大黃總蒽醌的提取純化方法及其在製備治療腎衰藥品中的應用的製作方法

2023-05-02 11:49:31

專利名稱：大黃總蒽醌的提取純化方法及其在製備治療腎衰藥品中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種大黃總蒽醌的提取方法及其在製備治療腎衰藥品中的應用。
背景技術：
慢性腎衰是世界性難題，僅我國就有數百萬患者，嚴重影響人民的健康和生活質量的提高。目前臨床上控制飲食，病人無法長期堅持，口服血管緊張素轉換酶抑制劑療效不確切，因此很多病人願意接受血透和腎移植，但也因需特殊設備，供腎來源不足及費用高，只有少數能夠採取這種治療。
大黃是一種常用中藥，其對防治慢性腎病發展為尿毒症有較明顯的作用。經申請人經研究，其中的有效物質主要是總蒽醌，但目前申請人尚未見到直接採用總蒽醌治療慢性腎衰的報導。
目前，現有技術從大黃中分離大黃總蒽醌普遍採用的是用有機試劑氯仿、乙醚等萃取的方法，對環境有較大的威脅，產率低、危險性大且價格昂貴。

發明內容
本發明首先要解決的技術問題就是現有提取大黃總蒽醌的技術有環境汙染的問題，其次要解決的是現有常規治療手段和藥物治療腎衰不理想的問題，為人們提供一種無汙染的大黃總蒽醌的提取方法，以及以大黃總蒽醌為主要成分的治療腎衰的藥物。
本發明所述的大黃總蒽醌的提取方法包括如下步驟(6)將大黃飲片和濃乙醇按1∶4-8的重量比混合，按回流法提取三次；(7)濾過提取液，回收乙醇，將濾液製成浸膏；(8)將浸膏加入大孔吸附樹脂柱，用重量為大黃飲片8-16倍的稀乙醇衝洗，棄去衝洗液，繼續用濃乙醇衝洗；(9)取洗脫液，回收乙醇至無醇味後將洗脫液調至酸性；(10)濾過洗脫液，將沉澱得到的固體物質乾燥即成。
上述工藝步驟中，回流提取時每次為1小時；在將浸膏加入大孔吸附樹脂柱時，最好將大孔吸咐樹脂與浸膏拌和後加入。
上述工藝步驟1中所述的濃乙醇的濃度為70％-90％，步驟3中所述的稀乙醇的是濃度為20％-40％，濃乙醇的濃度為75％-95％。
本發明提取大黃總蒽醌的工藝簡單、成本低廉、且無環境汙染問題，提取出的大黃總蒽醌對腎衰有明顯的療效。
以下是採用上述工藝步驟從大黃中提取的大黃總蒽醌主要藥效學實驗數據一、實驗材料1、藥品與試劑大黃總蒽醌，系棕黃色粉末，按上述工藝提取。實驗前用蒸餾水配成溶液。
TP，Randox，批號0092F。
ALB，北京中生生物工程高技術公司，批號000502。
URea，Randox，批號0104F。
Cr，Pointe，批號9360。
2、實驗動物實驗用SD♂大鼠由南京中醫藥大學實驗動物中心供給，合格證蘇動質97003。
3、實驗儀器Olympus AUT-560全自動生化分析儀，日本。
DF110型電子天平，江蘇省常熟市衡器工業社。
二、實驗條件給藥前後，實驗大鼠分籠飼養，餵飼全價顆粒(南京市江浦縣藥檢所實驗動物飼料加工廠提供)，自由飲水，室溫22±2℃。
三、實驗結果表1 大黃總蒽醌對腺嘌吟致大鼠CRF體重的影響(g)(X±S)用藥(W)組別造模前 用藥前1 2 3 4正常對照組 236.50 304.00 343.00353.00374.00377.00±15.88±25.18±31.00 ±31.71 ±32.38 ±32.72模型組 241.78 241.92 235.76227.91225.91226.50±19.51±26.20±26.15 ±23.31 ±25.65 ±31.46地塞米松組 238.21 244.28 233.92222.50222.50222.00±19.89±17.20±16.38 ±17.73 ±36.55 ±52.87腎復康組230.0 250.38 262.31*257.70**260.42**264.50**±10.74±13.65±18.14 ±21.36 ±20.35 ±14.04大黃總蒽237.14 247.08 255.91237.72245.45245.46醌I組 ±17.99±22.86±19.52 ±22.60 ±23.68 ±24.72大黃總蒽236.07 242.14 256.43232.27234.09236.36醌II組 ±18.63±26.57±35.52 ±35.50 ±36.48 ±38.02大黃總蒽247.14 258.93 259.58237.91249.54258.18*醌III組 ±20.32±26.40±26.33 ±36.54 ±29.19 ±30.98
與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
與正常對照相比，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
試驗結果表明70mg.kg-1劑量組在給藥4w後，體重明顯增加，與模型組比較，差異顯著(**P＜0.01)表2 大黃總蒽醌對腺嘌吟致大鼠CRF攝食量(g/100g)的影響(X±S)組別造模前用藥前用藥(w)1 2 34正常對照組 12.10 9.70 9.35 8.95 7.60 7.15±1.50±1.50 ±0.65 ±0.10 ±0.30 ±0.25模型組 11.20 7.20△6.27ΔΔ6.45ΔΔ6.67ΔΔ6.79ΔΔ±1.23±1.15 ±0.30 ±0.57 ±0.62 ±0.42地塞米松組 11.96 7.06 5.60Δ5.36**6.93 6.53±0.94±0.60 ±0.51 ±0.65 ±0.71 ±0.70腎復康組11.73 7.00 6.06 6.22 6.53 6.93±0.33±0.50 ±0.33 ±0.56 ±0.60 ±0.54大黃總蒽12.66 6.83 6.06 6.50 6.08 7.53醌I組 ±0.80±0.45 ±1.54 ±1.40 ±0.45 ±1.46太黃總蒽11.83 7.80 6.53 6.46 6.66 6.99醌II組 ±0.34±0.86 ±0.71 ±0.60 ±1.10 ±0.78大黃總蒽11.36 7.03 6.07 6.13 6.68 7.13醌III組 ±0.31±0.47 ±0.30 ±0.33 ±0.81 ±1.20與模型相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
與正常對照相比，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
造模後大鼠攝食量與正常對照組相比，即有明顯降低，用藥後個組大鼠食量無明顯增加，與模型組之間差異無顯著性。
表3 大黃總蒽醌對腺嘌吟致CRF大鼠腎臟係數的影響(X±S)組別 體重(g)腎重(g)腎係數(g/100g)正常對照組377.00±32.72 2.48±0.32 0.66±0.06模型組226.50±31.46 6.43±1.89 2.82±0.61ΔΔ地塞米松組222.0±52.87 5.02±0.73 2.34±0.43腎復康組 264.50±14.04 5.05±0.67 2.00±0.27**大黃總蒽醌I組 245.46±24.72 5.46±1.07 2.22±0.48*大黃總蒽醌II組236.36±38.02 5.22±0.71 2.17±0.33**大黃總蒽醌III組 258.18±30.98 5.80±1.01 2.26±0.43*與模型相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
與正常對照相比，ΔΔP＜0.01。
試驗結果表明，3個劑量組腎臟係數均明顯減低，與模型組比較，差異顯著(P＜0.05.P＜0.01)。
表4 大黃總蒽醌對腺嘌吟致大鼠CRF血清肌酐、尿素氮的影響(X±S)組別Scr(μmol/L) Bun(mmol/L)用藥15d 用藥15d用藥15d 用藥15d正常對照組39.60±8.74 45.87±12.26 10.28±1.89 10.00±1.03模型組205.37±39.76ΔΔ143.13±30.77ΔΔ52.60±8.63ΔΔ29.91±7.78地塞米松組155.69±27.53**105.71±15.77**47.67±12.23 21.81±2.36**腎復康組 145.51±36.14**88.82±21.59**31.49±10.97**16.88±3.40**大黃總蒽醌I組 200.67±55.75 130.07±26.51 43.03±11.25*25.00±3.62大黃總蒽醌II組165.86±22.51*113.41±30.26*39.52±9.77**21.86±5.22*大黃總蒽醌III組 159.93±31.32**104.40±33.21*35.04±7.17**23.48±4.97*與模型相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
與正常對照相比，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
表5 大黃總蒽醌對腺嘌吟致大鼠CRF血清總蛋白、白蛋白的影響(X±S)組別TP(g/L) ALB(g/L)用藥15d 用藥15d 用藥15d 用藥15d正常對照組 87.39±1.83 88.56±4.14 36.92±0.83 37.66±2.38模型組 74.51±8.83ΔΔ72.22±5.37ΔΔ31.80±1.27ΔΔ32.90±2.88ΔΔ地塞米松組 77.97±10.53 81.26±3.09**33.43±1.93*32.59±2.58腎復康組 68.98±4.61 75.02±2.52 34.09±1.56**33.23±1.58大黃總蒽醌I組 79.72±6.80 75.95±4.51 34.58±2.73**37.68±1.56**大黃總蒽醌II組 82.22±6.79*77.74±5.12*34.30±2.98*38.31±2.03**大黃總蒽醌III組81.67±5.80*78.53±7.49*32.80±1.27 35.01±2.74與模型相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
與正常對照相比，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
動物造模後，模型組與正常對照組相比，血清肌酐(Scr)，尿素氮(Bun)有明顯升高，與對照組比較差異顯著(P＜0.01)，而總蛋白(TP)和白蛋白(HLB)則表現為明顯的降低，與對照組比較，差異顯著(P＜0.01)。35.0mg.kg-1和70mg.kg-1劑量組連接給藥15d、30d後，血清肌酐和尿素氮明顯降低，與模型組比較，差異顯著(P＜0.05、P＜0.01)；血清總蛋白和白蛋白明顯升高，與模型組比較，差異顯著(P＜0.05、P＜0.01)。
表6大黃總蒽醌對腺嘌吟致大鼠CRF大鼠尿量、尿肌酐和蛋白的影響(X±S)組別 尿量(ml) 尿肌酐(μmol/L)尿蛋白(mg/L)用藥15d 用藥15d 用藥15d 用藥15d 用藥15d 用藥15d正常對照組 8.70 9.403979.70 3060.0 768.0886.40±2.36 ±2.41 ±1762.8 ±1016.94 ±367.39 ±400.07模型組 25.10ΔΔ24.60ΔΔ1156.90ΔΔ1129.30ΔΔ2129.90ΔΔ2028.80ΔΔ±4.96 ±6.02 ±145.81 ±538.37±729.02 ±444.60地塞米松組 23.25 21.37*1672.10 1639.10*901.0**1235.20**±6.21 ±4.27 ±781.65 ±283.85±307.09 ±453.39腎復康組 18.30**19.00*1836.40**1709.10*1267.78**1220.0**±5.23 ±3.92 ±378.34 ±361.30±331.42 ±610.81大黃總蒽 25.20 28.801615.80**1210.10 1460.6*1222.40**醌I組 ±7.70 ±10.93 ±180.36 ±266.17±449.04 ±309.11大黃總蒽 27.40 29.701778.50**1360.60 1490.90*1272.0**醌II組 ±3.16 ±10.22 ±88.70 ±780.01±305.94 ±376.06大黃總蒽 30.80 27.101858.10**1689.40*1290.0**1068.80**醌III組 ±9.04 ±6.50 ±369.68 ±371.15±417.11 ±284.94與模型相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
與正常對照相比，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
動物造模後尿量明顯增多，正常對照組比較，差異顯著(P＜0.01)。用藥後個劑量組尿量與模型組相比無明顯變化。腺嘌吟造模後，尿肌酐排洩量明顯具體實施方式
實施例1取大黃飲片100Kg，加重量為4倍大黃飲片的70％乙醇，回流提取3次，每次1小時，將三次的提取液合併後濾過，將濾液減壓回收乙醇得浸膏。將浸膏和大孔吸附樹脂拌合後上大孔吸附樹脂以重量約為16倍大黃飲片的20％乙醇衝洗柱子，棄去衝洗液後繼續用PH值為9的75％乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇至無醇未，調PH值至1，再將洗脫液濾過、沉澱，經乾燥即得棕黃色粉末狀大黃總蒽醌克。
實施例2大黃飲片用量及工藝步驟同實施例1，不同的是回流提取採用的為6倍的80％乙醇；將浸膏和大孔吸附樹脂拌合後上大孔吸附樹脂以重量約為12倍大黃飲片的30％乙醇衝洗柱子；棄衝洗液後，用PH值為8的85％乙醇洗脫。洗脫液回收乙醇至無醇味後，將其PH值調至3。
實施例3
大黃飲片用量及工藝步驟同實施例1，不同的是回流提取採用的為8倍的90％乙醇，將浸膏和大孔吸附樹脂拌合後上大孔吸附樹脂以重量約為8倍大黃飲片的40％乙醇衝洗柱子，棄衝洗液後，用PH值為7的75％乙醇洗脫。洗脫液回收乙醇至無醇味後，將其PH值調至5。
以下是上述三個實施例的有關具體數據批次 藥材量(kg) 幹膏量(kg) 純度(％) 含量測定(大黃素+大黃酚)(mg/g)001100 3.04 54.5321.6002100 2.92 56.0341.6003100 3.01 54.3350.0以大黃總蒽醌作為有效成份的用於治療腎衰的藥物一般製成片劑，其大黃總蒽醌的含量應大於50％(重量比)，其餘成份為玉米澱粉、糊精、梭基纖維素納等輔料，輔料的具體含量可視具體需要而定。
權利要求
1.一種大黃總蒽醌的提取方法，其特徵在於包括下列步驟(1)將大黃飲片和濃乙醇按1∶4-8的重量比混合，按回流法提取三次；(2)濾過提取液，回收乙醇，將濾液製成浸膏；(3)將浸膏加入大孔吸附樹脂柱，用重量為大黃飲片8-16倍的稀乙醇衝洗，棄去衝洗液，繼續用濃乙醇衝洗；(4)取洗脫液，回收乙醇至無醇味後將洗脫液的PH值調至酸性；(5)濾過洗脫液，將沉澱得到的固體物質乾燥即成。
2.如權利要求1所述的大黃總蒽醌的提取方法，其特徵在於每次回流提取的時間為1小時。
3.如權利要求1所述的大黃總蒽醌的提取方法，其特徵在於在將浸膏加入大孔吸附樹脂柱時，同時加入大孔吸咐樹脂。
4.如權利要求1或2或3所述的大黃總蒽醌的提取方法，其特徵在於步聚(1)中所述的濃乙醇的濃度為70％-90％。
5.如權利要求1或2或3所述的大黃總蒽醌的提取方法，其特徵在於步聚(3)中所述的稀乙醇的濃度為20％-40％，濃乙醇的濃度為75％-95％。
6.如權利要求1或2或3所述的大黃總蒽醌的提取方法，其特徵在於步聚(4)中所述洗脫液的PH值應調至1-5。
7.大黃總蒽醌在製備治療腎衰疾病中的應用。
8.一種以大黃總蒽醌為有效成份的治療腎衰的藥品，其特徵在於其中大黃總蒽醌的含量在50％以上。
全文摘要
本發明涉及一種大黃總蒽醌的提取方法及其在製備治療腎衰藥品中的應用。提取方法包括如下步驟:(1)將大黃飲片和濃乙醇按1∶4－8的重量比混合,按回流法提取三次;(2)濾過提取液,回收乙醇,將濾液製成浸膏;(3)將浸膏加入大孔吸附樹脂柱,用重量為大黃飲片8－16倍的稀乙醇衝洗,棄去衝洗液,繼續用濃乙醇衝洗;(4)取洗脫液,回收乙醇至無醇味後將洗脫液的pH值調至酸性;(5)濾過洗脫液,將沉澱得到的固體物質乾燥即成。以大黃總蒽醌為有效成份的治療腎衰的藥品,其中大黃總蒽醌的含量應在50%以上。本發明提取大黃總蒽醌的工藝簡單、成本低廉、且無環境汙染問題,提取出的大黃總蒽醌對腎衰有明顯的療效。
文檔編號C07C46/00GK1349966SQ0113416
公開日2002年5月22日 申請日期2001年11月9日 優先權日2001年11月9日
發明者王志華, 湯為, 陳妍, 郭莉, 王啟慧, 何明芳, 郭應球 申請人:南京中山製藥廠