阿膠低肽的製備方法

2023-05-21 21:07:46 1

專利名稱：：阿膠低肽的製備方法
技術領域：
：本發明涉及中藥藥效物質的提取工藝。
背景技術：
：食物或藥物中的蛋白質一般要被消化液酶解為低肽或胺基酸後而被機體吸收和利用，進而發揮營養和藥效。阿膠是著名的傳統中藥，它的服用方法一是烊化，二是製成不同配方的漿狀藥膏，均採用口服給藥。但阿膠中膠原蛋白佔到了80%,較難消化吸收，特別是對於脾胃虛弱的病人消化道內酶的活性低，其消化能力差，口服阿膠消化吸收不完全，達不到應有的藥效，同時還會增加胃腸負擔。目前還沒有其它的針對阿膠的這一缺點進行改進的技術。本發明採用仿生學原理和技術，即，利用生物酶解技術和超濾技術提取阿膠的藥效物質—一阿膠低肽。使它能夠完全口服吸收，並且為注射劑提供了直接的原料。所得阿較低肽，也已經藥效學實驗證實，具有較強的升血、提高機體免疫力、抗衰老等功效。
發明內容本發明是按照以下技術方案實現的，將阿膠膠漿在一定pH值、一定溫度下，先加入胃蛋白酶進行水解，然後再加胰蛋白酶進行水解，這樣做的目的是按照仿生學的原理，模仿藥品在人體胃內和小腸內的環境，將不能吸收的大分子阿膠膠原蛋白水解成易吸收的小分子低肽，水解之後將酶滅活，繼而用超濾柱進行超濾，得部分阿膠低肽，之後將超濾液再用大孔吸附樹脂柱分離純化阿膠低肽，進一步得到阿膠低肽洗脫液，減壓、低溫濃縮，乾燥，製得阿膠低肽。在選用阿膠原料藥時，可以是阿膠生產過程中的膠漿，這樣可以降低部分成本，也可以使用成品阿膠，將其烊化後去除脂肪的膠漿。將阿膠膠槳調pH值15時加入胃蛋白酶，將阿膠原料調pH值610時加入胰蛋白酶這樣基本符合胃和小腸內的酸鹼度。如將阿膠膠漿調pH值l3時加入胃蛋白酶、將阿膠原料調pH值7.58.5時加入胰蛋白酶為最宜。加入胃蛋白酶和胰蛋白酶時的溫度在3242°C。優選溫度是，當加入胃蛋白酶和胰蛋白酶時的溫度在3642"C為最宜。所使用的超濾柱是3kD或5kD分子截流量的超濾柱。對經過酶解的阿膠水解液進行超濾，得到了小於3kD或5kD分子和大於3kD或5kD分子的二部分超濾液，對前者則再採用大孔吸附樹脂柱分離純化，除去糖類及其它雜質，以收集更多的阿膠低肽；對後者則需重複再做酶解。對超濾後分子量仍大於3kD或5kD的肽需再進行二次或三次酶解、超濾柱超濾、大孔吸附樹脂柱分離，得到更多的阿膠低肽，這樣做會充分提取阿膠中的低肽，節約了原料，減少了成本。本發明製取的阿膠低肽，其最終目的是為研製更方便給藥和更快發揮藥效的製劑，採用5kD的分子截流量的超濾柱所得的阿膠低肽可作口服製劑的原料，如膠囊劑、片劑、口服液等，採用3kD的分子截流量的超濾柱所得的低肽可作注射劑的原料。本發明提供了一種提取傳統中藥阿膠藥效物質的新方法，它的特點在於，第一，採用仿生學的技術，直接提取了阿膠的有效成份用於病人，解決了消化能力低下患者口服現有阿膠製品吸收不完全的問題，提高傳統阿膠藥品的生物利用度。第二，為阿膠的注射給藥和製成其它口服劑型提供了安全有效的原料製備工藝。第三、利用對低肽的含量進行測定，使得該製劑質量穩定可控，而目前阿膠的口服劑型均沒有指標成分的檢測，填補了這方面的空白。通過實驗研究，也證明本發明所取得的阿膠低肽優於傳統的阿膠製劑。1、對失血性貧血模型的藥效研究取大鼠25隻，取5隻作為空白對照，用乙醚輕度麻醉，經心臟採血，造成大鼠失血，失血量為大鼠用血量的25%(用血量按體重的6%)。失血後24h,將大鼠固定於特製的大鼠固定籠具，尾部用溫水加溫，使大鼠尾部充血，用剪刀剪斷尾尖，取血0.02ml，加入裝有3.98ml紅細胞稀釋液的試管中，搖勻。鏡下計5個中方格中的紅細胞數，作為給藥前的紅細胞數。將所有造模大鼠(除空白組外)平均分成4組，於造模後第2天開始分別給予阿膠灌胃(5。％阿膠燉化液0.6ml/只)，阿膠注射(lkD^3kD阿膠預試驗藥液0.05ml/只，<3kD阿膠預試驗藥液0.05ml/只)，5%葡萄糖注射液(0.05ml/只)，每天一次，連續給藥7天，給藥結束後，所有大鼠再次經尾部取血，紅細胞計數方法同前。見表RBC(XlOVml)給藥前給藥後均值升高值空白組6.27±0.696.83±0.520.55阿膠灌胃組6.28±0.687.24±0.720.96*阿膠注射組(lkD3kD)6.19±0.847.52±1.161.33*阿膠注射組(<3kD)6.15±0.888.09±0.661.94*葡萄糖注射組6.31±0.736.90±0.910.59Hb(g/100ml)給藥前給藥後均值升高值空白組6.82±0.457.40±0.500.58阿膠灌胃組6.80±0.687.57±0.720.77阿膠注射組(lkD3kD)6.73±0.557.97±0.411.24*阿膠注射組(<3kD)6.76±0.718.06±0.97'1.30*葡萄糖注射組6.87±0.827.60±0.780.73*:表示P〈0.05(後4組均與空白組比較)阿膠灌胃組對比空白組，有RBC升高的作用，但Hb提升無統計學意義。阿膠注射組對比空白組，RBC和Hb均升高，且P〈0.05。證明口服和注射阿膠，藥效學均有效，且注射給藥組藥效高於灌胃組。2、對環磷醯胺及氯黴素所致貧血模型的藥效結果選用健康昆明種小鼠55隻隨機分為5組，(雄性，67周齡，體重20土2g)。給予環磷醯胺(CTX)50.0mg/kg及氯黴素(CH)62.5mg/kg，共5天。第一組(15隻)不給予任何藥物，分別於第6、IO及14天摘取右側眼球取血，抗凝檢測紅細胞及血紅蛋白。第二組(10隻)於第6天起給予阿膠灌胃(5%阿膠燉化液0.6ml/只)。第三、四組(20隻)，第6天起給予阿膠注射(lkD3kD阿膠預試驗藥液0.05ml/只，〈3kD阿膠預試驗藥液0.05ml/只)。第5組(10隻)第6天起給予5%葡萄糖注射(0.05ml/只)，分別於第10及14天摘取右側眼球取血，抗凝檢測紅細胞及血紅蛋白。見表tableseeoriginaldocumentpage5*:表示P〈0.05(後4組均與空白組比較)。阿膠灌胃組比空白組RBC和Hb值均有升高趨勢；阿膠注射組比空白組RBC和Hb值升高，且P<0.05，證明藥效學有效。但灌胃組和注射組之間差別無統計學意義。實施方案實施例一原料阿膠300g，步驟1、將阿膠粉碎，加20倍量水(g/g)，加熱溶解，靜置，去除上層脂肪，調整pH值2.0土0.1，加入胃蛋白酶，於41士0.5。C水浴中酶解2h，然後於85士0.5。C水浴中滅活15min，放冷；調整pH值為8.0士0.1，加入胰蛋白酶，於41±0.5'C水浴中酶解3h,然後於85士0.5'C水浴中滅活15min，放冷。2、將酶解液置於水浴中加熱至40°C，依次通過分子量截流值為3kD或〉5kD的超濾柱，收集超濾液，用大孔吸附樹脂柱分離，以除去糖類及其他雜質，進而得到3kD或5kD肽類組分。對大於3kD或大於5kD的一次水洗液再進行2次酶解並超濾、分離，得肽類組分，三次洗脫液合併。3、將洗脫液減壓濃縮，乾燥，即得成品阿膠低肽。實施例二原料阿膠生產中的膠漿300ml，1、阿膠膠漿，加15倍量水(v/v),調整pH值2.0土0.1，加入胃蛋白酶，於41士0.5。C水浴中酶解2h，然後於85士0.5。C水浴中滅活15min，放冷；調整pH值為8.0士0.1，加入胰蛋白酶，於41士0.5-C水浴中酶解3h,然後於85土0.5。C水浴中滅活15min，放冷。2、將酶解液置於水浴中加熱至40°C,依次通過分子量截流值為3kD或〉5kD的超濾柱，收集超濾液，用大孔吸附樹脂柱分離，以除去糖類及其他雜質，進而得到3kD或5kD肽類組分。對大於3kD或大於5kD的一次水洗液再進行2次酶解並超濾、分離，得肽類組分，三次洗脫液合併。3、將超濾液減壓濃縮，乾燥，即得阿膠低肽成品。權利要求1、阿膠低肽的製備方法，其特徵在於，將阿膠原料藥在一定pH值、在一定溫度下，先後加入胃蛋白酶和胰蛋白酶進行水解，然後將酶滅活，繼而用超濾柱進行超濾，得部分阿膠低肽，之後將超濾液再用大孔吸附樹脂柱分離，進一步得到阿膠低肽洗脫液，最後將所得阿膠肽低洗脫液減壓、低溫濃縮，乾燥。2、如權利要求1所述的阿膠低肽的製備方法，其特徵在於，阿膠原料藥可以是阿膠生產中的膠漿，也可以使用成品阿膠烊化後去除脂肪的膠漿。3、如權利要求1或2所述的阿膠低肽的製備方法，其特徵在於，將阿膠膠漿調pH值l5時加入胃蛋白酶，將阿膠原料調pH值610時加入胰蛋白酶。4、如權利要求1或3所述的阿膠低肽的製備方法，其特徵在於，阿膠膠漿調pH值13時加入胃蛋白酶、將阿膠原料調pH值7.58.5時加入胰蛋白酶為最宜。5、如權利要求1所述的阿膠低肽的製備方法，其特徵在於，加入胃蛋白酶和胰蛋白酶時的溫度在3242°C。6、如權利要求1或5所述的阿膠低肽的製備方法，其特徵在於，加入胃蛋白酶和胰蛋白酶時的溫度在3642'C為最宜。7、如權利要求1所述的阿膠低肽的製備方法，其特徵在於，所指超濾柱是3kD或5kD分子截流量的超濾柱。8、如權利要求1所述的阿膠低肽的製備方法，其特徵在於，分子量小於3kD或5kD的超濾液再用大孔吸附樹脂柱分離，除去糖類及其他雜質，以收集更多的肽類組分。9、如權利要求1所述的阿膠低肽的製備方法，其特徵在於，超濾後分子量大於3kD或5kD的肽再進行二次或三次酶解、超濾柱超濾、大孔吸附樹脂柱分離，得到更多的阿膠低肽。10、如權利要求6所述的阿膠低肽的製備方法，其特徵在於，採用5kD的分子截流量的超濾柱所得的阿膠低肽可作口服製劑的原料，如膠囊劑、片劑、口服液等，採用3kD的分子截流量的超濾柱所得的低肽可作注射劑的原料。全文摘要阿膠低肽的製備方法，本發明涉及中藥藥效物質的提取工藝。藥物中的蛋白質一般要被消化液酶解為低肽或胺基酸後而被機體吸收和利用。阿膠中膠原蛋白佔到了80％，較難消化吸收，達不到應有的藥效。本發明採用仿生學原理和技術，即，利用生物酶解技術和超濾技術提取阿膠的藥效物質——阿膠低肽。將阿膠原料藥在一定pH值、在一定溫度下，先後加入胃蛋白酶和胰蛋白酶進行水解，繼而用3kD或5kD超濾柱進行超濾，得超濾液，之後將超濾液用大孔吸附樹脂柱分離、純化，進一步得到阿膠低肽洗脫液，最後將所得阿膠肽低洗脫液減壓、低溫濃縮，乾燥，成品。所得阿膠低肽，經藥效學實驗證實，具有較強的升血、提高機體免疫力、抗衰老等功效；同時為製作阿膠的其它口服劑型和注射劑提供了工藝和原料。文檔編號C07K1/00GK101294186SQ200810015660公開日2008年10月29日申請日期2008年4月3日優先權日2008年4月3日發明者付英傑,田景振申請人:山東中醫藥大學