一種快速檢測植物中含原花色素的方法
2023-05-15 20:46:06 2
專利名稱：一種快速檢測植物中含原花色素的方法
技術領域：
本發明涉及植物化學領域，特別是涉及一種植物中原花色素的快速鑑定方法。
背景技術：
原花色素(Proathocyanidins)，也叫原花青素，是類黃酮的一種。原花色素是清除自由基最強的抗氧化劑之一，能保護大腦與神經組織，改善血液循環，靈活關節和年輕皮膚的作用。長期食用高含原花色素的食品，可以緩解心血管等疾病。食用高含原花色素的食品已成為預防這些疾病的主要食療方法，消費需求越來越大。在活體植物的組織和器官中，未被氧化的原花色素在細胞中是無色的，肉眼無法判斷植物器官中是否含有該物質。為了對活體植物中未氧化的原花色素的進行選擇，現有檢測原花色素的方法一般採用高壓液相色譜法(HPLC)，該法需要昂貴的儀器、良好的實驗平臺，複雜的樣品前處理、花費時間長和費用較高，不利於大規模的推廣，因此發明一種快速、簡便、低廉的檢測植物中含原花色素的方法，是尋找產原花色素植物和大規模開發原花色素產品的重要基礎。目前，未見有利用化學染色法快速檢測植物中含原花色素物種方法的報導，基於我們的研究結果，本發明為檢測植物中是否含原花色素提供了一種新的方法。
發明內容
本發明的目的在於提供一種直觀、經濟、簡便的植物中原花色素的快速檢測方法， 可應用於檢測植物中原花色素的含量。本發明方法使用試劑價格低廉，操作簡單，效果明顯，見效快。本發明的技術方案在常溫下，用DMACA (p-dimethylaminocinnamaldehyde)酸性醇類溶液浸泡待檢測的植物器官或組織樣品5分鐘左右，若植物器官或組織樣品中含有原花色素則會被染上藍色，且原花色素含量越高，顏色越藍；若樣品中不含原花色素則不被染上藍色，從而達到快速檢測植物樣品中是否含有原花色素的目的。所述DMACA酸性醇類溶液為DMACA鹽酸-乙醇溶液或DMACA鹽酸-甲醇溶液。所述的DMACA鹽酸-乙醇溶液中，DMACA的濃度為0. 5-2%,鹽酸濃度為10-15%， 乙醇濃度為45-55%。所述的DMACA鹽酸-甲醇溶液中，DMACA的濃度0. 5-2%,鹽酸濃度為8-14%，甲醇濃度為50-55%。發明申請人根據植物材料的特點和原花色素的化學性質，在本發明中採用高濃度的鹽酸軟化植物組織並提供酸性環境，有利於染色劑進入細胞與原花色素反應，植物器官或組織中原花色素含量越高，顏色越藍，從而能簡便、直觀區分植物器官或組織中原花色素的有無和含量的高低。
具體實施方式
實施例1
(1)取原花色素標準品(購自南京替斯艾麼中藥研究所)，分別配製成以下濃度的原花色素溶液lmg/ml、;3mg/ml、5mg/ml，分別取1毫升原花色素溶液置於透明容器中；
(2)把1 克 DMACA (p-dimethylaminocinnamaldehyde)加入 100 毫升鹽酸-乙醇溶液中，其中鹽酸濃度為10%，乙醇濃度為50%，充分溶解，得DMACA鹽酸-乙醇溶液。(3)分別在裝有原花色素溶液的透明容器中加入1毫升上述DMACA鹽酸-乙醇溶液，在常溫下染色5分鐘後觀察顏色，所有溶液中都產生藍色，且藍色的程度隨著原花色素濃度的增加依次增加。實施例2
(1)分別取兩種不同類型的授粉後8天的擬南芥dahWoAsis種子的種
皮，其中一個為野生型的種子種皮，文獻報導種皮中含有原花色素，另一個為黃籽突變體的種子種皮，文獻報導種皮中未檢測到原花色素。(2)把 1. 5 克 DMACA (p-dimethylaminocinnamaldehyde)加入 100 毫升鹽酸-乙醇溶液中，其中鹽酸濃度為15%，乙醇濃度為50%，充分溶解，得DMACA鹽酸-乙醇溶液。(3)分別取上述材料授粉後8天的種皮於載玻片上，用DMACA鹽酸-乙醇溶液完全覆蓋。常溫下染色5分鐘後，野生型擬南芥種子的種皮由綠色染為藍色，而黃籽突變體的種子種皮未被染上藍色，仍然為綠色。實施例3:
(1)分別取兩種不同類型的授粉後10天的白菜(SraMica rapa)種子的種皮，其中一個為藏油2號種子種皮，文獻報導種皮中含有原花色素，另一個為彭波黃的種子種皮，文獻報導種皮中不含原花色素。(2)把 1 克 DMACA (p-dimethylaminocinnamaldehyde)加入 100 毫升鹽酸-甲醇溶液中，其中鹽酸濃度為1496，，甲醇濃度為55%，充分溶解，得DMACA鹽酸-甲醇溶液。(3)分別取上述材料授粉後10天的種子種皮於載玻片上，用DMACA鹽酸-甲醇溶液完全覆蓋。常溫下染色5分鐘後，藏油2號的種子種皮由綠色變為藍色，彭波黃種皮未被染上色，仍然為綠色。實施例4:
(1)分別取兩種不同類型的授粉後10天的水稻(ftT^a. Miira)穎果，其中一個為紅米穎果，文獻報導其中含有原花色素，另一個為白米穎果，文獻報導其中未檢測到原花色素。(2)把 0. 5 克 DMACA (p-dimethylaminocinnamaldehyde)力口入 100 毫升鹽酸-乙醇溶液中，其中鹽酸濃度為10%，乙醇濃度為55%，充分溶解，得DMACA鹽酸-乙醇溶液。(3)分別取上述材料的授粉後10天的穎果於載玻片上，用DMACA鹽酸-乙醇溶液完全覆蓋。常溫下染色5分鐘後，紅米穎果由綠色變為藍色，白米穎果未被染上色，仍然為綠色。實施例5
(1)取來源不同類型茶葉Siz^z7lSi1S)的新鮮葉片樣品，顏色均為綠色，HPLC 測定其中原花色素的含量由高到底依次為樣品1>樣品2>樣品3。
(2)把2 克 DMACA (p-dimethylaminocinnamaldehyde)加入 100 毫升鹽酸-乙醇溶液中，其中鹽酸濃度為10%，乙醇濃度為55%，充分溶解，得DMACA鹽酸-乙醇溶液。
(3)分別取上述新鮮茶葉的葉片，切成小塊，分別放置於載玻片上，用DMACA鹽酸-乙醇溶液完全覆蓋。常溫下染色5分鐘後，樣品均被染上藍色，且藍色程度由淺到深依次為樣品3〈樣品2〈樣品1。
權利要求
1.一種快速檢測植物中含原花色素的方法，其特徵在於，在常溫下，用DMACA酸性醇類溶液浸泡待檢測的植物器官或組織樣品，若植物器官或組織樣品中含有原花色素則會被染上藍色，且原花色素含量越高，顏色越藍，若樣品中不含原花色素則不被染上藍色。
2.根據權利要求1所述的快速檢測植物中含原花色素的方法，其特徵在於，所述DMACA 酸性醇類溶液為DMACA鹽酸-乙醇溶液。
3.根據權利要求1所述的快速檢測植物中含原花色素的方法，其特徵在於，所述DMACA 酸性醇類溶液為DMACA鹽酸-甲醇溶液。
4.根據權利要求2所述的快速檢測植物中含原花色素的方法，其特徵在於為，所述的DMACA鹽酸-乙醇溶液中，DMACA的濃度為0. 5-2%,鹽酸濃度為10-15%，乙醇濃度為 45-55%。
5.根據權利要求3所述的快速檢測植物中含原花色素的方法，其特徵在於，所述的 DMACA鹽酸-甲醇溶液中，DMACA的濃度0. 5-2%,鹽酸濃度為8-14%，甲醇濃度為50_55%。
全文摘要
本發明涉及一種簡易快速檢測植物器官或組織含原花色素(Proanthocyanidins)的方法，利用染色法，加入與原花色素特異結合的染料對植物的器官或組織染色，DMACA(p-dimethylaminocinnamaldehyde)的酸性-醇類溶液可以使含有原花色素的植物器官或組織變為藍色，原花色素含量越高，顏色越藍，而不含原花色素的植物器官或組織則不產生藍色，從而達到快速檢測植物樣品中是否含有原花色素的目的。
文檔編號G01N31/22GK102323378SQ201110250289
公開日2012年1月18日 申請日期2011年8月29日 優先權日2011年8月29日
發明者嚴明理, 劉麗莉, 向建華, 賀巒, 金元昌 申請人:湖南科技大學