一種基於近紅外光譜技術布渣葉中黃酮類成分含量的測定方法
2023-05-18 00:35:01
專利名稱：一種基於近紅外光譜技術布渣葉中黃酮類成分含量的測定方法
技術領域：
本發明涉及中藥的質量控制方法；具體涉及一種布渣葉中黃酮類成分含量的測定方法，基於近紅外光譜技術的布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分的快速測定方法，屬於中藥質量檢測技術領域。
背景技術：
布渣葉為椴樹科植物破布葉Microcos paniculata L.的乾燥葉，產於廣東、廣西、海南、雲南等地，印度、印度尼西亞亦有分布；在我國，尤以兩廣地區資源豐富，其中廣東的陽西、湛江為主產地，均以野生為主。本品味微酸，性涼，無毒，具有清熱利溼、健胃消滯的功效，用於治療感冒發熱、黃疸、食欲不振、消化不良、脘腹脹痛、洩瀉、瘡瘍、蜈蚣咬傷等。布渣葉主要含有黃酮、生物鹼、有機酸、揮髮油、鞣質、酚類等成分。其中的黃酮類成分具有多方面的生物活性，如抗脂質過氧化、抗衰老、清除自由基、降低血脂及血膽固醇、抗菌消炎、抗病毒、增強免疫功能等。近紅外光譜分析技術(near infrared spectroscopy,NIRS)具有分析速度快、對樣品無損害、無化學汙染等顯著優點，近年來廣泛應用於農業、菸草、石油化工、醫藥等各個領域。本發明利用近紅外光譜技術結合偏最小二乘法(ParticalLeast Square，PLS)，對布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分進行含量測定，旨在建立一種布渣葉4種黃酮類成分的快速測定方法，該方法滿足製藥過程中布洛葉藥材快速質量控制的要求。
發明內容
本發明的目的在於提供布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分的快速測定方法，所述快速測定方法是基於近紅外光譜技術。本發明為實現上述目的所提供的技術方案是:一種布渣葉中黃酮類成分含量的測定方法，其特徵在於該方法是採用近紅外光譜技術進行測定。其具體包括以下步驟:步驟一:表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量的測定用HPLC法測定建模用布渣葉樣品中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量;步驟二:近紅外光譜的採集採集建模用布渣葉樣品的近紅外光譜；步驟三:模型的建立根據建模用布渣葉樣品的近紅外光譜，其及HPLC測得的表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量，選取代表性的樣品組成校正集，應用偏最小二乘法建立校正模型，布渣葉NIR光譜以9點平滑並進行縱坐標歸一化處理，表兒茶素、異牡荊苷和水仙苷的建模波段為7800 9999CHT1，牡荊苷的建模波段為7100 7800CHT1，得布渣葉模型；
步驟四:樣品的快速測定採集待測布渣葉樣品的近紅外光譜數據，將其導入模型中，進行快速測定，即得布渣葉樣品中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量。前述步驟一中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量的測定，可以採用現有技術已知的表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的HPLC的含量測定方法。優選的採用「同時測定布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分的HPLC含量測定法」，具體的測定方法如下:(I)色譜條件色譜柱:ShiseidoCapcell pak MG C18 (4.6 X 250mm, 5 U m)柱；流動相:以甲醇為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫；檢測波長:280nm ;流速:1.0mL/min ;柱溫:25°C ；梯度洗脫條件為:O 35分鐘，流動相A21 35%，流動相B79 65% ；35 60分鐘，流動相A35 48%，流動相B65 52% ； 60 62分鐘，流動相A48 80%，流動相B52 20% ；(2 )對照品溶液的製備取表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷對照品適量，精密稱定，加70%甲醇製成每mL含表兒茶素58.32 u g、牡荊苷23.24 u g、異牡荊苷38.32 u g和水仙苷57.76 u g的混合溶液，即得；( 3 )供試品溶液的製備取布渣葉藥材粉末(過三號篩)約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz) I小時，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；(4)測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 U L，注入液相色譜儀進行測定，得表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量。本發明的優點在於方法簡單、準確，靈敏度高，精密度、穩定性好，近紅外預測模型一旦建立，就可以快速準確地對未知含量的布渣葉樣品進行快速測定，可用於製藥過程中布渣葉藥材快速質量控制。
圖1，本發明實施例中49份布渣葉樣品表兒茶素含量分布圖。圖2，本發明實施例中49份布渣葉樣品牡荊苷含量分布圖。圖3，本發明實施例中49份布渣葉樣品異牡荊苷含量分布圖。圖4，本發明實施例中49份布渣葉樣品水仙荊苷含量分布圖。圖5，本發明實施例中49份布渣葉樣品的NIR光譜疊加圖。圖6，本發明實施例中49份布渣葉樣品的表兒茶素含量預測值與實測值之間的相關圖。圖7，本發明實施例中49份布渣葉樣品的牡荊苷含量預測值與實測值之間的相關圖。
圖8，本發明實施例中49份布渣葉樣品的異牡荊苷含量預測值與實測值之間的相關圖。圖9，本發明實施例中49份布渣葉樣品的水仙苷含量預測值與實測值之間的相關圖。
具體實施例方式一、近紅外預測模型的建立I儀器與試藥Nicolet6700傅立葉變換紅外光譜儀(美國Thermo Nicolet公司)，配有積分球漫反射採樣系統和Omnic信號採集軟體，Agilentl200高效液相色譜儀，Mettler XS205DU型電子分析天平(瑞士)，數據處理軟體為SAS JMP Statistical Discovery V9.0.2統計分析大師。布渣葉樣品分別採收自廣東省各市縣及在各大醫藥公司購買，共收集49份，所有樣品經廣東省中醫研究所劉法錦教授鑑定為:鍛樹科植物破布葉Microcos paniculataL.的乾燥葉，為《中國藥典》2010年版收載的品種。表兒茶素(批號:878-200102)、牡荊苷(批號:111687-200602)購於中國藥品生物製品檢定所；異牡荊苷(批號:Y-127_110705)、水仙苷(批號:S-063-110926)購於成都瑞芬思生物科技有限公司；甲醇為色譜純，液相用水為屈臣氏蒸餾水，其餘試劑均為分析純。2方法與結果2.1HPLC測定布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量2.1.1色譜條件色譜柱:ShiseidoCapcell pak MG C18 (4.6X 250mm, 5 U m)柱；流動相:以甲醇為流動相A，以水為流動相B，按下表進行梯度洗脫；檢測波長:280nm ;流速:1.0mL/min ;柱溫:25°Co梯度洗脫條件為:0 35分鐘，流動相A21 35%，流動相B79 65% ；35 60分鐘，流動相A35 48%，流動相B65 52% ；60 62分鐘，流動相A48 80%，流動相B52 20% ；2.1.2對照品溶液的製備取表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷對照品適量，精密稱定，加70%甲醇製成每mL含表兒茶素58.32 u g、牡荊苷23.24 u g、異牡荊苷38.32 u g和水仙苷57.76 u g的混合溶液，即得。2.1.3供試品溶液的製備取布渣葉藥材粉末(過三號篩)約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz) I小時，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。2.1.4 測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 U L，注入液相色譜儀進行測定。實施例中49份布渣葉樣品的表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量分布圖，見圖1 4。
2.2近紅外光譜的採集取布渣葉樣品粉末(過60目篩)約5g，放入樣品杯中，均勻鋪平，振動數下使粉末密實。以空氣為參比，按下述實驗條件進行掃描，測樣方式:積分球漫反射，解析度為4CHT1，自動增益，光譜採集範圍為10000 ^OOcnT1，掃描次數為32次，溫度為20 25°C，相對溼度為10% 20%。每個樣品取3份作平行實驗，求取其平均光譜。實施例中49份布渣葉樣品的近紅外光譜疊加見圖5。2.3模型的建立2.3.1校正集和驗證集樣品的選擇從收集到的49個樣品中，根據其表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量，選取39個有代表性的樣品組成校正集，剩餘10個樣品為驗證集樣品，表I列出了校正集和驗證集樣品表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量範圍。表1校正集與驗證集樣品表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量含量範圍
權利要求
1.一種布渣葉中黃酮類成分含量的測定方法，所述方法基於近紅外光譜技術進行測定，其特徵在於其包括以下步驟: (1)表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量的測定 用HPLC法測定建模用布渣葉樣品中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量； (2)近紅外光譜的採集 採集建模用布渣葉樣品的近紅外光譜； (3)模型的建立 根據建模用布渣葉樣品的近紅外光譜，及步驟(I)中HPLC法測得的表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量，選取代表性的樣品組成校正集，應用偏最小二乘法建立校正模型，布渣葉NIR光譜以9點平滑並進行縱坐標歸一化處理，表兒茶素、異牡荊苷和水仙苷的建模波段為7800 9999cm—1，牡荊苷的建模波段為7100 7800cm-1，得布渣葉模型； (4)樣品的快速測定 採集待測布渣葉樣品的近紅外光譜數據，將其導入模型中，進行快速測定，即得布渣葉樣品中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量。
2.權利要求1所述的布渣葉中黃酮類成分含量的測定方法，其特徵在於步驟(I)中的表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量的測定的具體方法為: (1)色譜條件 色譜柱:Shiseido Capcell pak MG C18,4.6 X 250mm、5 ii 111柱；流動相:以甲醇為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫；檢測波長:280nm ;流速:1.0mL/min ;柱溫:25°C ； 梯度洗脫條件: 0 35分鐘，流動相A21 35%，流動相B79 65% ； 35 60分鐘，流動相A35 48%，流動相B65 52% ； 60 62分鐘，流動相A48 80%，流動相B52 20% ； (2)對照品溶液的製備 取表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷對照品適量，精密稱定，加70%甲醇製成每mL含表兒茶素58.32 u g、牡荊苷23.24 u g、異牡荊苷38.32 u g和水仙苷57.76 u g的混合溶液，即得； (3)供試品溶液的製備 取布渣葉藥材粉末過三號篩約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理I小時，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得； (4)測定法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各IOu L，注入液相色譜儀進行測定，得表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量。
全文摘要
本發明公開了一種布渣葉中黃酮類成分含量的測定方法，基於近紅外光譜技術的測定布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分。該方法屬於快速測定方法，方法簡單、準確，靈敏度高，精密度、穩定性好，非常有利於在製藥過程中布渣葉藥材快速質量控制中的應用。
文檔編號G01N21/35GK103175804SQ201310067169
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月4日 優先權日2013年3月4日
發明者孫冬梅, 羅文匯, 畢曉黎, 譚志燦, 胥愛麗, 李養學, 李素梅, 江潔怡 申請人:廣東省中醫研究所