脂質、脂質複合物及其應用的製作方法

2023-05-19 20:45:21

專利名稱：脂質、脂質複合物及其應用的製作方法
脂質、脂質複合物及其應用本申請是申請日為2005年5月6日、題為「脂質、脂質複合物及其應用」的中國專利申請號2005800141579的分案申請。本發明涉及陽離子脂質、包含其的組合物及其應用以及將化學化合物轉移到細胞中的方法。分子生物學和分子醫學在很大程度上依賴於生物活性化合物向細胞內的引入。這些生物活性化合物典型地分別包括，特別是，DNA、RNA以及肽和蛋白質。典型地，要克服的屏障是脂雙層，其具有帶負電荷的外表面。在本領域，已經開發了許多技術來滲透細胞膜並且由此將生物活性化合物引入。然而，構思用於實驗室的一些方法不能用在醫學領域並且更特別地，不適合於藥物遞送。例如，本領域已知的電穿孔和衝擊法，如果應用的話，僅容許生物活性化合物的局部遞送。除此之外，所述脂雙層細胞膜還包括運送系統。因此，嘗試使用這種運送系統來將生物活性化合物遞送通過細胞膜。然而，由於這種遞送系統的特異性或交叉反應性，它們的應用通常不是可應用的方法。本領域描述的將生物活性化合物轉移到細胞中的更通用的方法是使用病毒載體。然而，病毒載體僅能用於將基因有效地轉移到一些細胞類型中；但是它們不能用於將化學上合成的分子引入細胞。一種備選的方法是使用所謂的脂質體(Bangham，J. Mol. Biol. 13，238-252)。脂質體是在兩親性脂質在水中締合後產生的小泡。脂質體典型地包括磷脂的同心排列的雙分子層。取決於層數，可將脂質體分類為小的單層脂質體、多層脂質體和大的多層脂質體。已經證明脂質體是有效的遞送試劑，因為它們容許親水性化合物結合到水性中間層中，而將疏水性化合物結合到脂質層中。本領域眾所周知的是，脂質製劑的組合物以及製備它們的方法對於得到的脂質聚集體的結構和大小具有影響，並且因此影響脂質體。還已知脂質體結合陽離子脂質。除了作為脂質體的成分之外，陽離子脂質還引起了相當多的關注，因為它們可以象這樣用於生物聚合體的細胞遞送。使用陽離子脂質，由於靜電相互作用，可以將任何陰離子化合物基本上以定量方式進行包封。此外，認為陽離子脂質與帶負電荷的細胞膜相互作用，啟動細胞膜轉運。已經發現，如此與生物活性化合物一起使用含有陽離子脂質的脂質體製劑或使用陽離子脂質需要探索式方法，每種製劑應用有限，因為通常在缺乏血清的情況 下，其典型地可以將質粒遞送到一些但是不是所有的細胞類型中。已經證實脂質和由它們轉運的生物活性化合物的電荷和/或質量比率是遞送不同類型的所述生物活性化合物的極其重要的因素。例如，已經顯示適合於包括5，000到10，000個鹼基大小的質粒遞送的脂質製劑，通常對於遞送寡核苷酸諸如典型地包括約10到約50個鹼基的合成的核酶或反義分子是無效的。此外，最近已經顯示指出反義寡核苷酸和核酶的優選遞送條件甚至在相同的細胞類型中也是不同的。美國專利6，395，713公開了基於陽離子脂質的組合物和將這些組合物用於將生物活性化合物轉移到細胞中的應用，所述組合物由親脂性基團、接頭和頭部基團組成。本發明待解決的問題是提供將生物活性化合物引入細胞，優選地動物細胞的方式。本發明待解決的另一個問題是提供核酸的遞送試劑，特別是小核酸諸如siRNA，siNA和RNAi 或適體和 spiegelmers。這些問題通過後附的獨立權利要求的主題得以解決。優選的實施方案可以從其後附的附屬權利要求獲得。在第一個方面，本發明待解決的問題通過按照式(I)的化合物得以解決，
權利要求
1.一種組合物，其包含脂質成分、藥物活性化合物和載體，其中所述脂質成分是按照式(I)的陽離子脂質化合物
2.按照權利要求I的組合物，其中凡和民各自並且獨立地選自包含十二烷基、十四烷基、十TK燒基和油基的組。
3.按照權利要求I和2中任一項的組合物，其中R1是十二烷基且R2是十四烷基；或 R1是十六烷基，且R2是油基。
4.按照權利要求1-3任一項的組合物，其中m是I或2。
5.按照權利要求1-4任一項的組合物，其中所述化合物是與陰離子Γ締合的陽離子脂質。
6.按照權利要求1-5任一項的組合物，其中Y—選自包括滷化物、乙酸根和三氟乙酸根的組。
7.按照權利要求1-6任一項的組合物，其中所述化合物選自包括下列各項的組-β -精氨醯_2，3- 二氨基丙酸-N-十六烷基-N-油基-醯胺三鹽酸鹽
8.按照權利要求1-7任一項的組合物，其中所述組合物是藥物組合物。
9.按照權利要求1-8任一項的組合物，其中所述核酸選自包括下列各項的組寡核苷酸和多核苷酸。
10.按照權利要求1-9任一項的組合物，其中所述核酸選自包括DNA，RNA,PNA和LNA的組。
11.按照權利要求1-10任一項的組合物，其中所述核酸是雙鏈核酸。
12.按照權利要求1-11任一項的組合物，其中所述核酸與陽離子脂質的摩爾比是O. 02_0· 05 ο
13.按照權利要求12的組合物，其中所述核酸與陽離子脂質的摩爾比是O.037。
14.按照權利要求1-13任一項的組合物，其中所述核酸主鏈與陽離子脂質氮的電荷比是 I : 4。
15.按照權利要求1-14任一項的組合物，所述組合物還包括至少一種輔助脂質成分。
16.按照權利要求15的組合物，其中所述輔助脂質成分選自包括磷脂和類固醇的組。
17.按照權利要求15-16任一項的組合物，其中所述輔助脂質成分選自包括下列各項的組1，2_ 二植烷醯-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺和I，2- 二油基-sn_甘油基_3_磷酸乙醇胺。
18.按照權利要求15-17任一項的組合物，其中所述輔助脂質成分的含量是從所述組合物的總脂質含量的約20mol%到約80mol%。
19.按照權利要求18的組合物，其中所述輔助脂質成分的含量是從約35mol%到約65mol %。
20.按照權利要求1-19任一項的組合物，其中所述脂質是β-精氨醯-2，3-二氨基丙酸-N-十六烷基-N-油基-醯胺三鹽酸鹽，所述輔助脂質是1，2- 二植烷醯-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。
21.按照權利要求20的組合物，其中所述脂質是所述組合物的總脂質含量的50mol%，所述輔助脂質是所述組合物的總脂質含量的50mol%。
22.按照權利要求1-21任一項的組合物，其中所述組合物包含至少兩種輔助脂質。
23.按照權利要求22的組合物，其中至少一種輔助脂質包含選自包括下列各項的組的部分PEG部分、HEG部分、聚羥乙基澱粉(polyHES)部分和聚丙烯部分，其中該部分優選地提供約500-10000Da的分子量、更優選地約2000_5000Da的分子量。
24.按照權利要求22或23的組合物，其中包含所述PEG部分的輔助脂質選自包括下列各項的組1，2- 二硬脂醯-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，1,2- 二烷基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺；和神經醯胺-PEG。
25.按照權利要求24的組合物，其中所述PEG部分具有約500Da到IOOOODa的分子量、優選地約2，000到5，OOODa的分子量、更優選地2，OOODa的分子量。
26.按照權利要求25的組合物，其中所述組合物包含作為脂質成分的β-精氨醯-2，3- 二氨基丙酸-N-十六燒基-N-油基-醯胺二鹽酸鹽，作為第一輔助脂質的I，2- 二植燒醯-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺和作為第二輔助脂質的1，2- 二硬脂醯-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-PEG2000。
27.按照權利要求26的組合物，其中所述第二輔助脂質的含量是約O.05mol %到4.9mol %、優選地約I到3mol %。
28.按照權利要求27的組合物，其中所述脂質的含量是45m0l%到50mOl%，第一輔助脂質的含量是45到50mol %，並且在存在PEG化的第二輔助脂質的條件下，所述第二輔助脂質的含量是約O. Imol %到約5mol %,優選地約l_4mol %,且更優選地約2%，其中所述脂質、所述第一輔助脂質和所述第二輔助脂質的含量的總和是IOOmol %，並且其中所述第一輔助脂質和所述第二輔助脂質的總和是50mOl%。
29.按照權利要求22-28任一項的組合物，所述組合物含有 a)50mol %的β -精氨醯-2，3- 二氨基丙酸-N-十六烷基-N-油基-醯胺三鹽酸鹽， 48m0l%的I，2-二植烷醯-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺；和 2mol% 1,2- 二硬脂醯-sn-甘油基_3_磷酸乙醇胺-PEG2000， 或 b)50mol %的β -L-精氨醯-2，3-L- 二氨基丙酸-N-十六烷基-N-油基-醯胺三鹽酸鹽， 49mol% 1,2- 二植烷醯-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺；和 Imol % N (羰基-甲氧基聚乙二醇-2000)-I，2- 二硬脂醯-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，優選其鈉鹽。
30.按照權利要求1-29任一項的組合物，其中所述化合物和/或所述輔助脂質成分是作為在水性介質中的分散體存在。
31.按照權利要求1-29任一項的組合物，其中所述化合物和/或所述輔助脂質成分作為在水混溶性溶劑中的溶液存在。
32.按照權利要求31的組合物，其中所述溶劑選自包括乙醇和叔丁醇的組。
33.按照權利要求30的組合物，其中所述分散體包含尺寸為120nm的顆粒。
34.按照權利要求1-33任一項的組合物用於製備藥物的應用，所述藥物用於治療和/或預防疾病。
35.按照權利要求34的應用，其中所述組合物包含適合於治療和/或預防所述疾病的藥物活性化合物。
36.按照權利要求34-35任一項的應用，其中所述藥物用於治療癌症和/或心血管相關的疾病。
37.按照權利要求35-36任一項的應用，其中所述藥物用於治療癌症。
38.按照權利要求37的應用，其中所述癌症選自包括實體瘤和非實體瘤的組。
39.按照權利要求38的應用，其中所述實體瘤選自包括下列各項的組胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、結腸癌和肝細胞癌。
40.按照權利要求36-39任一項的應用，其中所述癌症涉及選自包括血管發生和新血管發生的組的過程。
41.按照權利要求34-40任一項的應用，其中所述藥物用於將所述核酸施用到細胞中，所述細胞選自包括下列各項的組內皮細胞、上皮細胞和腫瘤細胞。
42.按照權利要求41的應用，其中所述細胞是內皮細胞。
43.按照權利要求42的應用，其中所述內皮細胞是血管系統的內皮細胞。
44.按照權利要求43的應用，其中所述血管系統是來自新血管發生的血管系統。
45.按照權利要求44的應用，其中所述血管系統是來自腫瘤相關的新血管發生。
46.按照權利要求43的應用，其中所述血管系統選自包括下列各項的組肝血管系統、心臟血管系統、腎臟血管系統、胰腺血管系統和肺血管系統。
47.按照權利要求34-46任一項的應用，其中所述藥物用於系統給藥。
48.按照權利要求34-46任一項的應用，其中所述藥物用於局部給藥。
49.按照權利要求34-48任一項的應用，其中所述藥物是診斷劑。
50.按照權利要求1-33任一項的組合物在製備轉移劑中的應用。
51.按照權利要求50的應用，其中所述轉移劑將藥物活性組分轉移到哺乳動物細胞中。
52.按照權利要求51的應用，其中所述哺乳動物細胞是人細胞。
53.按照權利要求51-52任一項的應用，其中所述細胞是內皮細胞。
54.按照權利要求53的應用，其中所述內皮細胞是血管相關的內皮細胞。
55.按照權利要求1-33任一項的組合物用於系統給藥的應用。
56.按照權利要求55的應用，其中所述系統給藥是對脊椎動物的系統給藥。
57.按照權利要求55-56任一項的應用，其中所述脊椎動物是哺乳動物。
58.按照權利要求57的應用，其中所述哺乳動物選自包括下列各項的組小鼠、大鼠、豚鼠、貓、狗、猴和人。
全文摘要
本發明是脂質、脂質複合物及其應用。其涉及按照式(I)的化合物，其中R1和R2各自並且獨立地選自包含烷基的組；n是介於1和4之間的任何整數；R3是選自包含賴氨醯、鳥氨醯、2，4-二氨基丁醯、組氨醯的組的醯基和按照式(II)的醯基部分，其中m是1-3之間的任何整數且Y-是藥用陰離子。
文檔編號C07C237/22GK102940891SQ20121047282
公開日2013年2月27日 申請日期2005年5月6日 優先權日2004年5月5日
發明者O·凱爾, J·考夫曼, 安斯加爾·桑特爾 申請人:賽倫斯治療公司