翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物及其製備方法和應用的製作方法
2023-04-29 01:08:01 2
專利名稱：翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於中藥領域，特別涉及翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物及其製備方法和應用。
背景技術：
腫瘤細胞對抗腫瘤藥物的多藥耐藥(multidrug resistance, MDR)是導致腫瘤化學藥物治療失敗的常見因素。目前國內腫瘤患病率呈上升趨勢，並且90%的腫瘤患者死亡在不同程度上受腫瘤耐藥的影響，這就急切尋求符合上述理想的新一代耐藥逆轉劑。現有的研究結果表明多種機制參與腫瘤細胞多藥耐藥形成，主要包括細胞膜 P-糖蛋白(PermeabiIity-glycoprotein, P-gP)、多藥耐藥相關蛋白(Multidrug Resistance Associated Protein, MRP)過度表達形成藥物外輸泵,使抗癌藥物在腫瘤細胞內蓄積下降；穀胱甘肽-S-轉移酶(GST)單獨或與穀胱甘肽(GSH) —起參與多種細胞毒代謝及解毒過程；與細胞凋亡相關的因子及基因如bcl-2，P53等異常。國內外針對上述環節進行了廣泛研究以尋求拮抗和/或逆轉腫瘤耐藥細胞，體外被證實具有逆轉耐藥活性的化合物或生物製劑很多，但真正進入臨床研究的只有異博定、環孢菌素A等極少數，而且療效不理想。目前還沒有一種藥物或方法在臨床被廣泛接受，其原因在於現有逆轉劑大多為「老藥新用」，逆轉耐藥往往不是其主要功能，臨床使用禁忌症多，毒副作用大；生物製劑在體內不穩定，難以作用到靶點且毒副反應多；臨床耐藥往往數種機制同時參與，只對單一機制起作用的逆轉劑難以發揮顯著的效應。其中對於中藥或有效單體成分研究而言，真正能結合臨床療效和中醫理論的研究少見。翻白草(Descolor Cinquefoil Herb),性甘、苦、平,具有清熱解毒功效；該藥材含延胡索酸(fumaric acid),沒食子酸(gallic acid),原兒茶酸(protocatechuic acid),懈皮素(quercetin),柚皮素(naringenin),山奈酌·(kaempferol),間苯二酸(m-phthalicacid)等化學成分，目前還沒有其具有逆轉腫瘤多藥耐藥作用的報導。
發明內容
為了解決上述現有技術中存在的不足之處，本發明的首要目的在於提供一種翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物。本發明的翻白草提取物起到逆轉腫瘤多藥耐藥作用，且該翻白草提取物無毒副作用。本發明的另一目的在於提供一種上述翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的製備方法。本發明的再一目的在於提供一種翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物在製備常規的中藥製劑劑型中的應用。本發明的目的通過下述技術方案實現一種翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的製備方法包括下述步驟翻白草粉碎，過40目篩，用2 — 5倍55% - 90%乙醇浸泡1_3天，過濾，收集濾液，回收乙醇濃縮至粘稠狀液體，加60% — 80%乙醇使其溶解，室溫下放置1-3天，用60% - 80%乙醇洗濾，收集濾液，濾液濃縮至相對密度為I. 02-1. 04g/cm3得濾液濃縮液，將濾液濃縮液乾燥，得到翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物；粉碎，過篩，得翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的細粉。一種翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的製備方法包括下述步驟翻白草粉碎，過40目篩，用3倍75%乙醇浸泡2天，過濾，收集濾液，回收乙醇濃縮至粘稠狀液體，加70%乙醇使其溶解，室溫下放置2天，用70 %乙醇洗濾，收集濾液，濾液濃縮至相對密度為I. 03g/cm3得濾液濃縮液，將濾液濃縮液乾燥，得到翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物；粉碎，過100目篩，得翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的細粉。所述的乾燥為冷凍乾燥、真空乾燥、噴霧乾燥中的一種；所述的過篩是過100-200目的篩網。所述噴霧乾燥的條件為進風溫度為110 130°C ;出風溫度為70 90°C ;霧化器 轉速為45 55轉/分鐘；進料速度為3 6ml/分鐘。所述噴霧乾燥的條件為進風溫度為120°C ;出風溫度為80°C ;霧化器轉速為50轉/分鐘；進料速度為5ml/分鐘。由上述所述的製備方法製備而成的翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物。上述所述的翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物在製備常規的中藥製劑劑型中的應用，在乾燥粉中加入製備不同中藥製劑劑型時需要的各種常規輔料，採用常規的中藥製劑製備方法將其製備成常見的中藥製劑劑型。所述中藥製劑劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑。本發明的原理在於翻白草性甘、苦、平，具有清熱解毒功效；該藥材含延胡索酸，沒食子酸，原兒茶酸，槲皮素，柚皮素，山柰酚，間苯二酸等化學成分，用本發明的製備方法將翻白草提取物製備出來，製備得到的翻白草提取物有逆轉腫瘤多藥耐藥的作用。本發明與現有技術相比，具有如下突出的優點本發明所製備的翻白草的提取物無毒副作用、有逆轉腫瘤多藥耐藥的特性，可以製備成顆粒、片劑、膠囊劑；本發明生產方法簡便，用藥成本不高。實驗結果表明本發明提取物含藥血清與ADR聯合用可使ADR對K562/ADR的IC5tl明顯下降，不同給藥濃度對K562/ADR逆轉倍數為I. 85 8. 63，且呈濃度正相關，這表明本發明中藥組合物對K562/ADR耐藥株具有逆轉作用。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但發明的實施方式不限於此。實施例I翻白草lkg，粉碎，過40目篩，用2倍90%乙醇浸泡I天，過濾，收集濾液，回收乙醇濃縮至粘稠狀液體，加80%乙醇使其溶解，室溫下放置I天，用80%乙醇洗濾，收集濾液，濾液濃縮至相對密度為I. 04g/cm3得到濾液濃縮液，將濾液濃縮液噴霧乾燥，進風溫度控制為110°C，出風溫度為70°C，霧化器轉速為45轉/分鐘，進料速度為3ml/分鐘，得翻白草抗腫瘤多藥耐藥提取物，將提取物粉碎，過150目篩，得翻白草抗腫瘤多藥耐藥提取物的細粉；細粉與常規輔料混勻後，壓片，得到含有翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的片劑。實施例2翻白草lkg，粉碎，過40目篩，用3倍75%乙醇浸泡2天，過濾，收集濾液，回收乙醇濃縮至粘稠狀液體，加70%乙醇使其溶解，室溫下放置2天，用70%乙醇洗濾，收集濾液，濾液濃縮至相對密度為I. 03g/cm3得到濾液濃縮液，將濾液濃縮液噴霧乾燥，進風溫度控制為120°C，出風溫度為80°C，霧化器轉速為50轉/分鐘，進料速度為5ml/分鐘，得翻白草抗腫瘤多藥耐藥提取物，將提取物粉碎，過100目篩，得翻白草抗腫瘤多藥耐藥提取物的細粉；細粉與常規輔料混勻後，製成顆粒，裝入膠囊，得到含有翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的膠囊劑。實施例3翻白草lkg，粉碎，過40目篩，用5倍55%乙醇浸泡3天，過濾，收集濾液，回收乙醇濃縮至粘稠狀液體，加60%乙醇使其溶解，室溫下放置3天，用60%乙醇洗濾，收集濾液，濾液濃縮至相對密度為I. 02g/cm3，得到濾液濃縮液，將濾液濃縮液噴霧乾燥，進風溫度控制為130°C，出風溫度為90°C，霧化器轉速為55轉/分鐘，進料速度為6ml/分鐘，得翻白草抗腫瘤多藥耐藥提取物，將提取物粉碎，過200目篩，得翻白草抗腫瘤多藥耐藥提取物的細粉；細粉與常規輔料混勻後，製備成顆粒劑，得到含有翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的顆 粒劑。實施例4翻白草lkg，粉碎，過40目篩，用5倍55%乙醇浸泡3天，過濾，收集濾液，回收乙醇濃縮至粘稠狀液體，加60%乙醇使其溶解，室溫下放置3天，用60%乙醇洗濾，收集濾液，濾液濃縮至相對密度為I. 02g/cm3,得到濾液濃縮液，採用冷凍乾燥法，將濾液濃縮液放入功率3KW冷凍乾燥機，冷凍24小時後得翻白草抗腫瘤多藥耐藥提取物，將提取物粉碎，過150目篩，得翻白草抗腫瘤多藥耐藥提取物的細粉；細粉與常規輔料混勻後，製備成顆粒劑，得到含有翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的顆粒劑。實施例5翻白草lkg，粉碎，過40目篩，用5倍55%乙醇浸泡3天，過濾，收集濾液，回收乙醇濃縮至粘稠狀液體，加60%乙醇使其溶解，室溫下放置3天，用60%乙醇洗濾，收集濾液，濾液濃縮至相對密度為I. 02g/cm3,得到濾液濃縮液，採用真空乾燥法，將濾液濃縮液放入功率3KW真空乾燥機，控制壓力IOOPa以下，乾燥24小時後得翻白草抗腫瘤多藥耐藥提取物，將提取物粉碎，過200目篩，得翻白草抗腫瘤多藥耐藥提取物的細粉；細粉與常規輔料混勻後，製備成顆粒劑，得到含有翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的顆粒劑。實施例6I.細胞和細胞培養白血病細胞K562/S為敏感株，K562/ADR為白血病細胞阿黴素耐藥株，K562/ADR是由K562/S細胞接觸遞增濃度的ADR誘導而成，具有典型多藥耐藥性。細胞株均培養於含10%小牛血清的RPMI-1640培養液中。細胞購買於中山大學實驗動物中心。2. MTT比色法測定翻白草提取物對腫瘤細胞的增殖抑制作用取對數生長期細胞，K562/ADR細胞以lX105/ml、K562/S以O. 5X105/ml分別接種於96孔培養板，100 μ I/孔。在37°C 5%C02條件下培養過夜後，加不同濃度翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物和ADR共100 μ 1，調零組和對照組加相應體積的培養液，每組設4個平行孔。培養72h後，每孔加5mg/ml MTT20 μ I (調零組除外)，再培養4h，傾去培養液，加DMS0100 μ I/孔，待完全溶解後，用酶聯免疫儀在波長570nm處調零組調零後讀取吸光度(A)值。取4孔A值的均數按公式計算細胞抑制率；細胞抑制率(IR)= [I-(試驗孔A均值/對照孔A均值)]X 100%。計算IR並求出半數抑制濃度(IC5tl),以上實驗重複3次。逆轉倍數=IC50對照組/IC50受試組IC50對照組為對照組的K562/S或K562/ADR IC50值；IC50 為不同劑量給藥組的IC5tl值。表I翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物對K562/S和K562/ADR細胞生長的逆轉作用
翻白草提取物IC50増敏倍數逆轉倍數
權利要求
1.一種翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的製備方法，其特徵在於包括下述步驟翻白草粉碎，過40目篩，用2 — 5倍55% -90%乙醇浸泡1_3天，過濾，收集濾液，回收乙醇濃縮至粘稠狀液體，加60% — 80%乙醇使其溶解，室溫下放置1-3天，用60% - 80%乙醇洗濾，收集濾液，濾液濃縮至相對密度為I. 02-1. 04g/cm3得濾液濃縮液，將濾液濃縮液乾燥，得到翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物；粉碎，過篩，得翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的細粉。
2.根據權利要求I中所述的一種翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的製備方法，其特徵在於包括下述步驟翻白草粉碎，過40目篩，用3倍75%乙醇浸泡2天，過濾，收集濾液，回收乙醇濃縮至粘稠狀液體，加70%乙醇使其溶解，室溫下放置2天，用70 %乙醇洗濾，收集濾液，濾液濃縮至相對密度為I. 03g/cm3得濾液濃縮液，將濾液濃縮液乾燥，得到翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物；粉碎，過100目篩，得翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的細粉。
3.根據權利要求I所述的製備方法，其特徵在於 所述的乾燥為冷凍乾燥、真空乾燥、噴霧乾燥中的一種； 所述的過篩是過100-200目的篩網。
4.根據權利要求3所述的製備方法，其特徵在於所述噴霧乾燥的條件為進風溫度為110 130°C ;出風溫度為70 90°C ;霧化器轉速為45 55轉/分鐘；進料速度為3 6ml/分鐘。
5.根據權利要求3所述的製備方法，其特徵在於所述噴霧乾燥的條件為進風溫度為1200C ;出風溫度為80°C ;霧化器轉速為50轉/分鐘；進料速度為5ml/分鐘。
6.一種由權利要求I 5任一項所述的製備方法製備而成的翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物。
7.根據權利要求6任一項所述的翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物在製備常規的中藥製劑劑型中的應用，其特徵在於在乾燥粉中加入製備不同中藥製劑劑型時需要的各種常規輔料，採用常規的中藥製劑製備方法將其製備成常見的中藥製劑劑型。
8.根據權利要求7所述的應用，其特徵在於所述中藥製劑劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑。
全文摘要
本發明提供一種翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的製備方法，包括下述步驟翻白草粉碎，過40目篩，用2－5倍55%－90％乙醇浸泡1-3天，過濾，收集濾液，回收乙醇濃縮至粘稠狀液體，加60％－80％乙醇使其溶解，室溫下放置1-3天，用60%－80％乙醇洗濾，收集濾液，濾液濃縮至相對密度為1.02-1.04g/cm3的濾液濃縮液，將濾液濃縮液乾燥後得到翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物，提取物粉碎，過篩，得到翻白草逆轉腫瘤多藥耐藥提取物的細粉。本發明所製備得到的翻白草提取物對逆轉腫瘤多藥耐藥有很好的作用，可將其應用於製備常規的中藥製劑劑型如片劑、膠囊劑、顆粒劑。
文檔編號A61K36/73GK102908422SQ201210376958
公開日2013年2月6日 申請日期2012年9月29日 優先權日2012年9月29日
發明者蔡宇, 張榮華 申請人:暨南大學