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一種治療原發性腎小球疾病的中藥組合物及其製備方法

2023-05-21 05:34:01 2

專利名稱:一種治療原發性腎小球疾病的中藥組合物及其製備方法
技術領域:
本發明涉及一種中藥組合物,特別涉及用於一種治療原發性腎小球疾病的中藥組合物及其製備方法。
背景技術:
病名概念及分類標準原發性腎小球疾病是病損局限於腎小球或主要是腎小球損害的一組腎臟病。原發性腎小球疾病大多是特發的(即發病原因不明),少部分由細菌感染或藥物所誘發。對原發性腎小球疾病的分類可從兩個方面,即臨床分型和病理分型。參照1992年原發性腎小球疾病臨床分型標準,可將其分為(1)急性腎小球腎炎為急性起病,以血尿、蛋白尿、水腫和高血壓為主要表現,並可有一過性氮質血症的一組疾病。多見於鏈球菌感染後,其它細菌、病毒及寄生蟲感染也可引起。
(2)急進性腎小球腎炎臨床起病過程和表現類似急性腎小球腎炎,但腎功能急劇壞轉、早期出現少尿性急性腎功能衰竭為特徵,病理表現為大量新月體形成的一組疾病。
(3)慢性腎小球腎炎是各種原發性腎小球疾病導致的一組長病程的(甚至數十年)、病情遷延、病變進展緩慢、最終將發展成慢性腎功能衰竭的一組腎小球疾病。臨床以水腫、高血壓、蛋白尿、血尿及腎功損害為基本表現,但由於疾病病理類型和病期不同,它們的主要表現可相異,呈多樣化。慢性腎小球腎炎為臨床常見病,尤以青壯年男性青年發病率高。本病治療困難,大多漸進為慢性腎功能衰竭,預後較差。
(4)腎病症候群要表現為「三高一低」,即高度浮腫、大量蛋白尿(≥3.5克/日)、高脂血症和低蛋白血症(血漿白蛋白≤30克/升)。只要具備大量蛋白尿和低蛋白血症診斷即可成立。
(5)隱匿性腎小球疾病以無症狀蛋白尿(尿蛋白量<1克/日,以白蛋白為主)和(或)單純性血尿(持續或間斷鏡下血尿,並偶見肉眼血尿,其性質為腎小球源性)為臨床表現的一組腎小球疾病。病人無水腫、高血壓及腎功能損害。
根據1982年世界衛生組織對原發性腎小球疾病的病理分型標準,可分為①輕微腎小球病變;②局灶性節段性病變;③瀰漫性腎小球腎炎包括膜性腎病、增生性腎炎(後者又可分為繫膜增生性腎炎、毛細血管增生性腎炎、繫膜毛細血管性腎炎、緻密沉積物性腎炎和新月體性腎炎)和硬化性腎炎。④未分類的腎小球腎炎。
原發性腎小球疾病臨床發病特點及研究意義我國作為一個發展中國家具有特殊的疾病構成譜既有不斷增長著發達國家的常見「富貴相關疾病」如糖尿病、高血壓、與血管成形技術(血管造影PTCA、冠脈搭橋術等)有關的腎小管壞死等;又仍然保存著不發達國家常見的「貧困相關疾病」,原發性腎小球疾病就是其中很主要的一類。按照我國的實際國情,這種「兩極並存」的疾病構成譜將會存在相當一個時期。因此,作為「貧困相關疾病」的原發性腎小球疾病在相當一個時期中我國腎臟病學界對原發性腎小球疾病的研究將仍佔重要地位,不應被對糖尿病腎病等疾病的研究所取代。大部分原發性腎小球疾病的治療效果尚不可稱滿意,半個世紀以來也沒有重大突破,因此,臨床研究的一個重點應是針對這些疾病的治療措施開展有組織、前瞻性、雙盲對照研究為評價療效(如尿蛋白、改善腎病症候群、降血壓、甚至改善病理改變、改善腎功能等)提供證據,即近些年來所重視的循證醫學(Evidance Medicine)。據數組不完全資料統計,腎小球疾病在我國患病率約0.2%-4%,患病人數較多,尤好發於生活、勞動條件;較差的青少年,佔我國慢性腎功能衰竭病因的3/4以上。IgA腎病的發病率佔原發性腎小球疾病的26%-34%。男女之比大約是2∶1。關於發病機理研究目前認為腎炎的發病與下列因素有關1、免疫介導損傷近代研究工作證實免疫介導損傷在大部分腎小球疾病的發病過程中起著主要的、啟動的作用①免疫病理技術(免疫螢光及免疫酶標技術)證實免疫球蛋白及補體成分在腎小球毛細血管袢及繫膜區沉著。②同時可於一些病人血循環中測知循環免疫複合物、冷球蛋白或抗基底膜抗體,而補體成分下降。③可採用免疫手段於實驗動物,製備多種與人類腎小球疾病相類似的病變。絕大部分腎小球疾病均由免疫複合物介導而致病。循環免疫複合物由抗原及抗體二者結合而成。當抗原與抗體數量相等或抗原稍過剩時形成大小適中的可溶性免疫複合物,當其含量較高和單核吞噬系統功能減弱時則有利於免疫複合物沉積於腎小球。循環免疫複合物主要沉積於腎小球繫膜區,當炎症廣泛而嚴重沉著於毛細血管袢內皮下側。腎小球毛細血管袢固有成分(糖蛋白GP330或600)及通過化學、電荷反應而「種植」在其上的外源性抗原(病毒、組織成分)可與循環中的抗體成分於腎小球毛細血管袢上相結合而形成免疫複合物形成,見於膜性腎病。
2、炎症介導過程大量臨床及實驗研究證明僅有廣泛、大量免疫複合物沉著仍不足引起腎小球炎症反應而致病。免疫複合物引起的各種炎症個導過程在發病中起重要作用。免疫複合物與通過C1(經典)途徑和C3(旁路)途徑激活補體;被破壞的細菌和組織細胞可釋放出細菌內毒素、組織蛋白酶、脂多糖等按旁路途徑激活補體系統。激活的補體系統生成一系列生物活性的片段具有膜攻擊作用,從而增加其通透性引起蛋白尿。炎性細胞沉積於繫膜區及毛細血管袢的免疫複合物及激活的補體通過免疫粘附及趨化作用吸引中性料細胞和單核細胞於局部浸潤。這些效應細胞通過釋放蛋白酶及超氧陰離子等代謝產物直接損害腎小球。腎小球上的免疫複合物及其激活的補體系列損傷毛細血管內皮細胞,釋放出內皮細胞活性因子並導致血小板聚集,激活XIII因子引起一系列凝血、纖溶過程。血小板本身釋放生長因子,另一方面又吸引單核細胞、釋放單核因子,均能促進繫膜細胞增殖及基質增生。非免疫、非炎症腎小球損傷過程由於腎小球內血液動力學改變而引起腎小球內血液灌注、跨膜壓力及濾過壓的「三高」現象,從而導致腎小球進行性硬化。引起腎小球內血液內血液動力學改變的因素包括健存腎單位的代償過程、一些影響入球小動脈擴張和出球小動脈收縮的內泌素及飲食中過多的蛋白質、磷、脂肪等。

發明內容
本發明的一個目的在於公開一種新的治療原發性腎小球疾病的中藥組合物;本發明的另一個目的在於公開製備一種新的治療原發性腎小球疾病中藥組合物的製備方法。
本發明中藥組合物的原料藥組成及配比如下(按重量份)虎杖600-1100重量份 白花蛇舌草600-1100重量份白茅根400-800重量份紅花100-400重量份。
本發明組合物的製備方法為以上四味,虎杖、白花蛇舌草用60-80%乙醇回流提取2-4次,每次1.5-3.5小時;合併乙醇提取液,濾過;濾取上清液;回收乙醇至相對密度1.10(50-70℃測);噴霧乾燥成細粉,備用;另取白茅根、紅花加水煎煮1-3次,每次1.5-3.5小時;合併水煎液,濾過;濾取上清液,濃縮至相對密度1.20(50-70℃測);加乙醇至醇含量為70%;徐徐攪拌,靜置過夜;濾取上清液;濃縮至相對密度1.10(50-70℃測);噴霧乾燥成細粉;將上述兩細粉加入藥學上可接受的賦型劑,按照常規的製劑工藝製備成臨床可接受的藥物劑型,例如,丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體製劑、膠囊劑、咀嚼劑等。
本發明組合物具有很好的治療原發性腎小球疾病的效果,主要藥效學實驗研究其結果完全支持治療原發性腎小球疾病的良好效果,不產生副作用,還能夠整體調節患者機體狀態,改善其他綜合指標。在同類藥物中具有明顯的療效優越性,因此具有良好的治療作用和相對低廉的成本以及極大的社會效益。
下面實驗例用於進一步說明本發明。
實驗例本發明組合物的藥效學研究試驗用本發明組合物製劑為四味清腎顆粒藥效學研究劑量設定為人臨床每天使用劑量為生藥52g/d.人。大鼠用量為2.34-9.36g生藥/kg;小鼠給藥劑量13.52、6.76、3.38g(生藥量)/Kg,家兔給藥劑量1.2-4.8g生藥/kg。
試驗材料四味清腎顆粒黑色顆粒,由北京中醫藥大學藥學院提供,批號20020901;含量2.6g生藥/g提取物。配製方法用蒸餾水配成所需濃度。
陽性藥保腎康片白色片劑,主要成分3-甲氧基-4-羥基桂皮酸哌嗪,成都亨達製藥廠生產,批號020210,規格50mg/片,配製方法研磨後溶於蒸餾水中,然後配成所需濃度。
動物紐西蘭純種白兔一級,北京市通利試驗動物養殖場,許可證編號京動管第0.24號。SD大鼠二級,北京市維通利華試驗動物技術有限公司提供,合格證號SCXK(京)2002-0003。ICR小鼠(二級),北京市維通利華試驗動物技術有限公司提供,合格證號SCXK(京)2002-0003。
實驗結果一、四味清腎顆粒對大鼠的利尿作用取合格大鼠50隻,雄性,體重250-300g,隨機分為5組,每組10隻。分為對照組灌胃等容量的蒸餾水;陽性對照保腎康組55mg/kg;受試物四味清腎顆粒高、中、低劑量組9.4、4.68、2.34(生藥量)g/kg。給藥量10ml/kg。灌胃給藥,每天1次,連續3天。
給藥前測量每隻大鼠給藥前1h的尿量,然後開始給藥,將陽性藥和受試物均勻加入負荷水中同時灌服,然後測給藥後15min、30min、1h、2h、4h、8h、12h、24h尿量及尿液ph值。在每個收集尿液容器內預先加入2ml甲苯,收集12h內尿液,放入4攝氏度冰箱內待測尿中Na+、K+、cl-的數值。
結果四味清腎顆粒連續灌胃給藥3天,高、中、低給藥組對正常水負荷大鼠尿量和Na+、K+、cl-含量有明顯的增加,與對照組比較有顯著性差異(P<0.05-0.01)。
表1.四味清腎顆粒對正常水負荷大鼠24h尿量與尿中鈉、鉀、氯的影響劑量 鉀鈉24h尿量(ml)氯(mg/100ml)(g/kg) (mg/100ml)(mg/100ml)對照組- 16.27±7.962.04±0.939.04±3.6313.15±5.89陽性藥組 55(mg/kg) 24.10±9.57* 2.57±1.1713.22±5.14* 20.78±7.33*高劑量組9.4 25.60±10.63* 3.09±1.46** 11.77±4.59* 20.27±6.43**中劑量組4.7 28.00±13.20* 2.73±1.1514.84±5.71* 20.98±8.54*低劑量組2.3 20.90±3.932.90±0.76* 10.81±2.77 18.68±5.96與對照組比較*P<0.05。
二.四味清腎顆粒對腎毒血清性腎炎(Masugi腎炎)模型的影響取紐西蘭白兔10隻,雄性,1.8-2.0kg。取上等量均漿與弗氏完全佐劑充分混勻,給兔腳掌皮下多點注射(5-6點,每點0.3ml)。兩周後用弗氏不完全佐劑與等量勻漿混勻,背部皮下多點注射(5-6點,每點0.3ml),每兩周一次。用瓊脂雙擴散法檢測血清抗體效價。抗體效價達到1∶16時,頸總動脈放血,取血清,即為兔抗大鼠腎毒血清。分裝後,凍存於-20攝氏度備用。
檢測指標(1)測給藥前(造模後)和給藥後8周的24h尿量及尿蛋白定量;(2)測給藥前(造模後)和給藥後8周的血尿素氮、肌苷、白蛋白、膽固醇、甘油三酯;(3)給藥後8周取腎臟稱重並做腎臟病理組織學檢查;(4)觀察藥後8周對靜脈血栓的影響在腎毒血清性病理模型基礎上,經過四味清腎顆粒治療8周,製備大鼠實驗性深靜脈血栓形成模型,觀察比較模型動物與給藥動物實驗性血栓形成的情況[5]。統計學方法計算均數和標準差,用spss進行組間t檢驗。
結果(1).四味清腎顆粒三個劑量組給藥8周後,均能顯著增加腎炎模型大鼠的24h尿量,減少24h尿蛋白含量。(2).給藥後8周高、中、低組均可降低血清尿素氮、肌酐、白蛋白的含量;高劑量組可以明顯降低甘油三脂的含量。(3).四味清腎顆粒三個劑量組連續給藥8周,雖然都能形成血栓,但能明顯減輕靜脈血栓的溼重和乾重,明顯減少靜脈血栓的形成,與對照組比較有顯著性差異。(4).連續給藥8周,腎臟病理結果顯示,模型組腎小球增大,白細胞、血管內皮細胞、繫膜細胞浸潤,細胞數明顯增加,腎小球直徑明顯增大,與對照組比較有顯著性差異P<0.001,表現出明顯的腎小球腎炎的病理改變。四味清腎顆粒高、中、低給藥組腎小球直徑及腎小球內細胞數明顯降低,P<0.001。
表2.給藥後血清白蛋白含量、BUN、Cre、膽固醇、甘油三酯的變化(n=10,x±s)白蛋白 膽固醇 甘油三酯尿素氮 肌酐(g/l) (mmol/l) (mmol/l) (mmol/l) (umol/l)對照組37.88±1.14 1.66±0.400.76±0.135.30±0.7926.52±5.94模型組34.34±2.39*** 2.02±0.39* 1.48±0.83* 6.25±0.78* 40.10±8.92**陽性組37.81±1.23ΔΔ1.57±0.31Δ0.82±0.18Δ4.95±0.58ΔΔ29.03±5.15ΔΔ高劑量組 37.02±1.31ΔΔ1.87±0.620.92±0.43Δ4.92±0.53ΔΔ27.28±5.17ΔΔ中劑量組 37.23±1.72Δ1.73±0.550.81±0.26Δ5.18±0.72Δ29.59±5.00ΔΔ低劑量組 36.29±1.74 1.81±0.970.99±0.475.13±0.58Δ31.73±8.26
與對照組比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.
與模型組比ΔP<0.05,ΔΔP<0.01,ΔΔΔP<0.001.
表3.給藥8周後腎炎大鼠24h尿量及尿蛋白含量變化(n=10,x±s)給藥前 給藥後組別尿量(ml) 尿蛋白(g/l) 尿量(ml) 尿蛋白(g/l) 腎重(g)對照組12.50±2.76 0.52±0.15 13.10±3.00 0.67±0.12 2.63±0.22模型組7.50±2.07**1.65±0.85** 7.6±1.71** 1.78±0.53*** 3.19±0.40**陽性組7.10±1.91*** 1.46±0.55*** 12.30±2.75ΔΔ0.80±0.27ΔΔΔ2.66±0.26ΔΔ高劑量組 6.9±2.02***1.52±0.68** 10.9±2.60ΔΔ0.79±0.37ΔΔ2.57±0.26ΔΔΔ中劑量組 7.0±1.49***1.78±0.83** 10.5±2.27ΔΔ0.94±0.34ΔΔ2.71±0.30Δ低劑量組 8.70±2.45**1.74±0.78** 10.5±2.22Δ0.97±0.41*ΔΔ2.76±0.53與對照組比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
與模型組比ΔP<0.05,ΔΔP<0.01,ΔΔΔP<0.001。
表4.給藥8周後對深部靜脈血栓的影響(n=10,x±s)血栓溼重(mg) 血栓乾重(mg)對照組 14.51±2.26 4.76±1.57模型對照組 24.50±3.71***8.69±2.36**陽性藥組 12.72±5.36ΔΔΔ5.23±2.18ΔΔ高劑量組 13.06±1.91ΔΔΔ5.19±2.47ΔΔ中劑量組 18.32±8.68Δ5.87±2.82Δ低劑量組 15.53±4.79ΔΔΔ5.2±2.5ΔΔ與對照組比***P<0.001.與模型組比ΔP<0.05,ΔΔΔP<0.001.
表5.四味清腎顆粒對腎毒血清性腎炎模型腎小球直徑及腎小球內細胞數的影響(x±s)劑量(g/kg) 腎臟數/個 直徑/mm 細胞數/個空白對照組 --- 8 0.119±0.017105±22模型對照組 --- 8 0.146±0.013## 140±27##陽性藥組28mg/kg 8 0.131±0.016** 115±13**四味清腎顆粒高劑量組3.8 8 0.136±0.014** 114±15**四味清腎顆粒中劑量組1.9 8 0.133±0.026** 116±20**四味清腎顆粒低劑量組0.958 0.124±0.015** 116±16**與對照組比##P<0.01.
與模型組比**P<0.05,***P<0.001.
三.對家兔C-BSA腎炎模型的影響檢測指標造模前、造摸後(給藥前)、給藥3、6周分別測量24h尿量,尿蛋白含量,血清尿素氮(BUN)、肝酐(Cr)、膽固醇、甘油三脂、白蛋白。血及尿中β2-MG含量用放射免疫方法測定;腎臟組織學檢查給藥6周後取動物腎臟進行病理學檢查,觀察組織形態變化並計算腎小球平均直徑和腎小球內平均細胞數。
結果(1).對尿量和尿蛋白的影響給藥後第3周,四味清腎顆粒高、中、低劑量組對家兔C-BSA腎炎模型的24h尿量和尿蛋白有明顯的改善,給藥6周後作用更明顯,與模型組比較有顯著性差異。(2).對血清白蛋白、尿素氮、肌酐、膽固醇、甘油三脂的影響給藥3周後對白蛋白、膽固醇、甘油三脂有明顯的降低,對尿素氮、肌酐有降低的趨勢但與對照組比無顯著性差異;給藥6周後對以上5項有明顯的改善作用,與模型組比有顯著性差異。(3).對給藥後腎臟重量的影響給藥6周後四味清腎顆粒三個劑量組腎臟重量與模型組比較有顯著性差異。(4).對給藥後血及尿中B2-MG的影響給藥6周後四味清腎顆粒可明顯降低血和尿中B2-MG的含量。(5).病理結果模型組腎小球增大,白細胞、血管內皮細胞、繫膜細胞浸潤,細胞數明顯增加,腎小球直徑明顯增大,與對照組比較有顯著性差異P<0.001,表現出明顯的腎小球腎炎的病理改變.四味清腎顆粒高、中、低給藥組腎小球直徑及腎小球內細胞數明顯降低,P<0.001。
表6.四味清腎顆粒對家兔C-BSA腎炎模型24h尿量的影響(n=10,x±s)劑量 給藥後組別 造模前 給藥前(g/kg)3周 6周對照組 - 115.38±33.11 114.13±48.171025.50±34.02 119.28±38.49模型組 - 96.13±9.93 66.25±22.17** 62.50±14.88*73.50±13.66*保腎康組 28mg/kg 123.25±44.52 65.75±19.83*97.50±30.94Δ106.00±27.30Δ高劑量組 3.8 96.13±24.7666.25±16.20*83.75±19.60Δ101.25±21.67Δ中劑量組 1.9 118.63±30.49 64.25±17.00*85.00±17.93Δ100.63±21.95Δ低劑量組 0.95 102.25±24.03 65.00±19.46*85.00±14.64Δ112.50±27.00Δ與對照組比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
與模型組比ΔP<0.05,ΔΔP<0.01,ΔΔΔP<0.001.
表7. 四味清腎顆粒對家兔C-BSA腎炎模型尿蛋白含量的影響(n=10,x±s)劑量給藥後組別 造模前給藥前(g/kg) 3周 6周對照組 - 0.37±0.220.39±0.190.55±0.26 0.43±0.10模型組 - 0.41±0.133.62±2.10** 4.36±1.62*** 6.00±4.13**保腎康組 28mg/kg0.41±0.232.45±1.14** 2.13±1.91*Δ0.51±0.30ΔΔ高劑量組3.8 0.50±0.233.10±1.73** 2.08±1.22*Δ0.57±0.29ΔΔ中劑量組1.9 0.45±0.263.19±1.76** 1.74±1.31*Δ0.67±0.46ΔΔ低劑量組0.95 0.41±0.202.40±1.45** 0.54±0.06ΔΔΔ0.47±0.16ΔΔ與對照組比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.。
與模型組比ΔP<0.05,ΔΔP<0.01,ΔΔΔP<0.001.
表8.對家兔C-BSA給藥6周對血清白蛋白、尿素氮、肌酐、膽固醇、甘油三脂影響(n=10,x±s)總膽固醇甘油三酯 尿素氮肌酐白蛋白(g/l)(mol/l) (mmol/l) (mmol/l) (umol/l)對照組40.83±3.02 0.97±0.20 0.56±0.155.29±1.58 76.54±9.56模型組27.08±4.14***3.66±2.25*2.61±1.73* 8.34±1.60*102.79±11.56**陽性組37.21±5.79ΔΔ1.14±0.67Δ 0.74±0.29Δ 6.38±1.48Δ 80.91±16.15Δ高劑量組 36.35±3.75ΔΔ1.15±0.54Δ 0.39±0.10ΔΔ4.54±0.75ΔΔΔ 73.4±12.88ΔΔΔ中劑量組 40.09±3.67ΔΔΔ 0.85±0.13ΔΔ0.54±0.19ΔΔ5.69±1.32ΔΔ 86.90±14.22Δ低劑量組 41.08±6.37ΔΔΔ 0.97±0.38Δ 0.86±0.34Δ 6.66±1.74Δ 83.71±11.59Δ與對照組比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
與模型組比ΔP<0.05,ΔΔP<0.01,ΔΔΔP<0.001.
表9.四味清腎顆粒對家兔C-BSA給藥6周對血清及尿液B2-MG的影響(n=10,x±s)劑量給藥前(mg) 給藥6周(mg)(g/kg) 血尿 血 尿對照組 - 122±1347±13110±15 39±16模型組 - 178±31** 73±16** 165±31** 74±17***陽性組28mg/kg 173±28** 74±11** 118±13ΔΔ47±18ΔΔ高劑量組3.8 168±25** 72±19** 120±16ΔΔ44±11ΔΔ中劑量組1.9 171±30** 71±13** 116±10ΔΔ43±20Δ低劑量組0.95168±29** 73±14** 119±12ΔΔ48±13Δ
與對照組比**P<0.01,***P<0.001。
與模型組比ΔP<0.05,ΔΔP<0.01。
表10.四味清腎顆粒對家兔C-BSA腎炎模型給藥6周後腎臟重量的影響(n=10,x±s)組別 劑量(g/kg) N(只)腎臟重(g)對照組 - 814.94±1.41模型組 - 827.12±7.02**保腎康組 28mg/kg 816.23±2.52Δ高劑量組3.8 815.87±2.19ΔΔ中劑量組1.9 816.59±2.79Δ低劑量組 0.95 817.59±2.84ΔΔ與對照組比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
與模型組比ΔP<0.05,ΔΔP<0.01,ΔΔΔP<0.001.
表11.四味清腎顆粒對C-BSA腎炎模型腎小球直徑及腎小球內細胞數的影響(x±s)劑量(g/kg) 腎臟數/個 直徑/mm 細胞數/個空白對照組 --- 8 0.139±0.027 112±26模型對照組 --- 8 0.197±0.022### 197±51###陽性藥組 28mg/kg 8 0.153±0.018**124±32**四味清腎顆粒高劑量組 3.8 8 0.163±0.021**126±23***四味清腎顆粒中劑量組 1.9 8 0.162±0.029**140±25**四味清腎顆粒低劑量組 0.95 8 0.163±0.025**143±56*與對照組比###P<0.001;與模型組比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.
四.對小鼠單核巨噬細胞吞噬功能的影響取ICR小鼠50隻,雌雄各半,隨機分成5組,每組10隻。空白對照組灌胃給等容量蒸餾水;陽性藥保腎康片156mg/Kg,四味清腎顆粒高、中、低劑量組6.8、3.4、1.2g/Kg,灌胃給藥,每日一次,連續7日,於末次給藥後1小時,尾靜脈注射印度墨汁10ml/kg。並於5、10、15、20分鐘各時間點內眥取血20ul,加入0.1%NaCO32ml中搖勻,在600nm下測定各樣光密度(OD),最後將小鼠處死,分別稱取肝重、脾重。按以下公式計算廓清指數K或校正廓清指數a。
K=logOD1-logOD2/t2-t11;a=3K*體重/(肝重+脾重),
計算平均值和標準差,給藥組與對照組進行組間t-檢驗。
結果四味清腎顆粒連續灌胃給藥7天,能明顯提高K值和a值,表明對單核巨噬細胞的吞噬功能具有明顯的增強作用,各劑量組與對照組比較有顯著差異。
表12.對小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能的影響用(n=10,x±s)組別 劑量(g/kg) 吞噬指數K吞噬活性a對照組 - 0.039±0.011 5.33±1.54陽性藥 55(mg/kg) 0.049±0.021 6.99±1.32*高劑量 13.52 0.067±0.022**7.88±2.15**中劑量 6.76 0.072±0.019*** 7.22±1.98*低劑量 3.38 0.056±0.024* 6.57±2.13注與空白組相比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.
五.對小鼠溶血素抗體生成的影響取小鼠50隻,雌雄各半,隨機分成5組,每組10隻。空白對照組灌胃給等容量蒸餾水;陽性藥保腎康110mg/kg;四味清腎顆粒高、中、低組13.5、6.8、3.4g(生藥量)/Kg,灌胃給藥,每日一次,連續8日。各組於給藥後第2天腹腔注射3∶5稀釋的綿羊紅細胞懸液(SRBC)0.2ml/只,進行免疫,於免疫後第6天即實驗第8天內眥取血,放置1小時,2000rpm離心10分鐘,取血清,生理鹽水稀釋500倍備用,進行溶血素測定。
計算按以下公式計算每隻小鼠樣品的半數溶血值HC50。
計算各組HC50的平均值,對各給藥組與對照組進行組間t-檢驗。
結果四味清腎顆粒連續灌胃給藥8天,對小鼠溶血素抗體生成具有明顯的促進作用(P<0.05-0.01)。
表13.對小鼠溶血素抗體生成的影響(n=10)組別 劑量(g/kg)HC50(x±s)對照組 - 155.6±34.3保腎康 110(mg/kg) 246.5±36.1*高劑量13.52245.7±29.8**中劑量6.76 223.4±35.2**低劑量3.38 317.3±37.6**
注與對照組比較*P<0.05**P<0.01.
六.急性血瘀大鼠血液流變學的影響取SD大鼠60隻,雌雄各半,180-200g,隨機分成6組,每組10隻。對照組既空白組、模型組造模後給等容量生理鹽水、陽性藥組給保腎康片55mg/kg、受試物四味清腎顆粒高、中、低劑量組9.4、4.7、2.3(生藥量)g/kg。給藥量10ml/kg。灌胃給藥,每天1次,連續7天。於第7天(末次給藥後)在大白鼠皮下注射腎上腺素0.8ml/kg,共2次,間隔4h,在第1次注射腎上腺素後2h將大鼠浸入冰水5min(0℃),第2次注射腎上腺素後停食,造成急性血瘀大鼠模型。次晨取血測血液流變學指標,內眥取血,肝素抗凝。
結果四味清腎顆粒各劑量組能明顯降低急性血瘀大鼠全血粘度,升高紅細胞變形性,降低其凝聚性;對血漿粘度無明顯影響。
表14對急性血瘀大鼠血液流變學的影響(n=6,x±s)劑量 全血粘度/mpa.s血漿粘度組別(g/kg) 高切 低切/mpa.s空白組- 4.59±0.51 8.26±0.14 1.41 ±0.35模型組- 8.95±1.12** 15.3±1.61**1.59±0.29保腎康55(mg/kg) 6.87±0.98ΔΔ12.28±1.36ΔΔ1.55±0.31高劑量組9.4 6.51±0.64ΔΔ12.33±1.35ΔΔ1.49±0.32中劑量組4.68 7.13±0.71ΔΔ13.47±1.2Δ1.51±0.27低劑量組2.34 7.24±0.52ΔΔ13.38±1.59 1.54±0.36與對照組比**P<0.01。
與模型組比ΔP<0.05,ΔΔP<0.01,ΔΔΔP<0.001.
表15.對急性血瘀大鼠紅細胞變形性和聚集性的影響(n=6,x±s)劑量紅細胞變形性 紅細胞變形性組別(g/kg) MAXDI SSS MAXD SS空白組- 0.75±0.02 285.95±35.00.39±0.12 69.00±34.02模型組- 0.64±0.04** 354.95±31.0** 1.25±0.21**263.98±34.97**保腎康55(mg/kg) 0.72±0.03ΔΔ367.97±40.10.88±0.14ΔΔ199.00±51.00ΔΔ高劑量組9.4 0.76±0.05ΔΔ374.98±38.90.69±0.25ΔΔ175.00±32.01ΔΔ中劑量組4.68 0.77±0.02ΔΔ335.98±42.10.68±0.16ΔΔ180.98±34.98ΔΔ低劑量 2.34 0.71±0.05Δ354.02±33.90.64±0.14ΔΔ186.98±51.02ΔΔ與對照組比**P<0.01。與模型組比ΔP<0.05,ΔΔP<0.01。
結論1.四味清腎顆粒連續灌胃給藥3天,各給藥組對正常水負荷大鼠24h尿量和Na+、K+、cl-含量有明顯的增加,與對照組比較有顯著性差異(P<0.05-0.01)。2.四味清腎顆粒連續灌胃給藥治療8周後,各劑量組均能顯著增加腎毒血清性腎炎模型大鼠的24h尿量,減少24h尿蛋白含量;給藥後8周後組均可降低血清尿素氮、肌酐、白蛋白的含量;高劑量組可以明顯降低甘油三脂的含量;連續給藥8周,能明顯減輕靜脈血栓的溼重和乾重,明顯減少靜脈血栓的形成,與對照組比較有顯著性差異;連續給藥8周,病理結果顯示,模型組腎小球增大,白細胞、血管內皮細胞、繫膜細胞浸潤,細胞數明顯增加,腎小求直徑明顯增大,表現出明顯的腎小球腎炎的病理改變。四味清腎顆粒高、中、低給藥組腎小球直徑及腎小球內細胞數明顯降低,明顯改善腎毒血清性腎炎模型的病理改變。3.四味清腎顆粒對家兔C-BSA腎炎模型,給藥治療第3周後,家兔的24h尿量和尿蛋白有明顯的降低,給藥6周後作用更明顯;給藥3周後對白蛋白、膽固醇、甘油三脂有明顯的降低,對尿素氮、肌酐有降低的趨勢,給藥6周後對以上5項有明顯的改善作用,與模型組比有顯著性差異;治療給藥6周後四味清腎顆粒可明顯減輕腎炎家兔的腎重;對給藥後血及尿中B2-MG含量明顯降低。病理結果顯示,模型組腎小球增大,白細胞、血管內皮細胞、繫膜細胞浸潤,細胞數明顯增加,腎小求直徑明顯增大,與對照組比較有顯著性差異P<0.001,表現出明顯的腎小球腎炎的病理改變。四味清腎顆粒高、中、低給藥組腎小球直徑及腎小球內細胞數明顯降低,明顯改善家兔C-BSA腎炎模型的病理改變。4.四味清腎顆粒連續灌胃給藥7天,對單核巨噬細胞的吞噬功能具有明顯的增強作用。5.四味清腎顆粒連續灌胃給藥8天,對小鼠溶血素抗體生成具有明顯的促進作用。6.四味清腎顆粒各劑量組能明顯降低急性血瘀大鼠全血黏度,升高紅細胞變形性,降低其凝聚性。
腎小球疾病其發病機制皆是由於免疫介導性疾病,由免疫引起炎症導致腎小球損害-即循環免疫複合物沉積、抗腎小球基底膜抗體行成、原位免疫複合物沉積、不溶性或難溶性免疫複合物等,但在慢性進展中也有非免疫炎症參與;腎小球疾病的病理改變因類型不同,慢性腎炎可由多種病理類型引起;病理生理改變主要以大量蛋白尿,血漿蛋白減少,高脂血症及腎功損害為主。
通過動物模型,本藥效學實驗著重對瀰漫性腎小球腎炎進行研究。家兔C-BSA腎炎模型是一種異種血清免疫複合物模型,其一系列病理改。變造成腎小球損害。其中,血液中免疫複合物在腎小球基底膜的沉積是造成腎小球損害的重要因素,蛋白尿的出現與免疫損傷造成腎小球基底膜分子結構有關。尿中蛋白的含量常反映腎小球的病變程度。經過6周的治療給藥,四味清腎顆粒通過降低尿蛋白含量、降低血清白蛋白、肌酐、尿素氮、甘油三脂、膽固醇與血中和尿中B2-MG含量的結果表明,四味清腎顆粒可明顯減輕膜性腎炎模型動物機體的免疫損傷和腎小球病變程度,對腎小球濾過功能有所改善。腎小球直徑及腎小球內細胞數明顯降低,明顯改善家兔C-BSA腎炎模型的病理改變。
通過8周治療給藥,四味清腎顆粒對腎小球毛細血管基底膜病變---大鼠腎毒血清性腎炎有明顯的改善。腎小球毛細血管基底膜病變導致血漿白蛋白減少,水腫,高血脂等改變。通過實驗顯示,四味清腎顆粒有明顯的利尿、降低尿蛋白;明顯升高血漿白蛋白、降低膽固醇、肌酐和尿素氮來改善腎功能和腎小球病變。腎小球直徑及腎小球內細胞數明顯降低,明顯改善腎毒血清性腎炎模型的病理改變。
此外,四味清腎顆粒還具有提高單核巨噬細胞吞噬功能而有助於免疫複合物的清除,而減少了免疫複合物的沉積。腎小球疾病同時伴有血液粘度升高、循環阻力增大等病理改變,同時伴有血栓形成等等,四味清腎顆粒通過對急性血瘀大鼠血液流邊學的影響,對深部靜脈血栓的影響,可以明顯的改善腎炎的高凝狀態,減少併發症的發生,明顯改善腎功能。通過動物實驗結果表明,四味清腎顆粒是一個對腎小球疾病,尤其是瀰漫性腎炎有明顯治療效果的中藥製劑,該實驗為其臨床應用提供了很的實驗依據。
下述實施例均能實現上述實驗例的效果。
實施例1顆粒劑虎杖900克白花蛇舌草900克白茅根600克紅花200克以上四味,虎杖、白花蛇舌草用70%乙醇回流提取3次,每次2小時;合併乙醇提取液,濾過;濾取上清液;回收乙醇至相對密度1.10(60℃測);噴霧乾燥成細粉,備用;另取白茅根、紅花加水煎煮2次,每次2小時;合併水煎液,濾過;濾取上清液,濃縮至相對密度1.20(60℃測);加乙醇至醇含量為70%;徐徐攪拌,靜置過夜;濾取上清液;濃縮至相對密度1.10(60℃測);噴霧乾燥成細粉;將上述兩細粉加入適量糊精後混勻製成1000克顆粒,即得。每日2次每次1袋,口服。
實施例2口服液虎杖700克 白花蛇舌草700克白茅根500克 紅花100克以上四味,虎杖、白花蛇舌草用70%乙醇回流提取3次,每次2小時;合併乙醇提取液,濾過;濾取上清液;回收乙醇至相對密度1.10(60℃測)備用;另取白茅根、紅花加水煎煮2次,每次2小時;合併水煎液,濾過;濾取上清液,濃縮至相對密度1.20(60℃測);加乙醇至醇含量為70%;徐徐攪拌,靜置過夜;濾取上清液;濃縮至相對密度1.10(60℃測);將上述兩濃縮上清液混勻加入矯味劑,經常規製成1000ml口服液,即得。每日3次,每次1瓶,口服。
實施例3片劑虎杖1000克 白花蛇舌草1000克 白茅根800克紅花300克以上四味,虎杖、白花蛇舌草用70%乙醇回流提取3次,每次2小時;合併乙醇提取液,濾過;率取上清液;回收乙醇至相對密度1.10(60℃測);噴霧乾燥成細粉,備用;另取白茅根、紅花加水煎煮2次,每次2小時;合併水煎液,濾過;濾取上清液,濃縮至相對密度1.20(60℃測);加乙醇至醇含量為70%;徐徐攪拌,靜置過夜;濾取上清液;濃縮至相對密度1.10(60℃測);噴霧乾燥成細粉;將上述兩細粉加入適量乙醇、糊精、硬脂酸鎂後混勻壓片,製成1000片。每日3次,每次4片,口服。
權利要求
1.一種治療原發性腎小球疾病的中藥組合物,其特徵在於該中藥組合物主要是由下述原料藥製成的虎杖600-1100重量份白花蛇舌草600-1100重量份白茅根400-800重量份 紅花100-400重量份。
2.如權利要求1所述的中藥組合物,其特徵在於該中藥組合物主要是由下述原料藥製成的虎杖900重量份 白花蛇舌草900重量份白茅根600重量份紅花200重量份。
3.如權利要求1所述的中藥組合物,其特徵在於該中藥組合物主要是由下述原料藥製成的虎杖700重量份 白花蛇舌草700重量份白茅根500重量份紅花100重量份。
4.如權利要求1所述的中藥組合物,其特徵在於該中藥組合物主要是由下述原料藥製成的虎杖1000重量份白花蛇舌草1000重量份白茅根 800重量份 紅花300重量份。
5.如權利要求1-4所述的中藥組合物的製備方法,其特徵在於該方法為以上四味,虎杖、白花蛇舌草用60-80%乙醇回流提取2-4次,每次1.5-3.5小時;合併乙醇提取液,濾過;濾取上清液;回收乙醇至相對密度1.10(50-70℃測);噴霧乾燥成細粉,備用;另取白茅根、紅花加水煎煮1-3次,每次1.5-3.5小時;合併水煎液,濾過;濾取上清液,濃縮至50-70℃測相對密度1.20;加乙醇至醇含量為70%;徐徐攪拌,靜置過夜;濾取上清液;濃縮至50-70℃測相對密度1.10;噴霧乾燥成細粉;將上述兩細粉加入藥學上可接受的賦型劑,按照常規的製劑工藝製備成丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體製劑、膠囊劑、咀嚼劑中的任一種。
6.如權利要求5所述的中藥組合物的製備方法,其特徵在於製成顆粒劑的方法為以上四味,虎杖、白花蛇舌草用70%乙醇回流提取3次,每次2小時;合併乙醇提取液,濾過;濾取上清液;回收乙醇至60℃測相對密度1.10;噴霧乾燥成細粉,備用;另取白茅根、紅花加水煎煮2次,每次2小時;合併水煎液,濾過;濾取上清液,濃縮至60℃測相對密度1.20;加乙醇至醇含量為70%;徐徐攪拌,靜置過夜;濾取上清液;濃縮至60℃測相對密度1.10;噴霧乾燥成細粉;將上述兩細粉加入適量糊精後混勻製成顆粒劑。
全文摘要
本發明公開了一種治療原發性腎小球疾病的中藥組合物及其製備方法。該組合物主要由虎杖、白花蛇舌草、白茅根、紅花組成。該中藥組合物製備時虎杖、白花蛇舌草用60-80%乙醇回流提取,濾取上清液;回收乙醇至相對密度1.10(50-70℃測),噴霧乾燥成細粉備用;另取白茅根、紅花加水煎煮合併水煎液,濾過;濾取上清液,濃縮,加乙醇,濾取上清液,濃縮,噴霧乾燥成細粉;將上述兩細粉加入藥學上可接受的賦型劑,按照常規的製劑工藝製備成臨床可接受的顆粒劑、膠囊等藥物劑型。本發明組合物具有很好的治療原發性腎小球疾病的效果,不產生副作用,還能夠整體調節患者機體狀態,改善其他綜合指標。
文檔編號A61P13/12GK1491717SQ0316000
公開日2004年4月28日 申請日期2003年9月19日 優先權日2003年9月19日
發明者圖婭, 孟鳳仙, 圖 婭 申請人:張旭, 張 旭

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