一種高效的紅花石蒜快速繁殖方法

2023-05-22 07:49:11 3

專利名稱：一種高效的紅花石蒜快速繁殖方法
技術領域：
本發明涉及高效的紅花石蒜快 速繁殖方法，屬於植物的人工繁殖和栽培方法技術領域。
背景技術：
紅花石蒜(L. radiata)是石蒜科石蒜屬多年生草本植物，地下有球形鱗莖，外包暗褐色膜質鱗被。花瓣色澤鮮紅，又名「曼珠沙華」，是重要的觀賞植物和藥用植物。紅花石蒜鱗莖的主要藥用成分是各種石蒜鹼和加蘭他敏。石蒜鹼及其衍生物具有一定抗癌活性，並能抗炎、解熱、鎮靜及催吐，對阿米巴痢疾亦有療效。加蘭他敏為可逆性膽鹼酯酶抑制劑，用於治療老年痴呆症，脊髄灰質炎等中樞性麻痺疾病引起的癱瘓、重症肌無カ等。目前這些成分均已可以以商業規模提取。在自然條件下，多數石蒜自然結實率很低，即使結實，但受生長環境的制約，能萌發成苗的極少。目前的紅花石蒜多為三倍體，主要以無性繁殖為主，毎年母鱗莖以「自然分裂」法分裂為2個子鱗莖成長為2個新植株，自然繁殖係數很低。近幾年來，由於製藥エ業的大量提取，原分布最廣、蘊藏量最多的紅花石蒜(L. radiata)和忽地笑(L. aurea)的野生資源也急劇減少。長期的人工繁殖是導致紅花石蒜鱗莖退化的原因，並嚴重影響紅花石蒜對逆境的抵抗能力和種球質量，且制約了紅花石蒜的育種進程。

發明內容
本發明的目的在於提供一種高效的紅花石蒜快速繁殖方法，進行規模化生產以及以紅花石蒜組培為基礎的其他學科的研究工作的需要。本發明的技術方案是這樣實現的，該種石蒜快速繁殖方法的主要特點是A外植體消毒選取多年生紅花石蒜的鱗莖洗浄，剝去外層鱗片，切除根部，切去鱗莖上半部分約1/2 2/3。將留有鱗莖盤的鱗莖均分為4 8塊，用O. I %的安利洗滌液在搖床上震蕩洗滌15 20min，流水衝洗30 60min後，再在超淨工作檯上用75%的酒精漂洗30s,無菌水清洗4遍後,用含I %的次氯酸鈉，無菌水衝洗4-5遍,最後用無菌濾紙吸乾表面水分；B叢生芽誘導將滅過菌的小塊鱗莖接種到以下培養基中MS基本培養基，適當濃度的植物生長激素，適當PH值，進行光照培養30 40天；C不定芽増殖待不定芽生長至2-3cm，將帶有不定芽的鱗莖接種到以下培養基中MS基本培養，適當濃度的植物生長激素，適當PH值；D生根培養選取生長健壯的試管苗，連同小鱗莖接種到如下培養基中1/2MS或MS基本培養基，蔗糖60 90g/L，適當濃度的植物生長激素，適當PH值，進行光照培養50 60天。E煉苗移栽將組培瓶蓋打開，並添加少量的蒸餾水，進行有菌條件馴化；用鑷子將組培苗從瓶中取出，移栽到已經滅菌的栽培基質中，進行遮陰馴化3周，期間不定期的噴施1/2MS營養液。所述的紅花石蒜快速繁殖方法的延伸技術方案包括步驟A中的消毒試劑和時間、步驟B中的pH值範圍以及步驟B、C、D、E中石蒜快速繁殖所述的培養基中涉及的植物生長激素，包括6-卞基腺嘌呤(6-BA)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、2，4_ 二氯苯氧乙酸(2,4-D)其中一種或幾種。所述的紅花石蒜快速繁殖方法的延伸技術方案包括步驟A中的種子消毒用試劑O. I %的安利洗滌液在搖床上震蕩洗滌15 20min和含I %次氯酸鈉滅菌20 30min。所述的紅花石蒜快速繁殖方法的延伸技術方案包括步驟B，C，D中pH值範圍為5. 8 7. O。所述的紅花石蒜快速繁殖方法的延伸技術方案包括其特徵在於步驟B所涉及到的植物生長激素為6-卞基腺嘌呤(6-BA) 3. O 5. Omg/L，萘乙酸(NAA) O. I O. 5mg/L。 所述的紅花石蒜快速繁殖方法的延伸技術方案包括步驟C中所涉及到的植物生長激素為，植物生長激素6-卞基腺嘌呤出-BA) 5. O 6. Omg/L，2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D) O. 5 2. Omg/L,蔡乙酸(NAA) O. I O. 5mg/L。所述的紅花石蒜快速繁殖方法的延伸技術方案包括步驟D中所涉及到的植物生長激素為卩引哚丁酸(IBA) I. O 2. Omg/L,鹿糖60 90g/L。採用植物組織培養的方法繁殖紅花石蒜，不僅可以擺脫外界條件的影響，四季都能進行生產，而且可以節約育苗佔地，降低生產成本。植物組織培養技術是利用細胞的全能性，採取植物體上的細胞團夥一塊組織，通過人為條件的控制，使這些組織形成千百萬植株，並且保存了母體的全部優良性狀，且遺傳性狀穩定。組織培養快速繁殖是目前儘快滿足市場需求的有效途徑，同時也是種質保存(超低溫保存)、誘變育種及遺傳轉化的基礎。這種方法保留了紅花石蒜的植株活性，可在短期內形成大量優良試管苗，進行規模化、工廠化生產。


圖I是開始萌發不定芽的紅花石蒜鱗莖圖，圖2增殖和生長的不定芽，圖3是生根壯苗的紅花石蒜植株，圖4是煉苗移栽前的紅花石蒜小鱗莖和植株。
具體實施例方式下面結合紅花石蒜的快速繁殖的實例說明本發明的具體實施方式
。實例I不定芽的誘導和培養I.取紅花石蒜的地下鱗莖，剝去外層鱗片，切除根部，切去鱗莖上半部分約1/2 2/3。將留有鱗莖盤的鱗莖均分為4 8塊，用O. I %的安利洗滌液在搖床上震蕩洗滌15 20min,流水衝洗60min後，再在超淨工作檯上用75%的酒精漂洗30s，無菌水清洗4遍後，用含I %次氯酸鈉溶液消毒20 30min (在次氯酸鈉溶液中加入幾滴吐溫80)，無菌水衝洗4-5次,最後用無菌濾紙吸乾種子表面水分。2.將消毒好的紅花石蒜鱗莖小塊直接接種到不定芽誘導培養基中MS基本培養基中添加，6-卞基腺嘌呤(6-BA)3. Omg/L，萘乙酸(NAA)O. 2mg/L，蔗糖30g/L，適當pH值；培養溫度28±1°C，光照強度1000 30001x，光照時間10 16h，進行光照培養。實例2叢生芽的誘導和試管苗的生根、移栽
I.培養30天後，待芽苗生長至2-3cm，將芽苗重新接種到本發明的叢生芽增殖培養基中，進行增殖培養。叢生芽誘導培養基是以MS培養基為基本培養基，並添加植物生長激素6-卞基腺嘌呤(6-BA) 5. Omg/L，2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D) I. Omg/L，萘乙酸(NAA) O. 5mg/L,蔗糖30g/L，進行增殖培養。培養30天以上，誘導率達到98 %，大部分芽苗可誘導出叢生芽數達到7-8個。2.選取生長健壯的試管苗，然後接種到1/2MS基本培養基上，吲哚丁酸(IBA) I. Omg/L,蔗糖60g/L，進行生根誘導。培養40天後，生根率達86 %，平均根數目達18. 5根。3.將紅花石蒜組培苗生根培養I. 5-2個月後開始進行煉苗移栽，首先將組培瓶移入光照培養箱，進行變溫變光馴化5-7天，再將組培瓶蓋打開，並添加IOml蒸餾水，進行有菌條件馴化2-3天。然後將組培苗移栽到已經滅菌的栽培基質(泥潭珍珠巖園土 = 1:1: 5)中，放置無加溫加光的溫室中，進行遮陰馴化3周，期間不定期的噴施1/2MS營養液，移栽後成活率達78%。以上實例的紅花石蒜組培快繁狀況見附圖。
權利要求
1.一種高效的紅花石蒜快速繁殖方法，其特徵在於 A、外植體消毒選取多年生紅花石蒜的鱗莖洗淨，剝去外層鱗片，切除根部，切去鱗莖上半部分約1/2 2/3。將留有鱗莖盤的鱗莖均分為4 8塊，用0. I %的安利洗滌液在搖床上震蕩洗滌，流水衝洗30 60min後，再在超淨工作檯上用75%的酒精漂洗30s，無菌水清洗4遍後,用含I %的次氯酸鈉,無菌水衝洗4 5遍,最後用無菌濾紙吸乾表面水分； B、叢生芽誘導將滅過菌的小塊鱗莖接種到以下培養基中MS基本培養基，適當濃度的植物生長激素6-卞基腺嘌呤(6-BA) 3. 0 5. Omg/L，萘乙酸(NAA) 0. I 0. 5mg/L，適當PH值，進行光照培養30 40天； C、不定芽增殖待不定芽長至2-3cm，將帶有不定芽的鱗莖接種到以下培養基中MS基本培養，植物生長激素6-卞基腺嘌呤出-BA) 5.0 6. Omg/L，2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D) 0. 5 2. Omg/L，萘乙酸(NAA) 0. I 0. 5mg/L，適當 PH 值； D、生根培養選取生長健壯的試管苗，連同小鱗莖接種到如下培養基中1/2MS或MS基本培養基，蔗糖60 90g/L，吲哚丁酸(IBA) I. 0 2. Omg/L，適當PH值，進行光照培養50 60天； E、煉苗移栽將組培瓶蓋打開，並添加少量的蒸餾水，進行有菌條件馴化；用鑷子將組培苗從瓶中取出，移栽到已經滅菌的栽培基質中，進行遮陰馴化3周，期間不定期的噴施1/2MS營養液。
2.根據權利要求I所述一種高效的紅花石蒜快速繁殖方法，其特徵在於步驟A中的種子消毒用試劑0. I %的安利洗滌液在搖床上震蕩洗滌15 20min和I %次氯酸鈉滅菌20 30mino
3.根據權利要求I所述一種高效的紅花石蒜快速繁殖方法，其特徵在於步驟B，C，D中所涉及到的pH值範圍為5. 8 7. O。
全文摘要
本發明提供一種高效的紅花石蒜快速繁殖方法，進行規模化生產和繁殖以滿足市場需要的紅花石蒜組織培養步驟包括A.外植體消毒，B.不定芽的誘導，C.不定芽的增殖，D.生根培養，E.煉苗與移栽。採用植物組織培養的方法繁殖紅花石蒜，不僅不受外界條件的影響，四季皆可進行，節約苗木佔地，降低生產成本，而且可以保存母體的全部優良性狀，遺傳性狀穩定。這種方法可在短時間內形成大量的優良試管苗，進行規模化、工廠化生產，為觀賞園藝、製藥等產業提供大量的原材料。
文檔編號A01H4/00GK102696479SQ20121012066
公開日2012年10月3日 申請日期2012年4月24日 優先權日2012年4月24日
發明者夏冰, 彭峰, 李曉丹, 江玉梅, 汪仁, 賀佳 申請人:江蘇省中國科學院植物研究所