用於診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其製備方法
2023-05-06 19:25:46 1
專利名稱：用於診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其製備方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種通過ELISA法篩查貓毛過敏性疾病和脫敏療法治療貓毛過敏性疾病的蛋白及其製備方法。
背景技術：
過敏性疾病是當今世界上最常見、最頑固的疾患之一，涉及臨床各科。目前有高達 20%的世界人口患有不同類型的過敏性疾病，從新生兒到中老年人各年齡段都有發生，沒有明顯的性別傾向，但有明顯的遺傳性傾向。過敏型變態反應也就是常說的I型變態反應，也是目前最常見的一個類型。其發生機理是外源性或內源性抗原(反應原)刺激機體的淋巴結，肝、脾等器官的單核吞噬系統，引起漿細胞反應，產生特異性反應素，即免疫球蛋白E(IgE)。IgE分子以其Fc端附著於肥大細胞或嗜鹼粒細胞的IgE受體上。此時機體即處於致敏狀態，被致敏的肥大細胞再次與特異性致敏反應原接觸時，就引進觸發反應，導致毛細血管擴張、水腫、滲出、平滑肌痙攣、外分泌活動亢進等一系列臨床表現，最常見的過敏症臨床表現是花粉症、反應性鼻炎、 過敏休克、支氣管哮喘、蕁麻疹、溼疹等等。引起過敏的主要的變應原有塵蟎、花粉、屋塵、黴菌、動物毛髮、羽毛等，其中動物毛髮是一種強烈的變應原。隨著生活水平的提高，越來越多的家庭擁有寵物，貓是比較常見的一種寵物。在日常生活中貓脫落的毛髮、皮屑漂浮在空氣中，通過鼻、口呼吸進入人體內， 極易誘發過敏性哮喘、鼻炎、結膜炎、皮炎。貓的唾液則通過體表接觸或經鼻、口進入人體內引發過敏反應。貓毛皮屑或唾液引起過敏的同為一個分子量為40KD的糖蛋白，其等電點為4. 5。 其病理機制為由特異性免疫球蛋白E介導的I型速發性過敏反應。
發明內容
本發明的目的是提供用於診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其製備方法，它利用脫敏治療的原理，通過依次吸收由小至大劑量的藥物，使病人逐步提高對外來變應原的耐受性，從而達到減輕發作或控制發作的目的，可用於過敏性哮喘、鼻炎、慢性蕁麻疹等症的治療。為了解決背景技術所存在的問題，本發明是採用以下技術方案它的製備方法為1)取寵物貓毛前三天內不用洗髮液洗寵物，部位不限，取貓毛後剪碎備用。2)在約50克貓毛，加入2倍體積的丙酮，清洗脫脂2-5小時；傾倒出丙酮，加入新的丙酮，重複清洗脫脂2次；3)三次脫脂後，傾倒出上層丙酮，保留下層固體，於室溫自然吹乾，待殘留貓毛末中毫無丙酮刺激氣味即為丙酮揮幹標準；4)取晾乾後的貓毛按照1 25W/V浸於含0.4%笨酚的碳酸氫鈉鹽水液中(5gNaCl/L ；2. 75g NaHC03/L ；pH = 8. 2，Coca，s Solution)，即每 25 毫升碳酸氫鈉鹽水液中有1克脫脂後的貓毛，4°C磁力攪拌10小時；間隔冷浸過夜，再磁力攪拌，至少72小時後取上層清夜；離心，除去沉澱，將上清調節PH到5. 0，加入(NH4) 2S04至80%飽和度，4°C攪拌 30-60分鐘，離心，收集沉澱；將沉澱用少量碳酸氫鈉鹽水液重新溶解，並用同樣緩衝液對樣品進行透析，除去(NH4)2SO4,得到貓毛鹽溶蛋白的粗提物；將粗提物先用陰離子交換柱分離純化，再用凝膠柱分離純化；收集活性峰，蒸餾水透析後，得到分子量為40kD的貓毛過敏原，加50%甘油保存。所述的陰離子交換柱可以是Resource Q陰離子交換柱，凝膠柱可以是kphacryl S-200凝膠柱。本發明具有以下有益效果利用脫敏治療的原理，通過依次吸收由小至大劑量的藥物，使病人逐步提高對外來變應原的耐受性，從而達到減輕發作或控制發作的目的，可用於過敏性哮喘、鼻炎、慢性蕁麻疹等症的治療。
具體實施例方式本具體實施方式
採用以下技術方案它的製備方法為1)取寵物貓毛前三天內不用洗髮液洗寵物，部位不限，取貓毛後剪碎備用；2)在約50克貓毛，加入2倍體積的丙酮，清洗脫脂2-5小時；傾倒出丙酮，加入新的丙酮，重複清洗脫脂2次；3)三次脫脂後，傾倒出上層丙酮，保留下層固體，於室溫自然吹乾，待殘留貓毛末中毫無丙酮刺激氣味即為丙酮揮幹標準；4)取晾乾後的貓毛按照1 25W/V浸於含0.4%笨酚的碳酸氫鈉鹽水液中 (5gNaCl/L ；2. 75g NaHC03/L ；pH = 8. 2，Coca，s Solution)，即每 25 毫升碳酸氫鈉鹽水液中有1克脫脂後的貓毛，4°C磁力攪拌10小時；間隔冷浸過夜，再磁力攪拌，至少72小時後取上層清夜；離心，除去沉澱，將上清調節PH到5. 0，加入(NH4) 2S04至80%飽和度，4°C攪拌 30-60分鐘，離心，收集沉澱；將沉澱用少量碳酸氫鈉鹽水液重新溶解，並用同樣緩衝液對樣品進行透析，除去(NH4)2SO4,得到貓毛鹽溶蛋白的粗提物；將粗提物先用陰離子交換柱分離純化，再用凝膠柱分離純化；收集活性峰，蒸餾水透析後，得到分子量為40kD的貓毛過敏原，加50%甘油保存。所述的陰離子交換柱可以是Resource Q陰離子交換柱，凝膠柱可以是kphacryl S-200凝膠柱。本具體實施方式
利用脫敏治療的原理，通過依次吸收由小至大劑量的藥物，使病人逐步提高對外來變應原的耐受性，從而達到減輕發作或控制發作的目的，可用於過敏性哮喘、鼻炎、慢性蕁麻疹等症的治療。
權利要求
1.用於診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其製備方法，其特徵在於它的製備方法為1)取寵物貓毛前三天內不用洗髮液洗寵物，部位不限，取貓毛後剪碎備用。2)在約50克貓毛，加入2倍體積的丙酮，清洗脫脂2-5小時；傾倒出丙酮，加入新的丙酮，重複清洗脫脂2次。3)三次脫脂後，傾倒出上層丙酮，保留下層固體，於室溫自然吹乾，待殘留貓毛末中毫無丙酮刺激氣味即為丙酮揮幹標準。4)取晾乾後的貓毛按照1 25W/V浸於含0.4%笨酚的碳酸氫鈉鹽水液中(5gNaCl/L; 2. 75g NaHC03/L ；pH = 8. 2，Coca，s Solution)，即每25毫升碳酸氫鈉鹽水液中有1克脫脂後的貓毛，4°C磁力攪拌10小時；間隔冷浸過夜，再磁力攪拌，至少72小時後取上層清夜； 離心，除去沉澱，將上清調節pH到5. 0，加入(NH4)2SO4至80%飽和度，4°C攪拌30-60分鐘， 離心，收集沉澱；將沉澱用少量碳酸氫鈉鹽水液重新溶解，並用同樣緩衝液對樣品進行透析，除去(NH4)2SO4,得到貓毛鹽溶蛋白的粗提物；將粗提物先用陰離子交換柱分離純化，再用凝膠柱分離純化；收集活性峰，蒸餾水透析後，得到分子量為40kD的貓毛過敏原，加50% 甘油保存。
2.根據權利要求1所述的用於診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其製備方法，其特徵在於所述的陰離子交換柱為Resource Q陰離子交換柱。
3.根據權利要求1所述的用於診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其製備方法，其特徵在於所述的凝膠柱為kphacryl S-200凝膠柱。
全文摘要
用於診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其製備方法，它涉及生物技術領域。它的製備方法為取貓毛後剪碎，在約50克貓毛，加入2倍體積的丙酮，清洗脫脂2-5小時；反覆脫脂共3次。脫脂後的貓毛浸於含0.4％笨酚的碳酸氫鈉鹽水液中，4℃磁力攪拌10小時；離心，除去沉澱，將上清調節pH到5.0，加入(NH4)2SO4至80％飽和度，4℃攪拌30-60分鐘，離心，收集沉澱；將沉澱用少量碳酸氫鈉鹽水液重新溶解，除去(NH4)2SO4，得到貓毛鹽溶蛋白的粗提物；將粗提物先用陰離子交換柱分離純化，再用凝膠柱分離純化；收集活性峰，蒸餾水透析後，得到分子量為40kD的貓毛過敏原，加50％甘油保存；本發明可用於過敏性哮喘、鼻炎、慢性蕁麻疹等症的治療。
文檔編號A61P37/08GK102391371SQ20111034184
公開日2012年3月28日 申請日期2011年11月2日 優先權日2011年11月2日
發明者王永昌 申請人:上虞常春生物技術有限公司