一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法
2023-05-02 07:16:26 3
專利名稱：一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法
一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法
技術領域：
本發明涉及藥物分析領域，特別涉及一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法。
背景技術：
如圖1所示，比阿培南是一種新型甲基碳青黴烯類抗生素，為非典型的 β -內醯胺類，通過抑制細菌細胞壁的合成而產生抗菌作用，可耐受多種β -內醯胺酶的水解作用，具有較強的穩定性，其抑制綠膿桿菌和厭氧菌的活性比亞胺培南強2 4倍，抑制耐藥綠膿桿菌活性比美羅培南強4 8倍，對不動桿菌、厭氧菌比頭孢他啶有效。其製劑為注射用比阿培南，2003年在日本批准上市，臨床適用於治療由敏感細菌引起的敗血症、肺炎、肺部膿腫、慢性呼吸道疾病引起的二次感染、難治性膀胱炎、腎盂腎炎、腹膜炎、婦科附件炎等；使用該製劑有時會出現不良反應過敏反應，這些不良反應與注射用比阿培南中存在的比阿培南聚合物有關，為了減少使用者出現過敏反應，需要減少使用含有過量比阿培南聚合物的比阿培南產品，如何判斷比阿培南產品含有多少比阿培南聚合物就是本發明的目的。因比阿培南為全合成抗生素類產品，由於空間位阻效應，比阿培南聚合物多為二聚物；如圖2Α和圖2Β所示，比阿培南二聚物包括比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B。
發明內容本發明要解決的技術問題是提供一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法，能快速判斷比阿培南原料中含有比阿培南二聚物的量。上述技術問題通過以下技術方案解決一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法，其特徵在於，包括以下步驟1)取比阿培南樣品，加水溶解稀釋；2)按照以下色譜條件對上述溶液進行分離定位流動相體積濃度為0. 05%的三氟乙酸-乙腈溶液，流速0. 8-1. 2ml/min，色譜柱 C18，檢測波長318nm，等度洗脫；3)將色譜圖中比阿培南二聚物的物質峰面積與峰總面積之比得出比阿培南中比阿培南二聚物的含量。在所述三氟乙酸-乙腈溶液中，三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8。所述流速為lml/min。本方法專屬性強，靈敏度高，能夠有迅速判斷比阿培南中比阿培南的比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B，保證比阿培南的安全性。本發明同時還提供一種比阿培南二聚物的製備方法，包括以下步驟1)取比阿培南樣品，加體積濃度為0.05%三氟乙酸溶液溶解稀釋，於室溫放置 1-2小時；
2)按照以下色譜條件對上述溶液進行分離定位流動相體積濃度為0. 05%的三氟乙酸-乙腈溶液，流速0. 8-1. 2ml/min，色譜柱 C18，檢測波長318nm，等度洗脫；3)收集上述分離物中的比阿培南二聚物。在所述三氟乙酸-乙腈溶液中，三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8。所述流速為lml/min。本發明具有優點各峰之間分離度良好，無幹擾雜質產生，破壞條件溫和，便於收集製備比阿培南二聚物。
圖1為比阿培南的分子結構式圖；圖2A為比阿培南二聚物A的分子結構式圖；圖2B為比阿培南二聚物B的分子結構式圖；圖3為比阿培南溶液的色譜圖；圖4A為比阿培南二聚物A的紫外光譜圖；圖4B為比阿培南二聚物B的紫外光譜圖。
具體實施方式實施例一在判斷比阿培南原料中含有比阿培南二聚物的量之前，本設計人通過以下方法在比阿培南溶液中製備比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B及確認1)製備系統適用性試驗溶液取比阿培南樣品約O.lg，加IOml體積濃度為 0. 05%的三氟乙酸溶液溶解後，於室溫放置2小時(此時，溶液中存在了比阿培南二聚物A 和比阿培南二聚物B)，再取3ml上述溶液至20ml量瓶中，加水稀釋至20ml刻度，搖勻，備用；[選擇0. 05%三氟乙酸溶液為破壞溶劑(pH值約為2. 4)，在此條件下，比阿培南更易於聚合，能夠形成比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B ；選擇在室溫條件下放置，未產生幹擾雜質，各峰之間分離度良好；時間控制在1 2小時內產生的二聚物量均滿足定位要求， 放置時間過長，其中一個二聚物不穩定，含量降低。]2)確認如圖3所示，採用島津20A型高效液相色譜儀，對系統適用性試驗溶液進行分離， 具體色譜條件為填充劑十八烷基鍵合矽膠，流動相體積濃度為0. 05%的三氟乙酸-乙腈溶液(三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8)，流速l.Oml/min，色譜柱C18，檢測波長 318nm，等度洗脫；再通過質譜儀對上述分離物進行檢測確認，存在兩個m/z均為701的物質，分別是比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B。因此，我們可以通過以下方法製備比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B 1)取比阿培南樣品，加體積濃度為0.05%的三氟乙酸溶液溶解後，於室溫放置2 小時備用；2)按照以下色譜條件對上述溶液進行分離定位
流動相體積濃度為0. 05 %的三氟乙酸-乙腈溶液，流速1. Oml/min,色譜柱 C18，檢測波長318nm，等度洗脫；3)收集上述分離物中的比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B。同時，通過質譜儀的確認，我們可以知道按上述色譜條件進行分離過程中，那兩個時間段的物質峰是比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B ；且由圖3可知，按上述色譜條件進行分離，各峰之間分離度良好，分析時間短，無幹擾雜質產生，破壞條件溫和，滿足測定需要。因此，按上述色譜條件對比阿培南溶液進行分離，只要在相應時間出現物質峰，就認為比阿培南溶液存在相應的比阿培南二聚物，然後根據峰峰面積計算出比阿培南中含有比阿培南二聚物的量。判斷比阿培南原料中含有比阿培南二聚物的量供試品溶液取比阿培南樣品約15mg，置IOml量瓶中，加水溶解並稀釋至IOml刻度，搖勻，備用；該供試品溶液的作用是再次確認比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B的存在。對照溶液取上述供試品溶液anl，置IOOml瓶量中，加水溶解並稀釋至IOOml刻度，搖勻，備用；該溶液的作用是用於計算比阿培南二聚物的含量。採用島津20A型高效液相色譜儀，對供試品溶液和對照溶液分別進行分離定位， 具體色譜條件為填充劑十八烷基鍵合矽膠，流動相體積濃度為0. 05%的三氟乙酸-乙腈溶液(三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8)，流速1. Oml/min，色譜柱C18，檢測波長 318nm，等度洗脫。經檢測，在色譜過程中的相應時間段沒有出現比阿培南二聚物A的物質峰和比阿培南二聚物B的物質峰；因此，我們認為此批比阿培南樣品沒含有比阿培南二聚物A和比阿
培南二聚物B。對於檢測波長的選擇如圖4A和圖4B所示，通過採用二極體陣列檢測器檢測的比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B的紫外光譜圖知，比阿培南二聚物A約在318nm的波長處有最大吸收，比阿培南二聚物B約在367nm的波長處有最大吸收，在318nm波長處也有較大吸收。且在318nm 波長下，比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B的響應值最大，靈敏度最高。綜合考慮比阿培南二聚物的最大吸收波長和檢測的靈敏度，選擇318nm為檢測波長。實施例二取比阿培南樣品約2g，加2ml的體積濃度為0. 05 %的三氟乙酸溶液溼潤後，於 80°C烘箱中烘乾，備用。供試品溶液取上述烘乾物約15mg，置IOml量瓶中，加水溶解並稀釋至IOml刻
度，搖勻，備用。對照溶液取上述供試品溶液anl，置IOOml瓶量中，加水溶解並稀釋至IOOml刻
度，搖勻，備用。採用島津20A型高效液相色譜儀，對上述供試品溶液和對照溶液進行分離測定， 具體色譜條件為填充劑十八烷基鍵合矽膠，流動相體積濃度為0. 05%的三氟乙酸-乙腈溶液(三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8)，流速1. Oml/min，色譜柱C18，檢測波長 318nm，等度洗脫。
經檢測，在色譜過程的相應時間段均出現比阿培南二聚物A的物質峰和比阿培南二聚物B的物質峰，根據峰峰面積比計算，在烘乾物中，阿培南二聚物A的含量為0. 05%，比阿培南二聚物B的含量為0.35%。本發明不局限於上述實施例，基於上述實施例的、未做出創造性勞動的簡單替換， 應當屬於本發明揭露的範圍。
權利要求
1.一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法，其特徵在於，包括以下步驟1)取比阿培南樣品，加水溶解稀釋；2)按照以下色譜條件對上述溶液進行分離定位流動相體積濃度為0. 05 %的三氟乙酸-乙腈溶液，流速0. 8-1. 2ml/min,色譜柱 C18，檢測波長318nm，等度洗脫；3)將色譜圖中比阿培南二聚物的物質峰面積與峰總面積之比得出比阿培南中比阿培南二聚物的含量。
2.根據權利要求1所述的定量分析方法，其特徵在於，在所述三氟乙酸-乙腈溶液中， 三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8。
3.根據權利要求1所述的定量分析方法，其特徵在於，所述流速為lml/min。
4.一種比阿培南二聚物的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟1)取比阿培南樣品，加體積濃度為0.05%三氟乙酸溶液溶解稀釋，於室溫放置1-2小時；2)按照以下色譜條件對上述溶液進行分離定位流動相體積濃度為0. 05 %的三氟乙酸-乙腈溶液，流速0. 8-1. 2ml/min,色譜柱 C18，檢測波長318nm，等度洗脫；3)收集製備上述分離物中的比阿培南二聚物。
5.根據權利要求4所述的製備方法，其特徵在於，在所述三氟乙酸-乙腈溶液中，三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8。
6.根據權利要求4所述的製備方法，其特徵在於，所述流速為lml/min。
全文摘要
本發明涉及一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法，其特徵在於，包括以下步驟1)取比阿培南樣品，加水溶解稀釋；2)按照以下色譜條件對上述溶液進行分離定位流動相體積濃度為0.05％的三氟乙酸-乙腈溶液，流速0.8-1.2ml/min，色譜柱C18，檢測波長318nm，等度洗脫；3)將色譜圖中比阿培南二聚物的物質峰面積與峰總面積之比得出比阿培南中比阿培南二聚物的含量。本方法專屬性強，靈敏度高，能夠有迅速判斷比阿培南中比阿培南的比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B，保證比阿培南的安全性。
文檔編號G01N30/02GK102207492SQ201110065098
公開日2011年10月5日 申請日期2011年3月17日 優先權日2011年3月17日
發明者劉俊華, 張莉, 杜青波, 王德剛, 赫渦濤, 鍾雅妮 申請人:珠海聯邦製藥股份有限公司