一種用lc-ms儀檢測地溝油的方法
2023-05-20 18:41:51
專利名稱：一種用lc-ms儀檢測地溝油的方法
技術領域：
本 發明涉及地溝油檢測技術領域，特別是涉及一種用LC-MS儀檢測地溝油的方法。
背景技術：
地溝油，是不法分子將下水道中的油膩漂浮物或者將賓館、酒樓的剩飯、剩菜(通稱泔水)回收，經過過濾、加熱、沉澱、分離、脫色、洗油等工序加工、提煉出的油，其主要成分仍然是甘油三酯，這種被稱作地溝油的三無產品，不僅質量極差、極不衛生，而且也比真正的食用油多了許多致病、致癌的毒性物質。一旦食用地溝油，它會破壞人們的白血球和消化道黏膜，引起食物中毒，甚至致癌的嚴重後果。所以地溝油是嚴禁用於食用油領域的。但是，也確有一些不法商販受利益驅動而不顧人民群眾生命安全私自生產加工地溝油並作為食用油低價銷售給一些小餐館，給人們的身心都帶來極大傷害。購買普通食用油時，一般的消費者會被建議要學會感官鑑別。根據經驗，食用植物油一般通過看、聞、嘗、聽、問五個方面來進行鑑別。但是對於對於摻雜有有害物質的劣質地溝油，僅僅靠人為的看、聞、嘗、聽的感官來進行鑑別是十分困難的。目前，國內尚未制定地溝油鑑別檢測的國家標準方法，雖然國內外研究人員進行了一些探索，鑑別油脂優劣的常規指標一般是水分、含量、比重、折光率、皂化值、酸價、氧化值、過氧化值、羰基值、碘值、揮發性組分、動物油脂、醛和酮類化合物(合格食用油所不含的)、電導率等指標。但是對地溝油檢測的研究報導並不多見，其主要原因是高酸值的地溝油成分比較複雜，其檢測的特異性理化指標還處於實驗研討階段，要準確定性定量目前仍比較困難。
發明內容
為了解決上述問題，本發明的目的之一在於提供了一種用LC-MS儀檢測地溝油的方法；為了實現上述目的，本發明的技術方案如下一種用LC-MS儀檢測地溝油的方法，包括如下步驟步驟A、標準溶液的配置(1)、乙酸銨溶液稱取乙酸銨加水溶解，搖勻即得質量濃度為0. 6 0. 8mg/ml的乙酸銨溶液；(2) ,DBS (十二烷基苯磺酸鈉的簡稱，以下同)標準儲備溶液取DBS加乙醇稀釋， 搖勻即得質量濃度為0. 5 2mg/ml的DBS標準儲備溶液；(3) ,DBS標準系列溶液分別取DBS標準儲備液加乙醇稀釋，製得質量濃度分別為 4 μ g/ml UO μ g/ml, 20 μ g/ml, 50 μ g/ml UOO μ g/ml, 500 μ g/ml 的 DBS 標準系列溶液；在所構建的色譜條件下，分別精密量取10 μ 1注入LC-MS儀，記錄色譜圖，以DBS濃度為橫坐標， 以峰面積為縱坐標，繪製標準曲線；
步驟B、樣品處理先取樣品10.01111 ，加入乙醇10 201111，80 1001水浴加熱5 101^11，渦旋混合 3 5min，5000 10000r/min離心5 lOmin，棄去油層，旋轉蒸發至幹；再加甲醇-2%乙酸的水溶液3 5ml復溶，5000 10000r/min離心5 lOmin，取上清液加入到已活化的固相萃取柱，接著用正己烷3 5ml淋洗，棄去淋洗液，最後用體積比為98 2的甲醇-乙酸銨溶液3 5ml洗脫，洗脫液用0. 45 μ m濾膜濾過，收集濾液，得到待測樣品；步驟C、LC-MS色譜條件的構建(1)、色譜條件色譜柱C18 柱(2. Omm X 50mm X 2.2 μ m)流動相甲醇-乙酸銨混合溶液，所述甲醇和乙酸銨的體積比為75 85 15 25流速0· 2ml/min柱溫30 40°C;(2)、質譜條件離子化模式電噴霧電離源負離子模式(ESI—)霧化氣流速1. 5L/min檢測器電壓1.68kvCDL 溫度200°C加熱模塊溫度200°C選擇監測離子:m/z= 297. 15,311. 17,325. 18,339. 20 ；步驟D、樣品測定和結果判斷在構建的條件下，精密量取待測樣品10 μ 1，注入LC-MS儀，如檢出的色譜峰保留時間與高純度DBS —致，並且在扣除背景後的樣品質譜圖中，有所選擇檢測的離子出現，且相對豐度比也與高純度DBS —致，則可判斷樣品中存在DBS，進而判斷樣品為地溝油。根據檢測數據進行定量計算
樹十二烷基苯磺酸鈉)=M
m式中ω (十二烷基苯磺酸鈉)_樣品中十二烷基苯磺酸鈉質量分數，μ g/ml,ρ -從校準曲線上查得的待測溶液中十二烷基苯磺酸鈉的質量濃度，μ g/ml,V-樣品定容體積，ml，m-樣品取樣量，ml。較佳地、所述乙醇為體積濃度為40 60%的乙醇溶液。較佳地、步驟B樣品處理中，所述渦旋混合3 5min後，重複80 100°C水浴加熱 5 IOmin兩次。較佳地、步驟B樣品處理中，所述已活化的固相萃取柱為依次用甲醇3ml和水3ml 活化的固相萃取柱。其篩查原理為地溝油，是不法分子將下水道中的油膩漂浮物或者將賓館、酒樓的剩飯、剩菜(通稱泔水)回收，經過過濾、加熱、沉澱、分離、脫色、洗油等工序加工、提煉出的油。DBS(十二烷基苯磺酸鈉的簡稱)為常用洗滌劑，被大量使用於餐飲業的清洗消毒環節中，具有中等毒性，動物實驗表明有明顯促致癌作用。該物質在天然食用油中不可能存在， 但用於精製地溝油的原材料-含有洗碗水中的洗 滌劑，且加工、精製過程難以去除該洗滌劑化學成分，導致性質穩定的DBS殘留在地溝油中，因此，選擇DBS作為鑑別地溝油的特異指標，專屬性強。本發明包括乙酸銨溶液配置、DBS標準儲備溶液的配置、DBS標準系列溶液的配置、樣品處理、LC-MS色譜條件的構建、樣品測定和結果判斷等步驟，以DBS為鑑別地溝油的特異性指標，利用LC-MS儀為主要檢測工具，通過反覆試驗構建出完整的檢測條件，本發明能快速、精確地檢測鑑別出樣品是否是地溝油，檢出限為20 μ g/ml，彌補了現行國家標準缺陷。
圖1為DBS選擇離子監測圖；其中A H^一烷基苯磺酸鈉m/z = 297. 15B 十二烷基苯磺酸鈉m/z = 311. 17C 十三烷基苯磺酸鈉m/z = 325. 18D 十四烷基苯磺酸鈉m/z = 339. 20圖2為DBS中十一烷基苯磺酸鈉㈧質譜圖；圖3為DBS中十二烷基苯磺酸鈉(B)質譜圖；圖4為DBS中十三烷基苯磺酸鈉(C)質譜圖；圖5為DBS中十四烷基苯磺酸鈉⑶質譜圖；圖6為地溝油樣品選擇離子監測圖。
具體實施例方式為了使本領域技術人員更好的理解本發明，以下通過幾個具體實施例來進行詳盡說明。實施例1一種用LC-MS儀檢測地溝油的方法，包括如下步驟步驟A、標準溶液的配置(1)、乙酸銨溶液稱取乙酸銨0. 3855g，加水500ml溶解，搖勻，即得；(2)、DBS標準儲備溶液取DBS約50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加50%乙醇稀
釋至刻度，搖勻、即得；(3)、DBS標準系列溶液分別取DBS標準儲備液適量，加50%乙醇稀釋，製得含 DBS 分別為 4 μ g/ml、10 μ g/ml、20 μ g/ml、50 μ g/ml、100 μ g/ml、500 μ g/ml 的標準系列溶液；在所構建的色譜條件下，分別精密量取10 μ 1注入LC-MS儀，記錄色譜圖，以DBS濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪製標準曲線；步驟B、樣品處理取樣品10. Oml，加入50 %乙醇20ml，80 °C水浴加熱20min，渦旋混合5min，自 「80°C水浴加熱20min」重複二次，10000r/min離心lOmin，棄去油層，旋轉蒸發至幹，加加甲醇-2 %乙酸的水溶液3ml復溶，10000r/min離心lOmin，取上清液加入到已活化的固相萃取柱(依次用甲醇3ml和水3ml活化)，用正己烷3ml淋洗，棄去淋洗液，用體積比為98 2 的甲醇-乙酸銨溶液3ml洗脫，洗脫液用0. 45 μ m濾膜濾過，收集濾液，得到待測樣品。步驟C、LC-MS色譜條件的構建
(1)、色譜條件色譜柱C18 柱(2. Omm X 50mm X 2.2 μ m)流動相甲醇-乙酸銨混合溶液，所述甲醇和乙酸銨的體積比為80 20流速0· 2ml/min柱溫40°C；(2)、質譜條件離子化模式電噴霧電離源負離子模式(ESI—)霧化氣流速1. 5L/min檢測器電壓1.68kvCDL 溫度200°C加熱模塊溫度200°C選擇監測離子:m/z= 297. 15,311. 17,325. 18,339. 20 ；步驟D、樣品測定和結果判斷在構建的色譜條件下，精密量取待測樣品10μ 1，注入LC-MS儀，記錄色譜圖，計算峰面積，用所述DBS標準系列溶液所得標準曲線計算待測溶液中十二烷基苯磺酸鈉含量；如待測樣品色譜圖中能檢出與DBS標準物質色譜圖中任一主峰保留時間一致的色譜峰，則表明待測樣品中存在十二烷基苯磺酸鈉，判斷待測樣品為地溝油。實施例2一種用LC-MS儀檢測地溝油的方法，包括如下步驟步驟A、標準溶液的配置(1)、乙酸銨溶液稱取乙酸銨0. 3g，加水500ml溶解，搖勻，即得；(2)、DBS標準儲備溶液取DBS約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加40%乙醇稀
釋至刻度，搖勻、即得；(3)、DBS標準系列溶液分別取DBS標準儲備液適量，加40%乙醇稀釋，製得含 DBS 分別為 4μ g/ml、10y g/ml、20y g/ml、50y g/ml、100y g/ml、500y g/ml 的標準系列溶液；在所構建的色譜條件下，分別精密量取10 μ 1注入LC-MS儀，記錄色譜圖，以DBS濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪製標準曲線；步驟B、樣品處理取樣品10. 0ml，加入40%乙醇10ml，90°C水浴加熱8min，渦旋混合3min，自「90°C 水浴加熱20min」重複二次，5000r/min離心8min，棄去油層，旋轉蒸發至幹，加加甲醇乙酸的水溶液4ml復溶，5000r/min離心8min，取上清液加入到已活化的固相萃取柱(依次用甲醇4ml和水4ml活化)，用正己烷4ml淋洗，棄去淋洗液，用體積比為98 2的甲醇-乙酸銨溶液4ml洗脫，洗脫液用0. 45 μ m濾膜濾過，收集濾液，得到待測樣品。步驟C、LC-MS色譜條件的構建(1)、色譜條件
色譜柱C18 柱(2. OmmX 50mm X 2. 2 μ m)流動相甲醇-乙酸銨混合溶液，所述甲醇和乙酸銨的體積比為75 25流速0· 2ml/min
柱溫30°C；(2)、質譜條件離子化模式電噴霧電離源負離子模式(ESI—)霧化氣流速1. 5L/min檢測器電壓1.68kvCDL 溫度200°C加熱模塊溫度200°C選擇監測離子:m/z= 297. 15,311. 17,325. 18,339. 20 ；步驟D、樣品測定和結果判斷在構建的色譜條件下，精密量取待測樣品10μ 1，注入LC-MS儀，記錄色譜圖，計算峰面積，用所述DBS標準系列溶液所得標準曲線計算待測溶液中十二烷基苯磺酸鈉含量；如待測樣品色譜圖中能檢出與DBS標準物質色譜圖中任一主峰保留時間一致的色譜峰，則表明待測樣品中存在十二烷基苯磺酸鈉，判斷待測樣品為地溝油。實施例3一種用LC-MS儀檢測地溝油的方法，包括如下步驟步驟A、標準溶液的配置(1)、乙酸銨溶液稱取乙酸銨0. 4g，加水500ml溶解，搖勻，即得；(2)、DBS標準儲備溶液取DBS約lOOmg，精密稱定，置50ml量瓶中，加60%乙醇
稀釋至刻度，搖勻、即得；(3)、DBS標準系列溶液分別取DBS標準儲備液適量，加60%乙醇稀釋，製得含 DBS 分別為 4μ g/ml、10y g/ml、20y g/ml、50y g/ml、100y g/ml、500y g/ml 的標準系列溶液；在所構建的色譜條件下，分別精密量取10 μ 1注入LC-MS儀，記錄色譜圖，以DBS濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪製標準曲線；步驟B、樣品處理取樣品10. 0ml，加入60%乙醇15ml，100°C水浴加熱5min，渦旋混合4min，自 「 100°C水浴加熱20min」重複二次，8000r/min離心5min，棄去油層，旋轉蒸發至幹，加加甲醇_2 %乙酸的水溶液5ml復溶，8000r/min離心5min，取上清液加入到已活化的固相萃取柱 (依次用甲醇5ml和水5ml活化)，用正己烷5ml淋洗，棄去淋洗液，用體積比為98 2的甲醇-乙酸銨溶液5ml洗脫，洗脫液用0. 45 μ m濾膜濾過，收集濾液，得到待測樣品。步驟C、LC-MS色譜條件的構建(1)、色譜條件色譜柱C18 柱(2. Omm X 50mm X 2.2 μ m)流動相甲醇-乙酸銨混合溶液，所述甲醇和乙酸銨的體積比為85 15流速0.2ml/min柱溫35°C;(2)、質譜條件
離子化模式電噴霧電離源負離子模式(ESI—)霧化氣流速1. 5L/min檢測器電壓1.68kvCDL 溫度200°C加熱模塊溫度200°C選擇監測離子:m/z= 297. 15,311. 17,325. 18,339. 20 ；步驟D、樣品測定和結果判斷在構建的色譜條件下，精密量取待測樣品10μ 1，注入LC-MS儀，記錄色譜圖，計算峰面積，用所述DBS標準系列溶液所得標準曲線計算待測溶液中十二烷基苯磺酸鈉含量；如待測樣品色譜圖中能檢出與DBS標準物質色譜圖中任一主峰保留時間一致的色譜峰，則表明待測樣品中存在十二烷基苯磺酸鈉，判斷待測樣品為地溝油。 以上所述僅為了是本領域技術人員理解本發明所列舉的幾個具體實施例，並非用來限制本發明所要求保護的範圍。故凡以本發明權利要求所述的特徵、結構及原理所做的等效變化或修飾，均應包括在本發明權利要求範圍之內。
權利要求
1.一種用LC-MS儀檢測地溝油的方法，其特徵在於，包括如下步驟 步驟A、標準溶液的配置(1)、乙酸銨溶液稱取乙酸銨加水溶解，搖勻配製成質量濃度為0.6 0. 8mg/ml的乙酸銨溶液；(2),DBS標準儲備溶液取DBS加乙醇稀釋，搖勻配製成質量濃度為0. 5 2mg/m 1的 DBS標準儲備溶液；(3)、DBS標準系列溶液分別取DBS標準儲備液加乙醇稀釋，製得質量濃度分別為 4 μ g/ml UO μ g/ml, 20 μ g/ml, 50 μ g/ml UOO μ g/ml, 500 μ g/ml 的 DBS 標準系列溶液；在所構建的色譜條件下，分別精密量取10 μ 1注入LC-MS儀，記錄色譜圖，以DBS濃度為橫坐標， 以峰面積為縱坐標，繪製標準曲線；步驟B、樣品處理先取樣品10. 0ml，加入乙醇10 20ml，80 100°C水浴加熱5 lOmin，渦旋混合3 5min，5000 10000r/min離心5 lOmin，棄去油層，旋轉蒸發至幹；再加甲醇-2%乙酸的水溶液3 5ml復溶，5000 10000r/min離心5 lOmin，取上清液加入到已活化的固相萃取柱，接著用正己烷3 5ml淋洗，棄去淋洗液，最後用體積比為98 2的甲醇-乙酸銨溶液3 5ml洗脫，洗脫液用0. 45 μ m濾膜濾過，收集濾液，得到待測樣品； 步驟C、LC-MS色譜條件的構建(1)、色譜條件色譜柱:C18 柱(2. OmmX 50mmX 2. 2 μ m)流動相甲醇_乙酸銨混合溶液，所述甲醇和乙酸銨的體積比為75 85 15 25 流速0. 2ml/min 柱溫30 40°C ；(2)、質譜條件離子化模式電噴霧電離源負離子模式(ESI—)霧化氣流速1. 5L/min檢測器電壓1.68kvCDL 溫度200°C加熱模塊溫度200°C選擇監測離子:m/z = 297. 15,311. 17,325. 18,339. 20 ；步驟D、樣品測定和結果判斷在構建的條件下，精密量取待測樣品10 μ 1，注入LC-MS儀，如檢出的色譜峰保留時間與高純度DBS —致，並且在扣除背景後的樣品質譜圖中，有所選擇檢測的離子出現，且相對豐度比也與高純度DBS —致，則可判斷樣品中存在DBS，進而判斷樣品為地溝油。
2.根據權利要求1中所述檢測地溝油的方法，其特徵在於，所述乙醇為體積濃度為 40 60%的乙醇溶液。
3.根據權利要求1中所述檢測地溝油的方法，其特徵在於，步驟B樣品處理中，所述渦旋混合3 5min後，重複80 100°C水浴加熱5 IOmin兩次。
4.根據權利要求1中所述檢測地溝油的方法，其特徵在於，步驟B樣品處理中，所述已活化的固相萃取柱為依次用甲醇3 5ml和水3 5ml活化的固相萃取柱。
全文摘要
本發明涉及地溝油檢測技術領域，特別是涉及一種用LC-MS儀檢測地溝油的方法；包括乙酸銨溶液配置、DBS標準儲備溶液的配置、DBS標準系列溶液的配置、樣品處理、LC-MS色譜條件的構建、樣品測定和結果判斷等步驟，本發明以DBS為鑑別地溝油的特異性指標，利用LC-MS儀為主要檢測工具，通過反覆試驗構建出完整的檢測條件，本發明能快速、精確地檢測鑑別出樣品是否是地溝油，檢出限為20μg/ml，彌補了現行國家標準缺陷。
文檔編號G01N30/02GK102435688SQ20111030205
公開日2012年5月2日 申請日期2011年9月28日 優先權日2011年9月28日
發明者關瀟瀅, 殷果, 王鐵傑, 肖麗和, 謝普, 魯藝 申請人:深圳市藥品檢驗所