一種六堡茶提取物中茶多糖的檢測方法與流程

2023-05-06 11:27:26 4

本發明屬於食品分析領域，尤其是一種六堡茶提取物中茶多糖的檢測方法。

背景技術：

六堡茶屬於黑茶類，主產於廣西梧州六堡鎮，該品種茶葉具有紅、濃、陳、醇的特點，具有消暑祛溼、明目清心、幫助消化的功效，因為六堡茶所含脂肪分解酵素高於其他茶類，因此具有健胃養神、減肥健身的功效，是一種廣受歡迎的茶類。

現代研究表明茶葉降脂、減肥、降糖等保健功能是多種成分綜合作用的結果，其中起主要作用的有兩大類物質，一類是多酚類化合物(簡稱茶多酚)，另一類是脂多糖類化合物(簡稱茶多糖)。

研究表明，茶多糖抑制高脂飲食小鼠血脂升高的作用大於茶多酚；茶多糖還有顯著的降低血糖保健功能。倪德江等研究表明不同茶類多糖對實驗型糖尿病小鼠均有極顯著的降低血糖作用。在低、中劑量下，烏龍茶、紅茶、黑茶、白茶中茶多糖降低血糖的作用明顯優於綠茶茶多糖。日本學者清水岑夫也揭示了茶葉中降血糖的有效成分是水溶性的組分複合多糖，即茶多糖。

由於六堡茶中茶多糖具有良好的保健功效，因此準確測定茶多糖含量對選擇原料和評價提取、純化工藝非常重要，但卻一直困擾著茶多糖的測定。

目前，國內外快速測定多糖含量主要是用蒽酮-硫酸法或苯酚-硫酸法。由於六堡茶中含有大量茶紅素、茶褐素、茶黃素等色素物質，對茶多糖檢測中的顯色反應會造成很大幹擾，造成檢測結果偏高，無法準確得到茶多糖含量。因此，為準確測定六堡茶提取物中茶多糖的含量，儘量減少其他物質的幹擾。

技術實現要素：

本發明旨在提供一種快速檢測六堡茶提取物中茶多糖含量的檢測方法，該方法可準確測定茶多糖的含量。

為了實現上述技術效果，本發明提供的技術方案是這樣的：一種六堡茶提取物中茶多糖的檢測方法，包括以下步驟：

步驟1：配製葡萄糖標準溶液作為對照；

步驟2：將六堡茶提取物樣品配製成檢測液；

步驟3：用紫外分光光度法測定標準對照品溶液和檢測液的吸光度，繪製標準曲線；

步驟4：計算六堡茶提取物樣品中茶多糖含量。

需要說明的是，步驟1中的配製葡萄糖標準溶液的具體步驟為：取d-無水葡萄糖對照品，加水溶解並稀釋製成每1ml中含0.3mg的溶液，作為對照品溶液。

需要說明的是，所述的步驟2中的將六堡茶提取物樣品配製成檢測液，包括以下步驟：

步驟s1：取六堡茶3g，置250ml燒瓶中，分別加入30ml沸水浸提3次，每次10min，合併濾液；

步驟s2：加乙醇調整至乙醇含量80％，過濾，用濃度為80％乙醇洗滌濾渣3次，30ml/次，揮幹溶劑，濾紙連同濾渣一起置燒瓶中，加50ml水，加熱回流0.5h，趁熱過濾，用65-100℃熱水洗滌，合併濾液，定容至100ml；

步驟s3：精密吸取5ml提取溶液，加入鹽酸溶液，混合液中鹽酸的濃度為0.5mol/l，在40℃下水解30min，冷卻後調ph至中性；

步驟s4：將酸水解後的多糖提取液置規格為15cm×2cm的聚醯胺層析柱中，用70-90℃熱水洗脫，收集濾液，定容至100ml，作為供試品溶液。

需要說明的是，步驟3中所述的紫外分光光度法測定為：將葡萄糖標準溶液和檢測液分別加入5％的苯酚溶液1.0ml，振搖混勻，加5.0ml硫酸，用微型漩渦混合儀迅速振搖混勻，室溫下放置30分鐘，以第1管為空白，照中國藥典2005年版一部附錄vb紫外-可見分光光度法，在487nm波長處測定吸光度。

需要說明的是，步驟3所述的標準曲線的繪製，包括以下步驟：

步驟ss1：分別精密吸取對照品溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml分別置10ml具塞試管中，分別加二純水至1.0ml，各精密加入5％的苯酚溶液1.0ml，振搖混勻；

步驟ss2：加5.0ml硫酸，用微型漩渦混合儀迅速振搖混勻，室溫下放置30分鐘；

步驟ss3：以第1管為空白，參照中國藥典2005年版一部附錄vb紫外-可見分光光度法，在487nm波長處測定吸光度，以吸光度和質量作標準曲線。

本發明與傳統方法相比，具有以下優點：

1.本發明採用酸水解和聚醯胺柱分離兩個步驟改進了六堡茶取物樣品的製備方法，有效地分離了對測定結果產生幹擾的茶色素等物質，實現了準確的多糖含量測定。

2.直接採用苯酚-硫酸法檢測由於有茶色素的幹擾造成結果偏高；採用本法檢測有效去除了茶色素等物質的幹擾，結果較準確。

3.本發明適用於任何一種市場上可以購買的六堡茶及其製品；

4.本發明適用於任何一種通過現有技術或新技術對六堡茶進行提取分離得到的六堡茶提取物。

具體實施例

下面結合具體實施方式對本發明的權利要求書做進一步說明，但不構成對本發明的任何限制，任何以本發明的技術方案為基礎所作出的有限次修改仍然屬於本發明所要保護的內容。

實施例1

1.六堡茶葉供試品溶液製備方法

步驟s1：取六堡茶3g，置250ml燒瓶中，分別加入30ml沸水浸提3次，每次10min，合併濾液；

步驟s2：加乙醇調整至乙醇含量80％，過濾，用濃度為80％乙醇洗滌濾渣3次，30ml/次，揮幹溶劑，濾紙連同濾渣一起置燒瓶中，加50ml水，加熱回流0.5h，趁熱過濾，用65-100℃熱水洗滌，合併濾液，定容至100ml；

步驟s3：精密吸取5ml提取溶液，加入鹽酸溶液，混合液中鹽酸的濃度為0.5mol/l，在40℃下水解30min，冷卻後調ph至中性；

步驟s4：將酸水解後的多糖提取液置規格為15cm×2cm的聚醯胺層析柱中，用70-90℃熱水洗脫，收集濾液，定容至100ml，作為供試品溶液。

2.對照品溶液的製備

將葡萄糖標準溶液和檢測液分別加入5％的苯酚溶液1.0ml，振搖混勻，加5.0ml硫酸，用微型漩渦混合儀迅速振搖混勻，室溫下放置30分鐘，以第1管為空白，照中國藥典2005年版一部附錄vb紫外-可見分光光度法，在487nm波長處測定吸光度。

3.標準曲線的繪製

步驟ss1：分別精密吸取對照品溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml分別置10ml具塞試管中，分別加二純水至1.0ml，各精密加入5％的苯酚溶液1.0ml，振搖混勻；

步驟ss2：加5.0ml硫酸，用微型漩渦混合儀迅速振搖混勻，室溫下放置30分鐘；

步驟ss3：以第1管為空白，參照中國藥典2005年版一部附錄vb紫外-可見分光光度法，在487nm波長處測定吸光度，以吸光度和質量作標準曲線(在1小時內測定完畢)，計算。

以上所述的僅為本發明的較佳實施例，凡在本發明的精神和原則範圍內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。