透骨草中芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分離工藝的製作方法

2023-05-02 05:23:41

專利名稱：透骨草中芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分離工藝的製作方法
技術領域：
本發明所屬醫藥產品研究開發技術領域。本發明涉及透骨草中芹菜素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分離工藝。
背景技術：
透骨草(Phrymaleptostachya L. var. asiatica Hara)又稱老婆子針線、接生草等，屬於透骨草科(Phrymaceae)透骨草屬(Phryma)多年生草本植物,生長於山坡、林下、 路旁、溝岸及草地的陰溼處。透骨草味苦、歸心經。我國很多地區都有分布。透骨草全草均可藥用，具有清熱利溼、活血消腫、催產等功效，能治跌打損傷、溼疹、骨折、黃水瘡等疾病。目前，藥典並沒有收錄有關透骨草科透骨草屬透骨草的相關記載，但是民間常用它來治療「風溼痺痛」等疾病。透骨草富含豐富的木脂素類化合物。日本學者Eiji Tan-iguchi 和Yasuyoshi Oshima先後從北美透骨草根中分離得到了透骨草靈-I (phrymalin-I)、透骨草靈 _Π (phrymalin-II)和乙酸透骨草脂素(leptostachyol acetate)。隨後，Eiji Taniguchi和Fumito Ishibashi合成了透骨草靈-I和透骨草靈-II及其立體異構體。Eiji Taniquchi和Fumito Ishibashi等人還從北美透骨草根中分離得到倍半木脂素haedoxao
A,並對haedoxan A進行了合成,但該合成的方法包括20個反應步驟,且反應條件苛刻,合成效率低。韓國學者SangMyung Zee等從北美透骨草乾燥地上部分的乙酸乙酯提取物中分離出了透骨草靈-II和熊果酸；此外，韓國學者IL-kwon park等從亞洲透骨草乾燥根的氯仿提取液中分離得到乙醯透骨草脂素和去甲氧基乙醯透骨草脂素。從透骨草中分離得到的化合物，除熊果酸為三萜類化合物外，其餘均為木脂素類化合物。

發明內容
I、透骨草中芹菜素-7-0-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分離工藝，其特徵在於該工藝包括以下過程步驟(I):稱取透骨草乾燥粗粉4. 1kg，加入以粗粉10倍量的60%乙醇浸泡過夜後，超聲提取30min-35min，超聲溫度為30°C -32°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，合併提取液並減壓濃縮，濃縮液置於4°C冰箱中48h-60h，抽濾，得到除去部分色素沉澱的濃縮液；步驟(2):將步驟(I)中的濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，每個萃取部分濃縮至稠膏狀浸膏，回收溶劑，由此得到正丁醇提取物45g ；步驟(3):將步驟⑵中正丁醇提取物45g溶於200ml氯仿中，拌以IOOg 100 200目矽膠，揮幹溶劑，選用450gl00 200目矽膠用氯仿拌勻，溼法裝柱，幹法上樣；步驟⑷採用不同梯度氯仿-甲醇=45 I 氯仿-甲醇=I I對步驟(3) 中的正丁醇提取物進行洗脫層析，以每50ml洗脫液收集一瓶，用薄層色譜TLC檢測，合併相同組分，濃縮至小體積，再經反覆純化得到化合物42mg ；步驟(5):結合光譜分析鑑定(4)中化合物結構為芹菜素-7-0- β -D-吡喃葡萄糖
3醛酸苷。根據本發明，本發明中的「 ％ 」是重量百分比。
具體實施例方式本發明所述的透骨草中芹菜素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分離工藝包括以下實施例，下面的實施例可進一步說明本發明，但不以任何方式限制本發明。實施例I :I、透骨草中芹菜素-7-0-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分離工藝，其特徵在於該工藝包括以下過程步驟⑴稱取透骨草乾燥粗粉4. 1kg，加入以粗粉10倍量的60%乙醇浸泡過夜後，超聲提取30min，超聲溫度為30°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，合併提取液並減壓濃縮，濃縮液置於4°C冰箱中48h，抽濾，得到除去部分色素沉澱的濃縮液；步驟(2):將步驟(I)中的濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，每個萃取部分濃縮至稠膏狀浸膏，回收溶劑，由此得到正丁醇提取物45g ；步驟⑶將步驟⑵中正丁醇提取物45g溶於200ml氯仿中，拌以IOOg 100 200目矽膠，揮幹溶劑，選用450gl00 200目矽膠用氯仿拌勻，溼法裝柱，幹法上樣；步驟(4):採用不同梯度氯仿-甲醇=45 I 氯仿-甲醇=I I對步驟(3) 中的正丁醇提取物進行洗脫層析，以每50ml洗脫液收集一瓶，用薄層色譜TLC檢測，合併相同組分，濃縮至小體積，再經反覆純化得到化合物42mg ；步驟(5):結合光譜分析鑑定(4)中化合物結構為芹菜素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖
醛酸苷。實施例2:I、透骨草中芹菜素-7-0-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分離工藝，其特徵在於該工藝包括以下過程步驟(I):稱取透骨草乾燥粗粉4. 1kg，加入以粗粉10倍量的60%乙醇浸泡過夜後，超聲提取35min，超聲溫度為32°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，合併提取液並減壓濃縮，濃縮液置於4°C冰箱中60h，抽濾，得到除去部分色素沉澱的濃縮液；步驟(2):將步驟(I)中的濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，每個萃取部分濃縮至稠膏狀浸膏，回收溶劑，由此得到正丁醇提取物45g ；步驟⑶將步驟⑵中正丁醇提取物45g溶於200ml氯仿中，拌以IOOg 100 200目矽膠，揮幹溶劑，選用450gl00 200目矽膠用氯仿拌勻，溼法裝柱，幹法上樣；步驟(4):採用不同梯度氯仿-甲醇=45 I 氯仿-甲醇=I I對步驟(3) 中的正丁醇提取物進行洗脫層析，以每50ml洗脫液收集一瓶，用薄層色譜TLC檢測，合併相同組分，濃縮至小體積，再經反覆純化得到化合物42mg ；步驟(5):結合光譜分析鑑定⑷中化合物結構為芹菜素-7-0- β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷。化合物的結構鑑定黃色無定形粉末，溶於熱甲醇、熱水、熱乙醇。鹽酸-鎂粉反應呈陽性，Molish反應呈陽性，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應顯藍色，提示該化合物為黃酮苷化合物。茴香醛-硫酸噴霧顯黃色(105°C )。用2%的硫酸水解，薄層檢識到葡萄糖醛酸的存在。
1H-NMR 在芳香區有 7 個氫質子信號δ7. 95(2H，d，J = 8. 3Hz，H-2S6,)和 δ6.94(2Η，d，J = 8. 3Hz，H-3' ,51 )分別是二氫雙峰，偶合常數J = 8. 3Hz，說明黃酮苷元 B 環為 AA' BB'系統；δ 6. 83(1H，br. s，H-8)和 δ 6. 44(1H，br. s，H-6)分別有一個單氫寬單峰，為A環間位偶合的兩氫質子；δ 6. 85 (1Η，s，Η-3)處有一尖銳單氫單峰，為黃酮苷元3位氫質子信號峰；低場區的δ 12. 97(lH,br. s)是黃酮5_0H的特徵信號峰，說明7位有含氧取代基；δ 10 12 (1Η，br. s)是黃酮4-0H的特徵信號峰。δ 5. 16 (1Η，d，J = 7. IHz, H-I ")處為葡萄糖醛酸端基氫信號峰，由其偶合常數J = 7. IHz得知其苷鍵為β構型。另外在δ3. 2 δ 3. 8處有4個糖上質子信號。13C-NMR 給出了 21 個碳信號，其中 δ 170.9(06 " )、δ 99. 4(C~1 ")、 5 76. 0(C-5/7 )、S74.5(C-3" )、S72.8(C_2" )、δ71·6(04")為一組葡萄糖醛酸基信號峰。另外還有15個黃酮苷兀的碳信號,其中δ99.5和δ 94. 6分別是5, 7-二氧代黃酮A 環上6、8位碳的特徵信號峰；δ 181. 9為黃酮類化合物4位C = O的特徵信號峰；δ 164. 2 和δ 102. 9分別為黃酮類化合物C-2和C-3的特徵信號峰；δ 128. 5和δ 115. 9分別為黃酮類化合物B環上AA' BB'系統中的C-2' ,6'、C_3'，5'的特徵信號峰；δ 162. 7說明黃酮類化合物C-7與葡萄糖醛酸相連形成氧苷。由NMR譜對數據進行了歸屬。經查閱文獻與其波譜數據基本一致。與對照品對照展距、顯色均一致且混合熔點不下降。根據以上解析推定此化合物結構為芹菜素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷。
權利要求
1.透骨草中芹菜素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分離工藝，其特徵在於該工藝包括以下過程步驟(I):稱取透骨草乾燥粗粉4. 1kg，加入以粗粉10倍量的60%乙醇浸泡過夜後，超聲提取30min-35min，超聲溫度為30°C _32°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，合併提取液並減壓濃縮，濃縮液置於4°C冰箱中48h-60h，抽濾，得到除去部分色素沉澱的濃縮液；步驟(2):將步驟(I)中的濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，每個萃取部分濃縮至稠膏狀浸膏，回收溶劑，由此得到正丁醇提取物45g ；步驟⑶將步驟⑵中正丁醇提取物45g溶於200ml氯仿中，拌以IOOg 100 200目矽膠，揮幹溶劑，選用450gl00 200目矽膠用氯仿拌勻，溼法裝柱，幹法上樣；步驟(4):採用不同梯度氯仿-甲醇=45 I 氯仿-甲醇=I I對步驟(3)中的正丁醇提取物進行洗脫層析，以每50ml洗脫液收集一瓶，用薄層色譜TLC檢測，合併相同組分，濃縮至小體積，再經反覆純化得到化合物42mg ；步驟(5):結合光譜分析鑑定(4)中化合物結構為芹菜素-7-0-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷。
全文摘要
本發明所屬醫藥產品研究開發技術領域。本發明涉及透骨草中芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分離工藝。稱取透骨草乾燥粗粉，加入以粗粉10倍量的60％乙醇浸泡過夜後，超聲提取三次，合併提取液並減壓濃縮，將濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，由此得到正丁醇提取物並進行矽膠柱層析，採用不同梯度氯仿-甲醇＝45∶1～氯仿-甲醇＝1∶1對正丁醇提取物進行洗脫；用薄層色譜TLC檢測，合併相同組分，濃縮至小體積，再經反覆純化得到化合物；結合光譜分析鑑定其結構為芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷。本發明的目的是為滿足生產和科研上的需求量，提高收率，降低成本。
文檔編號C07H17/07GK102603833SQ20121000987
公開日2012年7月25日 申請日期2012年1月1日 優先權日2012年1月1日
發明者侯欣池, 關鍵, 張崇禧, 張成城, 鄭友蘭 申請人:山東大學威海分校