一種龍爪蘭的組培快繁方法
2023-05-13 18:06:51 1
專利名稱：一種龍爪蘭的組培快繁方法
技術領域：
本發明涉及植物組織培養技術領域，主要是一種龍爪蘭的組培快繁方法。
背景技術：
龍爪蘭(Z)acO;/o;^加wa/flfc)是起源於歐洲的一種耐寒地生蘭科植物，為蘭科根爪蘭屬 多年生草本植物，非常漂亮，花期在6月底到7月，花色為紫紅色、且非常優雅。現在美國 的一些專業苗圃開始培養龍爪蘭出售。但龍爪蘭生長緩慢、繁殖係數低，三年只能增殖2個 芽，且又不能確定能否結種子。至今尚未見有組培成功的報導。
浙江省農業科學院從英國引進龍爪蘭種質，擬通過植物組織培養技術大量繁殖種苗，然 後出口歐美國家。同時還可以在國內試種後加以推廣。採用植物組織培養方法可以在短期內 快速繁殖多種植物，不僅繁殖率高，且因為其是無性繁殖，可以保持原繁殖母株的優良性狀, 近年來在生產上應用越來越廣。但是不同的植物利用植物組織培養方法繁殖種苗的難易程度 是不同的，特別是蘭科植物比較難。在龍爪蘭的前期組培試驗中，也出現了蘭科植物在組織 培養中常出現的一些問題，如外植體接種汙染率高、外植體易褐化、組培苗易褐化、移栽成 活率低等問題，使其無法實現大規模工廠化生產。
發明內容
本發明要解決上述現有技術的缺陷，提供一種龍爪蘭組培快繁的方法。
本發明解決其技術問題採用的技術方案。這種龍爪蘭組培快繁的方法，按如下步驟進行:
1) 、培養基的配製，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為
(1) 基本培養基MS或3/4MS或1/2MS，其中蔗糖或白糖20 30g/L，瓊脂7 9 g/L, pH5.4;
(2) 誘導培養基MS+6-BA2 5mg/L+NAA0.05 0.5mg/L+活性炭1 3g/L;
(3) 增殖培養基MS+6-BAl 3mg/L+NAA0.05 0.3mg/L+活性炭l 3g/L;
(4) 壯苗培養基3/4MS+6-BA0.1 lmg/L+NAA0.05 0.1mg/L+活性炭l 3g/L;
(5) 生根培養基1/2MS+IBA0.1 0.5mg/L+活性碳l 3g/L;
2) 、外植體的選取與滅菌取龍爪蘭幼嫩側芽，經滅菌處理後備用；
3) 、誘導培養將步驟2)滅菌處理後的幼嫩側芽在無菌條件下，用濾紙吸乾後，用解 剖刀剝去外葉，切去上部葉後，接種在誘導培養基上，經1 2個月後，直接從外植體誘導出 初代幼芽；
4) 、增殖培養將步驟3)誘導出的初代幼芽在無菌條件下，接種在增殖培養基上，培 養30 45天分化出叢芽；每隔30 45天，將步驟4)分化的叢芽切成單株再接種在增殖培 養基上，再分化出叢芽；
5) 、壯苗培養將步驟4)分化出叢芽接種到壯苗培養基上，20 30天後，幼苗株高生 長達2 5釐米；
6) 、生根培養將步驟5)生長達2 5釐米叢芽切成單株接種到生根培養基上，20 30天後，幼苗基部長出數根根系
7) 、組培苗的馴化與移栽將步驟6)生長達3 7釐米以上的生根幼芽，移至常溫下適 應3 5天後，打開蓋子再適應3 5天，洗清根部培養基後移栽入栽培基質中。
所述的滅菌處理是幼嫩側芽用自來水衝洗乾淨後，整理成1 1.5釐米長的幼芽，先在體 積比為10%的檸檬酸溶液中浸泡0.5 1小時，再經體積比為75%酒精浸泡0.5 1.0分鐘，再 用體積比為0.1%升汞溶液滅菌10 15分鐘，最後用無菌水衝洗3 5次。
所述的優化培養基，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為
(1) 基本培養基MS或3/4MS或1/2MS,其中蔗糖或白糖20 30g/L，瓊脂7 9 g/L， pH5.4;
(2) 誘導培養基MS+6-BA3mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭3 g/L;
(3) 增殖培養基MS+6-BA2mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭1 g/L;
(4) 壯苗培養基3/4MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭1 g/L;
(5) 生根培養基1/2MS+IBA0.5mg/L+活性碳1 g/L。 所述的各組織培養階段的培養條件是，培養溫度為20士2。C，光照光強為1500 2500 Lx,
光照時間為12h/d。
所述的栽培基質由泥炭珍珠巖蛭石按體積比3: 2: 1配製而成。 本發明的有益效果是
1) 、提出的龍爪蘭組培優化培養基針對性強、適用性好，由於提高了細胞分裂素濃度，
芽的誘導率達90%以上；芽的增殖率每個培養周期達5倍以上，年組培苗生產能力可達100 萬苗以上(一年為8個培養周期)；經增設的壯苗培養基培養後成苗生長速度加快，20 30 天苗高可達2 5釐米，生根率達100%;移栽成活率90%以上。
2) 、該方法由於外植體進行了檸檬酸溶液中浸泡預處理，在培養的各個階段在培養基中 添加了活性炭，並在20士2'C較低的溫度下進行培養，有效地防止了外植體和組培苗的褐變
現象，促進了組培苗的分化和生長。
3)、提出的組織培養快速繁殖方法得到的龍爪蘭組培苗，遺傳性狀一致，克服了常規繁 殖係數低的缺點。
具體實施例方式
通過以下實施例對本發明作進一步的詳細說明，但本發明的內容並不局限於此。 實施例l:本實施例1中的這種龍爪蘭組培快繁的方法，按如下歩驟進行-
1) 、培養基的配製，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為
(1) 基本培養基MS或3/4MS或1/2MS，其中蔗糖或白糖20 30g/L，瓊脂7 9 g/L， pH5.4;
(2) 誘導培養基MS+6-BA2 5mg/L+NAA0.05 0.5mg/L+活性炭1 3g/L
(3) 增殖培養基MS+6-BAl 3mg/L+NAA0.05 0.3mg/L+活性炭1 3g/L
(4) 壯苗培養基3/4MS+6-BA0.1 lmg/L+NAA0.05 0.1mg/L+活性炭1 3g/L
(5) 生根培養基1/2MS+IBA0.1 0.5mg/L+活性碳1 3g/L
2) 、外植體的選取與滅菌取龍爪蘭幼嫩側芽，用自來水衝洗乾淨後，整理成1 1.5釐 米長的幼芽，先在體積比為10%的檸檬酸溶液中浸泡0.5 1小時，再經體積比為75%酒精浸 泡0.5 1.0分鐘，再用體積比為0.1%升汞溶液滅菌10 15分鐘，最後用無菌水衝洗3 5次；
3) 、誘導培養將步驟2)滅菌處理後的幼嫩側芽在無菌條件下，用濾紙吸乾後，用解 剖刀剝去外葉，切去上部葉後，接種在誘導培養基上，經1 2個月後，直接從外植體誘導出 初代幼芽；
4) 、增殖培養將步驟3)誘導出的初代幼芽在無菌條件下，接種在增殖培養基上，培 養30~45天分化出叢芽；每隔30~45天，將步驟4)分化的叢芽切成單株再接種在增殖培 養基上，再分化出叢芽；
5) 、壯苗培養將步驟4)分化出叢芽接種到壯苗培養基上，20 30天後，幼苗株高生 長達2 5釐米；
6) 、生根培養將步驟5)生長達2~5釐米叢芽切成單株接種到生根培養基上，20 30天後，幼苗基部長出數根根系；
7) 、組培苗的馴化與移栽將步驟6)生長達3 7釐米以上的生根幼芽，移至常溫下適 應3 5天後，打開蓋子再適應3 5天，洗清根部培養基後移栽入由泥炭珍珠巖蛭石按體 積比3: 2: l配製而成的栽培基質中。
該實施例中各組培階段的培養條件是:培養溫度為20土2'C，光照光強為1500 2500Lx， 光照時間為12h/d。
實施例2:本實施例2中的這種龍爪蘭組培快繁的方法，按如下步驟進行
1) 、培養基的配製，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為
(1) 基本培養基MS或3/4MS或1/2MS，其中白糖30g/L，瓊脂8 g/L， pH5.4;
(2) 誘導培養基MS+6-BA3mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭3g/L
(3) 增殖培養基MS+6-BA2mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭1 g/L
(4) 壯苗培養基3/4MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭1 g/L
(5) 生根培養基1/2MS+IBA0.5mg/L+活性碳1 g/L;
2) 、外植體的選取與滅菌取龍爪蘭幼嫩側芽，取龍爪蘭幼嫩側芽，用自來水衝洗乾淨 後，整理成1 1.5釐米長的幼芽，先在體積比為10%的檸檬酸溶液中浸泡0.5 1小時，再經 體積比為75%酒精浸泡0.5 1.0分鐘，再用體積比為0.1%升汞溶液滅菌10 15分鐘，最後 用無菌水衝洗3 5次；
3) 、誘導培養將步驟2)滅菌處理後的幼嫩側芽在無菌條件下，用濾紙吸乾後，用解 剖刀剝去外葉，切去上部葉後，接種在誘導培養基上，經1 2個月後，直接從外植體誘導出 初代幼芽；
4) 、增殖培養將步驟3)誘導出的初代幼芽在無菌條件下，接種在增殖培養基上，培 養30 45天分化出叢芽；每隔30 45天，將步驟4)分化的叢芽切成單株再接種在增殖培 養基上，再分化出叢芽；
5) 、壯苗培養將步驟4)分化出叢芽接種到壯苗培養基上，20 30天後，幼苗株高生 長達2 5釐米；
6) 、生根培養將步驟5)生長達2 5釐米叢芽切成單株接種到生根培養基上，20 30天後，幼苗基部長出數根根系；
7) 、組培苗的馴化與移栽將步驟6)生長達3 7釐米以上的生根幼芽，移至常溫下適 應3 5天後，打開蓋子再適應3 5天，洗清根部培養基後移栽入由泥炭珍珠巖蛭石按體 積比3: 2: l配製而成的栽培基質中。
該實施例中各組培階段的培養條件是:培養溫度為20土2'C，光照光強為1500 2500Lx， 光照時間為12h7d。
除上述實施例外，本發明還可以有其他實施方式。凡採用等同替換或等效變換形成的技 術方案，均落在本發明要求的保護範圍。
權利要求
1、一種龍爪蘭的組培快繁方法，其特徵在於該方法按以下步驟進行1)、培養基的配製，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為(1)基本培養基MS或3/4MS或1/2MS，其中蔗糖或白糖20～30g/L，瓊脂7～9g/L，pH5.4；(2)誘導培養基MS+6-BA2～5mg/L+NAA0.05～0.5mg/L+活性炭1～3g/L；(3)增殖培養基MS+6-BA1～3mg/L+NAA0.05～0.3mg/L+活性炭1～3g/L；(4)壯苗培養基3/4MS+6-BA0.1～1mg/L+NAA0.05～0.1mg/L+活性炭1～3g/L；(5)生根培養基1/2MS+IBA 0.1～0.5mg/L+活性碳1～3g/L；2)、外植體的選取與滅菌取龍爪蘭幼嫩側芽，經滅菌處理後備用；3)、誘導培養將步驟2)滅菌處理後的幼嫩側芽在無菌條件下，用濾紙吸乾後，用解剖刀剝去外葉，切去上部葉後，接種在誘導培養基上，經1～2個月後，直接從外植體誘導出初代幼芽；4)、增殖培養將步驟3)誘導出的初代幼芽在無菌條件下，接種在增殖培養基上，培養30～45天分化出叢芽；每隔30～45天，將步驟4)分化的叢芽切成單株再接種在增殖培養基上，再分化出叢芽；5)、壯苗培養將步驟4)分化出叢芽接種到壯苗培養基上，20～30天後，幼苗株高生長達2～5釐米；6)、生根培養將步驟5)生長達2～5釐米叢芽切成單株接種到生根培養基上， 20～30天後，幼苗基部長出數根根系；7)、組培苗的馴化與移栽將步驟6)生長達3～7釐米以上的生根幼芽，移至常溫下適應3～5天後，打開蓋子再適應3～5天，洗清根部培養基後移栽入栽培基質中。
2、 根據權利要求1所述的龍爪蘭的組培快繁方法，其特徵在於所述的滅菌處理是幼嫩 側芽用自來水衝洗乾淨後，整理成1 1.5釐米長的幼芽，先在體積比為10%的檸檬酸溶液中 浸泡0.5~1小時，再經體積比為75%酒精浸泡0.5 1.0分鐘，再用體積比為0.1%升汞溶液 滅菌10 15分鐘，最後用無菌水衝洗3 5次。
3、 根據權利要求1所述的龍爪蘭的組培快繁方法，其特徵在於所述的培養基，包括基 本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為(l)基本培養基MS或3/4MS或1/2MS，其中蔗糖或白糖20~30g/L，瓊脂7~9 g/L， pH5.4; (2) 誘導培養基MS+6-BA3mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭3 g/L;(3) 增殖培養基MS+6-BA2mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭1 g/L;(4) 壯苗培養基3/4MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭1 g/L;(5) 生根培養基1/2MS+IBA0.5mg/L+活性碳1 g/L。
4、 根據權利要求1或3所述的龍爪蘭的組培快繁方法，其特徵在於，所述的各組織培養 階段的培養條件是，培養溫度為20土2'C，光照光強為1500 2500 Lx，光照時間為12h/d。
5、 根據權利要求1所述的龍爪蘭的組培快繁方法，其特徵在於所述的栽培基質由泥炭: 珍珠巖蛭石按體積比3: 2: 1配製而成。
全文摘要
本發明公開了一種龍爪蘭組培快繁的方法，按如下步驟進行1)培養基的配製，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分；2)外植體的選取與滅菌取龍爪蘭幼嫩側芽，經滅菌處理後備用；3)誘導培養接種在誘導培養基上，直接從外植體誘導出初代幼芽；4)增殖培養接種在增殖培養基上分化出叢芽；5)壯苗培養接種到壯苗培養基上；6)生根培養接種到生根培養基上；7)組培苗的馴化與移栽。本發明的有益效果是提出的龍爪蘭組培優化培養基針對性強、適用性好，生根率達100％；移栽成活率90％以上。該方法有效地防止了外植體和組培苗的褐變現象，促進了組培苗的分化和生長；遺傳性狀一致，克服了常規繁殖係數低的缺點。
文檔編號C12N5/04GK101112175SQ20071007099
公開日2008年1月30日 申請日期2007年8月23日 優先權日2007年8月23日
發明者呂永平, 剛 徐, 汪一婷, 牟豪傑, 陳劍平 申請人:浙江省農業科學院