新型化合物的製作方法

2023-05-23 14:00:46 2

專利名稱：新型化合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及噻吩羧醯胺衍生物，製備其過程中所用的方法和中間體，含有它們的藥物組合物及其在治療方面的用途。
背景技術：
NF-κB(核因子κB)家族由轉錄因子的Rel家族的同源和異源二聚體組成。這些轉錄因子的關鍵作用在於誘導和協調促炎症反應基因的廣譜表達，促炎症反應基因包括細胞因子類、趨化學因子、幹擾素類、MHC蛋白、生長因子和細胞粘附分子(參見文獻Verma等，Genes Dev.92723-35，1995；Siebenlist等，Ann.Rev.Cell.Biol.10405-455，1994；Bauerle和Henkel，Ann.Rev.Immunol.，12141-179，1994；Barnes和Karin，New Engl.J.Med.，3361066-1071，1997)。
最常見的Rel家族二聚物複合體由p50 NFkB和p65 RelA組成(Baeuerle和Baltimore，Cell 53211-217，1988；Baeuerle和Baltimore，Genes Dev.31689-1698，1989)。在靜息狀況下，NF-κB二聚物被抑制性蛋白IκB家族成員保留於細胞質中(Beg等，Genes Dev.，72064-2070，1993；Gilmore andMorin，Trends Genet.9427-433，1993；Haskil等，Cell 651281-1289，1991)。然而，當大量細胞因子或其它的外部刺激導致細胞活化時，IκB蛋白在其兩個關鍵絲氨酸殘基上發生磷酸化作用(Traenckner等，EMBO J.，142876，1995)並且然後被泛素化作用以及發生被蛋白酶體-介導的降解(Chen，Z.J.等，Genes and Dev.91586-1597，1995；Scherer，D.C.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9211259-11263，1996；Alkalay，I.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA9210599-10603，1995)。釋放的NF-κB然後可轉位到細胞核並激活基因轉錄(Beg等，Genes Dev.，61899-1913，1992)。
已有大量的外部刺激顯示出能激活NF-κB(Baeuerle，P.A.，以及Baichwal，V.R.，Adv.Immunol.，65111-136，1997)。儘管大多數的NF-κB激活因子可導致IκB磷酸化，但很清楚有多個途徑可得到此關鍵結果。受體-介導的NF-κB激活作用依賴於受體和銜接子/信號分子(例如，TRADD、RIP、TRAF、MyD88)和相關激酶(IRAK、NIK)之間的特異性相互作用(Song等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 949792-9796，1997；Natoli等，JBC 27226079-26082，1997)。環境應激如紫外線和γ-射線似乎可通過另一種較少定義的機制刺激NF-κB。
最近的出版物已部分地闡明了NF-κB的激活過程。已經識別出了三種調節特異性IκB/NF-κB相互作用的關鍵酶NF-κB誘導激酶(NIK)(Boldin等，Cell 85803-815，1996)、IκB激酶-1(IKK-1)(Didonato等，Nature 388548，1997；Regnier等，Cell 90373 1997)和IκB激酶-2(IKK-2)(Woronicz等，Science278866，1997；Zandi等，Cell 91243，1997)。
NIK似乎代表由腫瘤壞死因子和白介素-1所引發的NF-κB信號級聯的通用調節因子，並是kB磷酸化的強效誘導因子。然而MK不能直接使IκB磷酸化。
IKK-1和IKK-2被認為直接位於NIK的下遊並能直接使所有的三種IκB亞型磷酸化。IKK-1和IKK-2在胺基酸水平上有52％是相同的但表現出相似的底物特異性；然而，表現出來的酶活性是不同IKK-2比IKK-1強數倍。誘變研究以及表達數據，暗示IKK-1同IKK-2能通過其C-末端亮氨酸拉鏈基列來形成同源和異源二聚體，以異源二聚體的形式為優選(Mercurio等，Mol.Cell Biol.，191526，1999；Zandi等，Science；2811360，1998；Lee等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 959319，1998)。
MK、IKK-1和IKK-2都是絲氨酸/蘇氨酸激酶。最近的資料顯示酪氨酸激酶在調節NF-κB的激活作用方面也發揮作用。許多研究表明TNF-α誘導的NF-κB激活作用可被蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)和酪氨酸激酶調節(Amer等，JBC 27329417-29423，1998；Hu等，JBC 27333561-33565，1998；Kaekawa等，Biochem.J.337179-184，1999；Singh等，JBC 271 31049-31054，1996)。這些酶的作用機理似乎在於調節IκB的磷酸化狀態。例如，PTP1B和未確證的酪氨酸激酶似乎直接控制IκB-α上的賴氨酸殘基(K42)的磷酸化，其隨後對鄰近絲氨酸殘基的可及性有重要的影響，此絲氨酸殘基為通過IKK進行磷酸化作用的靶。
一些小組研究表明IKK-1和IKK-2與其他蛋白一起形成了「信號傳導體(signalosome)」結構的一部分，所述其他蛋白包括IKAP(Cohen等，Nature395292-296，1998；Rothwarf等，Nature 395297-300，1998)、MEKK-1、推定的MAP激酶磷酸酶(Lee等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9593 19-9324，1998)以及NIK和IκB。目前不但得到的資料暗示儘管IKK-1和IKK-2都同NIK相結合，但它們卻被不同地活化，並且因而可能代表了激活NF-κB的信號譜的重要整合點。重要地，已經發現MEKK-1(推定的信號傳導體和紫外線的靶，LPS誘導信號分子和小GTP酶成分之一)可激活IKK-2但不能激活IKK-1。類似地，IKK-1的NIK磷酸化導致IKK-1活性的顯著增加但對IKK-2隻有很小的影響(參見文獻Mercurio，F.以及Manning，A.M.，Current Opinionin Cell Biolo gy，11226-232，1999)。
NF-κB活化的抑制可能在炎性疾病治療方面有廣泛的用途。
不斷地有證據表明NF-κB信號傳導在癌症和轉移的發展方面起了重要的作用。已有記載表明在大量腫瘤型和腫瘤細胞系中有c-Rel、NF-κB2或IκBα的異常表達，並且目前有資料顯示通過IKK2的組成性NF-κB信號傳導在大量的腫瘤細胞系中發生。此活性與生長因子信號傳導例如自分泌環的建立的多種上遊缺陷相聯繫，或癌基因產物如Ras、AKT、Her2的出現有關，後者涉及IKK複合體的活化。組成型NF-κB活性被認為有助於腫瘤發生，其通過一系列抑制細胞凋亡的基因如A1/Bfi-1、IEX-1、XIAP的激活作用，導致細胞死亡途徑的抑制，及促進細胞生長的細胞周期蛋白D1的轉錄上調。其它資料顯示此途徑也可能涉及細胞黏附和細胞表面蛋白酶的調節。這一結果暗示在轉移的發展方面NF-κB活性可能發揮其它的作用。NF-κB活性介入腫瘤發生的有效證據包括腫瘤細胞對修飾形式的IκBα(超阻遏蛋白IκBα)表達的體外和體內抑制。
除了在許多腫瘤型中觀察到組成性NF-κB信號傳導以外，已有報導指出NF-κB也可響應於某些類型的化學療法而被活化。通過超阻遏蛋白型IκBα的表達對NF-κB的活化抑制，結合化學療法治療，已顯示出可提高化學療法在異種移植模型中的抗腫瘤效果。因而NF-κB活性也與可誘導化療抗性有關。

發明內容
根據本發明，提供了式(I)化合物和其可藥用鹽，
其中R1代表NH2或R1代表甲基，任選被一個或多個獨立地選自C1-C4烷基、C3-C6環烷基、滷素、羥基、C1-C4烷氧基、S(O)vCH3和NR4R5的基團取代；X代表O或S；R2代表氫、滷素、氰基、硝基、-NR6R7、-CONR6R7、-COOR6、-NR6COR7、-S(O)mR6、-SO2NR6R7、-NR6SO2R7、C1-C2烷基、三氟甲基、C2-C3鏈烯基、C2-C3炔基、三氟甲氧基、C1-C2烷氧基或C1-C2鏈烷醯基；A代表稠合二環體系，其中一個環為苯環或含有1～3個獨立地選自O、N和S雜原子的5～7元芳香雜環；並且另一個環為稠合苯環或含有1～3個獨立地選自O、N和S雜原子的稠合5～7元芳香雜環；或任選地包含1～3個分別選自氧、氮和硫雜原子的稠合5～7元飽和環；該稠合二環體系可任選地被一個或多個獨立地選自滷素、氰基、硝基、-NR8COR9、-S(O)sR8、-SO2NR8R9、-NR8SO2R9和C1-C6烷基的取代基取代；n代表0、1或2的整數；並且當n代表2時，每個R3基團可以被獨立地加以選擇；R3代表-W-Y-Z基團，其中W代表O、S(O)r，、NR13、CH2、-CH2-O-或化學鍵；Y代表化學鍵或Y代表基團-(CH2)p-X-(CH2)q-，其中p和q獨立地代表0、1或2的整數；並且X代表O、-CO-或CR14R15；R14和R15獨立地代表H、CH3和F；或R14代表H或CH3並且R15代表羥基或OCH3；或基團CR14R15一起代表C3-C6環烷基；Z代表
(a)苯環或含有1～3個獨立地選自O、N和S雜原子的5-或6-元芳香雜環；該苯基或芳香雜環任選被一個或多個取代基取代，所述取代基獨立地選自滷素、氰基、-NR16R17、-CONR16R17、-COOR16、-COR16-NR16COR17、-S(O)uR16、-SO2NR16R17、-NR16SO2R17、羥基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；該烷基或烷氧基任選進一步被一個或多個選自滷素、氰基、羥基、C1-C4烷氧基和NR18R19的基團取代；或(b)任選地含有1或2個獨立地選自O、N和S雜原子的飽和3～7元環，並且任選地包含羰基；該飽和環任選被一個或多個取代基取代，所述取代基獨立地選自滷素、氰基、-NR16R17、-CONR16R17、-COOR16、-COR16、-NR16COR17、-S(O)uR16、-SO2NR16R17、-NR16SO2R17、羥基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；該烷基或烷氧基任選進一步被一個或多個選自滷素、氰基、羥基、C1-C4烷氧基和NR18R19的基團取代；或(c)Z代表羥基、C1-C6烷氧基、CF3、CHF2、CH2F或NR20R21，其中R20和R21獨立地為氫或任選地被C1-C4烷氧基取代的C1-C6烷基；R4和R5獨立地代表H或C1-C4烷基；或基團NR4R5代表5-或6-元飽和的氮雜環，任選地還含有O、S或NR23基團；其中R23為氫或C1-C4烷基；R6和R7獨立地代表H或C1-C2烷基；R8和R9獨立地代表H或C1-C6烷基；R13代表H或C1-C4烷基；R16和R17獨立地代表H或C1-C6烷基；或基團NR16R17代表5-或6-元飽和的氮雜環，任選地還含有O、S或NR24基團；其中R24為氫或C1-C6烷基；R18和R19獨立地代表H或C1-C4烷基；或基團NR18R19代表5或6元飽和的氮雜環，任選地還含有O、S或NR25基團；其中R25為氫或C1-C4烷基；m、r、s、u和v獨立地代表0、1或2的整數。
某些式(I)化合物能以立體異構的形式存在。應當理解此發明包含式(I)化合物的所有幾何異構體和光學異構體以及包括其外消旋體的混合物。互變異構體及其混合物也構成了本發明的一方面。
在一個實施方案中，X代表氧。
在另一個實施方案中，R1代表CH3或NH2。在一個更特定的實施方案中，R1代表NH2。
式(I)化合物和其可藥用鹽的優點在於它們是酶IKK2的抑制劑。
本發明還提供了一種製備式(I)化合物或其可藥用鹽、對映異構體或外消旋體的方法。
根據本發明也提供用作藥物的式(I)化合物或其可藥用鹽。
本發明的另一方面提供式(I)化合物或其可藥用鹽在用於治療或預防疾病或病症的藥物的製備中的用途，在所述的疾病或病症中抑制IKK2的活性是有利的。
本發明的另一方面提供式(I)化合物或其可藥用鹽在用於治療或預防炎性疾病的藥物的製備中的用途。
根據本發明也提供了一種治療或降低疾病或病症風險的方法，在所述的疾病或病症中抑制IKK2的活性是有利的，此方法包括給患有或處於該疾病或病症風險中的人施用治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽。
本發明也提供治療或減少炎性疾病風險的方法，此炎性疾病存在於患有或處於該疾病風險中的人體內，其中該方法包括給患者服用治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽。
在特定的實施方案中，稠合二環體系A代表任選取代的喹啉、吲哚、苯並噻吩、苯並呋喃、四氫異喹啉、1，3-苯並二氧環戊烷(亞甲基二氧基苯基)和1，4-苯並二氧雜己烷(亞乙二氧基苯基)。
在一個實施方案中，式(I)中的基團R2代表H、滷素或C1-C2烷基。在另一個實施方案中，基團R2代表H或甲基。在另一個實施方案中，式(I)中的基團R2代表H。
本發明的具體化合物包括在此所列舉的化合物及其可藥用鹽2-[(氨基羰基)氨基]-5-(2-苯並呋喃基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(3-喹啉基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(8-喹啉基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(2-苯並噻吩基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(3-苯並噻吩基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(5-吲哚基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-4-甲基-5-(1，4-苯並二氧雜環己-6-基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-4-甲基-5-(3-吲哚基)-3-噻吩羧醯胺；
2-[(氨基羰基)氨基]-4-甲基-5-(1，3-苯並二氧雜環戊烯(benzodioxo)-5-基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(1H-吲哚-2-基)噻吩-3-羧醯胺；3-[(氨基羰基)氨基]-5-(1-苯並噻吩-3-基)噻吩-2-羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(2-嗎啉-4-基甲基苯並[b]噻吩-5-基)噻吩-3-羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-[4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-1-苯並噻吩-2-基]-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-{2-[4-甲基苯基磺醯基]-1，2，3，4-四氫異喹啉-6-基}噻吩-3-羧醯胺；3-[(氨基羰基)氨基]-5-(1-苯並噻吩-2-基)噻吩-2-羧醯胺。
除非另有說明，涉及的術語「C1-C6烷基」在此表示含有1～6個碳原子的直或支鏈烷基。這些基團的實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基和叔丁基。術語「C1-C2烷基」和「C1-C4烷基」可被類似的解釋。
除非另有說明，涉及的術語「C2-C3鏈烯基」在此表示含有2或3個碳原子並含有至少一個碳-碳雙鍵的直或支鏈烴基。這些基團的實例包括乙烯基和丙烯基。術語「C2-C6鏈烯基」可被類似的解釋。
除非另有說明，涉及的術語「C2-C3炔基」在此表示含有2或3個碳原子並含有一個碳-碳三鍵的直鏈烴基。這些基團的實例包括乙炔基和丙炔基。術語「C2-C6炔基」可被類似的解釋。
除非另有說明，涉及的術語「C3-C6環烷基」在此表示含有3～6個碳原子的飽和碳環。這些基團的實例包括環丙基、環戊基和環己基。
除非另有說明，涉及的術語「C1-C4烷氧基」在此表示含有1～4個碳原子的直或支鏈烷氧基。這些基團的實例包括甲氧基、乙氧基和異丙氧基。術語「C1-C2烷氧基」和「C1-C6烷氧基」可被類似的解釋。
除非另有說明，涉及的術語「C1-C2鏈烷醯基」在此表示甲醯基或乙醯基。
除非另有說明，涉及的術語「滷素」在此表示氟代、氯代、溴代和碘代。
含有1～3個獨立地選自O、N和S雜原子的5～7元芳香雜環的實例包括呋喃、噻吩、吡咯、噁唑、異噁唑、噻唑、異噻唑、咪唑、吡唑、三唑、吡啶、噠嗪、嘧啶和吡嗪。術語「含有1～3個獨立地選自O、N和S雜原子的5或6元芳香雜環」可被類似的解釋。
任選地含有1～3個獨立地選自O、N和S雜原子的飽和5～7元環的實例包括環戊基、環己基、四氫呋喃、吡咯烷、哌啶、哌嗪和嗎啉。
稠合二環體系，其中一個環為苯環或含有1～3個獨立地選自O、N和S雜原子的5～7元芳香雜環；並且另一個環為稠合苯環或含有1～3個獨立地選自O、N和S雜原子的稠合5～7元芳香雜環；或任選地含有1～3個獨立地選自氧、氮和硫雜原子的稠合5～7元飽和環的實例，包括萘基、喹啉、異喹啉、四氫異喹啉、吲哚、苯並噻吩、苯並呋喃、苯並咪唑、1，3-苯並二氧環戊烷(亞甲二氧基苯基)和1，4-苯並二氧雜環己烷(亞乙二氧基苯基)。
任選地還含有O、S或NR基團的5或6元飽和氮雜環的實例包括吡咯烷、哌啶、哌嗪和嗎啉。
任選地含有1或2個獨立地選自O、N和S雜原子並任選地含有羰基的飽和3～7元環的實例包括環丙基、環己基、吡咯烷、哌啶、嗎啉、四氫呋喃、哌啶-2-酮和哌啶-4-酮。
本發明也提供了一種製備式(I)化合物或其可藥用鹽、對映異構體或外消旋體的方法，其包括(a)將式(II)化合物 其中A、R2、R3和n如式(I)中所定義，與異氰酸酯或異硫氰酸酯或醯基衍生物R1-CO-L進行反應，其中L為離去基；或
(b)將式(III)化合物 其中R3、n和A如式(I)中所定義，與式(IV)化合物進行反應， 其中X、R1和R2如式(I)中所定義並且LG代表離去基；或(c)將式(V)化合物 其中R3、n和A如式(I)中所定義並且LG代表離去基，與式(VI)化合物進行反應，
其中X、R1和R2如式(I)中所定義；並且若必須，將得到的式(I)化合物或其另一種鹽轉化為其可藥用鹽；或將得到的式(I)化合物轉化為另一種式(I)化合物；並且若需要，將得到的式(I)化合物轉化為其光學異構體。
在方法(a)中，適合的異氰酸酯試劑包括三甲基甲矽烷基異氰酸酯、三甲基甲矽烷基異硫氰酸酯、氯磺醯異氰酸酯、三氯乙醯基異氰酸酯和異氰酸鈉。與三甲基甲矽烷基異氰酸酯或三甲基甲矽烷基異硫氰酸酯的反應，可在溶劑如二氯甲烷/二甲基甲醯胺中、在適合的高溫如反應混合物的回流溫度下進行。與氯磺醯異氰酸酯的反應，可在溶劑如甲苯中、在環境溫度下進行。與異氰酸鈉的反應可在適合的溶劑系統如含水乙酸中、在環境溫度下進行。三氯乙醯異氰酸酯的反應可在適合的溶劑體系如乙腈中、在環境溫度下進行，並隨後用氨水處理混合物得到通式(I)的化合物。適合的式R1-CO-L醯基衍生物包括醯滷、特定的醯氯和酸酐。與這些醯基衍生物的反應通常在環境溫度、在適合的溶劑如吡啶或者在如有適合的鹼如三乙胺或吡啶存在下的二氯甲烷的溶劑中進行。其中X代表O的式(I)化合物，可通過與如Lawesson試劑反應，隨後被轉化為相應的其中X代表S的式(I)化合物。
在方法(b)和(c)中，式(III)和(IV)化合物或者式(V)和(VI)化合物一起在催化作用下反應，此催化作用由過渡金屬如鈀或鎳的配位化合物來提供。在式(III)和(VI)的化合物中，在適當的條件下，「金屬」可以是金屬或半金屬，如鎂、鋅、銅、錫、矽、鋯、鋁或硼。適合的離去基包括碘代、溴代、氯代、三氟甲磺酸酯(triflate)或膦酸酯。
本領域的技術人員應當意識到，在本發明的方法中，起始反應物或中間體化合物中的某些官能團如羥基或氨基可能需要用保護基進行保護。因式(I)化合物的製備，在適當的階段，可能涉及一個或多個保護基的加入與脫除。
官能團的保護和脫保護在『Protective Groups in Organic Chemistry』，edited by J.W.F.McOmie，Plenum Press(1973)和『Protective Groups in OrganicSynthesis』，3rd edition，T.W.Greene P.G.M.Wuts，Wiley-Interscience(1999)中有充分的描述。
本發明包括以鹽特別是酸加成鹽形式的式(I)化合物。適合的鹽包括那些與有機或無機酸所形成的鹽。這類酸加成鹽通常是可以藥用的，儘管不可藥用酸的鹽可用於化合物的製備和純化方。因而，優選的鹽包括那些由氫氯酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、甲磺酸和苯磺酸所形成的鹽。
式(I)化合物的鹽可通過將游離鹼或其鹽，其對映異構體或外消旋體與一當量或多當量的適當酸反應形成。此反應可在如下溶劑中進行不能溶解此鹽的溶劑或介質或能溶解此鹽的溶劑，例如，水、二噁烷、乙醇、四氫呋喃或乙醚或混和溶劑，其可在真空中或通過冷凍乾燥法被除去。此反應也可能是置換過程或可在離子交換樹脂上進行。
式(II)化合物可通過文獻[例如，J.Het.Chem.36，333(1999)]中所描述的標準化學進行製備或通過將式(VII)化合物 其中A、R2、R3和n如式(I)中所定義，並且L代表離去基，與氨水反應來製備。適合的基團L包括滷素，特別是氯代。
其中L是滷代的式(VII)化合物，可由相應的式(VIII)化合物進行製備
其中A、R2、R3和n如式(I)中所定義，用滷化劑如亞硫醯氯化物處理。
式(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VIII)的化合物是市場上可買得到的或可通過這裡所列舉的標準化學方法製備得到。
這些的新型中間體化合物構成了本發明的另一方面。
式(I)化合物具有藥用活性，特別是作為IKK2酶抑制劑，並可用於人類和非人類動物的病症/疾病治療(治療性的或預防性的)，在此病症/疾病中IKK2的抑制是有益的。這種病症/疾病的實例包括炎性疾病或伴有炎性成分的疾病。特定的疾病包括炎症性關節炎包括類風溼性關節炎、骨關節炎、脊椎炎、賴特症候群、銀屑病關節炎、狼瘡和骨吸收病；多發性硬化症、炎症性腸病包括節段性迴腸炎；哮喘、慢性阻塞性肺病、肺氣腫、鼻炎、重症肌無力、突眼性甲狀腺腫(Graves』disease)、同種異體移植物排斥、牛皮癬、皮炎、變態反應性疾病、免疫複合物病、惡病質、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、中毒性休克、心衰竭、心肌梗塞、動脈粥樣硬化、再灌注損傷、愛滋病(AIDS)、癌症和胰島素抗性為特徵的失調如糖尿病、高血糖症、高胰島素血症、血脂障礙、肥胖症、多囊性卵巢病、高血壓、心血管疾病和X症候群。
NF-κB在腫瘤發生和化療抗性方面已報導的作用暗示，通過利用IKK2抑制劑如小分子IKK2抑制劑對該途徑的抑制作用可提供新型的癌症單一治療和/或為化療抗性腫瘤的治療提供重要輔助治療。
我們對選自哮喘、類風溼性關節炎、牛皮癬、炎症性腸病包括節段性迴腸炎、多發性硬化症、慢性阻塞性肺病、骨吸收病、骨關節炎、糖尿病/血糖控制和癌症的疾病特別感興趣。
因而，本發明提供了如上文被定義的式(I)化合物或其可藥用鹽用於治療的用途。
在另一方面，本發明提供了在上文被定義的式(I)化合物或其可藥用鹽在用於治療的藥物的製備中的用途。
還有另一方面，本發明提供了在上文被定義的式(I)化合物或其可藥用鹽在用於治療疾病或病症的藥物的製備中的用途，在所述的疾病或病症中IKK2酶活性的調節是有益的。
在本說明書的上下文中，除非有特別的說明，術語「治療」包括「預防」。術語「治療的」和「治療地」應作相應的解釋。
預防應該特別地與曾經患有或其它被認為有高風險患有可疑疾病或病症地病人的治療相關。處於發展中的特定疾病或病症危險中的人通常包括那些具有疾病或病症家族史的人，或那些通過遺傳測試或篩選已被確認特別易於發展所述疾病或病症的人。
本發明還進一步提供治療IKK2介導疾病的方法，其包括給患者服用治療有效量的如上文所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽。
本發明也為患者提供治療炎性疾病，特別是哮喘、類風溼性關節炎或多發性硬化症的方法，病人患有所述疾病或處於所述疾病的危險中，該方法包括給患者服用治療有效量的如上文所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽。
為了達到上文所提及的治療效果，用藥的劑量當然要隨所用化合物、施藥方式、期望的治療和顯示的病症而變化。
式(I)化合物和其可藥用鹽可以其自身使用，但通常以藥物組合物的形式被施用，其中式(I)化合物/鹽(有效成分)與可藥用佐劑、稀釋劑或載體相混合。根據施藥方式，藥物組合物將優選包括0.05～99％w(重量百分比)，更優選0.05～80％w，還更優選0.10～70％w，並甚至更優選0.10～50％w的有效成分，所有的重量百分數基於整個組合物。
本發明也提供一種藥物組合物，含有如上文所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及可藥用佐劑、稀釋劑或載體。
本發明還提供一種用於製備本發明藥物組合物的方法，其包括將如上文所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽與可藥用佐劑、稀釋劑或載體相混和。
藥物組合物以溶液、混懸劑、七氟代鏈烷烴氣溶膠和乾粉製劑的形式進行局部給藥(例如施於肺和/或氣道或皮膚)；或者通過下列方式進行全身給藥，如以片劑、膠囊、糖漿、散劑或顆粒的形式口服給藥，或以溶液或混懸劑的形式進行腸胃外給藥，或皮下給藥或以栓劑的形式直腸給藥；或者被經皮膚給藥。用於選擇和製備合適的藥用製劑的常規方法記載在，例如，″Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Designs″，M.E.Aulton，Churchill Livingstone，1988中。
本發明通過下面的實施例進行舉例說明，但並不被其所限制實施例12-[(氨基羰基)氨基]-5-(2-苯並呋喃基)-3-噻吩羧醯胺a)2-氨基-3-噻吩羧醯胺標題化合物採用Bull.Soc.Chim.France 2804(1974)中所描述的方法按照如下方式進行合成。
將2，5-二羥基-1，4-二噻烷(25g)和氰基乙醯胺(19.3g)的乙醇(120ml)懸液攪拌並加熱到50℃。用15分鐘的時間，加入三乙胺(9.2ml)，並將混合物在50℃再攪拌2小時。在冰中冷卻後，將固體過濾出來並乾燥(21.4g)。
MS(ES)143(M+H)+。
b)2-[(氨基羰基)氨基]-3-噻吩羧醯胺將2-氨基-3-噻吩羧醯胺(0.44g)懸浮於乙腈(25ml)中，並用10分鐘的時間在攪拌的條件下滴加三氯乙醯異氰酸酯(0.2ml)。在室溫下再繼續攪拌3小時，並然後加入氨水的甲醇溶液(10ml的2M溶液)，並再繼續攪拌2小時。將溶劑蒸除並將殘基物用水處理。將合成的固體過濾出來並用大量的水洗。用乙醚研磨得到標題脲(0.2g)。
MS(ES)186(M+H)+。
c)2-[(氨基羰基)氨基]-5-溴-3-噻吩羧醯胺將2-[(氨基羰基)氨基]-3-噻吩羧醯胺(1.0g)溶於乙酸(20ml)中，並用5分鐘的時間在快速攪拌的條件下加入溴(0.35ml)的乙酸溶液(5ml)。將混合物攪拌90分鐘並然後加入水(50ml)。將產物過濾出來並用水洗，並真空乾燥(0.55g)。
MS(ES)262/264(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)7.15(m，1H)，7.35(m，1H)，7.8(s，1H)，7.9(m，1H)，10.63(brs，1H)。
d)2-[(氨基羰基)氨基]-5-(2-苯並呋喃基)-3-噻吩羧醯胺將2-[(氨基羰基)氨基]-5-溴-3-噻吩羧醯胺(0.26g)、碳酸鈉(0.23g)和苯並呋喃-2-硼酸(boronic acid)(0.32g)的二甲氧基乙烷(60ml)和水(2ml)溶液用氬氣通氣10分鐘。然後加入四(三苯膦)鈀(0.2g)，並將混合物回流攪拌7小時。冷卻後，將混合物過篩並濃縮。將殘餘物在乙酸乙酯和3N碳酸鈉溶液之間分配，並過濾出固體的界面層(0.2g)。
MS(ES)300(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)6.9(s，1H)，7.05(m，2H)，7.2(m，2H)，7.3(m，1H)，7.6(m，3H)，7.8(m，2H)，11.15(brs，1H)。
實施例22-[(氨基羰基)氨基]-5-(3-喹啉基)-3-噻吩羧醯胺通過實施例1(d)的方法，但使用喹啉-3-硼酸來製備。
MS(ES)311(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)7.0(m，2H)，7.4(m，1H)，7.6(m，2H)，7.65(m，2H)，8.0(m，2H)，8.4(s，1H)，9.15(s，1H)，11.06(brs，1H)。
實施例32-[(氨基羰基)氨基]-5-(8-喹啉基)-3-噻吩羧醯胺通過實施例1(d)的方法，但使用喹啉-8-硼酸來製備。
MS(ES)311(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)6.9(m，2H)，7.2(m，1H)，7.6(m，2H)，7.7(m，1H)，7.8(d，1H)，8.1(m，2H)，8.4(d，1H)，9.0(m，1H)，11.01(brs，1H)。
實施例42-[(氨基羰基)氨基]-5-(2-苯並噻吩基)-3-噻吩羧醯胺通過實施例1(d)的方法，但使用苯並噻吩-2-硼酸來製備。
MS(ES)316(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)7.0(m，2H)，7.35(m，3H)，7.4(s，1H)，7.6(s，1H)，7.8(d，1H)，7.85(m，1H)，7.9(d，1H)，11.09(s，1H)。
實施例52-[(氨基羰基)氨基]-5-(3-苯並噻吩基)-3-噻吩羧醯胺通過實施例1(d)的方法，但使用苯並噻吩-3-硼酸來製備。
MS(ES)316(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)6.95(m，2H)，7.25(m，1H)，7.4(m，2H)，7.65(s，1H)，7.7(s，1H)，7.8(m，1H)，8.0(d，1H)，8.2(d，1H)，11.08(brs，1H)。
實施例62-[(氨基羰基)氨基]-5-(5-吲哚基)-3-噻吩羧醯胺通過實施例1(d)的方法，但使用吲哚-5-硼酸來製備。
MS(ES)299(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)6.4(s，1H)，6.8(m，2H)，7.2(m，1H)，7.3(m，3H)，7.6(s，1H)，7.65(m，1H)，7.7(s，1H)，10.91(s，1H)，11.0(brs，1H)。
實施例72-[(氨基羰基)氨基]-4-甲基-5-(1，4-苯並二氧雜環己-6-基)-3-噻吩羧醯胺a)2-氨基-4-甲基-5-(1，4-苯並二氧雜環己-6-基)-3-噻吩羧醯胺將1，4-苯並二氧雜環己-6-基丙酮(1.7g)、氰基乙醯胺(0.84g)、硫磺(0.36g)和嗎啉(1ml)的乙醇(5ml)溶液攪拌，並在55℃加熱6小時。將反應混合物冷卻並在加入水(150ml)之前將其與少量的不溶物分開。將沉澱的固體過濾出來，用水洗然後乾燥。然後將產物用乙醚研磨並收集(1.0g)。
MS(EI)266(M)+。
1H NMR(DMSO-D6)7.4(2H，d)，7.3(2H，d)，6.9(2H，s)，6.8(2H，s)，2.2(3H，s)。
b)2-[(氨基羰基)氨基]-4-甲基-5-(1，4-苯並二氧雜環己-6-基)-3-噻吩羧醯胺將2-氨基-4-甲基-5-(1，4-苯並二氧雜環己-6-基)-3-噻吩羧醯胺(0.44g)溶於四氫呋喃(10ml)中，冷卻至0℃，並在攪拌下滴加三氯乙醯異氰酸酯(0.11ml)。在室溫下再繼續攪拌30分鐘，然後加入氨的甲醇溶液(8ml的10％溶液)，並再繼續攪拌3小時。將溶劑蒸除，並將殘餘物用乙酸乙酯處理並將產物過濾出來。
MS(ES)332(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)2.2(s，3H)，4.25(s，4H)，6.7(m，2H)，6.8(m，2H)，6.9(m，1H)，7.2(br，1H)，10.01(brs，1H)。
實施例82-[(氨基羰基)氨基]-4-甲基-5-(3-吲哚基)-3-噻吩羧醯胺通過實施例7的方法，但使用吲哚-3-丙酮來製備。
MS(ES)313(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)2.2(s，3H)，6.65(brs，2H)，7.05(m，1H)，7.1(m，1H)，7.2(m，2H)，7.4(m，1H)，7.45(d，1H)，7.55(d，1H)，10.14(brs，1H)，11.3(m，1H)。
實施例92-[(氨基羰基)氨基]-4-甲基-5-(1，3-苯並二氧環戊-5-基)-3-噻吩羧醯胺通過實施例7的方法，但使用1，3-苯並二氧環戊-5-丙酮來製備。
MS(ES)318(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)2.2(s，3H)，6.05(s，2H)，6.8(m，1H)，6.9(m，1H)，6.95(m，1H)，7.1(m，2H)，7.2(m，2H)。
實施例102-[(氨基羰基)氨基]-5-(1H-吲哚-2-基)噻吩-3-羧醯胺a)標題化合物是通過將2-[(氨基羰基)氨基]-5-(1H-1-三叔丁基氧羰基吲哚-2-基)噻吩-3-羧醯胺，用90％三氟乙酸/10％水的混合物在環境溫度處理4小時製備得到的。蒸發得到固體(250mg)，將其用水洗。
MS(ES)301(M+H)+。
1H NMR(DMSO-D6)6.5(s，1H)，6.95(m，4H)，7.35(m，2H)，7.45(d，1H)，7.6(s，1H)，7.62(brs，1H)，10.9(s，1H)，11.32(brs，1H)。
b)2-[(氨基羰基)氨基]-5-(1H-1-三叔丁基氧羰基吲哚-2-基)噻吩-3-羧醯胺標題化合物(500mg)是由1H-1-(叔丁氧基羰基)吲哚-2-基硼酸按照與實施例1(d)相似的方法製備得到的，除了所得到的產物為固體，通過過濾反應混合物並依次用2N氫氧化鈉溶液、水和甲醇洗獲得。
MS(ES)401(M+H)+。
1H NMR(DMSO-D6)1.4(s，9H)，6.7(m，1H)，6.95(brs，2H)，7.2(m，3H)，7.4(m，1H)，7.6(s，1H)，7.65(brs，1H)，8.0(m，1H)，11.04(brs，1H)。
實施例113-[(氨基羰基)氨基]-5-(1-苯並噻吩-3-基)噻吩-2-羧醯胺a) 2-溴噻吩-4-羧酸根據J.Am.Chem.Soc.，1954，76，2445中所描述的方法來製備。
MS(ES)205(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)7.45(s，1H)，8.22(s，1H)，12.94(brs，1H)。
b)2-溴-4-(N-叔丁基氧羰基)氨基噻吩將2-溴噻吩-4-羧酸(3g)溶於乾燥溫熱的叔丁醇(24ml)中。加入三乙胺(2.02ml)，隨後加入二苯基磷醯基疊氮化物(3.12ml)。將溶液慢慢加熱到回流並繼續加熱回流過夜。然後將反應混合物冷卻，倒入水(150ml)中並用乙酸乙酯(3×100ml)萃取。將合併的提取物乾燥(MgSO4)，過濾並蒸發。粗產物通過柱色譜法來純化，用含5％乙酸乙酯的己烷來洗脫，得到白色固體(1.69g)。
MS(ES)276(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)1.44(s，9H)，7.03(s，1H)，7.51(s，1H)，9.65(s，1H)。
c)5-溴-3-[(叔丁基氧羰基)氨基]噻吩-2-羧酸在氬氣下，將2-溴-4-(N-叔丁基氧羰基)氨基噻吩(1.68g)在乾燥的THF(45ml)中攪拌，並將溶液冷卻至-78℃。滴加二異丙胺鋰(7.55ml，2M溶液)，並繼續攪拌3.5小時。加入粉狀CO2(過量)，並將混合物再攪拌10分鐘，之後溫熱至室溫。加入水(50ml)，真空除去THF，並將水相用乙酸乙酯(3×40ml)萃取。合併提取物，用1M HCl溶液(50ml)、水(50ml)和鹽水(50ml)洗，乾燥(MgSO4)，過濾並將溶劑蒸除。殘餘物用二氯甲烷研磨並將產物通過過濾收集得到淡黃色固體(1.57g)。
MS(ES)320(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)9.38(s，1H)，7.79(s，1H)，1.42(s，9H)。
d)5-溴-3-(叔丁基氧羰基)氨基噻吩-2-羧醯胺將5-溴-3-[(叔丁基氧羰基)氨基]噻吩-2-羧酸(0.80g)在乙腈(80ml)中攪拌。加入羥基苯並三唑(1.41g)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺氫氯化物(2.62g)，並在室溫中繼續攪拌10分鐘。加入濃氨水溶液(8ml)，並將反應混合物加熱回流1小時。將乙腈蒸除。加入水(100ml)，並將混合物通過超聲波振蕩並研磨。將合成的灰白色固體過濾收集，用水洗並真空乾燥(0.763g)。
MS(ES)319(M-H)-。
1H NMR(DMSO-D6)1.45(s，9H)，7.63(brs，2H)，7.78(s，1H)，10.40(s，1H)。
e)3-氨基-5-溴噻吩-2-羧醯胺將5-溴-3-(叔丁基氧羰基)氨基噻吩-2-羧醯胺(0.76g)在二氯甲烷(30ml)中攪拌。加入三氟乙酸(5ml)，將溶液在室溫下攪拌1小時，倒入飽和的碳酸氫鈉水溶液(200ml)中，並用二氯甲烷(3×100ml)萃取。合併提取物用鹽水(150ml)洗，乾燥(硫酸鎂)，過濾並蒸發得到黃色固體(0.511g)。
MS(ES)221(M+H)+。
1H NMR(DMSO-D6)6.50(brs，2H)，6.69(s，1H)，6.87(brs，2H)。
f)3-[(氨基羰基)氨基-5-溴噻吩-2-羧醯胺標題化合物按照與實施例1(b)相似的方法，由3-氨基-5-溴噻吩-2-羧醯胺製備得到。
MS(ES)264(M+H)+。
1H NMR(DMSO-D6)6.63(brs，2H)，7.41(brs，2H)，7.97(s，1H)，10.02(s，1H)。
g)3-[(氨基羰基)氨基-5-(1-苯並噻吩-3-基)噻吩-2-羧醯胺將3-[(氨基羰基)氨基-5-溴噻吩-2-羧醯胺(0.222g)和1-苯並噻吩-3-基硼酸(0.449g)在1，2-二甲氧基乙烷(15ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(3.5ml)中進行超聲處理並用氬氣通氣。加入四(三苯膦)-鈀(95mg)，並將混合物在攪拌下加熱回流4.5小時，然後冷卻並在室溫下攪拌過夜。將溶液過濾並用1，2-二甲氧基乙烷和水洗。將濾液在真空中濃縮，並用二氯甲烷(20ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(20ml)中溶解。將固體產物過濾收集，用二氯甲烷、水、二乙醚洗並乾燥(226mg)。
MS(ES)318(M+H)+。
1H NMR(DMSO-D6)6.60(brs，2H)，7.35-7.56(m，4H)，8.04(s，1H)，8.10(t，2H)，8.25(s，1H)，10.08(s，1H)。
實施例122-[(氨基羰基)氨基]-5-(2-嗎啉-4-基甲基苯並[b]噻吩-5-基)噻吩-3-羧醯胺將4-(5-溴苯並[b]噻吩-2-基甲基)嗎啉(Beilstein Reg.No.1115497)(230mg)的乾燥THF溶液，用三異丙基硼酸酯(291mg)來處理，並在氬氣下攪拌冷卻至＜-70℃。滴加正丁基鋰(0.921ml，1.6M的己烷溶液)，隨後加溫到室溫。將溶劑蒸除，並用二甲氧基乙烷(20ml)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(9ml)的混合物所代替。在氬氣下，向此混合物中加入2-[(氨基羰基)氨基]-5-溴噻吩-3-羧醯胺(98mg)和四-三苯膦鈀(O)(25mg)，並將此反應在90℃加熱1.5小時。將此反應混合物蒸發除去大量的有機物，並將殘餘物在2M的氫氧化鈉水溶液(30ml)和二氯甲烷之間分布。過濾後，將有機相分離，並用更多體積的氫氧化鈉溶液(10ml)萃取。將合併的含水提取物酸化至pH為8並過濾。在固體乾燥後用乙醚研磨得到粉狀物(27mg)。
LCMS 417(M+H)+。
1H NMR(DMSO-D6)2.47(m，4H)，3.65(m，4H)，3.80(s，2H)，6.95(brs，2H)，7.3(brs，1H)，7.33(s，1H)，7.5(m，1H)，7.69(brs，1H)，7.75(s，1H)，7.91(m，2H)，11.0(s，1H)。
實施例132-[(氨基羰基)氨基]-5-[4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-1-苯並噻吩-2-基]-3-噻吩羧醯胺a)標題化合物由4-[2-(1-苯並噻吩-4-基氧)乙基]嗎啉按照與實施例12相似的方法進行製備，除了將反應混合物在90℃加熱4小時之外。在真空中將溶劑除去，將殘餘物用3M碳酸鈉/二氯甲烷處理，並將固體從界面層過濾出來。由製備型hplc純化得到產物。
MS(ES)447(M+H)+。
1H NMR(DMSO-D6)2.5(m，4H)，2.8(t，2H)，3.55(m，4H)，4.25(t，2H)，7.0(m，3H)，7.15(m，2H)，7.35(m，3H)，7.8(m，1H)，11.05(brs，1H)。
b)4-[2-[(1-苯並噻吩-4-基氧)乙基]嗎啉將4-(2-氯乙基)嗎啉氫氯化物(0.74g)、1-苯並噻吩-4-醇(0.5g)和碳酸鉀(1.1g)在二甲基甲醯胺(15ml)中加熱，並在80℃攪拌6小時。冷卻後，將混合物倒入水中，並用乙酸乙酯萃取兩次。合併的溶劑相用鹽水洗兩次，乾燥(硫酸鎂)並蒸發得到產物(0.7g)。
MS(ES)264(M+H)+。
1H NMR(DMSO-D6)2.5(m，4H)，2.8(t，2H)，3.55(m，4H)，4.25(t，2H)，6.9(d，1H)，7.25(t，1H)，7.4(d，1H)，7.55(d，1H)，7.6(d，1H)。
c)1-苯並噻吩-4-醇此化合物按照J.Amer.Chem.Soc.，1955，77，5939中所描述的方法製備。
實施例142-[(氨基羰基)氨基]-5-{2-[4-甲基苯基磺醯]-1，2，3，4-四氫異喹啉-6-基}噻吩-3-羧醯胺a)標題化合物由6-溴-2-[4-甲基苯基磺醯]-1，2，3，4-四氫異喹啉按照與實施例13相似的方法進行製備，除了加將反應混合物在80℃加熱18小時之外。將溶劑真空除去後，將殘餘物用2M氫氧化鈉和二氯甲烷處理，並分離出水相，用36％的鹽酸調到pH為8。粗產物通過製備型hplc來純化。
MS(ES)471(M+H)+。
1H NMR(DMSO-D6)2.4(s，3H)，2.8(m，2H)，3.2(m，2H)，4.1(s，2H)，6.9(br，2H)，7.15(m，1H)，7.3(m，1H)，7.4(m，2H)，7.5(m，1H)，7.7-7.9(m，5H)，11.0(s，1H)。
b)6-溴-2-[4-甲基苯基磺醯]-1，2，3，4-四氫異喹啉在氬氣5℃下，將2-[3-溴苯基]-N-(4-甲基苯基磺醯)乙胺(7.44g)在氯仿(100ml)中攪拌，其間依次加入37-40％甲醛(3.5ml)和三氯氧磷(30ml)。然後將此混合物回流3小時，冷卻，倒入二氯甲烷(250ml)/飽和碳酸氫鈉(300ml)中，並在5℃下小心地按份加入固體碳酸氫鈉(160g)。再將水相用二氯甲烷萃取，並將合併的有機相用飽和碳酸氫鈉和水洗，乾燥(MgSO4)並蒸發得到油狀物，將其在異己烷/甲苯中結晶得到產物(3.48g)。
MS(ES)365(M)+。
1H NMR(CDCl3)2.43(s，3H)，2.89(t，2H)，3.34(t，2H)，4.1 8(s，2H)，6.89(d，1H)，7.23-7.30(m，2H obscured)，7.33(d，2H)，7.72(d，2H)。
c)2-[3-溴苯基]-N-(4-甲基苯基磺醯)乙胺將3-溴苯基乙胺氫氯化物(9.44g)加入到含有三乙胺(12.24ml)的THF(60ml)中，並在氬氣5℃攪拌，其間用15分鐘的時間分批加入4-甲基苯基磺醯氯(11.44g)。將此漿狀物用THF(50ml)稀釋並攪拌16小時。將固體過濾出來，用THF洗並將濾液蒸發。將殘餘物溶於乙酸乙酯中，用1N鹽酸、水、鹽水洗並乾燥(MgSO4)。在矽膠上進行快速色譜，用含0～25％乙酸乙酯的異己烷來洗脫得到產物(9.67g)。
MS(ES)352(M-H)-。
1H NMR(CDCl3)2.44(s，3H)，2.74(t，2H)，3.23(q，2H)，4.36(t，1H)，7.03(d，1H)，7.14(t，1H)，7.17(m，1H)，7.30(d，2H)，7.35(dd，1H)，7.69(dd，2H)。
d)3-溴苯基乙胺氫氯化物標題化合物的游離鹼有CAS登記號58971-11-2和Beilstein登記號2716071。
實施例153-[(氨基羰基)氨基]-5-(1-苯並噻吩-2-基)噻吩-2-羧醯胺標題化合物由3-[(氨基羰基)氨基-5-溴噻吩-2-羧醯胺和1-苯並噻吩-2-基硼酸按照與實施例11(g)相似的方法進行製備。
MS(ES)318(M+H)+。
1H NMR(DMSO-D6)6.64(brs，2H)，7.33-7.47(m，2H)，7.49(brs，2H)，7.71(s，1H)，7.80-7.90(m，1H)，7.90-8.02(m，1H)，8.23(s，1H)，10.05(s，1H)。
化合物的藥理評價IKK2濾器激酶試驗通過濾器激酶試驗檢測化合物的IKK2的抑制活性。將待檢測的化合物溶於二甲亞碸(DMSO)中，濃度為10mM。然後將化合物在激酶緩衝液(50mM三羥甲氨基甲烷，pH為7.4，含有0.1mM EGTA，0.1mM原釩酸鈉和0.1％β-巰基乙醇)中進行1/40稀釋。用2.5％DMSO的激酶緩衝液對此溶液按1∶3連續稀釋。將20μl的化合物稀釋物加入到96孔板的孔中，一式兩份。將20μl含有2.5％DMSO的激酶緩衝液代替化合物加入到對照孔中(0％抑制)。將20μl的0.5 M EDTA代替化合物加入到背景孔中(100％抑制)。
將10μl的醋酸鎂、未標記的ATP和33P-標記ATP的混合物加入到每個孔中，使得最終濃度為10mM的醋酸鎂、1μM ATP和0.1μCi33P ATP。將20μl IKK2(0.15μg/well)、1-53 GST-IκB(0.5μg/well)和牛血清白蛋白(BSA)(8.5ug/well)的混合物加入到每個孔中使反應開始。最終反應體積為50μl。
將此激酶反應在21℃孵育80分鐘，並通過加入等體積(50μl)20％的三氯乙酸(TCA)使蛋白沉澱來中止反應。使沉澱物形成10分鐘，然後將其放到GF/C uniflter 96孔板上過濾。每個濾器用約1ml的2％TCA洗兩次。將濾器板在30-40℃乾燥60分鐘，在每個孔中加入20μl的閃爍體並將板密封並在Packard Topcount微板閃爍計數器對其放射強度進行測定。
當在上述的試驗中被檢測時，實施例1～15的化合物給出少於10μM的IC50值，表明它們預期能顯示出有效的治療活性。
IKK1濾器激酶試驗化合物的選擇性可通過用濾器激酶試驗測定它們對IKK1的抑制來評估。此試驗條件同IKK2濾器激酶試驗是相同的，除了將IKK1(0.25μg/well)和1-53 GST IκB(9μg/well)的混合物加入到每個孔中開始反應之外。
對PBMC中LPS-誘導的TNFα產生的抑制通過測定腫瘤壞死因子α(TNFα)的產生抑制來評價測試化合物對核因子κB(NFκB)的激活作用，腫瘤壞死因子α是通過細菌的脂多糖(LPS)刺激外周血單核細胞(PBMCs)所產生。
從健康的志願者中收集人血(250ml)，用肝素抗凝。在50ml聚丙烯離心管中將等分的血(25ml)放在20ml Lymphoprep(Nycomed)上。將此管在2,500rpm離心(Sorval RT600B)30分鐘。將含有PBMCs的渾濁層用好尖端的巴斯德吸管收集，轉移到8個乾淨的聚丙烯離心管(每支管約10ml)中，並用磷酸緩衝鹽溶液(PBS)稀釋到50ml。將這些管在2,000rpm離心8分鐘。向每個細胞團中加入PBS(10ml)，並輕輕地使細胞再次懸浮。將細胞混合於4支離心管中，將PBS加入到每支管中使得體積為50ml，並將離心管在1,400rpm離心8分鐘。細胞團又再一次懸浮於10ml的PBS中，將其混合於2支離心管中，用PBS使體積達到50ml，並將管在900rpm離心10分鐘。
最終的細胞團輕輕地再懸浮於10ml的組織培養液(RPMI，含有1％熱滅活的人血清、L-穀氨醯胺和青黴素和鏈黴素)中，將其混合裝入1支管中並用RPMI培養基使體積達到30ml。細胞計數並將細胞懸液稀釋為2.6×106細胞/ml。
將化合物溶於DMSO至10mM，並用RPMI培養基以1∶250(40μM)稀釋。然後將此化合物用含0.4％DMSO的RPMI培養基以1∶3進行連續稀釋。將測試化合物的稀釋液等分(50μl)的轉移到96-孔板的孔中。對照孔中含有代替此化合物地0.4％DMSO的RPMI。
將細胞懸液等分(100μl)加入到每個孔中，並將板在37℃培養30分鐘。向孔中加入50μl的40μg/ml LPS(Sigma，L-4130)以刺激由細胞產生TNFα，並使板在37℃培養過夜。將RPMI培養基(50μl)加入到陰性對照孔中代替LPS。最終培養體積為200μl。
將板在1,200rpm離心4分鐘，並將上層清液移出以測定TNFα的濃度。殘餘細胞團的生存力可用WST-1試劑(Boehringer Mannheim，1044807)來測定。將含有10μl WST-1試劑的100μl RPMI培養基加入到每個孔中，並將板培養0.5～3小時。用96-孔板分光光度計來測定450nm處的吸光度。
通過酶聯免疫吸附測定法(ELISA)來測定上層清液中的TNFα(新獲得的或在-20℃凍存)。此ELISA板按下列方式製備將96孔板的孔塗上羊抗-人TNFα單克隆抗體(稀釋於塗層緩衝液中的100μl的1μg/ml抗體；0.5M的碳酸鹽/碳酸氫鹽緩衝液，pH 9.6，含有0.2g/l的疊氮鈉)，並在4℃孵育過夜。空白孔不被塗敷。將孔用0.1％BSA的含有0.05％Tween的PBS(PBS/Tween)洗一次，然後在室溫下用1％BSA的塗層緩衝液(200μl)孵育1小時。然後將孔用0.1％BSA的PBS/Tween液洗三次。
將來自PBMC培養的上清液的樣品，用1％BSA的PBS/Tween液按1∶3稀釋。將此稀釋液的100μl的等分量加入到ELISA板中。其它孔中含有100μl的TNFα標準樣(10、3.3、1.1、0.37、0.12、0.04、0.014和0ng/ml)。將此ELISA板在室溫下孵育2小時，之後將板用0.1％BSA的PBS/Tween液洗3次。將兔抗-人TNFα抗體(100μl的2.5μg/ml溶液)加入到每個孔中，並將板在室溫下孵育1.5小時。然後將孔用0.1％BSA的PBS/Tween液洗3次。將羊抗-兔IgG-辣根過氧化物酶結合物(ICN，674371；100μl的1∶10,000的稀釋物)加入到每個孔中，並將板在室溫下孵育1.5小時。將孔用0.1％BSA的PBS/Tween液洗3次。
過氧化物酶底物通過將1mg TMB片劑(Sigma，T-5525)溶於100μl的DMSO(100μl)中製備得到，並將其與36μl的UHPO(BDH，30559；1g片劑溶於25ml的蒸餾水)加入到10ml的0.1M檸檬酸鹽/醋酸鹽的緩衝液中，pH為6。將100μl的底物加入到每個孔中，並在室溫下將板避光孵育約30分鐘。此反應通過向每個孔中加入25μl的2M硫酸來中止。用96孔板分光光度計測定450nm處的吸光度。
權利要求
1.式(I)的化合物和其可藥用鹽， 其中R1代表NH2或R1代表甲基，任選被一個或多個獨立地選自C1-C4烷基、C3-C6環烷基、滷素、羥基、C1-C4烷氧基、S(O)vCH3和NR4R5的基團取代；X代表O或S；R2代表氫、滷素、氰基、硝基、-NR6R7、-CONR6R7、-COOR6、-NR6COR7、-S(O)mR6、-SO2NR6R7、-NR6SO2R7、C1-C2烷基、三氟甲基、C2-C3鏈烯基、C2-C3炔基、三氟甲氧基、C1-C2烷氧基或C1-C2鏈烷醯基；A代表稠合二環體系，其中一個環為苯環或含有1～3個獨立地選自O、N和S雜原子的5～7元芳香雜環；並且另一個環為稠合苯環或含有1～3個獨立地選自O、N和S雜原子的稠合5～7元芳香雜環；或任選地包含1～3個分別選自氧、氮和硫雜原子的稠合5～7元飽和環；該稠合二環體系可任選地被一個或多個獨立地選自滷素、氰基、硝基、-NR8COR9、-S(O)sR8、-SO2NR8R9、-NR8SO2R9和C1-C6烷基的取代基取代；n代表0、1或2的整數；並且當n代表2時，每個R3基團可以被獨立地加以選擇；R3代表-W-Y-Z基團，其中W代表O、S(O)r，、NR13、CH2、-CH2-O-或化學鍵；Y代表化學鍵或Y代表基團-(CH2)p-X-(CH2)q-，其中p和q獨立地代表0、1或2的整數；並且X代表O、-CO-或CR14R15；R14和R15獨立地代表H、CH3和F；或R14代表H或CH3並且R15代表羥基或OCH3；或基團CR14R15一起代表C3-C6環烷基；Z代表(a)苯環或含有1～3個獨立地選自O、N和S雜原子的5或6元芳香雜環；該苯基或芳香雜環任選被一個或多個取代基取代，所述取代基獨立地選自滷素、氰基、-NR16R17、-CONR16R17、-COOR16、-COR16-NR16COR17、-S(O)uR16、-SO2NR16R17、-NR16SO2R17、羥基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；該烷基或烷氧基任選進一步被一個或多個選自滷素、氰基、羥基、C1-C4烷氧基和NR18R19的基團取代；或(b)任選地含有1或2個獨立地選自O、N和S雜原子的飽和3～7元環，並且任選地包含羰基；該飽和環任選被一個或多個取代基取代，所述取代基獨立地選自滷素、氰基、-NR16R17、-CONR16R17、-COOR16、-COR16、-NR16COR17、-S(O)uR16、-SO2NR16R17、-NR16SO2R17、羥基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；該烷基或烷氧基任選進一步被一個或多個選自滷素、氰基、羥基、C1-C4烷氧基和NR18R19的基團取代；或(c)Z代表羥基、C1-C6烷氧基、CF3、CHF2、CH2F或NR20R21，其中R20和R21獨立地為氫或任選地被C1-C4烷氧基取代的C1-C6烷基；R4和R5獨立地代表H或C1-C4烷基；或基團NR4R5代表5或6元飽和的氮雜環，任選地還含有O、S或NR23基團；其中R23為氫或C1-C4烷基；R6和R7獨立地代表H或C1-C2烷基；R8和R9獨立地代表H或C1-C6烷基；R13代表H或C1-C4烷基；R16和R17獨立地代表H或C1-C6烷基；或基團NR16R17代表5或6元飽和的氮雜環，任選地還含有O、S或NR24基團；其中R24為氫或C1-C6烷基；R18和R19獨立地代表H或C1-C4烷基；或基團NR18R19代表5或6元飽和的氮雜環，任選地還含有O、S或NR25基團；其中R25為氫或C1-C4烷基；m、r、s、u和v獨立地代表0、1或2的整數。
2.根據權利要求1的式(I)化合物，其中X代表氧。
3.根據權利要求1或2的式(I)化合物，其中R1代表NH2。
4.根據權利要求1～3中任一項的式(I)化合物，其中R2代表H或甲基。
5.根據權利要求1的式(I)化合物，選自2-[(氨基羰基)氨基]-5-(2-苯並呋喃基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(3-喹啉基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(8-喹啉基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(2-苯並噻吩基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(3-苯並噻吩基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(5-吲哚基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-4-甲基-5-(1，4-苯並二氧雜環己-6-基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-4-甲基-5-(3-吲哚基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-4-甲基-5-(1，3-苯並二氧雜環戊烯-5-基)-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(1H-吲哚-2-基)噻吩-3-羧醯胺；3-[(氨基羰基)氨基]-5-(1-苯並噻吩-3-基)噻吩-2-羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-(2-嗎啉-4-基甲基苯並[b]噻吩-5-基)噻吩-3-羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-[4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-1-苯並噻吩-2-基]-3-噻吩羧醯胺；2-[(氨基羰基)氨基]-5-{2-[4-甲基苯基磺醯基]-1，2，3，4-四氫異喹啉-6-基}噻吩-3-羧醯胺；3-[(氨基羰基)氨基]-5-(1-苯並噻吩-2-基)噻吩-2-羧醯胺；及其可藥用鹽。
6.一種製備根據權利要求1～5中任一項的式(I)化合物的方法，所述方法包括(a)將式(II)化合物 其中A、R2、R3和n如權利要求(I)中所定義，與異氰酸酯或異硫氰酸酯或醯基衍生物R1-CO-L反應，其中L為離去基；或(b)將式(III)化合物 其中R3、n和A如權利要求(I)中所定義，與式(IV)化合物反應， 其中X、R1和R2如權利要求(I)中所定義並且LG代表離去基；或(c)將式(V)化合物 其中R3、n和A如式(I)中所定義並且LG代表離去基，與式(VI)化合物反應， 其中X、R1和R2如權利要求(I)中所定義；並且若必須，將得到的式(I)化合物或其另一種鹽轉化為其可藥用鹽；或將得到的式(I)化合物轉化為另一種式(I)化合物；並且若需要，將得到的式(I)化合物轉化為其光學異構體。
7.一種藥物組合物，包含如權利要求1～5中任一項的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及可藥用佐劑、稀釋劑或載體。
8.一種製備權利要求7的藥物組合物的方法，其包括將如權利要求1～5中任一項的式(I)化合物，或其可藥用鹽，與可藥用佐劑、稀釋劑或載體相混和。
9.如權利要求1～5中任一項的式(I)化合物，或其可藥用鹽用作藥物。
10.如權利要求1～5中任一項的式(I)化合物或其可藥用鹽在用於治療或預防疾病或病症的藥物的製備中的用途，在所述疾病或病症中抑制IKK2的活性是有益的。
11.如權利要求1～5中任一項的式(I)化合物或其可藥用鹽在用於治療或預防炎性疾病的藥物的製備中的用途。
12.根據權利要求11的用途，其中所述的疾病為哮喘。
13.根據權利要求11的用途，其中所述的疾病為類風溼性關節炎。
14.根據權利要求11的用途，其中所述的疾病為多發性硬化症。
15.根據權利要求11的用途，其中所述的疾病為慢性阻塞性肺病。
16.根據權利要求11的用途，其中所述的疾病為癌症。
17.一種用於治療或減少疾病或病症風險的方法，在此疾病或病症中抑制IKK2的活性是有益的，所述方法包括給患有或處於該疾病或病症風險中的人服用治療有效量如權利要求1～5中任一項的式(I)化合物或其可藥用鹽。
全文摘要
本發明涉及式(I)的噻吩羧醯胺，其中R
文檔編號A61K31/381GK1538968SQ02815251
公開日2004年10月20日 申請日期2002年7月19日 優先權日2001年7月25日
發明者戴維·格裡菲思, 克雷格·約翰斯頓, 約翰斯頓, 戴維 格裡菲思 申請人:阿斯特拉澤尼卡公司