二苯並噁和二苯並二噁衍生物及其作為抗腫瘤藥劑的用途的製作方法

2023-05-02 01:31:46

專利名稱：二苯並噁和二苯並二噁衍生物及其作為抗腫瘤藥劑的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及式(Ⅰ)的化合物及其差向異構體和對映體，或其生理上可使用的鹽，
其中R1和R2獨立地為氫、未取代的低級烷基、被低級烷氧基或低級烷硫基取代的低級烷基、或者未取代或被一個或多個低級烷基、低級烷氧基、滷素取代的低級烷基或滷素取代的醯基；X為CO或CHOH；Y為CO或CH2；而Z為O或NH。
除非特別指明，這裡所用的術語「低級烷基」是指未取代或可以被低級烷氧基或低級烷硫基取代的、最多含有6個(包括6個)、優選1-2個碳原子的烴基，例如「低級烷基」的例子為甲基、乙基、叔丁基、正戊基、取代的甲基如甲氧基甲基、甲硫基甲基。
「醯基」可以是脂肪族醯基、芳脂族醯基或芳族醯基。優選的脂肪族醯基有1-6個碳原子，例如甲醯基、乙醯基、丙醯基、正丁醯基、異丁醯基和戊醯基。芳脂族醯基例如可以被一個或多個取代基(例如低級烷氧基和滷代的低級烷基)取代的苯乙醯基，如α-甲氧基-α-(三氟甲基)-苯乙醯基。優選的芳族醯基為未取代或可以被低級烷基(例如甲基、乙基、叔丁基和正戊基)或滷素(例如氟、氯、溴或碘)取代的苯甲醯基。優選地，X為CO,Y為CO，而Z為O。
本發明還涉及含有一種或多種上式(Ⅰ)所定義的化合物或其生理上可使用的鹽的組合物；這些化合物或其生理上可使用的鹽作為抗腫瘤藥劑的用途；生產這些化合物或其生理上可使用的鹽的方法；和能生產某種這些化合物的微生物。
更具體地，本發明涉及下面定義的式(Ⅰ)的被稱為化合物A,A-1,A-2,A-3,A-4,A-5,A-6,A-7,A-8,A-9和A-10的化合物及其相應的差向異構體化合物B,B-1,B-2,B-3,B-4,B-5和B-6。化合物A:I,R1=H,R2=H,X=CO,Y=CO,Z=O(3,7-二羥基-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氫-5aH-二苯並[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外觀白色晶體2)熔點187-188℃3)比旋光度[α]23D=+272°(c=0.56，在甲醇中)4)分子量(FAB-MS法)負離子方式m/z 347(M-H)-5)分子式C18H20O76)高解析度質譜(M-H)測定值347.1146C18H19O7的計算值347.11317)UVλmaxnm(ε)在MeOH中213(20,100),282(14,500)在MeOH+N/10HCl中 215(18,400),278(14,500)在MeOH+N/10NaOH中248(16,100),297(13,900),328(17,000)8)IR光譜在KBr壓片中，主吸收波數如下3410,2932,1729,1678,1639,1604,1232,11269)1H-NMR光譜400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作內標，δ:101(3H,s),1.77(3H,d,J=2Hz),2.09(3H,s),2.38(3H,s),3.28(3H,s),4.32(1H,d,J=5Hz),5.35(1H,q,J=2Hz)5.52(1H,d,J=5Hz,D2O可互換的)，6.62(1H,s),10.60(1H,s,D2O可互換的)10)13C-NMR光譜100MHz，在DMSO-d6中，用TMS作內標δ:8.3,8.4,13.3,21.8,50.1,74.6,80.2,82.8,110.8,113.7,114.6,117.1,142.1,159.2,160.2,160.8,161.1,197.5
11)溶解性可溶於二甲基亞碸，乙酸乙酯，甲醇不溶於正己烷，水化合物A-1:I,R1=乙醯基，R2=乙醯基，X=CO,Y=CO,Z=O(3,7-二(甲基羰基氧基)-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氫-5aH-二苯並[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外觀白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 433(M+H)+3)分子式C22H24O94)1H-NMR光譜400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作內標δ:1.09(3H,s),1.80(3H,d,J=2Hz),2.10(3H,s),2.17(3H,s),2.34(3H,s),2.45(3H,s),3.23(3H,s),5.69(1H,s),5.78(1H,q,J=2Hz),7.04(1H,s)化合物A-2:R1=H,R2=對溴苯甲醯基，X=CO,Y=CO,Z=O(3-(4-溴苯甲醯基)-7-羥基-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氫-5aH-二苯並[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外觀白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 531(M+H)+3)分子式C25H23BrO84)1H-NMR光譜400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作內標δ:1.00(3H,s),1.80(3H,d,J=2Hz),2.14(3H,s),2.45(3H,s),3.31(3H,s),4.29(1H,s),5.56(1H,d,J=2Hz),5.71(1H,broad s),7.17(1H,s),7.85(2H,d,J=8.5Hz),8.08(2H,d,J=8.5Hz)化合物A-3:I,R1=對溴苯甲醯基，R2=對溴苯甲醯基，X=CO,Y=CO,Z=O(3,7-二(4-溴苯甲醯基)-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氫-5aH-二苯並[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外觀白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 713(M+H)+
3)分子式C32H26Br2O94)1H-NMR光譜400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作內標δ:1.44(3H,s),1.97(3H,d,J=2Hz),2.19(3H,s),2.57(3H,s),3.38(3H,s),5.21(1H,d,J=2Hz),5.73(1H,s),6.97(1H,s),7.62(2H,d,J=8.5Hz),7.69(2H,d,J=8.5Hz),7.95(2H,d,J=9Hz),8.05(2H,d,J=9Hz)化合物A-4:I,R1=H,R2=甲基，X=CO,Y=CO,Z=O((5aS,6S,7S)-7-羥基-3,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氫-5aH-二苯並[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外觀白色粉末2)分子量(EI-MS法)正離子方式m/z 362(M)+3)分子式C19H22O74)1H-NMR光譜270MHz，在CDCl3中，用TMS作內標δ:1.20(3H,s),1.97(3H,d,J=2Hz),2.20(3H,s),2.56(3H,s),3.50(3H,s),3.81(1H,d,J=2.5Hz),3.89(3H,s),4.22(1H,d,J=2.5Hz),4.91(1H,q,J=2Hz),6.60(1H,s)化合物A-5:I,R1=(-)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)-苯乙醯基，R2=甲基，X=CO,Y=CO,Z=O((S)-3,3,3-三氟-2-甲氧基-2-苯基-丙烯酸(5aS,6S,7S)-2,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-8,11-二氧-5a,6,7,8-四氫-11H-二苯並[b,e][1,4]二噁-7-基酯))；1)外觀白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 579 (M+H)+3)分子式C29H29F3O94)1H-NMR光譜400MHz，在CDCl3中，用TMS作內標δ:1.29(3H,s),1.97(3H,d,J=2Hz),2.13(3H,s),2.57(3H,s),3.09(3H,s),3.72(3H,d,J=1Hz),3.89(3H,s),4.98(1H,d,J=2Hz),5.60(1H,s),6.61(1H,s),7.42(3H,m),7.74(2H,m)化合物A-6:I,R1=(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯乙醯基，R2=甲基，X=CO,Y=CO,Z=O((R)-3,3,3-三氟-2-甲氧基-2-苯基-丙烯酸(5aS,6R,7S)-2,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-8,11-二氧-5a,6,7,8-四氫-11H-二苯並[b,e][1,4]二噁-7-基酯))；1)外觀白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 579 (M+H)+3)分子式C29H29F3O94)1H-NMR光譜400MHz，在CDCl3中，用TMS作內標δ:1.38(3H,s),1.96(3H,d,J=2Hz),2.20(3H,s),2.58(3H,s),3.33(3H,s),3.63(3H,d,J=1Hz),3.91(3H,s),5.07(1H,d,J=2Hz),5.66(1H,s),6.62(1H,s),7.44(3H,m),7.70(2H,m)化合物A-7:I,R1=CH2SCH3,R2=甲基，X=CO,Y=CO,Z=O((5aS,6R,7S)-3,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-7-甲基磺醯基甲氧基-6,7-二氫-5aH-二苯並[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外觀白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 423(M+H)+3)分子式C21H26O7S4)1H-NMR光譜500MHz，在CDCl3中，用TMS作內標δ:1.40(3H,s),1.88(3H,d,J=1.5Hz),2.16(3H,s),2.18(3H,s),2.53(3H,s),3.43(3H,s),3.88(3H,s),4.29(1H,s),4.86(2H,d,J=12.5Hz),4.93(1H,q,J=1.5Hz),6.55(1H,s)化合物A-8:I,R1=H,R2=H,X=CHOH,Y=CO,Z=O(3,7,8-三羥基-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氫-5aH-二苯並[b,e][1,4]二噁-11-酮)；1)外觀白色粉末2)分子量(EI-MS法)正離子方式m/z 350(M)+3)分子式C18H22O74)1H-NMR光譜500MHz，在DMSO-d6中，用TMS作內標δ:1.43(3H,s),1.63(3H,s),2.01(3H,s),2.21(3H,s),3.28(3H,s),3.56(1H,d,J=5,4.5Hz),4.07(1H,ddd,J=8,4.5,1Hz),4.59(1H,d,J=5Hz,D2O可互換的)，4.67(1H,d,J=1Hz),4.77(1H,d,J=8Hz D2O可互換的)，6.40(1H,s),9.82(1H,broad s,D2O可互換的)化合物A-9:I,R1=H,R2=H,X=CO,Y=CH2,Z=O((5aS,6R,7S)-3,7-二羥基-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氫-5aH,11H-二苯並[b,e][1,4]二噁-8-二酮)；1)外觀白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 335 (M+H)+3)分子式C18H22O64)1H-NMR光譜500MHz，在DMSO-d6中，用TMS作內標δ:1.15(3H),s),1.66(3H,s),2.01(3H,s),2.12(3H,s),3.27(3H,s),4.26(1H,d,J=5Hz),5.18(1H,d,J=14Hz),5.22(1H,d,J=5Hz D2O可互換的)，5.23(1H,s),5.29(1H,d,J=14Hz),6.39(1H,s),9.33(1H,s,D2O可互換的)化合物A-10:I,R1=H,R2=H,X=CO,Y=CO,Z=NH；1)外觀白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 348(M+H)+3)分子式C18H21NO64)1H-NMR光譜400MHz，在MeOH-d4中，用TMS作內標δ:1.25(3H,s),1.90(3H,d,J=1.2Hz),2.20(3H,s),2.44(3H,s),3.36(3H,s),4.35(1H,s),4.95(1H,broad s),6.56(1H,s)化合物B化合物A的對映體(3,7-二羥基-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氫-5aH-二苯並[b,e][1,4]噁-8,11-二酮)；1)外觀白色晶體2)熔點198-199℃3)比旋光度[α]23D=-8°(c=0.52，在甲醇中)4)分子量(FAB-MS法)負離子方式m/z 347(M-H)-5)分子式C18H20O7
6)高解析度質譜(M-H)測定值347.1140C18H19O7的計算值347.11317)UVλmaxnm(ε)在MeOH中 220(21,300),290(8,400)在MeOH+N/10HCl中 220(20,100),289(8,000)在MeOH+N/10NaOH中 249(17,100),335(12,800)8)IR 光譜在KBr壓片中，主吸收波數如下3424,2932,1744,1657,1600,1247,11289)1H-NMR光譜400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作內標δ:1.53(3H,s),1.66(3H,s),2.00(3H,s),2.32(3H,s),3.24(3H,s),4.27(1H,d,J=6Hz),5.13(1H,s),5.42(1H,d,J=6Hz,D2O可互換的),6.54(1H,s),10.38(1H,broad s,D2O可互換的)10)13C-NMR光譜125MHz，在DMSO-d6中，用TMS作內標δ:7.7,8.6,15.7,22.3,51.3,75.4,77.0,79.9,107.9,111.0,113.0,117.3,139.7,155.2,155.8,159.8,162.2,196.511)溶解性可溶於二甲基亞碸，乙酸乙酯，甲醇不溶於正己烷，水化合物B-1化合物A-1的差向異構體(3,7-二(甲基羰基氧基)-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氫-5aH-二苯並[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外觀白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 433 (M+H)+3)分子式C22H24O94)1H-NMR光譜400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作內標δ:1.51(3H,s),1.69(3H,s),1.98(3H,s),2.21(3H,s),2.33(3H,s),2.39(3H,s),3.28(3H,s),5.55(1H,s),5.56(1H,s),6.92(1H,s)化合物B-2化合物A-2的差向異構體(3-(4-溴苯甲醯基)-7-羥基-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氫-5aH-二苯並[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外觀白色粉末
2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 531(M+H)+3)分子式C25H23BrO84)1H-NMR光譜400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作內標δ:1.55(3H,s),1.71(3H,s),2.04(3H,s),2.41(3H,s),3.26(3H,s),4.23(1H,d,J=6Hz),5.37(1H,s),5.46(1H,d,J=6Hz),7.07(1H,s),7.86(2H,d,J=8Hz),8.06(2H,d,J=8Hz)化合物B-3化合物A-3的差向異構體1)外觀白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 713 (M+H)+3)分子式C32H26Br2O94)1H-NMR光譜500MHz，在CDl3中，用TMS作內標δ:1.63(3H,s),1.87(3H,s),2.13(3H,s),2.50(3H,s),3.47(3H,s),4.92(1H,s),5.95(1H,s),6.86(1H,s),7.63(2H,d,J=9Hz),7.69(2H,d,J=9Hz),7.98(2H,d,J=8Hz),8.06(2H,d,J=8Hz)化合物B-4化合物A-4的差向異構體((5aS,6S,7R)-7-羥基-3,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氫-5aH-二苯並[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外觀白色粉末2)分子量(EI-MS法)正離子方式m/z 362 (M)+3)分子式C19H22O74)1H-NMR光譜400MHz，在CDCl3中，用TMS作內標δ:1.71(3H,s),1.84(3H,s),2.08(3H,s),2.51(3H,s),3.35(3H,s),3.53(1H,d,J=3.5Hz,D2O可互換的)，3.87(3H,s),4.43(1H,d,J=3.5Hz),4.76(1H,s),6.54(1H,s)化合物B-5化合物A-5的差向異構體((S)-3,3,3-三氟-2-甲氧基-2-苯基-丙烯酸(5aS,6R,7S)-2,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-8,11-二氧-5a,6,7,8-四氫-11H-二苯並[b,e][1,4]二噁-7-基酯))；1)外觀白色粉末
2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 579(M+)+3)分子式C29H29F3O94)1H-NMR光譜500MHz，在CDCl3中，用TMS作內標δ:1.61(3H,s),1.82(3H,s),2.11(3H,s),2.51(3H,s),3.30(3H,s),3.59(3H,s),3.88(3H,s),4.78(1H,s),5.81(1H,s),6.55(1H,s),7.45(3H,m),7.69(2H,m)化合物B-6化合物A-6的差向異構體((R)-3,3,3-三氟-2-甲氧基-2-苯基-丙烯酸(5aS,6R,7R)-2,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-8,11-二氧-5a,6,7,8-四氫-11H-二苯並[b,e][1,4]二噁-7-基酯))；1)外觀白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正離子方式m/z 579 (M+H)+3)分子式C29H29F3O94)1H-NMR光譜500MHz，在CDCl3中，用TMS作內標δ:1.37(3H,s),1.83(3H,s),2.10(3H,s),2.50(3H,s),3.18(3H,s),3.72(3H,s),3.88(3H,s),4.72(1H,s),5.80(1H,s),6.55(1H,s),7.45(3H,m),7.80(2H,m)按照本發明所提供的方法，化合物A(R1=H,R2=H,X=CO,Z=O)及其差向異構體化合物B(R1=H,R2=H,X=CO,Z=O)可以通過在有氧的條件下，在培養基中培養一種能生產化合物A和/或B的麴黴菌屬微生物並從培養基中分離出化合物A和B而製得。
前述的方法中所使用的微生物可以是能生產這些化合物的、屬於麴黴菌屬的任何菌株(包括突變株和變種)。特別優選的菌株是日本麴黴菌NR7328、煙麴黴菌NR7329、NR7330、NR7331、NR7332和NR7334及其突變株和變種。日本麴黴菌NR7328、煙麴黴菌NR7329、NR7330、NR7331、NR7332和NR7334從玉米或土壤樣品中分離出來，並經過鑑定分別屬於日本麴黴菌和煙麴黴菌的菌株。
被命名為日本麴黴菌NR7328、煙麴黴菌NR7329、NR7330、NR7331、NR7332和NR7334的菌株已經遵照布達佩斯條約於1996年5月9日保藏在DMS Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und ZellkulturenGmbH,Germany，保藏號如下日本麴黴菌NR7328(DSM10677)，煙麴黴菌NR7329(DSM10678)，煙麴黴菌NR7330(DSM10679)，煙麴黴菌NR7331(DSM10680)，煙麴黴菌NR7332(DSM10681)和煙麴黴菌NR7334(DSM10682)。
日本麴黴菌NR7328和煙麴黴菌NR7329、NR7330、NR7331、NR7332和NR7334的培養基和形態特性如下菌株NR7328的培養基特性在蔡氏培養基-酵母抽提掖瓊脂(CYA)上，菌落生長迅速並在25℃7天後布滿佩特裡細菌培養皿，在濃絮狀菌絲質的中心顯示了茂盛的分生孢子的生長。菌落的顏色為深棕色至棕黑色(Munsell,7.5YR2/2-7.5YR2/2)。菌絲體為白色的，背面為淡黃色(Munsell,2.5YR8/6)。不產生滲出液和可溶性染料。
25℃下，菌落在麥芽糖提取液瓊脂(MEA)上比在CYA上生長慢，在25℃下7天後達到48-50mm的直徑，形成一個平整的、濃密的、沉重的孢子菌落。菌落的顏色為暗黃棕色(Munsell,10YR3/2)。菌絲體是白色的但是不明顯，背面為淡黃色(Munsell,5YR8/4)。沒有觀察到滲出液和可溶性染料。
在25℃下含有20％蔗糖的蔡氏培養基-酵母抽提液瓊脂(CY20S)上，菌落生長得與在25℃的CYA上一樣迅速，菌落的顏色也是棕黑色，菌絲體是白色絮狀的，背面為黃白色。
菌落在37℃的CYA上生長適中，7天後達到17-18mm的直徑，顯示了凸凹不平的菌落，分生孢子的生長差。菌落的顏色為暗灰黃色(Munsell,5Y5/2)。背景為深黃棕色(Munsell,5Y5/2)。
在5℃的CYA上沒有觀察到發芽。菌株NR7328的形態特徵分生孢子頭先是呈輻射狀，然後分裂成幾個縱向的柱，柱槽(strigmata)是單列的、緊密排列的瓶梗，幾乎布滿小泡的整個表面。小泡為球形或幾乎是球形的，直徑為35-55(-75)μm，壁很厚，稍帶棕色。條紋為寬的、光滑的壁7.5-20x250-700(-1000)μm。分生孢子為球形至近似球形，偶爾為橢球形，著色為黑色，直徑3.5-5.0μm。分生孢子的表面帶有相互間隔很寬的刺。
菌株NR7328以某種黑色色調著色為黑色的、濃密的、分生孢子生長茂盛的菌落。小泡為球形或幾乎是球形的。柱槽是單列的。分生孢子為球形至橢園形，帶刺，黑色。在這些明顯的特徵的基礎上，本發明的菌株NR7328被鑑定為一種日本麴黴菌菌株，命名為日本麴黴菌NR7328(DSM10677)。菌株NR7329,NR7330,NR7331,NR7332和NR7334的培養基特徵在CYA上，這些菌株的菌落生長迅速，在25℃下7天後達到53-61mm的直徑，除NR7334慢於其它菌株、達到44-45mm外。所有的菌落表現為平整的輪式質地，其中分生孢子生長茂盛。菌落的顏色為暗蘭綠色(Munsell,7.5BG4/4)或深蘭綠色至柔和蘭綠色(Munsell,5BG4/2-7/4)。菌絲體只有在邊緣才是白色的，有時還不明顯。NR7329的對比色為菌落黃(Munsell,5Y7/6)，而其它菌株的對比色為拿蒲黃(Munsell,2.5Y8/6)至柔和黃綠色(Munsell,2.5GY7/2)。不產生滲出液和可溶性染料。
在MEA上，菌落生長迅速，在25℃下7天後達到523-63mm的直徑，為平整濃密的偶爾為氈狀的菌落，與在25℃下的CYA上的菌落相比，質地疏鬆。菌落的顏色為暗綠色至灰綠色(Munsell,5G5/4-7/2)。菌絲體不明顯。對比色為無色或暗黃綠色(Munsell,7.5GY6/4)。沒有觀察到滲出液和可溶性染料。
在25℃下的CY20S上，這些菌落生長迅速，在7天後達到50-56mm的直徑，表現為濃密的輪式或氈狀的菌落。菌落的顏色和質地與在25℃下的CYA上的相同。菌絲體只有在邊緣才是白色的或淡黃綠色(Munsell,10Y9/4)的。菌落的對比色為奶黃色至中等黃綠色(Munsell,10Y7/6)。只有菌株FE6425才微弱地產生紅棕色的可溶性染料。
在37℃下的CYA上，菌落生長迅速並布滿佩特裡細菌培養皿，表現為平整的粉狀的菌落。菌落的顏色為灰黃色至串紅綠(Munsell,7.5GY6/2-5GY6/2)。分生孢子生長過多，菌絲體不明顯或只有在邊緣才可看到。菌落的背景為溝狀的，為米色至淡紅黃色(Munsell,2.5Y6/6-7/6)。某些菌落產生澄清的滲出液。
在5℃下的CYA上，所有的菌落都沒有觀察到發芽。菌株NR7329,NR7330,NR7331,NR7332和NR7334的形態特徵分生孢子頭為柱狀的，柱槽是單列的、緊密排列的瓶梗，相互平行並與條紋軸平行。瓶梗覆蓋了小泡的一半至2/3部分。小泡為抹刀形或漏鬥形，厚壁，寬度為13-30μm。條紋為無色的、邊緣光滑的、漸漸擴大進入小泡，最高達到400μm長，偶爾達到500μm長。分生孢子為球形或近似球形至橢球形，直徑為2.5-4.0μm。表面為從光滑的到粗糙的各種形狀，有時是帶刺的。
菌落在25℃和37℃下都生長迅速，顏色為某種暗綠色，分生孢子生長濃密茂盛。分生孢子頭為柱狀的。小泡為抹刀形，在其一半至2/3部分上覆蓋著茂盛的、緊密排列的而且相互平行並與條紋軸平行的瓶梗。柱槽是單列的。分生孢子很小，為球形至橢球形。在這些明顯的特徵的基礎上，本發明的菌株NR7329,NR7330,NR7331,NR7332和NR7334被鑑定為一種煙麴黴菌菌株，命名為煙麴黴菌NR7329(DSM10678),NR7330(DSM10679),NR7331(DSM10680),NR7332(DSM10681)和NR7334(DSM10682)。
本發明的化合物A和B可以通過在有氧的條件下，在培養基中培養能生產化合物A和/或B的麴黴菌屬微生物並從培養基中分離出化合物A和B而製得。
本發明的培養可以在含有培養微生物時使用的常規營養物的培養基中進行。可以提出的碳源的例子是葡萄糖、蔗糖、澱粉、甘油、糖漿、糊精及其混合物。氮源例如大豆粉、棉籽粉、肉漿、腖、乾酵母、酵母提取液、玉米浸取液、硫酸銨、硝酸鈉及其混合物。此外，還可以向培養基中加入其它的有機或無機物質以促進微生物的生長和提高真菌靜止素的生產率。這種物質的例子為無機鹽，例如碳酸鈣、氯化鈉、磷酸鹽等。
培養在有氧的條件下、在水溶性培養基中、優選通過浸沒式發酵進行。培養適於在20-37℃的溫度下進行，最佳溫度為27℃。培養優選在3-9的pH值下進行。培養時間依培養條件而定。總之，20-200小時足以進行培養。
為了從培養基中分離出化合物A和B，可以使用常規用於從微生物的培養基中分離代謝物的任何分離方法。例如，菌絲體可以通過離心或過濾從發酵液中分離出來，目標化合物可以用一種不與水相混的有機溶劑(例如烷醇如正丁醇，及其酯如乙酸乙酯、乙酸丁酯等)從濾液中萃取出來。另一方面，分離出的菌絲體中所包含的目標化合物可以通過例如用一種溶劑(如丙酮水溶液或甲醇水溶液)萃取菌絲體，除去溶劑，再用一種不與水相混的有機溶劑萃取殘留物而製得。這樣得到的有機層通過一種乾燥劑(例如硫酸鈉等)乾燥，然後減壓濃縮。所得的化合物A和B粗產物可以用分配法、柱色譜法(使用矽膠、氧化鋁、十八烷基-矽膠、Sephadex LH-20等作吸附劑)和高壓液相色譜(使用矽膠、十八烷基-矽膠和苯基矽膠等作吸附劑)純化。
可以以游離形式分離出化合物A和B，但是如果需要的話，用常規方法把它們可以轉變為生理上可使用的鹽(鈉鹽、銨鹽等)。
按照下面描述的方法A-F，可以把化合物A和B轉變為化合物A-1至A-10和B-1至B-6。方法A其中R1為低級烷基，R2為氫，X和Y為CO，而Z為O；或R1為氫，R2為低級烷基，X和Y為CO，而Z為O；或R1和R2都為低級烷基，X和Y為CO，而Z為O的式(Ⅰ)的化合物可以通過在一種鹼(例如碳酸鉀或氧化銀)的存在下在一種惰性溶劑(例如丙酮或N,N-二甲基甲醯胺)中，用烷基滷化物或烷基硫酸鹽使化合物A或B發生烷基化而製得。反應溫度可以在大約-50℃-150℃的很寬的溫度範圍、優選在大約0℃-100℃的溫度範圍內變化。甲基化也可以通過在一種溶劑(例如氯仿或甲醇)中，用重氮甲烷處理化合物A或B來進行。反應溫度可以在大約-0℃-80℃的很寬的溫度範圍、優選在大約10℃-30℃的溫度範圍內變化。方法B其中R1為醯基，R2為氫，X和Y為CO，而Z為O；或R1為氫，R2為醯基，X和Y為CO，而Z為O；或R1和R2都為醯基，X和Y為CO，而Z為O的式(Ⅰ)的化合物可以通過在一種偶聯劑(例如碳醯二亞醯胺)的存在下在一種惰性溶劑(例如乙腈或二噁烷)中，用一種羧酸使化合物A或B發生醯化而製得。反應溫度可以在大約-50℃-100℃的很寬的溫度範圍、優選在大約-20℃-50℃的溫度範圍內變化。也可以用所說的羧酸的一種活性衍生物(例如一種酸氯化物或與另一種羧酸(如苯磺酸)的混合酸酐)來完成醯基化反應。醯基化可選擇性地在一種鹼(例如碳酸氫鈉、吡啶、三乙胺或N,N-二甲基氨基吡啶的存在下，在一種惰性溶劑(例如二氯甲烷、氯仿、乙腈或N，N-二甲基甲醯胺)中進行。方法C其中R1為低級烷基，R2為醯基，X和Y為CO，而Z為O；或R1為醯基，R2為低級烷基，X和Y為CO，而Z為O的式(Ⅰ)的化合物可以通過在一種偶聯劑(例如碳醯二亞醯胺)的存在下在一種惰性溶劑(例如乙腈或二噁烷)中，用一種羧酸使其中R1為低級烷基，R2為氫，X和Y為CO，而Z為O；或R1為氫，R2為低級烷基，X和Y為CO，而Z為O的式(Ⅰ)的化合物發生醯化而製得。反應溫度可以在大約-50℃-100℃的很寬的溫度範圍、優選在大約-20℃-50℃的溫度範圍內變化。也可以用所說的羧酸的一種活性衍生物(例如一種酸氯化物或與另一種羧酸(如苯磺酸)的混合酸酐)來完成醯基化反應。醯基化可選擇性地在一種鹼(例如碳酸氫鈉、吡啶、三乙胺或N,N-二甲基氨基吡啶的存在下，在一種惰性溶劑(例如二氯甲烷、氯仿、乙腈或N,N-二甲基甲醯胺)中進行。或者可以通過在一種鹼(例如碳酸鉀或氧化銀)的存在下在一種惰性溶劑(例如丙酮或N,N-二甲基甲醯胺)中，用烷基滷化物或烷基硫酸鹽使其中R1為醯基，R2為氫，X和Y為CO，而Z為O；或R1為氫，R2為醯基，X和Y為CO，而Z為O的式(Ⅰ)的化合物(按照上述的方法B製得的)發生烷基化而製得。反應溫度可以在大約-50℃-100℃的很寬的溫度範圍、優選在大約-20℃-50℃的溫度範圍內變化。甲基化也可以通過在一種溶劑(例如氯仿或甲醇)中，用重氮甲烷處理化合物A或B來進行。反應溫度可以在大約-0℃-80℃的很寬的溫度範圍、優選在大約10℃-30℃的溫度範圍內變化。方法D其中X為CHOH,R1和R2各為氫、低級烷基或醯基，Y為CO，而Z為O的式(Ⅰ)的化合物可以通過在一種合適的有機溶劑(例如乙醇或乙酸)中，加壓或不加壓下，用一種催化劑(如鈀/炭或鉑)氫化還原；或者通過在一種合適的有機溶劑(例如乙醇)中，用硼氫化鈉處理化合物A或B或按照上述的方法A,B或C中所說的方法製備的化合物來生產。反應溫度可以在大約-80℃-50℃的很寬的溫度範圍、優選在大約0℃-30℃的溫度範圍內變化。方法E其中Y為CH2,R1和R2各為氫、低級烷基或醯基，X為CO或CHOH，而Z為O的式(Ⅰ)的化合物可以通過在一種合適的有機溶劑(例如乙醇)中，用硼氫化鈉還原處理化合物A或B或按照上述的方法A,B,C或D中所說的方法製備的化合物來生產。反應溫度可以在大約-80℃-50℃的很寬的溫度範圍、優選在大約0℃-30℃的溫度範圍內變化。方法F其中Z為NH,R1和R2各為氫、低級烷基或醯基，X為CO或CHOH,Y為CO或CH2的式(Ⅰ)的化合物可以通過在一種合適的有機溶劑(例如N,N-二甲基聚醯胺)中，在大約-40℃-80℃、優選在大約0℃-30℃的溫度下用氨處理化合物A或B或按照上述的方法A,B,C,D或E中所說的方法製備的化合物，然後在一種合適的溶劑(例如甲苯和苯)中，在弱酸(例如對甲苯磺酸吡啶鎓鹽)的存在下，在大約40-200℃、優選大約80-150℃的溫度下加熱來生產。式Ⅰ的化合物對幾種變形的細胞線的抗增生活性結腸-直腸瘤細胞線(HT-29和SW480)、肺癌細胞線(H460a)、骨瘤細胞線(Saos-2)和胰腺細胞線(ASPC-1)從ATCC(Americantype Cell Culture Collection)購得並在ATCC推薦的培養基中培養生長。也試驗了化合物抗乳腺癌細胞線(T-47D和MCF-7)、結腸-直腸瘤細胞線(COLO-320DM和HCT116)和肺癌細胞線(H1299)的增生的活性。為了分析各種化合物對這些細胞的生長的影響，以能在試驗的最後得到最少四對結果的濃度，把細胞放置在測定板上。把待分析的化合物溶解於100％的DMSO中，得到10mM的原種溶液。用水把每種化合物稀釋到1mM，並加到含有培養基的96-孔標準板的第一排的三個孔中，達到40μM的最終濃度。化合物依次用「標準板」中的培養基稀釋，然後把稀釋的化合物轉移到含有細胞的試驗板上，每個孔中DMSO的最終濃度為0.1％DMSO。在加入化合物後的不同時間分析MTT。把MTT(溴化-3-(4-5甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓，噻唑基蘭)加入每個孔中，達到1mg/ml的最終濃度。然後在37℃下溫育該板2.5-3小時。然後除去含培養基的MTT，向每個孔中加入50μl100％的乙醇以溶解偕苯肼基代甲基。然後用自動讀數計(生物技術微板測量計)讀取吸收值。對於Saos-2細胞，把細胞置於板的6個孔中，排板24小時後，以不同濃度加入化合物，然後在加藥後的不同天數時數細胞的個數，結果列於表1中。
表1IC50(μM)化合物A 化合物B細胞線乳腺T-47D 5.8MCF-7 1.5結腸-直腸HT29 5.8 4.8COLO-320DM 2.6SW480 3～10HCT116 1.3肺H1299 3～4H460A 2.3 2.2骨癌SAOS-2 0.3～1胰腺ASPC-1 6.2如上表1中所示，化合物A和B對變形的細胞線的增生具有抑制活性。因此，本發明所提供的式Ⅰ的化合物可用作乳腺癌、結腸-直腸癌、肺癌、骨癌等的抗癌藥物，以適當方式向哺乳動物(包括人類和非人類)給藥。
沒有觀察到本發明所提供的式Ⅰ的化合物的急性毒性。
本發明的產品可用作藥物，例如以藥物製劑的形式用於腸道(口服)給藥。本發明的產品例如可以經口服給藥(如以片劑、包衣的片劑、糖錠劑、硬膠囊或軟膠囊、溶液、乳液或懸浮液形式給藥)或經直腸給藥(例如以栓劑給藥)。
用於治療時，式Ⅰ的化合物及其生理上可使用的鹽可以製成各種藥物組合物。可以用本領域中熟悉的常規方法來製備含有這些化合物的藥物組合物，例如將這些組分與合適的、無毒的、惰性的適用於治療的固體或液體載體材料以及(如果需要的話)常用的藥用佐劑混合來製成一種藥劑。
考慮到這些化合物最終要具體化為適於口服或非腸道給藥的製劑形式，本發明的這些化合物可以含有在藥物製劑的生產中經常使用的、作為選擇性成分的各種佐劑。因此，例如在把本發明的組合物配製成所要的口服製劑時，可以使用選擇性的成分、填料，例如共沉澱的氫氧化鋁-碳酸鈣、磷酸二鈣或乳糖；崩解劑如玉米澱粉；和潤滑劑如滑石、硬脂酸鈣等。然而，應當充分理解，這裡所說的選擇性成分僅僅給出例子，本發明並不限於使用這些，在完成本發明時可以使用本領域所熟知的其它這樣的佐劑。
合適的這種載體材料不僅是無機的，而且還可以是有機的載體材料。因此，對於片劑、包衣的片劑、糖錠劑和硬膠囊，可以使用例如乳糖、玉米澱粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽。用於軟膠囊的合適的載體例如為植物油、蠟、脂肪和半固體多元醇和液體多元醇(依活性物質的性質而定，然而對於軟膠囊不需要載體)。用於配製溶液和糖漿的合適的載體材料例如為水、多元醇、糖、轉化糖和葡萄糖。用於栓劑的合適的載體材料例如為天然的或硬化的油、蠟、脂肪和半固體多元醇或液體多元醇。
作為藥物佐劑可考慮常用的防腐劑、增溶劑、穩定劑、加溼劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、香味劑、用於改變滲透壓的鹽、緩衝液、包衣劑和抗氧化劑。
式Ⅰ的化合物及其鹽可優選用於非腸道給藥，用於這種目的時優選製成如冷凍乾燥物或乾燥的粉末的製劑以便於用常規的試劑(例如水或常用的等滲的鹽水)稀釋。
例如，化合物A可以方便地用生理鹽水通過靜脈、皮下或肌肉內注射給藥，通常劑量為1-50mg/kg/天、優選1-20mg/kg/天；或者以膠囊或糖包衣的片劑給藥，通常劑量為1-100mg/kg/天、優選5-50mg/kg/天。
下面的實施例更詳細地描述了本發明，但其目的不在於限定本發明。除非特別指明，％是指重量/體積％。
實施例1燒瓶培養把一部分煙麴黴菌NR7329(DSM10678)的原種培養物(0.1ml)接種到一個含有100ml由0.05％Mg3(PO4)2·8H2O、0.8％KCl、5.0％蔗糖、1.0％玉米浸取液、2.0％烤大豆(Nisshin Seiyu Co.Ltd.,Japan)和0.03％Nissan消泡劑CA-123(Nippon Yushi Co.Ltd.,Japan)組成的培養基的500ml錐形瓶中。把培養基的pH調節到6.5。菌種培養物於27℃下在2270rpm的旋轉搖床上溫育3天，然後以每份2ml的量把菌種培養物轉移到100隻各含有100ml上述同樣的培養基的500ml燒瓶中。在與菌種培養物同樣的條件下，在旋轉搖床上進行發酵。大約96小時後，化合物的產量達到最大值。然後把所有的培養液按照下述的方法分離。罐發酵把一部分煙麴黴菌NR7329(DSM10678)的商品培養物(0.1ml)接種到一個含有100ml上述同樣的培養基的500ml錐形瓶中。第一個菌種培養物於27℃下在220rpm的旋轉搖床上溫育。然後以每份2ml的量把菌種培養物轉移到24隻各含有100ml上述同樣的培養基的500ml燒瓶中，在同樣的條件下發酵3天。把所得的培養物各600ml接種到四個每個含有30L同樣的培養基及500ml Nissan消泡劑CA-123的50L發酵罐中。罐發酵在27℃下以400rpm的轉速攪拌和30L/分鐘的空氣流速進行。大約經過91小時的發酵後，化合物的產量達到最大值。然後把所有的培養液按照下述的方法分離。分離方法-Ⅰ通過離心把上述燒瓶發酵中得到的培養液(10L)分成上清液和菌絲體餅。上清液(6.4L)用乙酸乙酯(6.4L)萃取，在減壓下把有機層濃縮至幹。把濃縮物(6.9g)溶解於甲醇(1L)中，與正己烷(2L)進行分配，然後除去正己烷層，再在減壓下把甲醇層濃縮至幹(粗提取物Ⅰ:5.2g)。在另一邊，用甲醇(4.5L)萃取菌絲體餅，過濾混合物，得到一個甲醇提取液，在減壓下濃縮這樣得到的甲醇提取液，濃縮液(1.5L)用正己烷(1.5L)洗滌。在減壓下把下層濃縮至幹。殘留物溶於水(1.5L)中，得到的懸浮液用乙酸乙酯(1.5L)萃取，然後在減壓下把乙酸乙酯層濃縮至幹(粗提取物Ⅱ:4.0g)。合併粗提取物Ⅰ和Ⅱ，在YMC-GEL ODS-A60-60/30(50g,YMC Co.LTD.,Japan)色譜柱上純化，色譜柱用水和甲醇的混合物洗脫。合併含有活性化合物的洗脫物，並在減壓下把濃縮至幹。殘留物(7.1g)然後在SephadexLH-20(4L,Pharmacia,Sweden)色譜柱上純化，用甲醇作洗脫劑。合併含有活性化合物的洗脫物，得到兩個餾分(餾分1:1.98g，餾分2:63mg)。餾分1通過製備性的HPLC(CAPCELLPAK C18 UG-120A；Shiseido,Japan)純化，用30％乙腈水溶液作洗脫劑。在減壓下分別把含有化合物A和B的餾分濃縮至幹。含有化合物A的殘留物(275mg)再通過製備性的HPLC(YMC-Pack PhA-414；YMC Co.LTD.,Japan)純化，用30％乙腈水溶液作洗脫劑。在減壓下把含有化合物A的餾分濃縮至幹，然後用甲醇結晶，得到化合物A的白色結晶(132mg)。用同樣的方式處理含有化合物B的殘留物(115mg)，得到化合物B的白色結晶(74mg)。分離方法-Ⅱ通過離心把上述罐發酵中得到的培養液(120L)分成上清液和菌絲體餅。上清液(100L)用乙酸乙酯(72L)萃取，在減壓下把有機層濃縮至幹。把濃縮物(160g)溶解於甲醇(3L)中，與正己烷(5L)進行分配，然後除去正己烷層，再在減壓下把甲醇層濃縮至幹(粗提取物Ⅰ:70g)。在另一邊，用甲醇(36L)萃取菌絲體餅，過濾混合物，得到一個甲醇提取液，在減壓下濃縮這樣得到的甲醇提取液，濃縮液(3L)用正己烷(3L)洗滌。在減壓下把下層濃縮至幹。殘留物溶於水(2L)中，得到的懸浮液用乙酸乙酯(2L)萃取，然後在減壓下把乙酸乙酯層濃縮至幹(粗提取物Ⅱ:230g)。合併粗提取物Ⅰ和Ⅱ，在矽膠(300g,Wakogel；Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd.,Japan)色譜柱上純化，色譜柱用二氯甲烷和甲醇的混合物洗脫。在減壓下把含有活性化合物的洗脫物，濃縮至幹。殘留物(77g)然後在Sephadex LH-20(44L)色譜柱上純化，用甲醇作洗脫劑。合併含有活性化合物的洗脫物，得到3個餾(餾分1,2,3)。含有化合物A和B的餾分1通過珞巴(樹脂)柱(LiChroprep Si60 size C；Merck,Germany)純化，用二氯甲烷和甲醇作洗脫劑。在減壓下把含有化合物A的餾分濃縮至幹，然後用甲醇結晶，得到化合物A的白色結晶(2.39g)。用同樣的方式處理含有化合物B的餾分，得到化合物B的白色結晶(0.72g)。
實施例2用與實施例1中同樣的方式培養煙麴黴菌NR7334(DSM10682)和日本麴黴菌NR7328(DSM10677)。
化合物A和B各自的產率如表2所示。
表2菌株序號化合物A化合物BNR7328 1mg/L -NR7334 45mg/L 20mg/L
實施例3燒瓶培養把一部分煙麴黴菌NR7330(DSM10679)的原種培養物(0.1ml)接種到一個含有100ml由2％葡萄糖、1％土豆澱粉、1.5％甘油、1％烤大豆、0.25％多肽腖、0.35％酵母提取液、0.3％NaCl、0.5％CaCO3、0.005％ZnSO4·7H2O、0.0005％CuSO4·5H2O、0.0005％MnSO4·4H2O和0.03％Nissan消泡劑CA-123組成的培養基的500ml燒瓶中。培養基的pH不進行調節。菌種和培養物的生產方法和條件與實施例的燒瓶培養相同。經過大約96小時的發酵後，分離所有的培養液。按照與上述同樣的方式培養煙麴黴菌NR7331(DSM 10680)和煙麴黴菌NR7332(DSM10681)。化合物A和B各自的產率如表2所示。
表3菌株序號化合物A化合物BNR7330 14mg/L 11mg/LNR7331 2mg/L 4mg/LNR7332 4mg/L 7mg/L實施例4化合物A-1和B-1的製備在室溫下攪拌21mg化合物A在1.4ml吡啶/乙酸酐(1∶1,v/v)中的溶液1小時，混合物在減壓下乾燥，得到26mg化合物A-1的白色粉末。
在室溫下攪拌21mg化合物B在1.4ml吡啶/乙酸酐(1∶1,v/v)中的溶液1小時，混合物在減壓下乾燥，得到26mg化合物B-1的白色粉末。
實施例5化合物A-1和B-1的製備在室溫下，向4mg化合物A在3ml甲醇中的溶液中加入過量的重氮甲烷的乙醚溶液，放置8小時，在真空下蒸餾溶液，殘留物通過製備性的TCL(Kieselgel 60 F254,Art.5715；Merck,Germany)純化，得到4mg化合物A-4的白色粉末。
按照同樣的方式處理6mg化合物B在3ml甲醇中的溶液，得到5mg化合物B-4的白色粉末。
實施例6化合物A-7的製備在室溫下，向5mg化合物A-4在0.2ml二甲基亞碸中的溶液中加入0.2ml的乙酸酐，混合物攪拌17小時，減壓蒸餾，殘留物通過製備性的HPLC純化，得到0.5mg化合物A-7的白色粉末。
實施例7化合物A-8的製備向50mg化合物A在10ml乙醇中的溶液中加入15mg鈀/活性炭，混合物在室溫下在氫氣氣氛下攪拌15小時，除去催化劑後，減壓蒸餾溶液。殘留物通過HPLC(CAPCELL Pak C18 SG120A)純化，用磷酸緩衝液和乙腈的混合物作洗脫劑，得到5mg化合物A-8的白色粉末。
實施例8化合物A-9的製備在0℃和氬氣氣氛下，向20mg化合物A在4ml甲醇中的溶液中加入2.6mg硼氫化鈉。攪拌4小時後，減壓蒸餾溶液，把4ml乙酸乙酯和4ml蒸餾水加入殘留物中。搖動溶液，減壓蒸餾有機層，殘留物通過HPLC(CAPCELL PakC18 SG120A)純化，用磷酸緩衝液和乙腈的混合物作洗脫劑，得到15mg化合物A-8和2mg化合物A-9的白色粉末。
實施例9化合物A-5,A-6,B-5和B-6的製備向3mg化合物A-4在0.2ml吡啶中的溶液中加入4.5mg的(-)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙醯氯，混合物攪拌5小時。減壓下除去吡啶後，殘留物通過製備性的TCL(Kieselgel 60F254,Art.5715)純化，得到3mg化合物A-5的白色粉末。
向3mg化合物A-4在0.2ml吡啶中的溶液中加入4.5mg的(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙醯氯，混合物攪拌5小時。減壓下除去吡啶後，殘留物通過製備性的TCL(Kieselgel 60 F254,Art.5715)純化，得到3mg化合物A-6的白色粉末。
向2mg化合物B-4在0.2ml吡啶中的溶液中加入4.5mg的(-)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙醯氯，混合物攪拌5小時。減壓下除去吡啶後，殘留物通過製備性的TCL(Kieselgel 60 F254,Art.5715)純化，得到2mg化合物B-5的白色粉末。
向2mg化合物B-4在0.2ml吡啶中的溶液中加入4.5mg的(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙醯氯，混合物攪拌5小時。減壓下除去吡啶後，殘留物通過製備性的TCL(Kieselgel 60 F254,Art.5715)純化，得到2mg化合物B-6的白色粉末。
實施例10化合物A-3和B-3的製備向5mg化合物A在0.8ml吡啶中的溶液中加入4mg的對溴苯甲醯氯，混合物攪拌1小時。減壓下除去吡啶後，殘留物通過製備性的TCL(Kieselgel 60F254,Art.5715)純化，得到2mg化合物A-2和0.5mg化合物A-3的白色粉末。
按照同樣的方式處理5mg化合物B在0.8ml吡啶中的溶液，得到1mg化合物B-2和2mg化合物B-3的白色粉末。
實施例11化合物A-2和B-2的製備向200mg化合物A在20ml乙腈中的溶液中加入164mg的對溴苯甲醯氯和120mg的碳酸鉀，混合物在室溫下攪拌30分鐘。反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用蒸餾水洗滌。有機層通過無水硫酸鎂乾燥，在減壓下蒸餾。殘留物通過矽膠色譜(Wakogel C-200)純化，用乙酸乙酯和正己烷的混合物作洗脫劑，得到100mg化合物A-2的白色粉末。
按照同樣的方式處理200mg化合物B在20ml乙腈中的溶液，得到200mg化合物B-2的白色粉末。
實施例12化合物A10的製備在氬氣氣氛下，向72.9mg化合物A在0.25ml無水DMF中的溶液中加入0.5ml新鮮製備的NH3的DMF溶液。30分鐘後，減壓下除去揮發物。向固體殘留物中加入22ml甲苯和10mg對甲苯磺酸吡啶鎓鹽。混合物總計回流125分鐘，然後冷卻，減壓下除去揮發物。產物通過矽膠色譜純化，用己烷-乙酸乙酯(1∶1)作洗脫劑，得到45.9mg化合物A-10的白色粉末。
下列實施例說明包含本發明所提供的化合物A的抗腫瘤藥物實施例包含下列成分的片劑是按照常規方法生產的化合物A 100mg澱粉 26mg羧甲基纖維素鈣 15mg結晶纖維素 20mg硬脂酸鈣 4mg165mg
權利要求
1．一種式(Ⅰ)的化合物及其差向異構體和對映體或其生理上可使用的鹽，
其中R1和R2獨立地為氫、未取代的低級烷基、被低級烷氧基或低級烷硫基取代的低級烷基、或者未取代或被一個或多個低級烷基、滷素取代的低級烷基或低級烷氧基取代的醯基；X為CO或CHOH；Y為CO或CH2；而z為O或NH。
2．權利要求1的化合物，其中X為CO。
3．權利要求2的化合物，其中Y為CO。
4．權利要求3的化合物，其中R1和R2都為氫。
5．權利要求4的化合物，其中Z為O，該化合物的比旋光度為[α]23D=+272°(C=0.56，在甲醇中)。
6．權利要求4的化合物，其中z為O，該化合物的比旋光度為[α]23D=8°(c=0.52，在甲醇中)。
7．權利要求2的化合物，其中R1為醯基。
8．權利要求7的化合物，其中R1為乙醯基。
9．權利要求8的化合物，其中R2為醯基。
10．權利要求9的化合物，其中R1為乙醯基。
11．權利要求10的化合物及其差向異構體，其中z為O。
12.權利要求7的化合物，其中R1為對溴苯甲醯基。
13．權利要求12的化合物，其中R2為氫。
14．權利要求13的化合物及其差向異構體，其中z為O。
15．權利要求7的化合物，其中R1為(-)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯乙醯基。
16．權利要求15的化合物，其中R2為低級烷基。
17．權利要求16的化合物，其中R2為甲基。
18．權利要求17的化合物及其差向異構體，其中Z為O。
19．權利要求7的化合物，其中R1為(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯乙醯基。
20．權利要求19的化合物，其中R2為低級烷基。
21．權利要求20的化合物，其中R2為甲基。
22．權利要求21的化合物及其差向異構體，其中Z為O。
23．權利要求2的化合物，其中R1為取代的低級烷基。
24．權利要求23的化合物，其中R1為甲硫基甲基。
25．權利要求24的化合物，其中R2為低級烷基。
26．權利要求25的化合物，其中R2為甲基。
27．權利要求2的化合物，其中R1為氫。
28．權利要求27的化合物，其中R2為醯基。
29．權利要求28的化合物，其中R1為對溴苯甲醯基。
30．權利要求29的化合物及其差向異構體，其中Z為O。
31．權利要求27的化合物，其中R2為低級烷基。
32．權利要求31的化合物，其中R2為甲基。
33．權利要求32的化合物及其差向異構體，其中Z為O。
34．權利要求4的化合物，其中Z為NH。
35．一種藥物組合物，含有治療有效量的下式Ⅰ的一種化合物，
其中R1和R2獨立地為氫、未取代的低級烷基、或被低級烷氧基或低級烷硫基取代的低級烷基、或者未取代或被一個或多個低級烷基、滷素取代的低級烷基或低級烷氧基取代的醯基；X為CO或CHOH；Y為CO或CH2；而Z為O或NH，及其差向異構體和對映體，或其生理上可使用的鹽，和一種藥學上可接受的載體。
36．一種治療在需要治療的宿主中的腫瘤的方法，包括給該宿主施用治療有效量的下式Ⅰ的化合物，
其中R1和R2獨立地為氫、未取代的低級烷基、或被低級烷氧基或低級烷硫基取代的低級烷基、或者未取代或被一個或多個低級烷基、滷素取代的低級烷基或低級烷氧基取代的醯基；X為CO或CHOH；Y為CO或CH2；而Z為O或NH，及其差向異構體和對映體，或其生理上可使用的鹽，和一種藥學上可接受的載體。
37．一種生物學純的日本麴黴菌NR7328(DSM 10677)培養物。
38．一種生物學純的煙麴黴菌NR7329(DSM 10678)培養物。
39．一種生物學純的煙麴黴菌NR7330(DSM 10679)培養物。
40．一種生物學純的煙麴黴菌NR7331(DSM 10680)培養物。
41．一種生物學純的煙麴黴菌NR7332(DSM 10681)培養物。
42．一種生物學純的煙麴黴菌NR7334(DSM 10682)培養物。
全文摘要
可用作抗腫瘤藥劑的式(Ⅰ)的化合物及其差向異構體和對映體或其生理上可使用的鹽,其中R
文檔編號A61K31/335GK1221409SQ97195242
公開日1999年6月30日 申請日期1997年5月30日 優先權日1996年6月7日
發明者厄瓦什·H·德欣格拉, 白井治義, 竹花幸, 彼得·M·伍庫裡赫, 矢吹波 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司