用於製備fmoc基可水解連接體的方法

2023-05-02 08:10:46 2

專利名稱：用於製備fmoc基可水解連接體的方法
技術領域：
本發明涉及可水解連接體的製備，該連接體可用於蛋白質和多肽藥物的修飾。
背景技術：
大多數多肽和蛋白質藥物在體內是短壽命的並且通常具有較短的循環半衰期。考慮到多肽和蛋白質藥物不能口服吸收，故治療性活性藥物在循環中的長期保持是具有明顯臨床意義的優選特徵。 用於提高蛋白質或多肽藥物的臨床性能的有吸引力的策略是用聚合物比如聚亞烷基氧化物(Roberts等，Advan Drug Rev. 54， 459-476 (2002))或多糖比如聚唾液酸(Fernandes等，Biochim Biophys Acta 1341 ， 26-34 (1997))、葡聚糖或羥乙基澱粉修飾蛋白質或多肽藥物。目前已知的有用聚(乙二醇)(PEG)修飾。然而，用PEG修飾蛋白質通常導致蛋白質活性的降低。因此，人們開發出替代方案以通過使用可水解的或可降解的化學連接體來使聚合物對蛋白質或多肽藥物形成可釋放的聯結(US6， 515， 100、 US 7， 122， 189、W0 04/089280、W006/138572)。蛋白質_聚合物結合體可看作前體藥物，並且活性蛋白質可經由可控的釋放機制由結合體中釋放出來。通過使用該方案，可獲得藥學動力學性能得到改善的藥物(趙等，Bioconj卿te Chem 17， 341-351 (2006))。 因此，W004/089280建議使用可水解的PEG連接體。(將說明書中引用的所有文獻引入本文以作參考)。 Tsubery等(J Biol Chem 279， 38118-38124 (2004))描述了一種基於Fmoc (9-荷基氨基甲酸甲酯)基團的用於蛋白質衍生的可水解的PEG連接體。芴基與馬來醯亞氨-丙酸酐以及N-羥基琥珀醯亞胺反應，進一步通過它們的氨基與聚(乙二醇)(PEG)和蛋白質反應。然而，可水解的連接體，B卩，MAL-FMS-0SU(9-羥甲基-2-(氨基-3-馬來醯亞氨-丙酸)-7-磺基芴基N-羥基琥珀醯亞胺碳酸酯)的合成，具有較低的產率和降低的重複性。根據Tsubery等的合成中的關鍵問題在於通過9_羥甲基_2氨基芴基與馬來醯亞氨丙酸酸酐的反應來引入馬來醯亞胺基。在該步驟中，出現了不希望有的副反應比如9位的OH基的酯化。因此，包含用於保護OH基的額外步驟的改善的合成被開發。

發明內容
本發明提供了一種新的用於合成通式1的化合物的方法
formula see original document page 5 (通式l) 其中PG為保護基，並且位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一個與自由基Y結合。
Y是包含N-馬來醯亞胺基部分的自由基。 除了與自由基Y結合之外，通式1的化合物在可用位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一個處可選地與自由基X結合。
X*-S03-R3。 W選自於由氫、(C「C8)-烷基和(C「C8)-烷基-RA構成的組。
W為聚合物。 本發明的化合物根據多步驟方案製備，其中用於芴環系中的9-羥甲基基團的保護基將被使用。這些衍生物可被進一步修飾以產生活性酯比如琥珀醯亞胺酯。
具體實施例方式
本發明通過使用保護基以產生通式1的化合物的合成可解決上述問題。通式1的化合物對產生可水解的連接體的後續反應步驟來說是合適的前體物，並且提供了高產率和高純度的預期產物，該水解的連接體為比如MAL-FMS-OSU以及包含活性馬來醯亞胺(MAL)和N-羥基琥珀醯亞胺(0SU = NHS)基的其他MAL-Fmoc-OSU衍生物。這些連接體可進一步用一種以上聚合物修飾，然後可用於修飾多肽或蛋白質藥物。 通式1的化合物由氨基取代的芴開始製備。該新的合成方案在如下所示的方案中
的步驟4中在芴的9位引入了用於羥甲基的保護基。如下合成方案作為例子說明了通式1
的化合物的製備。
formula see original document page 6
進一歩的反應歩驟:
formula see original document page 6
formula see original document page 7 在第一步驟(參見上述方案)中，例如通過與B0C-酸酐等反應，用BOC (叔丁氧羰基)基團保護氨基取代的芴的胺基。可以使用任何其他合適的用於胺基的保護基(Greene等，有機合成中的保護基，Jon Willey&Son，Inc.，第三版，紐約(1999))。另一例子是Z(苄氧羰基)基團。 為了合成在位置1、2、3、4、5、6、7或8處具有超過1個自由基Y的通式1的化合物，
在類似的反應中可使用多個氨基取代的芴衍生物。
歩驟2 : 在第二步驟中，例如，通過與NaH或二異丙基醯胺鋰(LDA)和甲酸乙酯反應、並接著在MeOH中與NaBH4或其他還原劑比如DIBAL (氫化二異丁基鋁鹽)反應，在荷核的9位引入羥甲基。
歩驟3 : 在第三步驟中，例如，用HC1 CF3 COOH或對甲苯磺酸斷開BOC保護基。
歩驟4 : 在第4步驟中，例如，9-羥甲基通過與甲矽烷基滷化物比如tBDMS-Cl (Corey等，J.AmChem Soc. 94， 6190-6191 (1972))或4，4' _三甲氧基三苯甲基氯反應而被保護。
在一個實施方式中，甲矽烷基滷化物為tB匿S-Cl (叔丁基二甲基甲矽烷基氯)。優選與tB匿S-Cl的反應在DMF(二甲基甲醯胺)中與咪唑一起進行。甲矽烷基保護基的使用使分子更具親脂性，從而促進與超過1個自由基Y結合的化合物的製備。
歩驟5 : 在第5步驟中，例如，通過使氨基與馬來醯亞氨烷酸或馬來醯亞氨烷酸酸酐反應來引入N-馬來醯亞胺部分。 馬來醯亞胺基對硫醇基是反應性的。因此，經修飾的聚合物比如PEG-SH可共價結
合到可水解的連接體上從而產生聚合物修飾的可水解的連接體。
歩驟6 : 在該可選的步驟中，自由基X(-S(^R3)被引入到芴環系中。該酸性基團使化合物更具親水性從而允許在水溶劑中進行隨後的偶聯反應。此外，磺酸基通過與聚合物中的0H基的酯化允許第二聚合物的偶聯。 該步驟允許引入自由基X以產生通式1的化合物，該化合物除了包括在位置1、2、3、4、5、6、7或8處的自由基Y之外，還包括在可用位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一個處的自由基X。
7
在一個實施方式中，至少一個自由基X被結合到位置2、4、5和/或7上。在另一 實施方式中，自由基X被結合到7位上。 在另一實施方式中，自由基X(-S(^R3)在步驟4之後被引入到芴環系中。如 果-S03R3是-S03H，那麼-S03H基可通過酯化被保護。
講一歩的反應歩驟: 在與馬來醯亞氨烷酸縮合後，通過去除保護基(PG)而使9-羥甲基去保護，從而產
生通式2的化合物。去保護優選用BF3比如BF3 Et20(三氟化硼乙醚)進行。
OH (通式2) 通過使通式2的化合物與N-羥基琥珀醯亞胺或其衍生物比如N， N' - 二琥珀醯亞
胺碳酸酯反應可合成MAL-FMS-OSU或其衍生物。用於形成琥珀醯亞胺酯的反應條件在本領
域是已知的。用於通式2的琥珀醯亞胺基修飾的化合物可通過與SH-聚合物反應而被進一
步修飾，隨後將其與多肽或蛋白質藥物中的氨基反應，從而產生具有包含聚合物的可水解
連接體的多肽或蛋白質藥物的偶聯物。 上述例舉的方案產生了通式1的化合物 (通式1) 其中PG為保護基，並且位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一個與自由基Y結合。
Y為包含N-馬來醯亞胺基的部分。 被至少一個自由基Y取代的通式1的化合物還可以在可用位置1、2、3、4、5、6、7或 8中的至少一個處與自由基X結合。
X*-S03-R3。 R3獨立地選自於由氫、(C「Cs)-烷基和(CrC8)-烷基-R4。" (C「C8)-烷基"是指具有l-8個碳原子的一價烷基。其例子包括甲基、乙基、丙基、丁基、己基等。包括直鏈烷基和支鏈烷基。 R4是聚合物。該聚合物的例子包括聚乙二醇(PEG)、多聚唾液酸(PSA)、羥烷基澱 粉(HAS)等。 在另一實施方式中，本發明涉及通式1的化合物，其中PG為甲矽烷基。甲矽烷基
的例子為三甲基甲矽烷基、三乙基甲矽烷基或叔丁基二苯基甲矽烷基。 在另一實施方式中，PG為叔丁基二甲基甲矽烷基。 在一個實施方式中，Y為formula see original document page 9 &在每次出現時獨立地為(CrC8)-烷基。 在一個實施方式中，！^在每次出現時獨立地選自於由甲基、乙基、丙基、丁基和己 基構成的組。 R2獨立地選 自 於 由-C (0) NR-、 -C (0) NR-(C「C8)-烷 基-NR-、-NRC (0)-和-NRC (0) - (C「C8)-烷基-NR構成的組，其中R獨立地為氫或(C「C8)-烷基。 在一個實施方式中，R2為-C(O)NH-。
在另一實施方式中，R2為-NHC(O)-。 在一個實施方式中，通式1的化合物在位置1、2、3或4中的至少一個處與自由基 Y結合。 在另一實施方式中，通式1的化合物在位置1、2、3或4中的至少一個處與自由基 Y結合，並在位置5、6、7或8中的至少一個處與自由基X結合。 在另一實施方式中，在位置2或3中的至少一個處被至少一個自由基Y取代的通 式1的化合物還在位置7或8中的至少一個處與自由基X結合。 在另一實施方式中，在被至少一個自由基Y取代的通式1的化合物中，自由基X被 結合到7位上。 在另一實施方式中，通式1的化合物在位置2禾P 7處與自由基Y結合。 在另一實施方式中，通式1的化合物在位置2和7處分別與自由基Y和自由基X
^口 口 。 在另一實施方式中，通式1的化合物為下述 本發明通過下述例子進行說明，但並不限於此。
formula see original document page 10formula see original document page 11formula see original document page 12實施例 MAL-Fmoc-OSu可根據如下方案(實施例1-8)被合成。 實施例1 :2-(Boc-氨基)芴的合成(Albericio等，Synth Commun. 31，
225-32(2001)) 在145ml用冰浴冷卻的二噁烷-1120(2 : 1/V : V)和42. 5ml 2N Na0H的混合物 中，在緩慢攪拌下製備2-氨基芴的懸浮液(14.4g，79.7mmo1)。然後添加Boc20(19. lg， 87.7mmol，l.l當量)並在25。C下連續攪拌。接著用TLC[對於2-(Boc-氨基)芴為 Rf = 0.75， CHCl3_Me0H-H0Ac (95 : 5 : 3)]進行反應跟蹤，並通過添加2N Na0H來 將PH保持在9-10之間。在24小時後，TLC分析顯示存在2-氨基芴[Rf = 0. 60， CHCl3_Me0H-H0Ac (95 : 5 : 3)]，因此添加另一個5. 2g Boc20(23. 8mrno1，0. 3當量)，並且反 應繼續進行額外的3小時，直至初始產物完全消失為止。用1M KHS04將懸浮液酸化到pH 3。 過濾、並用30ml冷卻水、30ml二噁烷-H20(2 : 1) 、30ml己烷洗滌固體，並在真空中乾燥。該 產物(淺黃色粉末)(30. lg，90X產率)用TLC(Rf = 0. 75 ;CHCl3/MeOH/HOAc 95 : 5 : 3) 顯示是純的，並且通過NMR表徵。 力畫R(200MHz/DMS0) S = 9， 45 (1H ;s ;NH) ;7， 84-7， 77 (3H ;m ;H1 ， H4， H5);7， 59-7， 17(4H ;m ;H2， H6-H8) ;3， 86 (2H ;s ;CH2) ;1， 49 (9H， s， t_Bu) 13C匪R(50MHz/DMS0) S = 152， 8 (Amid-C) ;143，8(C9a) ;142，6(C8a); 141，2(C4b) ;138，7(C2) ;135，2(C4a) ;126，7(C6) ;125，8(C7) ;124，9(C8) ;120， 0(C4); 119，2(C5) ;116，9(C3) ;114，8(C1) ;79，02(CH2) ;39，5(Cq t-Bu) ;28，2(3xCH3 t-Bu)
實施例2 :9-羥甲基-2-(Boc-氨基)芴的合成(Albericio等，Synth Commun. 31， 225-32(2001))
在氬氣保護下，將140ml幹THF(用鈉新蒸餾的)中2-(Boc-氨基)芴(13. 49g， 47.9mmo1)的溶液仔細添加到20ml幹THF中6. 3g 60 % NaH(160mmo1， 3. 3當量)的懸 浮液中。觀察到氣體析出和自發熱。在完成2-(Boc-氨基)芴的添加之後，在4(TC下 攪拌反應混合物1小時。然後將反應混合物冷卻到室溫，並緩慢添加9. 7ml甲酸乙酯 (120mmo1，2. 5當量)以避免劇烈的氫氣泡。初始混濁的淺棕色懸浮液在添加甲酸乙酯時 迅速澄清為暗褐色溶液，接著攪拌1小時。接著通過TLC[對於中間產物為Rf = 0. 52， CHCl3-Me0H-H0Ac(95 : 5 : 3)]進行反應跟蹤。用碎冰使反應終止，並且通過旋轉蒸發除 去100ml水和有機溶劑。向液相中添加10ml 2N NaOH，並用3X 50ml 二乙醚洗滌，在冰浴中 冷卻並用25ml冰冷的HOAc酸化直至pH 5為止。將隨後出現的灰白色沉澱溶解在300ml EtOAc中。用50ml EtOAc萃取液相，用2 X 75ml飽和NaHC03和1 X 75ml鹽水洗滌有機相， 並用化2504充分乾燥。然後減壓除去溶劑。 9-甲醯基-2-(Boc-氨基)荷被懸浮在100ml甲醇中，並且2. 0g NaBH4[52. 9mmo1， 對應於初始2-(Boc-氨基)芴的1. 1當量]被分批添加。在室溫下，磁力攪拌迅速澄清的 懸浮液4小時，直至初始產物消失為止[TLC，Rf = 0. 57，PE : MTBE(l : 2)]。用300ml水 稀釋反應混合物，並用15ml冰冷的HOAc將其酸化至pH 5. 0，接著將沉澱直接溶解在150ml EtOAc中。用3 X 50ml飽和NaHC03和1 X 50ml鹽水洗滌有機相，並用無水Na2S04充分乾燥。 旋轉蒸發溶劑以獲得不需要進一步純化即可使用的固體。通過NMR分析產物(13. lg，88% 產率)。 力NMR(200MHz/DMS0) S = 9， 42 (1H ;s ;NH) ;7， 87 (1H ;s ;H1) ;7， 79-7， 66 (2H ;m ;
H4， H5) ;7， 61 (1H ;d ; J = 7， 71Hz ;H8) ;7， 48-7， 15 (3H， m， H3， H6， H7 ;) ;5， 07 (1H， t， J =
4，80Hz;0H) ;4， 00-3， 88(1H ;m ;H9) ;3， 82-3， 63 (2H ;m ;CH2) ; 1， 49 (9H ;s ;t-Bu) 13C畫R(50MHz/DMS0) S = 152， 88 (Amid-C) ;146，05(C9a) ;144，90(C8a);
140，81(C4b) ;138， 64(C2) ;134，90(C4a) ;127， 13(C6) ;125，85(C7) ;125， 05(C8);
119， 93(C4) ;119， 16(C5) ;117，47(C3) ;115， 24(Cl) ;79，00(Cq t_Bu) ;63，85(CH2);
50， 19(C9) ;28，20(3x CH3 t_Bu) 實施例3 :9-羥甲基-2-氨基芴的合成formula see original document page 14
將13. 0g 9-羥甲基-2-(Boc-氨基)芴溶解在110ml乙腈中並進行回流攪拌。滴 加42ml 2NHC1(2.0當量，84mmo1)。回流攪拌反應混合物45分鐘。將反應混合物冷卻至室 溫並通過TLC(Rf = 0. 1 PE-MTBE(l : 2))監測反應。通過旋轉蒸發部分地除去溶劑，並且 將殘留物溶解在70ml 2N HC1中。用2X50ml MTBE仔細洗滌溶液。用Na2C03將液相調節 到pH 9並用2 X 70ml EtOAc萃取。用50ml鹽水洗滌有機相，並用Na2S04充分乾燥。通過 旋轉蒸發除去溶劑。該產物未經進一步純化而被使用。通過NMR證實結構一致性(S.76g， 99%產率)。 4畫R(200MHz/DMS0) S = 7， 69-7， 40 (3H ;m ;3xAr-H) ;7， 37-7， 02 (2H ;m ; 2xAr-H) ;6， 87(1H ;s ;Ar-H) ;6，68(lH;d;J = 8， 3他；Ar-H) ;5， 19 (2H ;s ;NH2) ;5，03(1H; t ; J = 4， 93Hz ;0H) ;3， 93-3， 58 (3H ;m ;H9， CH2) 13C NMR (50MHz/DMS0) S = 148， 36 (Ar-Cqu) ; 146， 81 (Ar-Cqu) ; 143， 97 (Ar-Cqu); 141， 87(Ar-Cqu) ; 129， 03 (Ar-Cqu) ; 126， 92 (Ar-CH) ; 124， 85 (Ar-CH) ; 124， 24 (Ar-CH); 120， 40(Ar-CH) ;117， 81 (Ar-CH) ;113， 00 (Ar-CH) ;110， 76 (Ar-CH) ;64，27(CH2) ;49，90(CH)
實施例4 :叔丁基二甲基甲矽烷氧基-9-甲基-2-氨基芴的合成
將5. 91g咪唑(86. 8mmo1，2. 1當量)溶於24ml幹DMF中，並在氬氣保護下，在冰 浴中攪拌10分鐘。7.47g溶於幹DMF中的叔丁基二甲基甲矽烷基氯化物(49.6mmo1，1.2 當量)被添加。在冰上攪拌15分鐘後，在冷卻條件以及氬氣保護下，逐滴添加8.73g溶於 40ml幹DMF中的9-羥甲基-2-氨基荷(41. 3mmo1)。該反應在冰上進行15分鐘，接著移至 室溫下進行。通過TLC[目標產物Rf = 0.6， PE-MTBE(l : 2)]監測反應。兩小時後，初始 產物[Rf = 0. IPE-MTBE(I : 2)]已經消失，接著用400ml CH2C12稀釋反應混合物，並添加 100ml 5%NaHC03。用5X 200ml水洗滌有機相，並用Na2S04充分乾燥。通過旋轉蒸發除去 CH2Cl2，並且通過共沸蒸餾用甲苯除去DMF。殘餘的棕色油(13.4g，99X產率)用NMR分析 並未經進一步的純化而被使用。 力畫R(200MHz/DMS0) S = 7， 67-7， 40 (3H ;m ;3x Ar-H) ;7， 34-7， 00 (2H ;m ;2x Ar-H) ;6，81(lH;s ;lx Ar-H) ;6， 59 (lx ;dd ;J = 8， 02Hz & 1，83Hz;lx Ar-H) ;5，19(2H;s;NH2) ;3， 97-3， 76(2H ;m ;CH2) ;3， 75-3， 57 (1H ;m ;CH) ;0， 88 (9H ;s ;3x CH3) ;0， 03 (6H ;s ;2x
CH3) 13C NMR(50MHz/DMS0) S = 148， 40 (Ar-Cqu) ; 145， 81 (Ar-Cqu) ; 143， 67 (Ar-Cqu);
141， 88(Ar_Cqu) ; 129， 08 (Ar_Cqu) ;127， 10 (Ar_CH) ; 124， 97 (Ar_CH) ; 124， 16 (Ar_CH);
120， 47(Ar_CH) ; 117， 87 (Ar_CH) ; 113， 22 (Ar_CH) ; 110， 58 (Ar_CH) ;66， 04 (CH2_OH);
49， 60 (C9) ;25， 88 (3xCH3 ;t-Bu) ;18， 04(Cqu ;t-Bu) ;_5， 04(2CH3 ;Si_CH3) 實施例5 :叔丁基二甲基甲矽烷氧基_9-甲基_2-(氨基-3-馬來醯亞氨丙酸)芴
的合成
formula see original document page 15 向幹THF(用鈉新蒸餾的)中13.5g的9-叔丁基二甲基甲矽烷氧基甲基-2-氨基 芴的溶液中添加9. 42gN，N'-二環己基碳二亞胺(75. 7mmo1，1. 1當量)和651mg 1-羥基苯 並三唑(4. 8mmo1，0. 1當量)。將13. 5g(41. 5mmo1， 1. 1當量)3-馬來醯亞氨丙酸溶於50ml 幹THF中並逐滴添加。在氬氣保護下，在室溫下攪拌反應混合物過夜，並通過TLC監測產物 形成[初始材料Rf = 0. 6，目標產物Rf = 0. 18， PE-MTBE (1 : 2)]。 —旦檢測不到初始材料，就濾出二環己基脲，並通過旋轉蒸發除去THF。將殘餘的 固體溶於200ml CH2Cl2，ffi 50ml 5% NaHC03和50ml鹽水洗滌，並用Na2S04充分乾燥。將棕 色晶體溶於20ml的MTBE中。在過濾之後，用小部分MTBE洗滌殘餘物，直至洗滌溶液保持 無色為止。通過NMR分析黃色晶體(10. 5g，53X產率)。 力NMR(200MHz/DMS0) S = 10， 06 (1H ;s ;NH) ;7， 92 (1H ;s ;Hl) ;7， 82-7， 70 (2H ; m;H4&H5) ;7，62(lH;d;J = 7，20Hz;H3) ;7，49(lH;d;J = 8，08Hz;H8) ;7， 41—7， 18 (2H ; m ;H6&H7) ;7， 03(2H ;s ;2x Mal-CH) ;4，02(lH;t;J = 6，63Hz;H9) ;3， 95-3， 66 (4H ;m ; Prop-CH2-N&CH2-OTBDMS) ;2，61(2H;t;J = 7， 07Hz ;Prop-CH2_C = 0) ;0， 84 (9H ;s ;3x t-BuCH3) ;0， 10—0， 56 (6H ;m ;2x CH3_Si) 13C畫R(50MHz/DMS0) S = 170，81(C = 0 Mai) ;168，30(C = 0 Amid); 145，12(C9a) ;144，62(C8a) ;140，68(C4b) ;138，05(C2) ;136，02(C4a) ;134，62(2xCH Mal) ;127， 34(C6) ;126， 02(C7) ;125， 15(C8) ;119， 99(C4) ;119，37(C5) ;118， 63(C3); 116，31(Cl) ;65， 54(CH20TBDMS) ;49，85(C9) ;35， 01 (Prop-CH2_N) ;33， 91 (Prop-CH2_CO); 25，84(3x CH3(t-Bu) ;18，01(Cqu t_Bu) ;_5， 40 (CH3_Si) ;_5， 44 (CH3_Si)
實施例6 :9-羥甲基-2-(氨基-3-馬來醯亞氨丙酸)芴的合成
在氬氣保護下，將10. 3g叔丁基二甲基甲矽烷氧基-9-甲基-2-(氨基-3-馬來醯 亞氨丙酸)芴(21. 6mmo1)溶於230ml CH2C12中。逐滴添加35ml三氟化硼醚化物30分鐘。 通過TLC監測反應[初始材料Rf = 0. 6，目標產物Rf = 0. 38， CH2C12-甲醇(10 : 1)]。 一 旦初始材料已經消失，就用飽和NaHC03溶液對溶液進行水解。過濾製得的晶體。蒸發母液 中的有機相。將殘餘物和濾渣重新溶於250ml EtOAc和120ml 5%腿〇03中。用lX50ml 5% NaHC03、50ml水和50ml鹽水洗滌有機相，並用Na2S04充分乾燥。通過旋轉蒸發除去溶 劑。通過NMR和質譜驗證產物的結構。 力NMR(200MHz/DMS0) S = 10， 09 (1H ;s ;NH) ;7， 88 (1H ;s ;Hl) ;7， 82-7， 69 (2H ; m;H4&H5) ;7， 66-7， 52 (2H ;m ;H3&H8) ;7， 41-7， 17 (2H ;m ;腿H7) ;7， 03 (2H ;s ;2x Mal-CH) ;5，09(lH;t;J = 4，93Hz;0H) ;5，08(lH;t;J = 6，06Hz;H9) ;3， 97-3， 53(4H ;m ; Prop-CH2-N&CH2-OH) ;2， 61 (2H ;t ;J = 6， 82Hz ;Prop-CH2_C = 0) 13C畫R(50MHz/DMS0) S = 170， 82 (C = 0 Mai) ;168， 38 (C = 0 Amid); 146，00(C9a) ;144，89(C8a) ;140，63(C4b) ;138，05(C2) ;135，92(C4a) ;134，62(2xCH Mal) ;127， 16(C6) ;126， 09(C7) ;125， 03(C8) ;119， 93(C4) ;119， 33(C5) ;118， 39(C3); 116， 36(Cl) ;63， 86(CH2OH) ;50， 14(C9) ;35， 07 (Prop-CH2_N) ;33， 92 (Prop-CH2_CO)
ESI-MS :發現:(M+Na)+ :385. 2 ;計算值:(M+Na)+ :385 實施例7 :9-羥甲基-2-(氨基-3-馬來醯亞氨丙酸)芴-N-羥基琥珀醯亞胺基碳 酸酯的合成 將7. 3ml絕對THF(溶劑THF)中1. 8g妣啶的溶液中的1. 7ml (5. 1,1)逐滴添加 到在75ml幹THF(用鈉新蒸餾的)中0. 93g 9-羥甲基-2-(氨基-3-馬來醯亞氨丙酸)芴 (2. 6,1)和1. lg三光氣(triphosgene) (3. 6,1， 1. 4當量)的攪拌溶液中。40分鐘後， 沉澱的吡啶鹽酸鹽經塞裡塑料濾出，並通過旋轉蒸發除去THF。將獲得的油狀物溶於75ml 具有1. lgN-羥基琥珀醯亞胺(13. 6mmo1，5. 3當量)的幹四氫呋喃中。然後添加2. 6ml吡 啶溶液(8. 2mmo1)，並攪拌溶液40分鐘。用塞裡塑料將一些額外的沉澱的吡啶鹽酸鹽濾出，並通過旋轉蒸發除去THF。將獲得的油狀物溶於70ml氯仿中，並用4X40ml 0. IN HCl、 3 X 50ml5% NaHC03水溶液、接著用IX 40ml水、40ml鹽水洗滌，並用化2504充分乾燥。通過 旋轉蒸發除去氯仿。通過NMR和質譜驗證結構一致性。 力NMR(500MHz/CDCl3) S = 8， 35 (1H ; s ;NH) ; 8， 00-7， 95 (1H ;m ;H3); 7， 71-7， 65(2H ;m ;H4&H5) ;7， 50-7， 46 (1H ;d ; J = 7， 25Hz ;H8) ;7， 42-7， 36 (2H ;m ;H1&H6); 7， 30-7， 25(1H ;m ;H7) ;6， 69 (2H ;s ;2x Mal-CH) ;4， 66 (1H ;dd ; J = 10， 40Hz&5， 99Hz ; Ha-CH20) ;4，14(lH;t;J = 10， 09Hz ;Hb_CH20) ;4， 27(1H ;dd ;J = 9， 46Hz&5， 99Hz ;H9); 3，95(2H;t;J = 7， 09Hz ;Prop-CH2-N) ;2， 86 (4H ;s ;2x Succ_CH2) ;2， 80-2， 54 (2H ;m ; Prop-CH2-C = 0) 13C NMR(125MHz/CDCl3) S = 170， 53 (C = 0 Mai) ;168， 21 (C = 0 Amid);
151， 41 (C = 0碳酸酯);143，79(C2) ;141，13(C9a) ;140，94(C8a) ;137，36(C4b);
137，11(C4a) ;134，20(2xCH Mal) ;128，33(C6) ;126，82(C7) ;124，62(C8) ;120，63(C4);
120， 23(C3) ;119， 96(C5) ;116， 50(C1) ;72，67(CH20) ;46，49(C9) ;35， 62 (Prop-CH2_N);
34， 15(Prop-CH2-C0) ;25，47(2x Succ_CH2)ESI-MS(計算值):(M+H)+ :504 ; (M+Na)+ :526ESI-MS(觀察值):(M+H)+:504. 1 ; (M+Na) + :526. 1 實施例8 :9-羥甲基_2-(氨基-3-馬來醯亞氨丙酸)-7-硫代荷-N-羥基琥珀醯 亞胺碳酸酯的合成 向在60ml三氟乙酸中1.2g 9_羥甲基_2_ (氨基_3_馬來醯亞氨丙酸)芴_N_羥 基琥珀醯亞胺碳酸酯(2. lmmol)的溶液中添加7ml氯磺酸。30分鐘後，將反應混合物冷卻 到4°C ，並添加350ml冷的二乙醚。將沉積產物濾出，並用二乙醚洗滌兩次，並且在真空中幹 燥。 通過質譜驗證結構一致性。
ESI-MS(觀察值)(M+H)+:583. 9
ESI-MS(計算值)(M+H)+:583 由2， 7- 二氨基芴開始合成MAL2-Fmoc-0su在實施例9中被說明。 實施例9 :9-羥甲基-2，7-二-(氨基-3-馬來醯亞氨丙酸)芴-N-羥基琥珀醯亞
胺碳酸酯的合成
formula see original document page 18 在如實施例1-8所述的條件下製備9-羥甲基-2， 7- 二 _(氨基-3-馬來醯亞氨 丙酸)芴-N-羥基琥珀醯亞胺碳酸酯。按照Albericio等所述的方法(Synth Commun，31， 25-32(2001))，2，7-二氨基芴中的氨基被B0C20保護。然後，通過二異丙醯胺鋰(LDA)與 甲酸乙酯的反應，在9位引入甲醯基。用硼氫化鈉將獲得的醛類還原成相應的醇，從而形 成9-羥甲基-2，7-二-(Boc-氨基)芴。隨後用CH3CN中的2N HC1斷開BOC保護基，從而 獲得9-羥甲基-2， 7- 二氨基芴。然後按照實施例5所述的方法與叔丁基二甲基甲矽烷基 氯化物反應來保護011基，從而形成叔丁基二甲基甲矽烷氧基-9-甲基-2，7-二氨基芴。然 後，在存在N， N' -二環己基碳二亞胺和羥基苯並三唑下，進行游離氨基與馬來醯亞氨丙酸 的反應，從而獲得了叔丁基二甲基甲矽烷氧基_9-甲基_2， 7- 二 -(氨基-3-馬來醯亞氨丙 酸)芴。在用三氟化硼醚化物對9位的0H基去保護之後，形成了9-羥甲基-2，7-二-(氨 基-3-馬來醯亞氨丙酸)芴。最後，進行與三光氣和N-羥基琥珀醯亞胺的反應，從而製得 9-羥甲基-2， 7- 二 -(氨基-3-馬來醯亞氨丙酸)芴-N-羥基琥珀醯亞胺碳酸酯。
權利要求
一種製備根據通式1的化合物的方法(通式1)其中PG為保護基，位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一個與自由基Y結合；Y是包含N-馬來醯亞胺基部分的自由基；以及可用位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一個可選地與自由基X結合；X為-SO3-R3；R3獨立地選自於由氫、(C1-C8)-烷基和(C1-C8)-烷基-R4構成的組；以及R4為聚合物；所述方法包括使通式2的化合物中的9-羥甲基與引入PG的保護劑反應、以及隨後將所述化合物與N-馬來醯亞胺衍生物反應的步驟(通式2)其中位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一個與胺結合。F2008800218767C00011.tif,F2008800218767C00012.tif
2. 如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述保護劑為甲矽烷基滷化物。
3. 如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述甲矽烷基滷化物為叔丁基二甲基甲矽烷基氯化物。
4. 如權利要求3所述的方法，其特徵在於，與叔丁基二甲基甲矽烷基氯化物的反應在DMF中與咪唑一起進行。
5. 如權利要求4所述的方法，其特徵在於，所述N-馬來醯亞胺衍生物為馬來醯亞氨烷酸。
6. 如權利要求l所述的方法，其特徵在於，所述PG為甲矽烷基衍生物。
7. 如權利要求6所述的方法，其特徵在於，所述PG為叔丁基二甲基甲矽烷基。
8. 如權利要求7所述的方法，其特徵在於，可用位置1 、2、3、4、5、6、7或8中的至少一個可選地與自由基X結合。
9. 如權利要求7或8所述的方法，其特徵在於，所述Y為 2-一N其中&在每次出現時獨立地為(C「Cs)-烷基，以及尺2獨立地選 自 於 由-C(0)NR-、-C(0)NR-(C「C8)-烷基-NR-、-NRC (0)-和-NRC (0) - (C「C8)-烷基-NR構成的組，其中R獨立地為氫或(C「C8)-烷基。
10. —種通式1的化合物(通式1)其中PG為保護基，並且位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一個與自由基Y結合；可用位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一個可選地與自由基X結合；Y是包含N-馬來醯亞胺基部分的自由基；X為-S03-R3 ;R3獨立地選自於由氫、(C「C8)-烷基和(C「C8)-烷基-RA構成的組。
11.如權利要求10所述的化合物，其特徵在於，所述PG為甲矽烷基，Y為Ri在每次出現時獨立地為(C「Cs)-烷基，以及尺2獨立地選 自 於 由-C(0)NR-、-C(0)NR-(C「C8)-烷基-NR-、-NRC (0)-和-NRC (0) - (C「C8)-烷基-NR構成的組，其中R獨立地為氫或(C「C8)-烷基。
12.如權利要求11所述的化合物，其特徵在於，所述PG為叔丁基二甲基甲矽烷基。
全文摘要
提供了一種新穎的用於製備Fmoc(9H-芴-9-基甲氧羰基)化合物的工藝，其中用於芴環系中的9-羥甲基的保護基被使用。這些化合物可用於蛋白質和多肽藥物的修飾。
文檔編號C07D207/448GK101754951SQ200880021876
公開日2010年6月23日 申請日期2008年6月25日 優先權日2007年6月26日
發明者于爾根·西克曼, 克裡斯蒂安·諾埃, 格哈德·施託伊貝爾, 皮特·圖雷切克 申請人:巴克斯特國際公司;巴克斯特保健股份有限公司