ABO、RhD血型定型試劑卡及其製備方法及其採用的抗體稀釋液的製作方法

2023-05-23 15:23:51

專利名稱：ABO、RhD血型定型試劑卡及其製備方法及其採用的抗體稀釋液的製作方法
技術領域：
本發明涉及血型定型測試領域，特別涉及ー種ABO、RhD血型定型試劑卡及其製備 方法及其採用的抗體稀釋液。
背景技術：
在臨床治療中，輸血是搶救傷病員生命的重要手段和措施。為保證輸血的安全，選 用可靠的實驗方法，採用特異性、靈敏度高的實驗技術是非常重要的。血型是人類血液的主要特徵之一，表達了血液各種成份抗原的遺傳性狀，其中ABO 血型及I^hD血型成為輸血和器官移植中重要的血型系統。早在1907年，Hoktoen就首先提出了血型檢定對輸血治療的重要性，Ottenberg等 在1908年進ー步提出了供受體血液交叉配合試驗的概念，更強調血型檢定對臨床輸血的 深遠意義。ABO血型不相容輸血，幾乎毫無例外要發生溶血性輸血反應症狀瀰漫性血管內 凝血、腎衰以致死亡。因此，ABO血型的準確定型至關重要。2000年衛生部頒發的《臨床輸血技術規範》(衛醫發[2000] 184號)第四章第十五 條明確規定「輸血科(血庫)要逐項核對輸血申請單、受血者和供血者血樣，複查受血者 和供血者ABO血型(正反定型)，並常規檢查患者的Mi (D)血型，正確無誤時可進行交叉配 血。」英國藥典中特別強調「檢測ABO血型要檢測紅細胞抗原和血清或血漿中抗體兩方面。」1990年，Lapierre發表了微柱凝膠免疫實驗技術，這是人類紅細胞血型學發展的 裡程碑。美國輸血學會《輸血技術手冊》第12版(1996年)起就已經將該技術列入紅細胞 血型檢測的常規技術中。如今，在世界先進國家，該新技術正在取代應用多年的血凝試驗， 應用在紅細胞血型血清學臨床常規檢驗工作中。其一般採用以下步驟進行製備步驟一、凝膠懸浮介質的配置所述凝膠懸浮介質配方如下對羥基苯甲酸甲酯 (5. 5-6. 5) X 10_4g/ml對羥基苯甲酸丙酯 (1. 0-1. 5) X 10-4g/ml甘氨酸(1. 6-1. 9) X10-2g/ml氯化鈉(1. 7-1. 8) X 10-3g/ml磷酸ニ氫鉀(2. 1-2. 4) X 10-4g/ml磷酸氫ニ鈉(4. 6-4. 8) X 10-4g/ml牛血清蛋白彡4%以上試劑用蒸餾水溶解，調pH值為6. 6-6. 8 ；步驟ニ、凝膠製備選用聚丙烯醯胺葡聚糖凝膠或葡聚糖凝膠，用步驟ー配製的凝膠懸浮介質或生理 鹽水浸泡後再用該凝膠懸浮介質洗滌3-5次；步驟三、凝膠的配置
將步驟二製備的凝膠與各抗體均按照體積比2 1-6 1的比例混合，分別配置成含有IgM性質的單克隆抗A抗體的凝膠和含有IgM性質的單克隆抗B抗體的凝膠；將步驟二製備的凝膠與步驟一配製的凝膠懸浮介質或生理鹽水按照體積比2 1-6 1的比例混合，配製成含有凝膠懸浮介質或生理鹽水的凝膠；步驟四、分裝按照每管2218微升的量，將步驟四配製的各凝膠分別加入到一空白卡片的六個微柱管中，形成具有6各微柱凝膠管的ABO血型定型檢測試劑卡。在國內外，已經有部分廠家按照上述方法生產用於ABO血型定型和IihD定型的 ABOAhD血型定型檢測試劑卡，但是存在以下兩點不足一方面其採用的凝膠為葡聚糖凝膠，顆粒較大，凝膠之間的縫隙較大，從而使得進行ABO血型定型的靈敏度降低；另一方面懸浮凝膠的介質為大多為生理鹽水或低離子強度溶液，不能有效保護抗體的穩定性，影響產品正定型的準確性。此兩個缺點降低了 ABO血型定型的準確性，容易導致ABO血型定型的錯誤，此外，已有的ABO血型定型卡僅進行ABO正定型，不進行ABO反定型，使用不方便。

發明內容
為解決上述問題，本發明的目的在於克服上述不足，提供一種靈敏度高、特異性好、質量穩定、保質期長和能同時進行正反定型的ABO、RhD血型定型試劑卡及其製備方法及其採用的抗體稀釋液。為達到上述目的，本發明的技術方案是一種ABO、MiD血型定型試劑卡的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟步驟一、抗體稀釋液的配製，所述抗體稀釋液配方如下甘氨酸10-20g/L，磷酸氫二鈉0. 30-0. 50g/L,磷酸二氫鈉0. 30-0. 50g/L,牛血清白蛋白:12_20g/L，吐溫 80 0. 005-0. 015g/L，注射用水加至IL ；步驟二 凝膠前處理a.溼熱滅菌選用丙烯葡聚糖凝膠，按照質量體積比1 1.2-1 2加入生理鹽水懸浮凝膠，進行溼熱滅菌，溼熱滅菌後備用；b.洗膠溼熱滅菌後凝膠按照質量體積比1 1.2-1 2加入所述抗體稀釋液， 懸浮凝膠，凝膠靜置時間不得少於6小時，以便凝膠自然沉降結實，倒去上清液，再加入質量體積比1 1.2-1 2的抗體稀釋液，懸浮凝膠，如此重複至少2次，除去凝膠保存液成份、凝膠破損碎片，收集得到顆粒大小均勻的凝膠；步驟三配料按照質量體積比1.3 1-1.7 1配製成IgM性質的單克隆抗A凝膠、含有IgM 性質的單克隆抗B凝膠和含有IgM性質的單克隆抗D凝膠；以及不含抗體的抗體稀釋液的的凝膠，即中性膠；步驟四分裝將所述抗A凝膠、抗B凝膠、抗D凝膠、中性膠分別加入到微柱凝膠管中，前三管為抗A凝膠、抗B凝膠、抗D凝膠，後三管為中性膠。步驟五封口將分裝好的微柱凝膠卡的上部微柱凝膠管口進行封口處理。
優選的，所述抗體稀釋液配方還包括以下組分氯化鈉1.5-2. Og/L，疊氮鈉:0. 005-0· 015g/L。優選的，所述分裝是在微柱凝膠管中按照每管25-30ul的灌裝量，分別灌注所述抗A凝膠、抗B凝膠、抗D凝膠和中性膠。優選的，所述封口是用鋁箔對微柱凝膠管口進行熱力塑封。優選的，所述封口步驟後增加步驟六貼籤，即封口完成後，在微柱凝膠管上貼籤， 形成ABO、RhD血型定型試劑卡。優選的，在步驟六後增加步驟七封裝，即對ABO、RhD血型定型試劑卡進行無菌塑封和裝盒。一種用於製備權利要求1或2所述的ABO、RhD血型定型試劑卡的抗體稀釋液，其特徵在於，所述抗體稀釋液配方如下甘氨酸10-20g/L,磷酸氫二鈉0.30-0. 50g/L,磷酸二氫鈉0. 30-0. 50g/L,牛血清白蛋白:12-20g/L，吐溫80 0. 005-0. 015g/L，注射用水加至IL0優選的，所述抗體稀釋液還包括以下組分氯化鈉1.5-2. Og/L，疊氮鈉:0. 005-0· 015g/L。一種ABOjhD血型定型試劑卡，其特徵在於，所述ABOjhD血型定型試劑卡採用權利要求1或2所述的ABO、RhD血型定型試劑卡的製備方法製備。採用本技術方案的有益效果是通過磷酸鈉鹽緩衝體系維持體系的PH值，添加了吐溫80，去除凝膠保存液成份，並且使得紅細胞通過凝膠間隙時獲得合適的潤滑能力，使無凝集的紅細胞具有完全通過凝膠顆粒間隙的能力，而凝集的紅細胞則不能通過。通過添加牛血清白蛋白保護抗體的效價，消除凝膠的非特異性吸附。採用疊氮鈉降低微生物汙染，延長產品的保存期，消除微生物汙染帶來的血型定型錯誤。並在製備過程中還需要對凝膠進行篩選，對篩選獲得的凝膠原料需要進行溶脹、溼熱滅菌、洗滌，消除凝膠中含有的微生物， 去除凝膠保存液成份以及破損的凝膠顆粒，大大提高了產品的質量。
具體實施例方式下面結合附圖
和具體實施方式
對本發明作進一步詳細的說明。實施例1，一種ABO、RhD血型定型試劑卡的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟步驟一、抗體稀釋液的配製，所述抗體稀釋液配方如下氯化鈉1. 5g/L，甘氨酸:20g/L，磷酸氫二鈉:0. 30g/L，磷酸二氫鈉:0. 50g/L，牛血清白蛋白12g/L，疊氮鈉:0. 015g/L，吐溫80 :0. 005g/L，注射用水加至IL ；步驟二 凝膠前處理a.溼熱滅菌選用丙烯葡聚糖凝膠，按照質量體積比1 1.2加入生理鹽水懸浮凝膠，進行溼熱滅菌，溼熱滅菌後備用；b.洗膠溼熱滅菌後凝膠按照質量體積比1 2加入所述抗體稀釋液，懸浮凝膠， 凝膠靜置時間為6小時，以便凝膠自然沉降結實，倒去上清液，再加入質量體積比1 1.2 的抗體稀釋液，懸浮凝膠，如此重複2次，除去凝膠保存液成份、凝膠破損碎片，收集得到顆粒大小均勻的凝膠；
步驟三配料按照質量體積比1.3:1配製成I gM性質的單克隆抗A凝膠、含有IgM性質的單克隆抗B凝膠和含有IgM性質的單克隆抗D凝膠；以及不含抗體的抗體稀釋液的的凝膠，即中性膠；步驟四分裝按照每管30u 1的灌裝量，將所述抗A凝膠、抗B凝膠、抗D凝膠、中性膠分別加入到微柱凝膠管中，前三管為抗A凝膠、抗B凝膠、抗D凝膠，後三管為中性膠。步驟五封口將分裝好的微柱凝膠卡用鋁箔對微柱凝膠管口進行熱力塑封。步驟六貼籤，即封口完成後，在微柱凝膠管上貼籤，形成ABO、IihD血型定型試劑卡。步驟七封裝，即對ABO、RhD血型定型試劑卡進行無菌塑封和裝盒。實施例2，一種ABO、RhD血型定型試劑卡的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟步驟一、抗體稀釋液的配製，所述抗體稀釋液配方如下氯化鈉:2. Og/L，甘氨酸10g/L，磷酸氫二鈉:0. 50g/L，磷酸二氫鈉:0. 30g/L，牛血清白蛋白:20g/L，疊氮鈉0. 005g/L，吐溫80 :0. 015g/L，注射用水加至IL ；步驟二 凝膠前處理a.溼熱滅菌選用丙烯葡聚糖凝膠，按照質量體積比1 2加入生理鹽水懸浮凝膠，進行溼熱滅菌，溼熱滅菌後備用；b.洗膠溼熱滅菌後凝膠按照質量體積比1 1.2加入所述抗體稀釋液，懸浮凝膠，凝膠靜置時間為7小時，以便凝膠自然沉降結實，倒去上清液，再加入質量體積比1 2 的抗體稀釋液，懸浮凝膠，如此重複3次，除去凝膠保存液成份、凝膠破損碎片，收集得到顆粒大小均勻的凝膠；步驟三配料按照質量體積比1.7 1配製成IgM性質的單克隆抗A凝膠、含有IgM性質的單克隆抗B凝膠和含有IgM性質的單克隆抗D凝膠；以及不含抗體的抗體稀釋液的的凝膠，即中性膠；步驟四分裝按照每管25ul的灌裝量，將所述抗A凝膠、抗B凝膠、抗D凝膠、中性膠分別加入到微柱凝膠管中，前三管為抗A凝膠、抗B凝膠、抗D凝膠，後三管為中性膠。步驟五封口將分裝好的微柱凝膠卡用鋁箔對微柱凝膠管口進行熱力塑封。步驟六貼籤，即封口完成後，在微柱凝膠管上貼籤，形成ABO、IihD血型定型試劑卡。步驟七封裝，即對ABO、RhD血型定型試劑卡進行無菌塑封和裝盒。實施例3，一種ABO、RhD血型定型試劑卡的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟步驟一、抗體稀釋液的配製，所述抗體稀釋液配方如下氯化鈉1. 8g/L，甘氨酸15g/L，磷酸氫二鈉0. 40g/L，磷酸二氫鈉0. 45g/L，牛血清白蛋白17g/L，疊氮鈉 0. 010g/L，吐溫80 :0. 011g/L，注射用水加至IL ；步驟二 凝膠前處理a.溼熱滅菌選用丙烯葡聚糖凝膠，按照質量體積比1 1.8加入生理鹽水懸浮凝膠，進行溼熱滅菌，溼熱滅菌後備用；b.洗膠溼熱滅菌後凝膠按照質量體積比1 1.7加入所述抗體稀釋液，懸浮凝膠，凝膠靜置時間為8小時，以便凝膠自然沉降結實，倒去上清液，再加入質量體積比 1 1.6的抗體稀釋液，懸浮凝膠，如此重複至少2次，除去凝膠保存液成份、凝膠破損碎片， 收集得到顆粒大小均勻的凝膠；步驟三配料按照質量體積比1.5 1配製成IgM性質的單克隆抗A凝膠、含有IgM性質的單克隆抗B凝膠和含有IgM性質的單克隆抗D凝膠；以及不含抗體的抗體稀釋液的的凝膠，即中性膠；步驟四分裝按照每管^ul的灌裝量，將所述抗A凝膠、抗B凝膠、抗D凝膠、中性膠分別加入到微柱凝膠管中，前三管為抗A凝膠、抗B凝膠、抗D凝膠，後三管為中性膠。步驟五封口將分裝好的微柱凝膠卡用鋁箔對微柱凝膠管口進行熱力塑封。步驟六貼籤，即封口完成後，在微柱凝膠管上貼籤，形成ABO、IihD血型定型試劑卡。步驟七封裝，即對ABO、RhD血型定型試劑卡進行無菌塑封和裝盒。實施例4，一種ABO、IihD血型定型試劑卡，由一張聚丙烯塑料透明卡片並排六支微柱管，從左向右第一支至第三支微管分別充填抗A、抗B、抗D (單克隆抗體IgM試劑)凝膠，稱之為特異性膠，檢測人紅細胞ABO、RhD抗原，第四支至第六支微管充填不含抗體的凝膠，稱之為中性膠，第四支微管作為陰性對照管；第五支和第六支微管作為ABO血型反定型管。採用實施例1、實施例2或實施例3所述的方法製備而成。實施例5，一種用於製備實施例4所述的ABO、RhD血型定型試劑卡的抗體稀釋液，配方如下氯化鈉1. 5g/L，甘氨酸:20g/L，磷酸氫二鈉:0. 30g/L，磷酸二氫鈉:0. 50g/L，牛血清白蛋白12g/L，疊氮鈉:0. 015g/L，吐溫80 :0. 005g/L，注射用水加至IL0實施例6，一種用於製備實施例4所述的ABO、RhD血型定型試劑卡的抗體稀釋液，配方如下氯化鈉:2. Og/L，甘氨酸10g/L，磷酸氫二鈉:0. 50g/L，磷酸二氫鈉:0. 30g/L，牛血清白蛋白:20g/L，疊氮鈉0. 005g/L，吐溫80 :0. 015g/L，注射用水加至IL0實施例7，一種用於製備實施例4所述的ABO、RhD血型定型試劑卡的抗體稀釋液，配方如下氯化鈉1.8g/L，甘氨酸15g/L，磷酸氫二鈉:0. 40g/L，磷酸二氫鈉:0. 45g/L，牛血清白蛋白:17g/L，疊氮鈉:0. 010g/L，吐溫80 :0. 011g/L，注射用水加至IL0上述實施例中所述的抗體稀釋液，其配方各組分的配比範圍為氯化鈉1.5-2. Og/L,甘氨酸:10-20g/L,磷酸氫二鈉0. 30-0. 50g/L,磷酸二氫鈉0. 30-0. 50g/L,牛血清白蛋白:12-20g/L,疊氮鈉0. 005-0. 015g/L,吐溫 80 0. 005-0. 015g/L，注射用水加至IL0採用本技術方案的有益效果是通過磷酸鈉鹽緩衝體系維持體系的PH值，添加了吐溫80，去除凝膠保存液成份，並且使得紅細胞通過凝膠間隙時獲得合適的潤滑能力，使無凝集的紅細胞具有完全通過凝膠顆粒間隙的能力，而凝集的紅細胞則不能通過。通過添加牛血清白蛋白保護抗體的效價，消除凝膠的非特異性吸附。採用疊氮鈉降低微生物汙染，延長產品的保存期，消除微生物汙染帶來的血型定型錯誤。並在製備過程中還需要對凝膠進行篩選，對篩選獲得的凝膠原料需要進行溶脹、溼熱滅菌、洗滌，消除凝膠中含有的微生物， 去除凝膠保存液成份以及破損的凝膠顆粒，大大提高了產品的質量。以上所述的僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對於本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明創造構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬於本發明的保護範圍。
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權利要求
1.一種ABO、IihD血型定型試劑卡的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟步驟一、抗體稀釋液的配製，所述抗體稀釋液配方如下甘氨酸:10_20g/L，磷酸氫二鈉0. 30-0. 50g/L，磷酸二氫鈉:0. 30-0. 50g/L，牛血清白蛋白:12-20g/L，吐溫 80 0. 005-0. 015g/L，注射用水加至 IL ；步驟二 凝膠前處理a.溼熱滅菌選用丙烯葡聚糖凝膠，按照質量體積比1 1.2-1 2加入生理鹽水懸浮凝膠，進行溼熱滅菌，溼熱滅菌後備用；b.洗膠溼熱滅菌後凝膠按照質量體積比1 1.2-1 2加入所述抗體稀釋液，懸浮凝膠，凝膠靜置時間不得少於6小時，以便凝膠自然沉降結實，倒去上清液，再加入質量體積比1 1.2-1 2的抗體稀釋液，懸浮凝膠，如此重複至少2次，除去凝膠保存液成份、凝膠破損碎片，收集得到顆粒大小均勻的凝膠；步驟三配料按照質量體積比1.3 1-1.7 1配製成IgM性質的單克隆抗A凝膠、含有IgM性質的單克隆抗B凝膠和含有IgM性質的單克隆抗D凝膠；以及不含抗體的抗體稀釋液的的凝膠，即中性膠；步驟四分裝將所述抗A凝膠、抗B凝膠、抗D凝膠、中性膠分別加入到微柱凝膠管中，前三管為抗A 凝膠、抗B凝膠、抗D凝膠，後三管為中性膠。步驟五封口將分裝好的微柱凝膠卡的上部微柱凝膠管口進行封口處理。
2.根據權利要求1所述的ABO、RhD血型定型試劑卡的製備方法，其特徵在於，所述抗體稀釋液配方還包括以下組分氯化鈉1. 5-2. Og/L，疊氮鈉0. 005-0. 015g/L。
3.根據權利要求1或2所述的ABO、RhD血型定型試劑卡的製備方法，其特徵在於，所述分裝是在微柱凝膠管中按照每管25-30ul的灌裝量，分別灌注所述抗A凝膠、抗B凝膠、 抗D凝膠和中性膠。
4.根據權利要求3所述的ABO、RhD血型定型試劑卡的製備方法，其特徵在於，所述封口是用鋁箔對微柱凝膠管口進行熱力塑封。
5.根據權利要求4所述的ABO、MiD血型定型試劑卡的製備方法，其特徵在於，所述封口步驟後增加步驟六貼籤，即封口完成後，在微柱凝膠管上貼籤，形成ABO、IihD血型定型試齊U卡。
6.根據權利要求4所述的ABO、MiD血型定型試劑卡的製備方法，其特徵在於，在步驟六後增加步驟七封裝，即對ABO、RhD血型定型試劑卡進行無菌塑封和裝盒。
7.一種用於製備權利要求1或2所述的ABOjhD血型定型試劑卡的抗體稀釋液，其特徵在於，所述抗體稀釋液配方如下甘氨酸:10_20g/L，磷酸氫二鈉0. 30-0. 50g/L，磷酸二氫鈉:0. 30-0. 50g/L，牛血清白蛋白:12-20g/L，吐溫 80 0. 005-0. 015g/L，注射用水加至 IL0
8.根據權利要求7所述的抗體稀釋液，其特徵在於，所述抗體稀釋液還包括以下組分氯化鈉1. 5-2. Og/L，疊氮鈉0. 005-0. 015g/L。
9.一種ABO、RhD血型定型試劑卡，其特徵在於，所述ABO、RhD血型定型試劑卡採用權利要求1或2所述的ABO、RhD血型定型試劑卡的製備方法製備。
全文摘要
本發明公開了一種ABO、RhD血型定型試劑卡及其製備方法及其採用的抗體稀釋液，通過磷酸鈉鹽緩衝體系維持體系的pH值，添加了吐溫80，去除凝膠保存液成份，並且使得紅細胞通過凝膠間隙時獲得合適的潤滑能力，使無凝集的紅細胞具有完全通過凝膠顆粒間隙的能力，而凝集的紅細胞則不能通過。通過添加牛血清白蛋白保護抗體的效價，消除凝膠的非特異性吸附。採用疊氮鈉降低微生物汙染，延長產品的保存期，消除微生物汙染帶來的血型定型錯誤。並在製備過程中還需要對凝膠進行篩選，對篩選獲得的凝膠原料需要進行溶脹、溼熱滅菌、洗滌，消除凝膠中含有的微生物，去除凝膠保存液成份以及破損的凝膠顆粒，大大提高了產品的質量。
文檔編號G01N33/531GK102445550SQ20101050046
公開日2012年5月9日 申請日期2010年10月9日 優先權日2010年10月9日
發明者費敏 申請人:蘇州蘇大賽爾免疫生物技術有限公司