在生物傳感器上產生參比區和樣品區的方法及所得生物傳感器的製作方法
2023-05-13 23:37:31 2
專利名稱：在生物傳感器上產生參比區和樣品區的方法及所得生物傳感器的製作方法
相關申請的交叉引用本申請要求2004年12月29日提交的題為「在生物傳感器上產生參比區和樣品區的方法及所得生物傳感器(Method for Creating a Reference Region anda Smaple region on a Biosensor and the Resulting Biosensor)」的美國專利申請第11/027,509號的優先權，其涉及2004年12月29日提交的題為「空間掃描光閱讀器系統及其使用方法」(Spatially Scanned Optical Reader System And MethodFor Using Same)(律師案卷號SP04-149)的美國專利申請第11/027,547號，它們的內容通過引用包括在此。
背景技術：
發明領域本發明涉及一種其表面上既有參比區又有樣品區的生物傳感器，其中的參比區和樣品區部分地通過使用沉積技術如印刷或衝壓來形成。在一個實施方式中，所述生物傳感器包含在微量培養板的孔中。
相關技術的描述目前，生物傳感器如表面等離子共振(surface plasmon resonance，SPR)傳感器或共振波導光柵傳感器使光學標記物獨立檢測(LID)技術能夠被用來檢測生物傳感器表面上的生物分子結合事件。具體地說，SPR傳感器和共振波導光柵傳感器使得光學LID技術能夠測定生物傳感器折射率/光學響應的變化，進而檢測生物傳感器表面的生物分子結合事件。這些生物傳感器與不同的光學LID技術一道已被用於研究許多生物分子結合事件，包括蛋白質-蛋白質相互作用和蛋白質-小分子相互作用。
為實現高靈敏度檢測，關鍵是小心控制或剔除(reference out)可能導致測量的折射率/光學響應產生虛假改變的因素(例如，溫度、溶劑效應、體積折射率變化和非特異結合)。在基於晶片的LID技術中，典型地使用兩個生物傳感器來實現上述作用，其中一個是實際生物傳感器，另一個是毗鄰生物傳感器，用於剔除上述因素。兩種示例性基於晶片的LID生物傳感器包括Biacore的SPR平臺和Dubendorfer的裝置，Biacore的SPR平臺中使用4個相鄰流動通道中的一個作為參比，而Dubendorfer的裝置則使用鄰接傳感器墊的獨立墊作為參比。下面的文獻詳細描述了Biacore的SPR平臺和Dubendorfer的裝置·「改善的生物傳感器分析」(Improving Biosensor Analysis)，Myska，J.Mol.Recognit，1999，12，279-284。
·「在Biacore S51中水動力訪問檢測點」(Hydrodynamic Addressing ofDetection Spots in Biacore S51)，Biacore Technology Note 15。
·J.Dubendorfer等，「集成光學免疫傳感器的感應和參比墊」(Sensing andReference Pads for Integrated Optical Immunosensors)，Journal of BiomedicalOptics 1997，2(4)，391-400。
使用這些類型的參比方案的優點體現在Biacore S51中，這是目前市場上可獲得的最新且最敏感的SPR平臺。這種儀器因為其改進的參比作用而具有顯著改善的靈敏度和性能，其基礎在於使用所謂的水動力參比墊以儘可能減小單一通道內的噪音、溫度效應、漂移、體積折射率效應。然而，基於晶片的LID技術要求使用流動細胞技術，因而這不易適用於微量培養板中。
為微量培養板設計的生物傳感器非常吸引人，因為它們適用於高通量篩選應用。然而，目前使用的微量培養板是一個孔中包含樣品生物傳感器，而相鄰孔中包含參比生物傳感器。因為兩個生物傳感器間分開的距離較大，這就難以剔除溫度效應。而且，使用兩個相鄰的生物傳感器，則必須在樣品孔和參比孔中使用兩種不同的溶液，這會導致移液誤差、稀釋誤差、和兩種溶液間的體積折射率變化。其結果是，參比作用的有效性受損。為了解決上述問題，美國專利申請2003/0007896描述了幾種不同的方法，其中為了剔除溫度效應，使用的是同時測量單個生物傳感器的光學響應以及不同的偏光。然而，這些方法不易實施，且無法考慮也無法校正體積折射率效應和非特異結合。
在另一種方法中，O』Brien等使用雙元件SPR傳感器，其中，通過使用雷射消融聯合表面化學的電化學制模來形成參比區。然而，由於該方法需要使用金屬襯底，因而難以實施且應用性有限。關於雙元件SPR傳感器參比及該方法的詳細描述參見O′Brien等題為「SPR生物傳感器同時去除熱和體積組成效應」(SPR BiosensorsSimultaneously Removing Thermal and Bulk CompositionEffects)，Biosensors Bioelectronics 1999，14，145-154。
由此可見，需要可用於微量培養板並且可用於檢測生物分子結合事件，同時剔除溫度效應、漂移、體積折射率效應和非特異結合的生物傳感器。本發明滿足了這種需要和其它需要。
發明概述本發明包括一種方法，其中，可使用幾種不同的沉積技術(例如，接觸針印刷、非接觸印刷、微觸點印刷、網點印刷、絲網印刷、氣溶膠印刷(aerosolprinting)、衝壓(stamping)、噴霧)中的任一種在單個生物傳感器上形成參比區和樣品區，該生物傳感器可位於微量培養板的單個孔內。用於在生物傳感器表面上形成參比區和樣品區的方法實施過程包括(1)去活化試劑在生物傳感器反應表面上的選擇性沉積；(2)靶分子(例如蛋白質)在生物傳感器反應表面上的選擇性沉積；或(3)活化試劑在生物傳感器非反應表面上的選擇性沉積。表面具有參比區和樣品區的生物傳感器使得能夠使用樣品區來檢測生物分子結合事件，並且使得能夠使用參比區來剔除可不良影響生物分子結合事件的檢測的虛假變化。
附圖簡要說明結合附圖，參考以下詳細說明可更全面地理解本發明，其中
圖1是一示意圖，有助於描述根據本發明在單個生物傳感器上形成參比區和樣品區的三種不同的方法；圖2-5顯示了為評價本發明第一種方法的可行性而進行的實驗結果的圖表和照片；圖6-7顯示了為評價本發明第二種方法的可行性而進行的實驗結果的圖表和照片；圖8顯示了為評價本發明第二種方法的可行性而進行的實驗結果的圖表和照片。
附圖詳述圖1是一示意圖，用於描述在位於微量培養板108單個孔106底部的單個生物傳感器100上形成參比區102和樣品區104的三種不同的方法。然而，在描述本發明詳細內容之前，應理解，優選的生物傳感器100是可用於實施LID技術的傳感器，如SPR傳感器100和共振波導光柵傳感器100。以下文獻詳細描述了本發明中可使用的這些示例性生物傳感器100的結構和功能·歐洲專利申請0 202 021 A2，題為「光學分析方法與設備「(Optical AssayMethod and Apparatus)。
·美國專利4,815,843，題為「選擇性檢測物質和/或檢測氣態、液態、固態和多孔樣品折射率變化的光學傳感器」(Optical Sensor for Selective Detectionof Substances and/or for the Detection of Refractive Index Changes in Gaseous，Liquid，Solid and Porous Samples)。
這些文獻的內容通過引用包括在此。
圖1顯示了採用特定沉積技術以便在位於微量培養板108單個孔106內的單個生物傳感器100上形成參比區102和樣品區104的方法的三個例子。在第一種方法中，用反應性試劑112(例如，聚(乙烯-alt-馬來酸酐)(EMA))塗覆(步驟1a)生物傳感器100的表面110。(反應性試劑112的例子包括但不限於具有酸酐基團、活性酯、馬來醯亞胺基團、環氧化物、醛、異氰酸酯、異硫氰酸酯、磺醯氯、碳酸酯、亞胺醯酯、或烷基滷的試劑)。然後，通過將阻斷劑/去活化試劑116沉積在其上，特異性地去活化(步驟1b)表面110上的預定區域。例如，當表面110塗覆有胺反應性塗層如EMA時，可使用許多含胺反應試劑來阻斷/去活化表面，例如乙醇胺(EA)、乙二胺(EDA)、三羥甲基氨基乙烷(tris)、O，O』-二(2-氨基丙基)聚乙二醇1900(PEG1900DA)或其它聚乙二醇胺或二胺。或者，可使用不含胺的反應試劑來水解反應性基團。在隨後的固定化步驟(步驟1c)中，將靶分子118(例如，蛋白質118)加入到孔106中。靶分子僅結合未用去活化試劑116處理的傳感器區域。靶分子可以是蛋白質、肽、合成或天然膜、小分子、合成或天然DNA或RNA、細胞、細菌、病毒。這是在單個生物傳感器100上形成參比區102和樣品區104的一種方法。
在第二種方法中，用反應性試劑112塗覆(步驟2a)生物傳感器100的表面110。然後，將靶分子118直接印刷(步驟2b)到表面110上塗覆有反應性試劑112的預定區域中。隨後，使整個孔106接觸(步驟2c)去活化試劑116，以去活化/阻斷表面110上未印刷區域，用作參比區102。這是可用於在單個生物傳感器100上形成參比區102和樣品區104的另一種方法。
在第三種方法中，用具有可轉化為反應性基團的官能團(例如羧酸基團)的物質塗覆(步驟3a)生物傳感器100的表面110。在步驟3b中，通過將活化反應試劑如1-[3-(二甲基氨基)丙基]]-3-乙基鹽酸鹽(EDC)/N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)沉積在其上來使預定的表面區域有反應活性。然後，整個孔106接觸包含靶分子118的溶液，使靶分子118結合(步驟3c)表面110上通過印刷活化試劑112而活化的區域。表面110上不具有附連的靶分子118的區域可用作參比區102。這是用於在單個生物傳感器100上形成參比區102和樣品區104的另一種方法。
應指出，存在許多可用於上述方法的不同沉積技術。例如，沉積技術可包括接觸針印刷、非接觸印刷(噴墨列印、氣溶膠印刷)、毛細管印刷、微觸點印刷、凹版移印(pad printing)、網點印刷、絲網印刷、微量移液(micropipetting)和噴霧。
還應理解，本領域技術人員能夠採用任何一種上述方法在表面100上印刷多個不同的點，以在微量培養板108同一個孔106中形成參比區102、陽性/陰性對照和/或多個不同的靶分子1-2(例如)。這種情況的一個例子如圖1底部所示。
以下是為評價本發明三種不同方法各自可行性而進行的多個實驗的描述。
參考與本發明第一種方法相關的實驗，採用螢光分析和康寧LID分析來評價在生物傳感器100上形成參比(非結合)區102和樣品(結合)區104的可行性。康寧LID分析是指採用共振波導光柵傳感器進行的分析。在第一組實驗中，將三種溶解在硼酸鹽緩衝液(100mM，pH9)中的不同的去活化試劑116(乙醇胺(EA)、乙二胺(EDA)和O，O』-二(2-氨基丙基)聚乙二醇1900(PEG1900DA))印刷到三個不同的孔中塗覆有反應性試劑112(聚(乙烯-alt-馬來酸酐(EMA))的玻片上。採用配備有10號襯套針的Cartesian自動針式印刷機來進行印刷，印刷5×7獨立點陣列(間隔300um)以形成印刷(參比)區102。各點印刷得足夠近，以至於融合在一起而形成矩形區域。然後用生物素-peo-胺溶液118孵育各孔，用於評價印刷過程的有效性。據預計，生物素118僅結合孔的非印刷(樣品)區域104。然後，使各孔接觸cy3-抗生物素蛋白鏈菌素的溶液，螢光掃描儀下成像。
圖2總結了這些實驗的結果。由圖可見，在對應於印刷有去活化試劑116的各孔內的圓形區域中未觀察到螢光信號。這個結果表明，所有三種阻斷劑116(包括EA、PEG1900DA和EDA)可有效滅活反應性試劑112(EMA)，因而阻止生物素118與cy3-抗生物素蛋白鏈菌素的結合。圖表顯示，印刷(參比)區102相對於未印刷(樣品)區104的螢光強度降低＞98％。螢光圖像的檢查還表明，去活化試劑116未顯著擴散到印刷(參比)區102外部。
進行另一組實驗來研究去活化試劑116濃度對性能的影響。使用太濃的去活化試劑116可導致未印刷(樣品)區104的交叉汙染。圖3顯示了在印刷有各種濃度EA116的玻片上進行cy3-抗生物素蛋白鏈菌素結合試驗後獲得的5幅螢光圖像。由圖像1-2可見，使用較高濃度的EA116時，存在顯著鋪展/交叉汙染。並且，由圖像3-4可見，使用較低濃度的EA116時，EA116限制在印刷區域並仍可有效滅活表面，一如該區域中觀察到低螢光信號強度所證明。最後的圖像5是沒有印刷EA116的圖像。
進行又一組實驗來證明(i)在孔106內使用印刷的去活化試劑116不會負面影響後續靶分子118在未印刷(反應性)區域112上的固定，和(ii)使用印刷的去活化試劑116與大量溶液中使用去活化試劑一樣起作用。在這些實驗中，首先用反應性試劑112(EMA)塗覆康寧LID微量培養板108(含Ta2O5波導薄層)中的幾個孔106。然後，將去活化試劑(PEG1900DA)116印刷到康寧LID微量培養板108各孔106的預定區域上。作為對照，其它孔106用相同的阻斷劑116溶液孵育或保持未處理。然後，使所有的孔106接觸生物素-peo-胺118溶液，再與cy3-抗生物素蛋白鏈菌素孵育。
圖4顯示了這些螢光成像實驗的結果。對於抗生物素蛋白鏈菌素與生物素118的特異性結合，一半區域被去活化試劑(PEG1900DA)116阻斷的孔106相對於不包含去活化試劑116的孔106觀察到相當的cy3螢光信號。這說明印刷區域之外的區域不存在阻斷劑116的擴散。印刷沉積相對於體積溶液沉積去活化(阻斷)試劑116有效性的比較表明兩種方法同樣有效，一如兩種處理低螢光信號水平所證明的那樣。
進行了採用康寧LID微量培養板108的其它實驗以體現採用本發明孔內參比的優點。在這些實驗中，將去活化試劑(PEG1900DA)116印刷到LID微量培養板108的一些EMA塗覆孔106。然後通過將孔106與生物素-peo-胺的溶液孵育，使生物素固化化到表面上。隨後，將微量培養板108安裝到康寧LID設備中，監測抗生物素蛋白鏈菌素(100nM在PBS中)的結合隨時間的變化。在試驗期間，LID設備連續掃描各孔106底部/生物傳感器100，以監測參比(未結合)區102和樣品(結合)區104中的信號。關於LID設備更詳細的內容，參見同時提交的題為「空間掃描光學閱讀器系統及其使用方法」(Spatially ScannedOptical Reader System and Method for Using Same)(律師案卷號SP04-149)的上述美國專利申請序列第11/027,547號。
圖5A顯示了試驗過程期間一個孔106內參比區102和樣品區104的響應。在該圖表中，痕跡「差值組_B6」是由樣品痕跡「信號組_B6」減去參比痕跡「參比組_B6」得到的參比校正數據。由圖可見，在第一個～10分鐘內，兩通道內都存在信號隨時間的系統性降低(即漂移)。然而，這種漂移在參比校正痕跡「差值組_B6」中實質上被消除了。具體地，未校正痕跡「信號組_B6」中的漂移率約為-2.5pm/分鐘，參比痕跡「參比組_B6」中的漂移率約為～0pm/分鐘。
圖5B顯示了相同試驗的第一個10分鐘的圖表，其中採用了孔內(孔B6信號區和參比區)或孔間參比(孔B6信號區減去相鄰孔B5參比區)。數據清楚表明，孔內參比技術能非常有效得消除生物傳感器100的環境漂移。
圖5C顯示了總的波長位移(結合抗生物素蛋白鏈菌素之後)與傳感器100上的位置關係的曲線。由圖可見，傳感器100上參比(阻斷)區102和樣品(未阻斷)區104之間存在清楚明顯的轉變，表明印刷過程可以受控的方式進行。
以下是關於本發明第二種方法的實驗的描述。同樣，在本發明第二種方法中，通過將靶分子118直接印刷到反應性表面100上，然後通過用去活化試劑116處理來滅活表面100的其餘部分，在單個生物傳感器100內形成參比區102和感應區104。該方法的優點是與採用體積溶液(＞～10ul)的固定化作用相比，顯著降低了所消耗的蛋白質體積(＜～1nl)。
為了證明該方法的可行性，將BSA-生物素118(50ug/ml，100mM硼酸鹽pH9)印刷到康寧LID微量培養板108的一些孔106中。然後，用乙醇胺116(200mM在硼酸鹽緩衝液中，pH9)處理每個孔106，再用cy3-抗生物素蛋白鏈菌素(100nM在PBS中)孵育。圖6是螢光圖像，其中，在印刷BSA-生物素118的樣品區104中觀察到強螢光信號，在參比區102中觀察到非常弱的信號(＜感測區信號的3％)。這些結果表明，(i)印刷方法可有效固定BSA-生物素118；(ii)印刷區之外沒有發生BSA-生物素118的擴散；(iii)印刷的BSA-生物素118維持了其結合抗生物素蛋白鏈菌素的能力。圖7顯示了採用康寧LID平臺進行的類似實驗的結果。～240pm的結合信號水平表明，大量蛋白質118結合在了表面上。與上述螢光實驗的結果相一致，在生物傳感器100的參比部分102中沒有觀察到抗生物素蛋白鏈菌素的結合。
以下是關於本發明第三種方法的實驗的描述。同樣，在本發明第三種方法中，通過將活化試劑112(例如1-[3-(二甲基氨基)丙基])-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC，Aldrich)和N-羥基琥珀酸亞胺(NHS，Aldrich))印刷到非反應性表面(例如具有羧酸基團的表面)，形成用於附著靶分子118的反應性結合表面104，在單個生物傳感器100內形成參比區102和感應區104。
為了證明這個概念，將包含EDC(1mM)和NHS(1mM)的水溶液印刷到微量培養板108孔106中水解EMA表面上。然後將整個孔106用生物素-胺118孵育，並進行cy3-抗生物素蛋白鏈菌素螢光結合試驗。圖8顯示了圖表和照片，其中，僅對應於印刷區的區域中觀察到螢光信號，證明可選擇性地控制靶分子附著而未印刷區域可用作參比區102。
下面將描述根據本發明，採用印刷/衝壓技術來形成LID生物傳感器100的孔內參比的一些其它特徵和優點。
1)相同孔內形成的參比區可顯著降低或消除溫度、體積折射率效應和非特異結合導致的偏差。採用孔內參比剔除這些因素比採用相鄰孔作為參比更加有效。
2)孔內參比區因不再需要使用獨立參比(對照)孔而降低了反應試劑的消耗。
3)印刷/衝壓技術可根據微量培養板的製造規模來調節。
4)與採用體積溶液反應的蛋白質固化相比，印刷/衝壓靶蛋白可降低蛋白質用量約～100-10,000倍。
5)事實上，可將印刷/衝壓技術應用於任何類型的基板，用於在生物傳感器上製備表面。
6)也可包含第二種檢測方法如質譜法以提供生物分子結合的更詳細信息。
雖然附圖和上文所述發明詳述中闡述了本發明的一些實施方式，但應理解，本發明並不限於所述實施方式，而是能夠進行各種重排、改進和替換，而不背離所附權利要求書所提出和限定的本發明的精神。
權利要求
1.一種生物傳感器，其表面包含部分地採用沉積技術形成的參比區和樣品區。
2.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，通過進行以下步驟在所述表面上形成參比區和樣品區用反應性試劑塗覆所述表面；將去活化試劑沉積到所述塗覆表面的預定區域以形成參比區；和使所述表面接觸靶分子，其中，所述靶分子結合於未用去活化試劑處理的所述塗覆表面的預定區域，形成樣品區。
3.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，通過進行以下步驟在所述表面上形成參比區和樣品區用反應性試劑塗覆所述表面；將靶分子沉積到所述塗覆表面的預定區域以形成樣品區；和使所述塗覆表面接觸去活化試劑以使一部分的其上仍然顯露反應性試劑的所述塗覆表面滅活，形成參比區。
4.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，通過進行以下步驟在所述表面上形成參比區和樣品區將活化試劑沉積到所述表面的預定區域並使靶分子附著於至少一部分的其上顯露活化試劑的所述塗覆表面，以形成樣品區；和使用沒有活化試劑的區域作為參比區。
5.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述表面包括一個以上的參比區和/或一個以上的樣品區。
6.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，包括參比區和樣品區的所述表面使得能夠利用樣品區來檢測生物分子結合事件，並且使得能夠利用參比區來剔除對生物分子結合事件的檢測造成不良影響的效應。
7.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，包括參比區和樣品區的所述表面使得能夠利用質譜儀來同時檢測兩區域以獲得關於生物結合事件的進一步信息。
8.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，通過沉積抵抗靶分子非特異結合的分子來形成所述參比區。
9.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述表面位於微量培養板孔的底部。
10.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述表面是玻片。
11.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述生物傳感器是表面等離子共振傳感器。
12.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述生物傳感器是共振波導光柵傳感器。
13.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述沉積技術是接觸針印刷。
14.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述沉積技術是非接觸印刷如噴墨列印或氣溶膠印刷。
15.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述沉積技術是毛細管印刷。
16.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述沉積技術是微觸點印刷。
17.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述沉積技術是凹版移印。
18.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述沉積技術是網點印刷。
19.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述沉積技術是絲網印刷。
20.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述沉積技術是微量移液。
21.如權利要求1所述的生物傳感器，其特徵在於，所述沉積技術是噴霧。
22.一種微量培養板，其包括包含許多形成在其中的孔的框架，每個孔包含一生物傳感器，所述生物傳感器的表面具有部分地採用沉積技術形成的參比區和樣品區。
23.如權利要求22所述的微量培養板，其特徵在於，通過進行以下步驟在所述表面上形成參比區和樣品區用反應性試劑塗覆所述表面；將去活化試劑沉積到所述塗覆表面的預定區域以形成參比區；和使所述表面接觸靶分子，其中，所述靶分子結合於未用去活化試劑處理的所述塗覆表面的預定區域，形成樣品區。
24.如權利要求22所述的微量培養板，其特徵在於，通過進行以下步驟在所述表面上形成參比區和樣品區用反應性試劑塗覆所述表面；將靶分子沉積到所述塗覆表面的預定區域以形成樣品區；和使所述塗覆表面接觸去活化試劑以使其上仍然顯露反應性試劑的所述塗覆表面中的一部分滅活，形成參比區。
25.如權利要求22所述的微量培養板，其特徵在於，通過進行以下步驟在所述表面上形成參比區和樣品區將活化試劑沉積到所述表面的預定區域並使靶分子附著於至少一部分的其上顯露活化試劑的所述塗覆表面，以形成樣品區；和使用沒有活化試劑的區域作為參比區。
26.如權利要求22所述的微量培養板，其特徵在於，所述表面包括在每個孔內的一個以上的參比區和/或一個以上的樣品區。
27.如權利要求22所述的微量培養板，其特徵在於，包括參比區和樣品區的所述表面使得能夠利用樣品區來檢測生物分子結合事件，並且使得能夠利用參比區來剔除對生物分子結合事件的檢測造成不良影響的虛假變化。
28.如權利要求22所述的微量培養板，其特徵在於，所述生物傳感器是表面等離子共振傳感器。
29.如權利要求22所述的微量培養板，其特徵在於，所述生物傳感器是共振波導光柵傳感器。
30.如權利要求22所述的微量培養板，其特徵在於，所述沉積技術包括以下一種接觸針印刷、非接觸印刷(噴墨印刷、氣溶膠印刷)、毛細管印刷、微觸點印刷、凹版移印、網點印刷、絲網印刷、微量移液和噴霧。
31.一種在生物傳感器上製備模式表面的方法，其包括以下步驟採用沉積技術在所述生物傳感器的表面上形成參比區和樣品區。
32.如權利要求31所述的方法，其特徵在於，通過進行以下步驟在所述生物傳感器的表面上形成參比區和樣品區用反應性試劑塗覆所述表面；將去活化試劑沉積到所述塗覆表面的預定區域以形成參比區；和使所述表面接觸靶分子，其中，所述靶分子結合於未用去活化試劑處理的所述塗覆表面的預定區域，形成樣品區。
33.如權利要求31所述的方法，其特徵在於，通過進行以下步驟在所述生物傳感器的表面上形成參比區和樣品區用反應性試劑塗覆所述表面；將靶分子沉積到所述塗覆表面的預定區域以形成樣品區；和使所述塗覆表面接觸去活化試劑以滅活一部分的其上仍然顯露反應性試劑的所述塗覆表面，形成參比區。
34.如權利要求31所述的方法，其特徵在於，通過進行以下步驟在所述生物傳感器的表面上形成參比區和樣品區將活化試劑沉積到所述表面的預定區域並使靶分子附著於至少一部分接觸活化試劑的所述塗覆表面，以形成樣品區；和使用沒有活化試劑的區域作為參比區。
35.如權利要求31所述的方法，其特徵在於，所述生物傳感器具有一個以上的參比區和/或一個以上的樣品區。
36.如權利要求31所述的方法，其特徵在於，具有參比區和樣品區的所述生物傳感器使得能夠利用樣品區來檢測生物分子結合事件，並且使得能夠利用參比區來剔除對生物分子結合事件的檢測造成不良影響的虛假變化。
37.如權利要求31所述的方法，其特徵在於，所述生物傳感器位於微量培養板孔的底部。
38.如權利要求31所述的方法，其特徵在於，所述生物傳感器是表面等離子共振傳感器。
39.如權利要求31所述的方法，其特徵在於，所述生物傳感器是共振波導光柵傳感器。
40.如權利要求31所述的方法，其特徵在於，所述沉積技術包括以下一種接觸針印刷、非接觸印刷(噴墨印刷、氣溶膠印刷)、毛細管印刷、微觸點印刷、凹版移印、網點印刷、絲網印刷、微量移液和噴霧。
全文摘要
本文描述了一種方法，可使用許多沉積技術中的任一種在單個生物傳感器上形成參比區和樣品區，在優選的實施方式中，生物傳感器位於微量培養板的單個孔內。用於在生物傳感器的表面上形成參比區和樣品區的沉積技術包括(1)將去活化試劑印刷/衝壓到生物傳感器的反應性表面上；(2)將靶分子(靶蛋白)印刷/衝壓到生物傳感器的反應性表面上；或(3)將反應性試劑印刷/或衝壓到生物傳感器的非反應性表面上。
文檔編號G01N33/543GK101091116SQ200580045157
公開日2007年12月19日 申請日期2005年12月29日 優先權日2004年12月29日
發明者S·J·喀拉蚩, A·G·弗魯託斯, 彭金林, G·A·皮切, M·B·韋布 申請人:康寧股份有限公司