一種中藥凍幹注射劑中活性化合物含量的測定方法
2023-05-08 17:17:41
專利名稱：一種中藥凍幹注射劑中活性化合物含量的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥凍幹注射劑中活性化合物含量的測定方法，屬於藥物製劑分 析技術領域。
背景技術：
中藥凍幹注射劑在質量標準上，要求控制的項目比較多，其中，有效化合物的含量 控制對中藥凍幹注射劑的質量控制至關重要。CN1785223A公開了一種治療肌肉萎縮及重症肌無力的藥物及其製備方法，該專利 公開了該藥物的組方、製劑以及膠囊、片劑等製備方法；該專利還公開了該藥物的藥效學實 驗，證實該藥物具有增強正常運動神經元活力，促進神經突起生長，又能保護興奮性胺基酸 毒性損傷運動神經元，減少細胞凋亡，在維持中樞神經系統功能，延緩病情發展，提高患者 生存質量方面具有重要的臨床應用價值；該專利還公開了其中人參提取物的製備方法，「取 人參藥材，用60-90%乙醇提取1-3次，第1次加藥材8-12倍量溶劑提取1_2小時，第2次 加6-10倍量溶劑提取1-2小時，第3次加6-10倍量溶劑提取0. 5-1小時；合併上述提取液， 趁熱濾過，減壓回收乙醇，並濃縮，放入不鏽鋼桶內，加純水攪拌均勻，冷藏對-3他；將冷藏 液取出，放至常溫，板框過濾器過濾，用少量水洗滌板框，濾液加純水稀釋，備用；取人參濃 縮藥液通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，並分別用pH值8-9的氨水、20%乙醇、80% 乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液。將80%洗脫液加入純水，配成50%醇溶液，通過中性氧 化鋁柱，收集洗脫液，再用少量50%乙醇洗滌柱子，合併洗脫液備用；取藥液加入活性炭， 回流加熱，煮沸20min，趁熱板框抽濾，收集濾液，濃縮，冷藏過夜；澄清板過濾，減壓乾燥， 即得人參提取物。」該人參提取物即為人參總皂苷提取物；該專利還公開了淫羊藿提取物的 提取方法，「取淫羊藿藥材，加水煎煮提取2-5次，加水量為10-30倍，第一次提取時間定為 0. 5-2h，以後3次為0. 5-lh ；合併上述提取液，趁熱濾過，減壓濃縮，放入不鏽鋼桶內，加乙 醇至藥液含醇濃度為70%，冷藏；過濾，濾液回收乙醇並濃縮，加水攪拌均勻，冷藏，過濾， 備用；取淫羊藿藥液通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，並分別用純水、20%乙醇、50% 乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液；洗脫液拌入適量硅藻土混勻，用無水乙醇提取2-5次，提 取液合併，回收乙醇並濃縮，濃縮液加入丙酮，並攪拌均勻，冷藏，過濾，沉澱加丙酮再同前 處理2次，合併3次濾液，回收溶劑，並濃縮，減壓乾燥，即得淫羊藿提取物。」該淫羊藿提取 物即為淫羊藿總黃酮提取物。該專利未公開凍幹注射劑製備及其含量測定方法。由CN1785223A公開的技術內容，可以看出，該中藥組合物包括黃酮類和皂苷類成 分。黃酮類化合物具有強的紫外吸收，而皂甙具有弱紫外吸收。由於皂苷類成分的極性較 大，含量較低，採用傳統的紫外或蒸發光檢測器來分離和鑑定其活性成分即繁瑣又耗時，因 此建立一個靈敏的、選擇性強的方法來同時分析皂苷和黃酮類化合物，非常必要。本專利申請即是在CN1785223A的基礎上做了進一步的研發，在研製該中藥組合 物的凍幹注射劑的基礎上，制定了活性化合物含量的測定方法。
發明內容
本發明的目的是提供一種中藥凍幹注射劑活性化合物含量的測定方法。本發明所述中藥凍幹注射劑是由如下重量份比例的原料製成人參總皂苷提取物30-70 淫羊藿總黃酮提取物20-60。具有高靈敏度的液質聯用，在進行中藥成分分析時，可以提供化合物的多組分的 同時檢測有用的信息，尤其對於那些難以用傳統的分析檢測方法測定的微量成分，本發明 採用高效液相色譜串聯質譜(HPLC-MS/MQ法，通過MS1，MS2和保留規律，定性表徵和定量 分析了本發明所述中藥凍幹注射劑化合物含量的測定方法。本發明測定方法可以有效的、 可靠的對本發明所述中藥凍幹注射劑進行質量控制，以確保其安全有效。本發明測定方法中，液相色譜條件和質譜條件優選如下液相色譜條件柱溫為25°C ；流動相A為0. 甲酸，B為乙腈；流速為0. 7mL/ min ；梯度0-6 分鐘，16-38% B,6-15 分鐘，38-50% B、15-18 分鐘，50-95% B、18-20 分鐘， 95-16% B ；質譜條件負離子方式檢測；源噴射電壓為-4500V ；霧化溫度為650°C ；霧化氣壓 力為60psi ；輔助氣壓力為65psi ；氣簾氣壓力為25psi ；掃描方式為多反應監測；駐留時間 均為40ms，碰撞室出口電壓-5. 0V，進口電壓:-10. OV。其中液相色譜柱優選為C18反相柱，質譜條件中的霧化氣、輔助氣和氣簾氣優選 為氮氣。本發明測定方法中，所述中藥凍幹注射劑活性化合物優選為15種，分別為人參 皂苷Rbl、人參皂苷Rb2、人參皂苷Re、人參皂苷Rd、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、人參皂苷 Rgl、人參皂苷Rg2、20- (S)人參皂苷Rg3、20 (R)-人參皂苷Rg3、淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定 B、朝藿定C和金絲桃苷。結構式如下人參皂苷Rbl:人參皂苷Rb2:
權利要求
1.一種中藥凍幹注射劑中活性化合物含量的測定方法，該中藥凍幹注射劑是由30-70 重量份的人參總皂苷提取物和20-60重量份的淫羊藿總黃酮提取物製成，其特徵在於該方 法採用高效液相色譜串聯質譜法。
2.根據權利要求1所述測定方法，其特徵在於所述高效液相色譜串聯質譜法的色譜條 件為液相色譜條件柱溫為25°C ；流動相A為0. 甲酸，B為乙腈；流速為0. 7mL/min ；梯 度0-6 分鐘，16-38% B,6-15 分鐘，38-50% B、15-18 分鐘，50-95% B、18-20 分鐘，95-16% B ；質譜條件負離子方式檢測；源噴射電壓為-4500V ；霧化溫度為650°C ；霧化氣壓力為 60psi ；輔助氣壓力為65psi ；氣簾氣壓力為25psi ；掃描方式為多反應監測；駐留時間均為 40ms，碰撞室出口電壓-5. OV 進口電壓-10. OV。
3.根據權利要求2所述的測定方法，其特徵在於所述液相條件中色譜柱採用C18反相柱。
4.根據權利要求2所述的測定方法，其特徵在於所述質譜條件中霧化氣、輔助氣和氣 簾氣均為氮氣。
5.根據權利要求1-4任一項所述的測定方法，其特徵在於所述活性化合物為15種，分 別為人參皂苷Rbl、人參皂苷Rb2、人參皂苷Re、人參皂苷Rd、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、人 參皂苷Rgl、人參皂苷Rg2、20-(Q人參皂苷Rg3、20(R)_人參皂苷Rg3、淫羊藿苷、朝藿定A、 朝藿定B、朝藿定C和金絲桃苷。
6.根據權利要求1-4任一項所述的測定方法，其特徵在於所述中藥凍幹注射劑原料的 重量比例如下人參總皂苷提取物35 淫羊藿總黃酮提取物55。
7.根據權利要求1-4任一項所述的測定方法，其特徵在於所述中藥凍幹注射劑原料的 重量比例如下人參總皂苷提取物65 淫羊藿總黃酮提取物25。
8.根據權利要求1-4任一項所述的測定方法，其特徵在於所述中藥凍幹注射劑原料的 重量比例如下人參總皂苷提取物50 淫羊藿總黃酮提取物40。
全文摘要
本發明提供了一種中藥組合物凍幹注射劑中多種組分含量的測定方法，本發明中藥凍幹注射劑原料包括人參和淫羊藿，臨床用於運動神經元疾病(肌萎縮側索硬化症、進行性脊肌萎縮症、進行性延髓麻痺、原發性側索硬化症)、進行性肌營養不良症、先天性肌病等疾病所致的肌肉萎縮及重症肌無力的治療，本發明方法採用高效液相色譜串聯質譜法同時定性和定量分析該中藥凍幹注射劑中15個活性化合物，可以用於該產品的質量控制。
文檔編號A61K36/296GK102125594SQ20101003336
公開日2011年7月20日 申請日期2010年1月12日 優先權日2010年1月12日
發明者劉興國, 劉敏彥, 宋劍, 王貴金, 蔡豔, 裴彩雲, 賈繼明, 趙韶華, 鄭亞傑 申請人:河北以嶺醫藥研究院有限公司