一種治療或預防過敏性疾病的有效成分的製作方法

2023-05-16 15:08:31

一種治療或預防過敏性疾病的有效成分的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種治療或預防過敏性疾病的有效成分，其中該有效成分為甘油醛-3-磷酸脫氫酶(G3PDH)。此外，本發明還提供了甘油醛-3-磷酸脫氫酶在製備治療或預防過敏性疾病的藥劑中的用途，以及在製備治療或預防氣喘或異位性皮膚炎的藥劑中的用途。
【專利說明】一種治療或預防過敏性疾病的有效成分

【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種抗過敏活性物質的用途，具體而言，該包含該抗過敏活性物質的 組合物可用於製備預防或治療過敏性疾病的藥劑，尤其是氣喘或異位性皮膚炎。

【背景技術】
[0002] 過敏性疾病，例如過敏性溼疹、蕁麻疹、反覆發作的過敏性鼻炎、過敏性氣喘及異 位性皮膚炎，在臺灣及其他已開發國家已成為嚴重的社會問題，廣為人知的衛生假說為：嬰 幼兒接觸免疫刺激病原體的機會愈少，愈容易引發過敏相關疾病的產生。相關研究指出，過 敏性疾病發生時，人體內的免疫反應會使Thl細胞數量下降，連續產生多種細胞激素促使 免疫反應朝向Th2途徑，形成體液免疫反應，例如IgE的產生及嗜伊紅血球過多等，經由刺 激Thl型免疫反應以調節、平衡過敏所引發Th2型免疫反應，將可達到改善過敏體質的效 果。
[0003] 但針對氣喘的治療，目前仍以藥物治療為主：如類固醇和抑制肥大細胞釋放發炎 物質的藥物、氣管擴張劑和免疫療法等。然而，包括抗發炎藥物和氣管擴張劑在內的藥物治 療仍無法真正的改變過敏免疫反應，僅為一種治標的方法。
[0004] 於異位性皮膚炎治療上，目前為局部塗抹類固醇（topical corticosteroids, TCS)(Lowenberg et al.，2008)或是局部免疫抑制劑（topical calcineurin inhibitors, TCI) (Hultsch et al.，2005;Kim et al·，2010)為最快速有效的 方式。但是，仍有一些副作用的疑慮如長期使用類固醇會有皮膚萎縮、皮膚色素改變、皮膚 出現血絲、甚至造成像妊娠紋般的擴張紋，且類固醇於人體吸收後可能影響賀爾蒙分泌。而 免疫抑制劑也會造成皮膚灼熱與刺激感等的副作用。因此，異位性皮膚炎的治療仍需以有 效改善皮膚發炎反應並且沒有副作用為目標。
[0005] 另一方面，減敏療法雖能改變過敏免疫體質，但是通常需要較長的一段時間，且有 時會出現一些副作用，並非所有的病人都能夠使用。
[0006] 因此，仍需開發具抗過敏活性的活性成分，以刺激免疫細胞、調節Thl/Th2免疫反 應為作用機制。


【發明內容】

[0007] 本發明基於發現甘油醒-3-磷酸脫氫酶（Glyceraldehyde3_phosphate Dehydrogenase, G3FOH)具有抗過敏活性，可降低個體過敏反應，因而可開發為治療或預防 過敏性疾病的藥劑，進一步驗證其亦可開發為治療或預防氣喘或異位性皮膚炎的藥劑。
[0008] 因此，本發明一方面提供一種甘油醛-3-磷酸脫氫酶 (Glyceraldehyde3_phosphate Dehydrogenase,63Η)Η)或其具相同功能的變異體或片段在 製備降低個體過敏反應的藥劑中的用途。
[0009] 在一方面，本發明提供一種甘油醛-3-磷酸脫氫酶或其具相同功能的變異體或片 段在製備治療或預防過敏性疾病的藥劑中的用途。其中該過敏性疾病可為氣喘或異位性皮 膚炎。
[0010] 另一方面，本發明所提供的甘油醛-3-磷酸脫氫酶具有SEQ ID NO: 1所示的氨基 酸序列。
[0011] 此外，本發明所提供的甘油醛-3-磷酸脫氫酶是選自由加氏乳酸桿菌 (Lactobacillus gasseri)PM_A0005菌株（簡稱「PM-A0005菌株」）及其萃取物、區分物、次 區分物或有效成分所組成的群組；其中該PM-A0005菌株保藏在中國典型培養物保藏中心， 其菌種保藏編號為CCTCC NO :M207039。該PM-A0005菌株已於2007年1月5日申請專利， 並記載在臺灣專利第1356680號中。
[0012] 在一方面。本發明所提供的PM-A0005菌株的萃取物、區分物及次區分物可與生理 上可接受的賦形劑或稀釋劑製成一醫藥組合物或食品組合物。
[0013] 在另一方面，本發明所提供的甘油醛-3-磷酸脫氫酶或其具相同功能的變異體或 片段可與生理上可接受的賦形劑或稀釋劑製成一醫藥組合物或食品組合物。
[0014] 除此之外，本發明提供一種加氏乳酸桿菌（Lactobacillus gasseri)PM_A0005菌 株在製備治療或預防異位性皮膚炎的藥劑中的用途，其中該PM-A0005菌株保藏在中國典 型培養物保藏中心，其菌種保藏編號為CCTCC NO :M207039。
[0015] 根據本發明的實施例，該PM-A0005菌株的萃取物為溶菌酶分解該PM-A0005菌株 菌體後再以硫酸銨沉澱胞質蛋白質而獲得。在本發明一具體實施例中，該萃取物為以濃度 為大於0且小於等於25% (w/w)或濃度為50-75% (w/w)的硫酸銨沉澱胞質蛋白質而獲得， 其萃取物編號分別為AS_0-25%或AS_50-75%。
[0016] 根據本發明的實施例，該PM-A0005菌株萃取物的區分物為溶菌酶分解該 PM-A0005菌株菌體後再以硫酸銨沉澱胞質蛋白質而獲得萃取物後，其再經離子交換層析 (ion-exchange chromatography)分離而得。在本發明一具體實施例中，該區分物編號分別 為 IE1-2、IE1-3、IE3-2 及 IE3-3。
[0017] 根據本發明另一實施例，該PM-A0005菌株萃取物的次區分物為溶菌酶分解該 PM-A0005菌株菌體後再以硫酸銨沉澱胞質蛋白質而獲得的萃取物，其再經離子交換層析分 離獲得區分物後，再以膠體過濾層析法分離而得。在本發明一具體實施例中，該次區分物 IE3-3G1的有效成分為甘油醛-3-磷酸脫氫酶。
[0018] 本發明的各種具體實施例於下文詳述。本發明的其他特徵將可由下文有關該等各 種具體實施例的詳細敘述、圖式及申請專利範圍而清楚呈現。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019] 在本發明中所呈現的較佳具體實施例圖式為闡述本發明為目的。應被理解的是， 本發明並不局限於所示的較佳具體實施例。數據以平均值土SD表示。其中*:P< 0.05、 **:P < 0· 01、***:P < 0· 001，成對 t 檢定（paired t-test)。
[0020] 圖1A-1C顯示該PM-A0005菌株的萃取物經離子交換層析進一步分離活性物質的 結果；圖1A為離子交換層析的條件設定；圖1B為萃取物AS_0-25%所分離出3個區分物 (fractions);及圖1C為萃取物AS_50-75%所分離出3個區分物；
[0021] 圖2A-2E顯示將區分物IE1-2、IE1-3、IE3-2和IE3-3利用膠體過濾層析進一步 分離活性物質的結果；圖2A為膠體過濾層析的條件設定；圖2B為區分物IE1-2所分離出 1個次區分物（subfraction) IE1-2G1 ;圖2C為IE1-3所分離出2個次區分物IE1-3G1和 IE1-3G2 ;圖2D為IE3-2所分離出3個次區分物IE3-2G1、IE3-2G2和IE3-2G3 ;及圖2E為 IE3-3 所分離出 5 個次區分物 IE3-3G1、IE3-3G2、IE3-3G3、IE3-3G4 和 IE3-3G5 ;
[0022] 圖3為在給予小鼠萃取物AS_50-75% (塵蟎致敏-AS)及次區分物IE3-3G1 (塵蟎 致敏-IE)後，以甲基膽鹼誘發氣管收縮並測量小鼠呼吸道阻力的結果，其中呼吸道阻力是 以Penh表示；
[0023] 圖4A-4C為塵蟎致敏小鼠的肺部組織變化評估，顯示投予萃取物AS_50_75%和次 區分物IE3-3G1可顯著降低肺臟的發炎與細胞浸潤現象；圖4A為肺部細胞衝洗液的細胞計 數結果；圖4B為肺部細胞衝洗液的細胞分類；及圖4C為肺部細胞衝洗液中胸腺活化調節 趨化因子（thymus and activation-regulated chemokine，TARC)濃度，其中塵蟎致敏-AS 組投予萃取物AS_50-75% ;塵蟎致敏-IE組投予次區分物IE3-3G1 ;
[0024] 圖5為塵蟎致敏小鼠的肺部組織H&E染色結果，發現經投予萃取物AS_50_75% 和次區分物IE3-3G1分別可有效地降低小鼠氣管壁增厚及改善免疫細胞大量浸潤等現 象；其中對照組為正常小鼠；塵蟎致敏組以以塵蟎致敏；而塵蟎致敏-AS組投予萃取物 AS_50-75% ;塵蟎致敏-IE組則投予次區分物IE3-3G1 ;
[0025] 圖6A-6D為劑量107CFU或109CFU的PM-A0005 口服治療異位性皮膚炎小鼠的生理 特徵。圖6A為小鼠皮膚外觀；圖6B為Cutometer ?MPA 580測量皮膚含水量的結果；圖 6C為Cutometer ?MPA 580所測量的pH值；及圖6D為利用Tewameter TM210儀器測量表 皮水分經皮膚蒸發量（Trans-epidermal water loss, TEWL)的結果；
[0026] 圖 7A-7D 為 IE3-3G1 或PBS 以腹腔（intraperitoneal，i. ρ·)注射治療以塵蟎（Der P)或卵白蛋白（Ovalbumin, OVA)致敏的異位性皮膚炎小鼠生理特徵；圖7A為小鼠皮膚外 觀；圖7B為以Cutometer ?MPA 580測量皮膚含水量的結果；圖7C為Cutometer ?MPA 580所測量的pH值；及圖7D為利用Tewameter TM210儀器測量表皮水分經皮膚蒸發量 (Trans-epidermal water loss, TEWL)的結果；
[0027] 圖8A-8C為劑量107CFU或109CFU的PM-A0005 口服治療異位性皮膚炎小鼠 後其皮膚厚度及嗜酸性粒細胞浸潤結果。圖8A為致敏皮膚位置的蘇木精-伊紅染色 (hematoxylin-eosin stain，H&E stain)切片結果；圖8B為以H&E染色切片所測量的皮膚 厚度；及圖8C為每切片視圖的嗜酸性粒細胞數目；
[0028] 圖9A-9C為IE3-3G1或PBS以腹腔（i. p.)注射治療以塵蟎（Der p)或卵白蛋白 (0VA)致敏的異位性皮膚炎小鼠其皮膚厚度及嗜酸性粒細胞浸潤結果。圖9A為致敏皮膚 位置的蘇木精-伊紅染色（H&E stain)切片結果；圖9B為由H&E染色切片所測量的皮膚厚 度；及圖9C為每切片視圖的嗜酸性粒細胞數目；
[0029] 圖10為劑量107CFU或109CFU的PM-A0005 口服治療異位性皮膚炎小鼠後其胸腺 基質淋巴細胞生成素 （thymic stromal lymphopoietin，TSLP)的表達結果；
[0030] 圖11A-11B為劑量107CFU或109CFU鵝PM-A0005 口服治療異位性皮膚炎小鼠後其 蘭格罕細胞（langerhans cells)的數目變化。圖11A為致敏皮膚位置染色切片結果；圖 11B為每切片視圖於表皮層或真皮層的蘭格罕細胞細胞數目；
[0031] 圖12為IE3-3G1或PBS以腹腔（i.p.)注射治療以塵蟎（Der p)或卵白蛋白（0VA) 致敏的異位性皮膚炎小鼠其TSLP表達結果；
[0032] 圖13A-13B為IE3-3G1或PBS以腹腔（i. p.)注射治療以塵蟎（Der p)或卵白蛋 白（0VA)致敏的異位性皮膚炎小鼠其蘭格罕細胞（langerhans cells)的數目變化。圖13A 為致敏皮膚位置染色切片結果；圖13B為每切片視圖於表皮層或真皮層的蘭格罕細胞細胞 數目；
[0033] 圖14A-14B為劑量107CFU或109CFU的PM-A0005 口服治療異位性皮膚炎小鼠後其 總IgE (圖14A)及0VA-特異性IgE (圖14B)的變化。
[0034] 圖15A-15B為IE3-3G1或PBS以腹腔（i. p.)注射治療以塵蟎（Der p)或卵白蛋 白（0VA)致敏的異位性皮膚炎小鼠其總IgE (圖15A)及0VA-特異性IgE (圖15B)的變化；
[0035] 圖16為劑量107CFU或109CFU的PM-A0005 口服治療異位性皮膚炎小鼠其以白血 球凝集素（leuc〇agglutinin，PHA-L)或不同濃度0VA刺激脾臟細胞後，該脾臟細胞的增生 能力變化結果；
[0036] 圖17A-17B為IE3-3G1或PBS以腹腔（i. p.)注射治療以塵蟎（Der p)或卵白蛋 白（0VA)致敏的異位性皮膚炎小鼠其以PHA-L、不同濃度0VA (圖17A)或Derp (圖17B)刺 激脾臟細胞後，該脾臟細胞的增生能力變化結果；
[0037] 圖18A-18C為劑量107CFU或109CFU的PM-A0005 口服治療異位性皮膚炎小鼠其 以PHA-L、不同濃度0VA刺激脾臟細胞後，其細胞激素 IFN- γ (Interferon- γ )(圖18A)、 IL-17(圖18B)及IL-10 (圖18C)的變化結果；
[0038] 圖19A-19C為IE3-3G1或PBS以腹腔（i. p.)注射治療以塵蟎（Der p)或卵白蛋 白（0VA)致敏的異位性皮膚炎小鼠其以PHA-L、不同濃度Der p或0VA刺激脾臟細胞後，其 細胞激素 IFN-γ (圖19A)、IL-17 (圖19B)及IL-10 (圖19C)的變化結果。
[0039] 圖20為劑量107CFU或109CFU的PM-A0005 口服治療異位性皮膚炎小鼠其IL-17 表達情形的染色切片結果；
[0040] 圖21為IE3-3G1或PBS以腹腔（i. P.)注射治療以塵蟎（Der P)或卵白蛋白（0VA) 致敏的異位性皮膚炎小鼠其IL-17表達情形的染色切片結果；
[0041] 圖22為次區分物IE3-3G1的蛋白質二維電泳分析結果。編號1-編號5為甘油 醛-3-磷酸脫氫酶；編號6為果糖二磷酸醛縮酶；
[0042] 圖23以考馬斯藍染色及使用抗組胺酸（Histidine)抗體進行Western blot分析 鑑定G3PDH重組蛋白質；其中Μ :蛋白質分子標記；1 :次區分物IE3-3G1 ;2 :G3roH-His重組 蛋白；
[0043] 圖24為G3PDH重組蛋白刺激小鼠樹突細胞產生細胞激素 IL-12 (IL12p40)以評 估對於免疫調節的功效的結果；其中以添加脂多醣（lip〇P〇lysaccharide，LPS)或PHA為正 對照組，僅有細胞而未額外添加刺激物組為對照組；
[0044] 圖25為G3PDH重組蛋白刺激小鼠脾臟細胞產生細胞激素 Interferon- γ (IFN- γ ) 以評估對於免疫調節的功效的結果；其中以添加 LPS或PHA為正對照組，僅有細胞而未額外 添加刺激物組為對照組。

【具體實施方式】
[0045] 除非另有定義，此處所始有使用的技術及科學名詞具有與本發明所屬【技術領域】技 術人員一般所了解的相同含義。此處所使用，如有矛盾的情形，以本文件(包括定義）為準。
[0046] 本文所使用的「一」一詞，如未特別指明，是指該冠詞的文法上受詞為一個或一個 以上（即至少為一個)。例如「一成份」是指一成份或多於一成份。
[0047] 本文所使用的「過敏性疾病」一詞，是指過敏原、過敏原特異性的免疫球蛋白 E(IgE)以及肥大細胞等的共同作用所引發的疾病。首先是過敏原與附在肥大細胞固定區 (fragment constant, Fc)受體的免疫球蛋白E結合後，促使肥胖細胞進行去顆粒作用。而 由顆粒釋出一些介質如組織胺，白三烯素及趨化因子等，這些介質進而造成血管的通透性 增加及氣管的收縮而導致症狀，同時也會吸引一些其他的細胞如中性白血球，嗜伊紅性白 血球等，導致相當程度的發炎反應，造成更進一步皮膚、黏膜組織或是血管的慢性發炎。過 敏疾病包括但不限於異位性皮膚炎、過敏性鼻炎與氣喘、以及一些特定的食物與昆蟲叮咬 引起的過敏。這些疾病會導致相當程度的發炎反應，造成皮膚、黏膜組織或是血管的慢性發 炎。
[0048] 本文所使用的「氣喘」一詞，是指因吸入具有誘發性的過敏原引起無法控制的氣道 過度反應，並伴隨呼吸道結構的改變，包括但不限於上皮的增生、黏膜組織的變形、呼吸道 平滑肌的增生、以及細胞外基質的增生。
[0049] 本文所使用的「異位性皮膚炎」一詞，是指一種皮膚炎的形式，其為一種復發性 但不具有傳染性的皮膚發炎及皮膚搔癢症狀，包括但不限於神經性皮膚炎、內源性溼疹、 屈部溼疹及嬰兒溼疹。
[0050] 本文所使用的「具相同功能的變異體」一詞，是指一使用例如重組基因技術而得， 藉由一或若干個胺基酸插入、缺失或取代不同於已知蛋白質胺基酸序列但不影響其功能的 多肽。例如，胺基酸取代是以另一具有相似結構及/或化學性質的胺基酸置換一胺基酸的 結果(意即保守胺基酸置換)。而保守胺基酸取代可基於涉及殘基的極性、電荷、溶解性、疏 水性、親水性及/或兩親性質的相似性而進行。胺基酸插入或胺基酸缺失則較佳在約1至 20個胺基酸範圍內，更佳為1至10個胺基酸。允許的變化可通過使用重組基因技術在多肽 分子中系統地使胺基酸插入、缺失或取代及鑑定所得重組變異體的活性及功能實驗而找出 具相同功能的變異體。本文所使用的「具相同功能的片段」一詞，是指已知蛋白質或具相同 功能變異體中提供相同功能的部位的胺基酸片段。例如，抗原決定部位的胺基酸序列。
[0051] 本文所使用的「可接受」一詞，是指該載劑必需與組合物的活性成分兼容(較佳為 能穩定該活性成分）且對被治療個體無害。
[0052] 本文所使用的「有效量」一詞，是指相較於未接受此量的對應個體，藥物或藥劑的 用量造成所欲的藥理或生理上的結果，或疾病、異常或副作用的治療、治癒、預防、或改善， 或減少疾病或異常的發生。服用的有效量或有效劑量可根據所使用的特定有效成分、服用 模式、年齡、體型、以及所欲治療個體的條件而改變。藥劑的精確服用量則系依醫師的判斷 進行投藥且依個體差異而異。
[0053] 根據本發明，發現甘油醒-3-磷酸脫氫酶（Glyceraldehyde3_phosphate Dehydrogenase, G3FOH)具有非可預期的抗過敏活性。在本發明一具體實施例中，針對甘油 醛-3-磷酸脫氫酶（G3PDH)進行小鼠樹突細胞共培養實驗，顯示G3PDH可有效誘發小鼠樹 突細胞表達IL-12及刺激脾臟細胞表達IFN- γ，顯示其具有刺激免疫細胞、調節免疫反應 的功效。因此，本發明提供甘油醛-3-磷酸脫氫酶或其具相同功能的變異體或片段在製備 降低個體過敏反應的藥劑中的用途。
[0054] 因此，本發明提供甘油醛-3-磷酸脫氫酶或其具相同功能的變異體或片段在製備 降低過敏性疾病以及氣喘或異位性皮膚炎的藥劑中的用途。
[0055] 本發明的一實施例中，甘油醛-3-磷酸脫氫酶具有如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸 序列。但本發明所使用的甘油醛-3-磷酸脫氫酶當包含不同來源以及製程的甘油醛-3-磷 酸脫氫酶，或其具相同功能的變異體或片段。
[0056] 根據本發明，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（G3PDH)為活性成分可進一步與生理上可 接受的賦形劑或稀釋劑製成一醫藥組合物，或一食品組合物。
[0057] 根據本發明，包含以甘油醛-3-磷酸脫氫酶為活性成分的組合物、萃取物、區分 物、次區分物（subfraction)亦可用於製備治療或預防氣喘或異位性皮膚炎藥劑。
[0058] 根據本發明，該甘油醛-3-磷酸脫氫酶是分離自加氏乳酸桿菌（Lactobacillus gasseri) PM-A0005菌株，該PM-A0005菌株由東宇生物科技股份有限公司開發，於2007年 4月6日寄存於中國典型培養物保藏中心，寄存編號CCTCC NO :M207039。並於2007年1月 5日申請專利並於2012年1月21日取得臺灣專利第1356680號。但於該已獲準的專利中 並未曾公開其具有預防或治療過敏性氣喘或異位性皮膚炎的功效，亦未公開其有效成分。
[0059] 根據本發明，該PM-A0005菌株的萃取物可經由本【技術領域】所熟知的標準方法，例 如利用溶菌酶分解菌體並以硫酸銨沉澱胞質蛋白質而獲得。在本發明的一具體實施例中， 是將該PM-A0005菌株以溶菌酶處理而釋出細胞質內容物，接續以濃度遞增的硫酸銨沉澱 蛋白質以獲得不同硫酸銨濃度的萃取物，根據不同的硫酸銨濃度可獲得4個不同蛋白質萃 取物，分別命名為AS_0-25%、AS_25-50%、AS_50-75%、AS_75-100%。將此4種蛋白質萃取物 與小鼠樹突細胞共同培養，發現AS_0-25%和AS_50-75%具有誘發小鼠樹突細胞產生高於 對照組(僅有細胞)3倍以上的IL-12表達量，顯示其具有刺激免疫細胞、調節免疫反應的功 效；進而將AS_50-75%經腹腔注射投予小鼠，可顯著降低塵蟎致敏小鼠呼吸道阻力，並顯著 抑制肺臟的細胞浸潤與發炎現象。因此證實該PM-A0005菌株的萃取物具有預防或治療過 敏性氣喘的功效。
[0060] 根據本發明，該PM-A0005菌株的區分物（fraction),可經由本技 術領域所熟知的標準方法，自上述方法所獲的萃取物，接續經離子交換層析 (ion-exchangechromatography)分離而得。在本發明的一具體實施例中，進一步將萃取物 AS_0-25%和AS_50-75%利用HiTrap?DEAE-FF管柱以離子交換層析法分離活性物質。經由 離子交換層析法，AS_0-25%可以分離出3個區分物IE1-UIE1-2和IE1-3 ;AS_50-75%可以 分離出3個區分物IE3-UIE3-2和IE3-3。將此6種蛋白質區分物與小鼠樹突細胞共同培 養，發現該等區分物可誘發小鼠樹突細胞產生高於對照組(僅有細胞)IL-12表達量，顯示其 具有刺激免疫細胞、調節免疫反應的功效。其中IE1-2、IE1-3、IE3-2和IE3-3的IL-12表 達量更高於對照組3倍以上。
[0061 ] 根據本發明，該PM-A0005菌株的次區分物（subfraction)，可經由本技術領 域所熟知的標準方法，自上述方法所獲的區分物以膠體過濾層析法（Ge 1 -fi 1 trat i on chromatography)的方式進行更進一步的分離活性物質而得。在本發明的一具體實施例中， 進一步將區分物IE1-2、IE1-3、IE3-2和IE3-3利用S印hacryl?S-300HR管柱給以膠體過 濾層析分離，IE1-2可以分離出1個次區分物（subfraction) IE1-2G1 ;ΙΕ1-3可以分離出 2個次區分物和IE1-3G2 ;IE3-2可以分離出3個次區分物IE3-2G1、IE3-2G2和 IE3-2G3 ;IE3-3可以分離出5個次區分物比3-361、比3-362、比3-363、比3-364和比3-365。 將此11種蛋白質次區分物與小鼠樹突細胞共同培養，發現次區分物可誘發小鼠樹突細胞 產生高於對照組(僅有細胞)的IL-12表達量，顯示其具有刺激免疫細胞、調節免疫反應的功 效，尤以IE3-3G1的IL-12表達量較對照組高出約7. 3倍以上為最佳；其中將IE3-3G1經腹 腔注射投予小鼠，可顯著降低塵蟎致敏小鼠呼吸道阻力，並顯著抑制肺臟的細胞浸潤與發 炎現象，證實本發明的次區分物具有降低過敏反應，特別是預防或治療過敏性氣喘的功效。 此外，在OVA或是Der p經皮致敏的小鼠以腹腔注射IE3-3G1後，顯著減緩皮膚發炎現象， 亦證明本發明次區分物具有降低預防或治療異位性皮膚炎的功效。
[0062] 本發明該PM-A0005菌株的萃取物、區分物及次區分物可進一步與生理上可接受 的賦形劑或稀釋劑製成一醫藥組合物，或一食品組合物。因其具有刺激免疫細胞IL-12表 達的功效，可降低塵蟎致敏小鼠的呼吸道阻力及抑制肺臟的細胞浸潤與發炎現象；亦可刺 激抑制發炎的IL-10細胞激素，以降低經0VA或是Der p經皮致敏所造成的皮膚發炎反應， 故可用於治療或預防過敏性氣喘或異位性皮膚炎。另外，該PM-A0005菌株本身亦具有治療 或預防異位性皮膚炎的功效。
[0063] 根據本發明，可依本領域技術人員熟知或標準的方法，依需要選用適當的飲食用 材料製成口服藥物、食品或飲品。該食品或飲品包括但不限於乳品、發酵乳製品、飲料、運動 飲料、營養添加物或保健食品、糖果或是膠質。
[0064] 一些適當賦形劑的實施例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖、甘露糖、澱粉、阿拉伯 膠、磷酸鈣、褐藻酸鹽、黃蓍樹膠、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯啶酮、纖維素、滅菌 水、糖漿和甲基纖維素其中一種或幾種。該組合物可另外包括潤滑劑，溼潤劑，乳化劑，懸浮 齊IJ，保存劑，甜味劑或調味劑其中一種或幾種，其中潤滑劑包括滑石粉、硬脂酸鎂或礦物油 其中一種或幾種；保存劑包括羥基苯甲酸甲酯或丙酯其中一種或幾種。
[0065] 本發明進一步以下列實施例說明，其是提供示範的目的而非用以限制本發明。
[0066] 實施例1PM-A0005菌株的製備
[0067] 加氏乳酸桿菌PM-A0005菌株以MRS培養基於37°C培養24小時，挑選單一菌落於 5ml的無菌培養基(表1)於37°C培養20小時。第3天以無菌方式製作種子罐，取出菌液以 50倍稀釋於培養基中以37°C培養16小時。第4天將100ml菌液接種於含有3. 5公升培養 基的桌上型微處理控制發酵槽(型號：Major ScienCe，MS-Fl)中進行發酵，於37°C、pH6. 0 條件下培養5. 5小時。當發酵結束後，取出發酵菌液並使用高速離心機去除上清液留下菌 泥，計數菌數達到l〇9CFU。
[0068] 表 1
[0069]

【權利要求】
1. 甘油醒 _3_ 憐酸脫氧酶（Glyceraldehyde3_phosphate Dehydrogenase，63Η)Η)或其 具相同功能的變異體或片段在製備降低個體過敏反應的藥劑中的用途。
2. 甘油醛-3-磷酸脫氫酶或其具相同功能的變異體或片段在製備治療或預防過敏性 疾病的藥劑中的用途。
3. 如權利要求2所述的用途，其中該過敏性疾病為氣喘。
4. 如權利要求2所述的用途，其中該過敏性疾病為異位性皮膚炎。
5. 如權利要求1或2所述的用途，其中該甘油醛-3-磷酸脫氫酶具有如SEQ ID NO: 1 所示的胺基酸序列。
6. 如權利要求1或2所述的用途，其中該甘油醛-3-磷酸脫氫酶是選自由加氏乳酸 桿菌（Lactobacillus gasseri)PM-A0005菌株及其萃取物、區分物、次區分物或有效成分 所組成的群組；其中該PM-A0005菌株保藏在中國典型培養物保藏中心，其菌種保藏編號為 CCTCC NO :M207039。
7. 如權利要求6所述的用途，其中該萃取物為溶菌酶分解該PM-A0005菌株菌體後再以 硫酸銨沉澱胞質蛋白質而獲得。
8. 如權利要求7的所述用途，其中該萃取物為以濃度為大於0且小於等於25%或濃度 為50-75%的硫酸銨沉澱胞質蛋白質而獲得。
9. 如權利要求6所述的用途，其中該區分物為溶菌酶分解該ΡΜ-Α000 5菌株菌體 後再以硫酸銨沉澱胞質蛋白質而獲得萃取物後，其再經離子交換層析（ion-exchange chromatography)分離而得。
10. 如權利要求9所述的用途，其中該區分物為選自由IE1-2、IE1-3、IE3-2及IE3-3 所組成的群組。
11. 如權利要求6所述的用途，其中該次區分物為溶菌酶分解該PM-A0005菌株菌體後 再以硫酸銨沉澱胞質蛋白質而獲得的萃取物，其再經離子交換層析分離獲得區分物後，再 以膠體過濾層析法（gel filtration chromatography)分離而得。
12. 如權利要求11所述的用途，其中該次區分物為IE3-3G1。
13. 如權利要求12所述的用途，其中該次區分物為IE3-3G1的有效成分為甘油 醛-3-磷酸脫氫酶。
14. 如權利要求6所述的用途，其中該PM-A0005菌株的萃取物、區分物及次區分物可與 生理上可接受的賦形劑或稀釋劑製成一醫藥組合物或食品組合物。
15. 如權利要求1或2所述的用途，其中該甘油醛-3-磷酸脫氫酶或其具相同功能的變 異體或片段可與生理上可接受的賦形劑或稀釋劑製成一醫藥組合物或食品組合物。
16. 一種加氏乳酸桿菌（Lactobacillus gasseri)PM_A0005菌株在製備治療或預防異 位性皮膚炎的藥劑中的用途，其中該PM-A0005菌株保藏在中國典型培養物保藏中心，其菌 種保藏編號為CCTCC NO :M207039。
【文檔編號】A61K38/44GK104056259SQ201410112862
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2014年3月24日 優先權日:2013年3月22日
【發明者】蘇偉志, 陳湘陵, 黃浚憲, 吳小俐, 李光智, 蔡佩瑜, 曾群富 申請人:東宇生物科技股份有限公司