腎炎清片中黃芪主要成分檢測方法
2023-05-21 08:29:16 1
腎炎清片中黃芪主要成分檢測方法
【專利摘要】本發明涉及中藥腎炎清片中黃芪主要成分檢測方法，該方法包括以下步驟：步驟1，對照品溶液的製備，步驟2，供試品溶液的製備，步驟3，將對照品溶液和供試品溶液注入色譜儀，得到色譜圖，步驟4，根據色譜圖用外標兩點法對數方程計算供試品中黃芪甲苷的含量。
【專利說明】腎炎清片中黃芪主要成分檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥製劑的檢測方法，特別是腎炎清片中黃芪主要成分檢測方法。
技術背景
[0002]腎炎清片，為一種治療腎炎的中藥製劑，是由黃芪、益母草、白茅根、篇蓄、瞿麥、小 薊、石韋、地榆炭、土大黃和甘草製成。
[0003]腎炎清片方中益母草，性苦、辛而微寒，具有利水消腫、解毒活血之功，為方中君 藥。白茅根性甘、寒，既能涼血止血，又能清熱利尿、導熱下行，適宜於膀胱溼熱蘊結而致的 血尿。本方用其與益母草共為君藥，可使妄行之血歸於脈中而降血尿。篇蓄與瞿麥二者合 用，善於清下焦溼熱而利水通淋；小薊善治下焦結熱所致尿澀赤痛、血淋尿血；石韋能上清 肺熱、下走膀胱而利尿通淋；地榆長於治療下焦病證，在本方中攜諸藥清熱下焦火熱之邪， 破解下焦淤血；土大黃可治療血熱所致的咳血、吐血、尿血、痔血、崩漏，以及外傷出血等證。 黃芪功於補氣昇陽、益衛固表、利水消腫、託瘡生肌。腎炎清片對於降低急性腎小球腎炎、慢 性腎小球腎炎、隱匿性腎小球腎炎、紫癜性腎炎等原因所致血尿有明顯作用，可減少和減輕 糖皮質激素治療過程中的不良反應。
[0004]為使該藥物生產標準化，達到療效確切，質量穩定的目的。本發明經過研究，建立 了 一種檢測本發明製劑中有效成分黃芪甲苷的方法，該方法採用HPLC法對其中的有效成 分黃芪甲苷進行含量測定。該方法精密度、靈敏度、穩定性均好，確保產品質量的「安全、均 一、穩定、有效、可控」。
【發明內容】
[0005]本發明提供一種中藥腎炎清片中黃芪主要成分的檢測方法，該檢測方法包括，對 藥品中的藥物有效成分黃芪甲苷進行含量測定，該測定方法採用HPLC法。
[0006]本發明的檢測方法，包括以下步驟:
[0007]步驟I，對照品溶液的製備，
[0008]步驟2，供試品溶液的製備，
[0009]步驟3，將對照品溶液和供試品溶液注入色譜儀，得到色譜圖，
[0010]步驟4，根據色譜圖計算供試品中黃芪甲苷的含量，
[0011]其中，色譜柱採用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，流動相為乙腈-水溶液，檢測 器採用蒸發光散射檢測器。
[0012]根據本發明，流動相乙腈-水的體積比為1:0.538-9。
[0013]根據本發明，其中步驟I所述對照品溶液的製備，方法如下:取黃芪甲苷對照品加 甲醇製成溶液。優選地，方法如下:取黃芪甲苷對照品加甲醇製成每Iml含0.2-0.6mg的溶液。
[0014]根據本發明，其中步驟2中所述供試品溶液的製備，方法如下:取檢測樣品，加入 氨水超聲處理，離心得上清液，過C18柱，甲醇洗脫，濾過，即得。優選地，方法如下:檢測樣品研細，取0.5-3g，加入2-8%氨水10-50ml，超聲處理20min以上，離心，取上清液5_25ml，上樣於C18上，10-20ml水洗，棄去，甲醇洗脫，微孔濾膜濾過，即得。
[0015]根據本發明實施方式之一，其中C18的重量不少於150mg。
[0016]根據本發明的另一實施方式，其中微孔濾膜的孔徑為0.22-0.45 U m。
[0017]根據本發明，其中步驟3的方法如下:分別取對照品溶液10-20ia，供試品溶液10-20 yl，注入液相色譜儀，得到色譜圖，用外標兩點法對數方程計算黃芪甲苷含量。
[0018]本發明目的在於檢測中藥腎炎清片中的藥物有效成分黃芪甲苷的含量，並通過該有效成分的含量了解腎炎清片在生產過程中是否達到生產要求，起到控制產品質量的作用。
[0019]根據本發明的檢測方法，所得供試品中每片黃芪甲苷的含量不得少於0.15mg。
[0020]本發明找到一種合適的質量控制方法來確定產品的質量，該質量控制方法較為完善，操作性強，重現性好，測定偏差小，穩定性好，精密度高。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0021]圖1黃芪甲苷標準曲線。
【具體實施方式】
[0022]以下通過實施例，進一步說明本發明，但不作為本發明的限制。
[0023]實驗例I黃芪甲苷含量測定方法學研究
[0024]本發明的含量測定方法，是通過篩選獲得的，篩選過程如下:
[0025]1、儀器與試藥
[0026]儀器高效液相色譜儀:Waters2695進樣系統，Waters2424ELSD檢測器；WatersEmpower色譜工作站；Mettler AE240 (十萬分之一)天平(梅特勒-託利多上海儀器有限公司)。
[0027]試藥黃芪甲苷購自中國藥品生物檢定所(批號110781-200613)
[0028]乙腈為色譜純；成品樣品及陰性對照品(由本公司提供)。
[0029]2、色譜條件的選擇
[0030]色譜柱:AgilentZORBAX SB-C18, 5 u m, 250X4.6mm ;流動相:乙腈:水=35:65 ;柱溫:30°C ;流速lml/min ;ELSD檢測器。在此色譜條件下，黃芪甲苷與樣品中其它組分分離良好，理論板數按黃芪甲苷對照品峰計大於2000。
[0031]3、供試品溶液的製備
[0032]取重量差異項下腎炎清片，研細，混勻，取1.5g，精密稱定，置三角瓶中，精密加入4%氨水20ml，超聲處理20min，離心，精密量取上清液10ml，上樣於已處理好的C18(250mg)上，5ml水洗，棄去，甲醇洗脫並定容至2ml的容量瓶中，搖勻，微孔濾膜(0.45um)濾過，即得。
[0033]4、空白試驗
[0034]取缺黃芪的陰性樣品，按供試品溶液製備方法操作，依法進樣測定，記錄色譜圖。結果，在對照品相同保留時間處無吸收峰。表明樣品中無幹擾黃芪甲苷的成分存在。
[0035]5、線性關係的考察[0036]精密稱取黃芪甲苷對照品3.90mg，置IOml量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；精密吸取上述對照品溶液各2111、5111、10111、20111、30111、40111、50 yl，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定黃芪甲苷峰面積，以對照品進樣量的自然對數為橫坐標，以峰面積的自然對數值為縱坐標，作黃芪甲苷的標準曲線。(參見圖1)
[0037]表1黃芪甲苷含量測定線性試驗
[0038]
【權利要求】
1.一種檢測腎炎清片中黃芪主要成分的方法，包括以下步驟: 步驟I，對照品溶液的製備， 步驟2,供試品溶液的製備， 步驟3，將對照品溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀，得到色譜圖， 步驟4，根據色譜圖計算供試品中黃芪甲苷的含量， 其中 色譜柱採用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，流動相為乙腈-水溶液，檢測器採用蒸發光散射檢測器。
2.根據權利要求1的方法，其特徵在於，流動相乙腈-水的體積比為1:0.538-9。
3.根據權利要求1的方法，其特徵在於，其中步驟I所述對照品溶液的製備，方法如下: 取黃芪甲苷對照品加甲醇製成溶液。
4.根據權利要求3的方法，其特徵在於，其中步驟I所述對照品溶液的製備，方法如下: 取黃芪甲苷對照品加甲醇製成每Iml含0.2-0.6mg的溶液。
5.根據權利要求1的方法，其特徵在於，其中步驟2中所述供試品溶液的製備，方法如下: 取檢測樣品，加入氨水超聲處理，離心得上清液，過C18柱，甲醇洗脫，濾過，即得。
6.根據權利要求5的方法，其特徵在於，其中步驟2中所述供試品溶液的製備，方法如下:檢測樣品研細，取0.5-3g，加入2-8%氨水10-50ml，超聲處理20min以上，離心，取上清液5-25ml，上樣於C18上，10-20ml水洗，棄去，甲醇洗脫，微孔濾膜濾過，即得。
7.根據權利要求6的方法，其中C18的重量不少於150mg。
8.根據權利要求6的方法，其中微孔濾膜的孔徑為0.22-0.45 u m。
9.根據權利要求1的方法，其特徵在於，其中步驟3的方法如下:分別取對照品溶液10-20 yl，供試品溶液10-20 yl，注入液相色譜儀，得到色譜圖，用外標兩點法對數方程計算黃芪甲苷含量。
10.根據權利要求1-9中任一權利要求所述的方法，其中所得供試品中每片黃芪甲苷的含量不得少於0.15mg。
【文檔編號】G01N30/88GK103575842SQ201210257780
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年7月24日 優先權日:2012年7月24日
【發明者】周桂榮, 鄂秀輝, 張蘭蘭, 周水平 申請人:天士力製藥集團股份有限公司