一種治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑及其製備方法
2023-04-29 05:19:16 1
專利名稱：一種治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種新藤黃酸中藥製劑及其製備方法，尤其涉及到一種治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑及其製備方法。
背景技術：
藤黃(Gamboge)系藤黃科(Gittiferae)植物(Garcinia hanburyi Hook.f.)所分泌的乾燥樹脂。呈紅黃色或橙紅色，圓柱形或不規則的塊狀物，質脆易碎。主要產於柬埔寨、泰國、越南以及印度等地區。《海藥本草》始載「酸澀有毒」、主治蟲牙蛀齒，點之便落「，歷代以藤黃為主要成分的膏、丸、散計有多種。現代中醫臨床應用藤黃也較為廣泛，單用或與其它藥物合用治療癰腫初起、創瘍、帶狀皰疹、骨髓炎、毛囊炎等取得良好療效。美國藥典曾收載該品，酸性成分為藤黃樹脂中主要活性成分。1955年M.Amorosa在Ann.Chim.Itay 54，40(1955)文獻首次報導了獲得藤黃酸成分，並採用核磁共振技術確定了藤黃酸的分子結構。呂歸寶等在《藥學學報》1984，19(8)P636-639，篇名「藤黃中新藤黃酸的分離及其結構」的文章中報導了從藤黃中分離得到新藤黃酸，並用紫外、紅外廣譜、核磁共振等方法對其結構進行了鑑定。1991年曲寶璽等在《中國腫瘤臨床》1991，18(1)，P50-52，篇名為「藤黃II號抗癌作用的實驗研究」中報導了以新藤黃酸給予模型小鼠，表明該藥對小鼠移植性腫瘤有明顯抑制作用，與藤黃酸相比具有更高的治療指數，對部分類型的惡性腫瘤具有更好的治療效果。新藤黃酸是一種具有較高價值的潛在抗腫瘤治療藥物，但是只有用2％吐溫80配製的新藤黃酸水溶液，穩定性差，臨床使用十分不便。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑，該注射用新藤黃酸製劑具有良好的溶解性和穩定性，原材料來源豐富，易於工業化生產，產品質量易於控制，經濟實用。
本發明所要解決的另一個技術問題是提供一種治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑的製備方法，該製備方法工藝簡單。
本發明解決其技術問題採用的技術方案一種治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑，以新藤黃酸為活性成分，其餘成分為助溶劑、賦形劑、注射用水，其原料質量份配比範圍新藤黃酸1～100份助溶劑 1～100份賦形劑 1～200份注射用水0～5000份。
上述原料優選質量份配比範圍新藤黃酸10～80份助溶劑 10～40份賦形劑 5～70份注射用水0～4200份。
上述原料優選質量份配比範圍新藤黃酸30～50份助溶劑 15～35份賦形劑 25～60份注射用水0～3000份。
所述製劑是注射劑，所述的注射劑為溶液型注射劑、乳濁型注射劑、注射用凍乾粉針、注射用滅菌粉劑或片劑中的任何一種。
所述的助溶劑選用油酸山梨坦、聚山梨酯類、普流羅尼克、聚乙二醇、聚乙烯醇、丙二醇、乙醇、甘油、有機酸及其鈉鹽、醯胺及胺類、聚維酮、L-精氨酸、賴氨酸、葡甲胺、碳酸氫鈉、碳酸鈉、亞硫酸氫鈉、依地酸二鈉、氫氧化鈉、硼酸鈉、蜂膠中的一種或幾種。
所述的助溶劑為L-精氨酸、賴氨酸或葡甲胺中的任何一種或幾種。
所述的賦形劑選用氯化鈉、甘露醇、右旋糖酐中的一種或幾種。
本發明的另一個技術問題所採用的技術方案注射用新藤黃酸製劑製備方法，其特徵在於它包括如下步驟
A、按上述質量份配比稱取原料新藤黃酸，加入注射用水攪勻；B、加入助溶劑，溶解至澄清；C、加入賦形劑，攪拌溶解；D、加入活性炭，攪拌、脫炭、過濾、分裝，即製成新藤黃酸注射液。
上述的B步加入助溶劑後採用超聲溶解。
將上述D步所製成的新藤黃酸注射液冷凍乾燥，即製成注射用新藤黃酸凍乾粉針。
本發明所用原料新藤黃酸具有抗腫瘤作用，本發明所用新藤黃酸可使用背景技術中的呂歸寶等在《藥學學報》1984，19(8)P636-639，篇名「藤黃中新藤黃酸的分離及其結構」的文章中報導了從藤黃中分離得到新藤黃酸所公開的方法製備，也可使用如下方法製備取藤黃粉末100g，研細，加丙酮300～700mL，65℃水浴回流10～180min，靜置，倒出上清液，再依據上述方法分別加丙酮300～600mL、100～500mL繼續提取，共3次，合併提取液。減壓回收丙酮，濃縮至約50～200mL，用100～700g矽膠吸附，揮幹丙酮；另取已活化矽膠300～1800g，以苯溼法裝入層析柱中，最後裝入拌藥矽膠，矽膠柱用二倍柱體積的苯洗脫，再用苯-乙酸乙酯(3～15∶1)洗脫至無色，收集苯-乙酸乙酯(3～15∶1)洗脫部分，減壓回收至幹。按照上述方法通過矽膠G柱層析(氯仿裝柱)，以氯仿-甲醇-二乙胺(6～20∶0.5～4∶0.5～6)洗脫，收集流分，新藤黃酸部分以稀鹽酸酸化，得亮黃色沉澱，濾取沉澱，水洗到中性，抽乾，得亮黃色無定形固體新藤黃酸原料。
本發明注射用新藤黃酸製劑配方的篩選新藤黃酸為亮黃色結晶性粉末，在乙醇、甲醇等有機溶劑中溶解，水中不溶，在氫氧化鈉、碳酸氫鈉等鹼性溶液中溶解，但不穩定，易於水解，故選擇合適的助溶劑是製劑的關鍵。我們選擇了多種助溶劑，新藤黃酸在氫氧化鈉和碳酸氫鈉中溶解最快，但溶液在室溫放置4～8小時後顏色變深，提示藥物已經發生降解。表面活性劑對本品有較好的助溶效果，水溶液室溫放置6天，顏色改變不明顯，高效液相色譜測定新藤黃酸含量基本無改變。酸性、中性胺基酸對本品基本無助溶效果。鹼性胺基酸如L-精氨酸及賴氨酸對新藤黃酸助溶效果顯著，水溶液室溫放置6天，顏色改變不明顯，高效液相色譜測定新藤黃酸含量基本無改變。葡甲胺助溶效果也較好。L-精氨酸、賴氨酸或葡甲胺為本製劑的優選助溶劑，L-精氨酸為本製劑的最優助溶劑，實驗結果見表1。
表1助溶劑對新藤黃酸溶解的影響(100mg∶10mL)
新藤黃酸100mg加助溶劑L-精氨酸後，採用冷凍乾燥，凍乾粉呈現易碎、鬆散的網格狀，復溶時溶液有乳光，澄明度差，因此我們加入不同賦形劑並進行了篩選，結果見表2。
表2新藤黃酸助溶劑篩選結果(1)
從上表可看出，新藤黃酸加助溶劑L-精氨酸時，選用甘露醇、氯化鈉、乳糖、右旋糖酐做為賦形劑較為理想。
新藤黃酸100mg加助溶劑賴氨酸後，採用冷凍乾燥，凍乾粉呈現易碎、鬆散的塊狀，復溶時溶液略有乳光，澄明度檢查不合格，因此我們加入不同賦形劑並進行了篩選，結果見表3。
表3新藤黃酸助溶劑篩選結果(2)
從上表可看出，新藤黃酸加助溶劑賴氨酸時，選用甘露醇、氯化鈉、右旋糖酐做為賦形劑較為理想。
因此本發明的賦形劑優選甘露醇、氯化鈉、右旋糖酐；最優選甘露醇。
以高效液相色譜進行成分測定表明，本發明的注射用新藤黃酸配方的組合物具有良好的穩定性，可長時間室溫放置，特別是在凍乾粉中充入N2可長時間保存不變質，復溶表1
通過三次獨立實驗，結果顯示注射用新藤黃酸對動物和人腫瘤細胞株的半數抑制濃度(IC50)均在10μg/ml以下。根據國家藥監局相關標準(《新藥(西藥)臨床前研究指導原則彙編(藥學、藥理學、毒理學)》1993；《新藥(中藥)臨床前研究指導原則彙編(藥學、藥理學、毒理學)》1993)，當藥物對體外培養癌細胞的半數抑制濃度(IC50)＜10μg/ml以下時，即可判斷藥物有顯著的抗腫瘤活性，因此，由實驗結果可以判斷注射用新藤黃酸對惡性腫瘤細胞有明顯的細胞毒作用。
實驗例2.
注射用新藤黃酸對體外培養的人肺癌A549細胞的細胞毒作用(時間-效應關係)1.實驗材料(1)實驗用藥注射用新藤黃酸，0.2g/支；5-FU，0.25g/支，江蘇南通製藥總廠，批號031203(2)腫瘤細胞株人肺癌A549細胞。
2.實驗方法細胞培養於含10％小牛血清的高糖型DMEM培養液中，稀釋成4～5×103細胞/mL。在磁力攪拌條件下以8頭加樣槍接種於96孔培養板中，每孔190μL，置於37℃、5％CO2培養箱中，飽和溼度條件培養24h，待細胞貼壁後，實驗組各孔分別加入10μL濃度為3.0μg/mL的注射用新藤黃酸溶液；西藥陽性對照藥物組5-FU的濃度為10μg/mL；每批實驗同時設溶劑對照孔。各組給藥後，分別再繼續培養24、48、72、94、120、144h，對注射用新藤黃酸、5-FU陽性對照組以及溶劑對照組各取8孔，每孔加濃度為5mg/mL MTT生理鹽水溶液20μL，繼續培養4h，然後棄去培養基，加150μL DMSO充分溶解10min，8頭加樣槍移取DMSO溶液加於另一全新微孔培養板中，按MTT法在酶標儀中測定各孔的光密度(OD)值，抑制率按下式計算
實驗重複三次，抑制率值為三次平均值。
3.實驗結果注射用新藤黃酸對體外培養的人肺癌A549細胞的細胞毒作用(時間-效應關係)實驗結果見表5.表6.表7.
表5藤黃酸對人肺癌A549細胞的時間-效應關係(實驗一)
表6新藤黃酸對人肺癌A549細胞的時間-效應關係(實驗二)
表7新藤黃酸對人肺癌A549細胞的時間-效應關係(實驗三)
由上述實驗結果可知，本發明新藤黃酸對體外培養的人肺癌A549細胞增殖具有明顯的時間-效應關係，作用強度隨給藥時間的延長而增加。對肺癌A549細胞的抗增殖作用強度與作用時間確切相關。對細胞增殖的抑制作用與臨床標準用藥5-FU相當。
實驗例3.
本發明對小鼠移植性腫瘤的抗腫瘤作用
1.實驗材料實驗用藥注射用新藤黃酸，0.2g/支5-FU，0.25g/支，江蘇南通製藥總廠，批號0312032.實驗方法給藥途徑灌胃給予新藤黃酸製劑，每日1次。
給藥周期荷實體瘤昆明種小鼠接種腫瘤細胞後次日開始給藥，連續給藥7天，20天後處死動物稱取瘤重。荷腹水瘤昆明種小鼠接種腫瘤細胞後次日開始給藥，連續給藥7天，計算小鼠存活時間。
3.實驗結果注射用新藤黃酸對荷S-180腹水瘤及實體瘤小鼠的抗腫瘤作用實驗結果見表8.注射用新藤黃酸對荷H22腹水瘤及實體瘤小鼠的抗腫瘤作用實驗結果見表9.
表8注射用新藤黃酸對荷S-180腹水瘤及實體瘤小鼠的抗腫瘤作用(x±s)(n＝12)
與0.9％NaCl組比較，*表示p＜0.05；**表示p＜0.01與5-FU組比較，△表示p＜0.05；△△表示p＜0.01表9注射用新藤黃酸對荷H22腹水瘤及實體瘤的抗腫瘤作用(x±s)(n＝12)
與0.9％NaCl組比較，*表示p＜0.05；**表示p＜0.01與5-FU組比較，△表示p＜0.05；△△表示p＜0.01結果顯示，對於S-180腫瘤細胞株所致實體瘤和腹水瘤，注射用新藤黃酸可抑制其增殖，療效確切，在實驗劑量其抑瘤效果優於10mg.kg-15-FU(下同)的治療效果(p＜0.01)。對荷H22肝癌細胞株所致實體瘤和腹水瘤，注射用新藤黃酸有顯著的抗腫瘤作用，療效確切，在實驗劑量其抑瘤效果優於10mg.kg-15-FU(下同)的治療效果(p＜0.01)。
實驗例4.
本發明對艾氏腹水癌小鼠的抗腫瘤作用1.實驗材料實驗用藥注射用新藤黃酸，0.2g/支2.實驗方法給藥途徑腹腔注射給予注射用新藤黃酸製劑。
給藥周期荷瘤小鼠接種腫瘤細胞後次日開始給藥，給藥方法按表中所示。
3.實驗結果注射用新藤黃酸腹腔給藥對艾氏腹水癌的抑制作用實驗結果見表10.
表10注射用新藤黃酸腹腔給藥對艾氏腹水癌的抑制作用(x±s)(n＝10)
實驗例5.
本發明對其它小鼠腹水癌的抗腫瘤作用1.實驗材料實驗用藥注射用新藤黃酸，0.2g/支2.實驗方法給藥途徑腹腔注射給予注射用新藤黃酸製劑。
給藥周期荷瘤昆小鼠接種腫瘤細胞後次日開始給藥，給藥方法按表中所示。
3.實驗結果注射用新藤黃酸腹腔給藥對其它小鼠腹水癌的抑制作用實驗結果見表11表11注射用新藤黃酸腹腔給藥對ARS、P388小鼠腹水癌的抑制作用(x±s)(n＝6)
實驗例6.
本發明對其它小鼠實體瘤的抗腫瘤作用1.實驗材料實驗用藥注射用新藤黃酸，0.2g/支2.實驗方法給藥途徑、給藥周期荷瘤小鼠接種腫瘤細胞後次日開始給藥，給藥方法按表中所示。
3.實驗結果注射用新藤黃酸對U14鼠宮頸癌、Lewis肺癌、Ma737乳腺癌、Ma737乳腺癌、La795肺腺癌、La795肺腺癌小鼠實體瘤的抑制作用實驗結果見表12.
表12注射用新藤黃酸對小鼠實體瘤的抑制作用(x±s)(n＝10)
下面結合具體實施例來詳細說明本發明。
具體實施例方式
本發明的詳細組分由下列實施例給出，但本發明的保護範圍，不僅局限於此。
通過下述實施例進一步說明本發明。
實施例1注射用新藤黃酸製劑，其原料質量份配比範圍新藤黃酸20份、L-精氨酸20份、甘露醇40份、注射用水1000份。
取處方量新藤黃酸置於適當容器中，加適量注射用水(總體積的80％)，攪拌混勻，加入L-精氨酸超聲溶解至澄清，加入甘露醇，攪拌溶解，然後加入1％針用炭，攪拌30min，脫炭，加注射用水至足量，檢驗含量合格後，無菌環境中首先以0.45μm微孔濾膜過濾，然後再以0.22μm微孔濾膜過濾，濾液分裝於青黴素瓶中，每瓶10mL，半加塞，裝盤，置於凍幹箱中，插入溫度傳感器，關閉箱門開機冷凍乾燥，密塞，出箱，軋蓋，檢查，得注射用新藤黃酸凍乾粉。
實施例2注射用新藤黃酸製劑，其原料質量份配比範圍新藤黃酸20份、L-精氨酸20份、右旋糖酐40份、注射用水1000份。
取處方量新藤黃酸置於適當容器中，加適量注射用水(總體積的80％)，攪拌混勻，加入L-精氨酸超聲溶解至澄清，加入右旋糖酐，攪拌溶解，然後加入1％針用炭，攪拌30min，脫炭，加注射用水至足量，檢驗含量合格後，無菌環境中首先以0.45μm微孔濾膜過濾，然後再以0.22μm微孔濾膜過濾，濾液分裝於青黴素瓶中，每瓶10mL，密塞，出箱，軋蓋，檢查，得新藤黃酸注射液。
實施例3注射用新藤黃酸製劑，其原料質量份配比範圍新藤黃酸50份、賴氨酸50份、氯化鈉100份、注射用水5000份。
取處方量新藤黃酸置於適當容器中，加適量注射用水(總體積的80％)，攪拌混勻，加入賴氨酸或葡甲胺超聲溶解至澄清，加入右旋糖酐或氯化鈉，攪拌溶解，然後加入1％針用炭，攪拌30min，脫炭，加注射用水至足量，檢驗含量合格後，無菌環境中首先以0.45μm微孔濾膜過濾，然後再以0.22μm微孔濾膜過濾，濾液分裝於青黴素瓶中，每瓶5mL，半加塞，裝盤，置於凍幹箱中，插入溫度傳感器，關閉箱門開機冷凍乾燥，密塞，出箱，軋蓋，檢查，得注射用新藤黃酸凍乾粉。
實施例4注射用新藤黃酸製劑，其原料質量份配比範圍新藤黃酸50份、葡甲胺50份、右旋糖酐100份、注射用水5000份。
取處方量新藤黃酸置於適當容器中，加適量注射用水(總體積的80％)，攪拌混勻，加入賴氨酸或葡甲胺超聲溶解至澄清，再加入右旋糖酐或氯化鈉，攪拌溶解，然後加入1％針用炭，攪拌30min，脫炭，加注射用水至足量，檢驗含量合格後，無菌環境中首先以0.45μm微孔濾膜過濾，然後再以0.22μm微孔濾膜過濾，濾液分裝於青黴素瓶中，每瓶5mL，密塞，軋蓋，檢查，得新藤黃酸注射液。
實施例5新藤黃酸注射用片劑，其原料質量份配比範圍新藤黃酸50份、L-精氨酸35份、氯化鈉60份、注射用水3000份。
取處方量新藤黃酸置於適當容器中，加適量注射用水，攪拌混勻，加入L-精氨酸超聲溶解至澄清，再加入氯化鈉，攪拌溶解，然後加入1％針用炭，攪拌30min，脫炭，超濾，無菌環境中再加其他已消毒的注射用輔料制粒，烘乾，整粒，壓片，片劑分裝於已消毒容器中，封裝，得新藤黃酸注射用片劑。
實施例6新藤黃酸乳濁型注射劑，其原料質量份配比範圍新藤黃酸50份、豆磷脂30份、甘油200份、注射用水2000份。
取處方量新藤黃酸、精製豆磷脂、甘油與適量注射用水混合；轉入到高速組織搗碎機中，8000轉/分攪拌三次，第一次10分鐘，第二次5分鐘，第三次3分鐘，使其分散均勻成初乳劑；緩慢加入剩餘的注射用水，再轉入到高壓乳勻機內，40Mpa勻化三次，過濾得濾液；灌封，滅菌，即得新藤黃酸乳注射液。
實施例7注射用新藤黃酸滅菌粉劑，其原料質量份配比範圍新藤黃酸10份、L-精氨酸10份、氯化鈉5份、注射用水0份。
取處方量新藤黃酸、L-精氨酸、氯化鈉混合均勻，置粉碎機中粉碎，粉末用放射源照射滅菌，分裝於已消毒容器中，封裝，即製得注射用新藤黃酸滅菌粉劑。
實施例8注射用新藤黃酸凍乾粉針，其原料質量份配比範圍新藤黃酸80份、L-精氨酸40份、甘露醇70份注射用水4200份。
製備方法同實施例1。
實施例9注射用新藤黃酸溶液型注射劑，其原料質量份配比範圍新藤黃酸1份、甘油1份、右旋糖苷1份、注射用水5000份。
製備方法同實施例4。
實施例10注射用新藤黃酸冷乾粉針，其原料質量份配比範圍新藤黃酸100份、L-精氨酸100份、甘露醇200、份注射用水5000份。
製備方法同實施例1。
權利要求
1.一種治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑，其特徵在於，以新藤黃酸為活性成分，其餘成分為助溶劑、賦形劑、注射用水，其原料質量份配比範圍新藤黃酸 1～100份助溶劑1～100份賦形劑1～200份注射用水 0～5000份。
2.根據權利要求1所述的治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑，其特徵在於其原料優選質量份配比範圍新藤黃酸 10～80份助溶劑10～40份賦形劑5～70份注射用水 0～4200份。
3.根據權利要求2所述的治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑，其特徵在於其原料優選質量份配比範圍新藤黃酸 30～50份助溶劑15～35份賦形劑25～60份注射用水 0～3000份。
4.根據權利要求1-3任何一項所述的治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑，其特徵在於所述製劑是注射劑，所述的注射劑為溶液型注射劑、乳濁型注射劑、注射用凍乾粉針、注射用滅菌粉劑或片劑中的任何一種。
5.根據權利要求1-3任何一項所述的治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑，其特徵在於所述的助溶劑選用油酸山梨坦、聚山梨酯類、普流羅尼克、聚乙二醇、聚乙烯醇、丙二醇、乙醇、甘油、有機酸及其鈉鹽、醯胺及胺類、聚維酮、L-精氨酸、賴氨酸、葡甲胺、碳酸氫鈉、碳酸鈉、亞硫酸氫鈉、依地酸二鈉、氫氧化鈉、硼酸鈉、蜂膠中的一種或幾種。
6.根據權利要求5所述的治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑，其特徵在於所述的助溶劑為L-精氨酸、賴氨酸或葡甲胺中的任何一種或幾種。
7.根據權利要求1-3任何一項所述的治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑，其特徵在於所述的賦形劑選用氯化鈉、甘露醇、右旋糖酐中的一種或幾種。
8.權利要求1-7任何一項所述的注射用新藤黃酸製劑製備方法，其特徵在於它包括如下步驟A、按權利要求1-7任何一項的質量份配比稱取原料新藤黃酸，加入注射用水攪勻；B、加入助溶劑，溶解至澄清；C、加入賦形劑，攪拌溶解；D、加入活性炭，攪拌、脫炭、過濾、分裝，即製成新藤黃酸注射液。
9.根據權利要求8所述的注射用新藤黃酸製劑製備方法，其特徵在於所述的B步加入助溶劑後採用超聲溶解。
10.根據權利要求8或9所述的注射用新藤黃酸製劑製備方法，其特徵在於將上述D步所製成的新藤黃酸注射液冷凍乾燥，即製成注射用新藤黃酸凍乾粉針。
全文摘要
本發明公開了一種治療腫瘤的注射用新藤黃酸製劑，以新藤黃酸為活性成分，其餘成分為助溶劑、賦形劑、注射用水，其原料質量份配比範圍新藤黃酸1～100份、助溶劑1～100份、賦形劑1～200份、注射用水0～5000份。本發明還公開了這種注射用新藤黃酸製劑的製備方法，它包括如下步驟A、按質量份配比稱取原料新藤黃酸，加入注射用水攪勻；B、加入助溶劑，溶解至澄清；C、加入賦形劑，攪拌溶解；D、加入活性炭，攪拌、脫炭、過濾、分裝，即製成新藤黃酸注射液。該注射用新藤黃酸製劑具有良好的溶解性和穩定性，原材料來源豐富，易於工業化生產，產品質量易於控制，經濟實用。
文檔編號A61P35/00GK1857529SQ20061003476
公開日2006年11月8日 申請日期2006年4月5日 優先權日2006年4月5日
發明者趙愛國 申請人:趙愛國