包含殼聚糖和環糊精的納米顆粒的製作方法

2023-05-07 15:29:41

專利名稱：：包含殼聚糖和環糊精的納米顆粒的製作方法包含殼聚糖和環糊精的納米顆粒發明領域本發明涉及被設計用於生物活性分子的釋放的納米顆粒系統。特別地，本發明涉及由聚合物殼聚糖和環糊精的混合物組成的、可將生物活性分子置於其中的納米顆粒系統，還涉及獲得該納米顆粒系統的方法。發明背景由於聚合的納米顆粒具有以下前景改善穩定性、促進藥物輸送以及控制釋放至身體的某些區域內、克服與上皮屏障的有限滲透性相關的問題，因此聚合的納米顆粒正受到人們的特別關注。在生物可降解的聚合物中，殼聚糖由於其作為黏膜粘著劑(C,M.Lehr，J.A.Bouwstra，E.H.Schacht和H.E.Junginger，丄泡亂，1992，78，43-48)和吸收促進劑(P.Artursson，T.Lindmark,S.S.Davis和L.Illum，屍/flrm.ies.，1994，11,1358-1361)的性質近年來受到廣泛關注。此外，科學研究認可殼聚糖為具有可接受的毒理學特徵譜(toxicologicalprofile)的物質(S.B.Rao和C.P.Sharma,J.Biomed.Ma欣to"1997，34，21-28)，其已被FDA批准為動物營養品中的添加劑(J.D.McCurdy,draweesC7Y/朋dCMos朋，ElsevierAppliedScience,London,1992,pp.757-764)。殼聚糖[a(l-4)2-氨基-2-脫氧-Z3-D-葡聚糖]是由甲殼質的脫乙醯作用產生的天然多糖。然而，實際上，用作營養補充劑或用於醫藥應用的殼聚糖是乙醯化的單體和脫乙醯化的單體的無規聚合物。作為用於大量的治療分子的跨黏膜給藥的載體，殼聚糖的納米顆粒已得到廣泛研究(A.M.DeCampos,Y.Diebold,E.L.Carvalho，A.Sanchez和M.J.Alonso，屍Awm.Was.,2004,21，803-810;R.Fernandez-Urrusuno，P.Calvo，C.Remufi&n-L6pez,J.L.Vila-Jato和M.J.Alo謂，泡度i仏，1999,16，1576-1581;A.Prokov，E.Kozlov，G.W.Newman禾口M.J.Newman,Sz'oewg7,ween7zg，2002，78,459-466;A.Vila,A.Sanchez,K.Janes,I.Behrens,T.Kissel,J.L.Vila-Jato和M.J.Alo勵，Eur.,泡亂腸//^亂，2004,57，123-131)。這些顆粒系統的顯著特徵是其改善低滲透性分子的吸收特性的能力(R.Fernandez-Urrusuno,P.Calvo,C.Remufi&n-L6pez,J.L.Vila-Jato禾口M.J.Alonso,1999，16，1576-1581;A.Vila,A.Sanchez,K.Janes,I.Behrens，T.Kissel,J.L.Vila-Jato和M.J.Alonso,五wJ",i^am.所印;mnw.，2004，57,123-131)。雖然殼聚糖的納米顆粒已證實其具有與親水性藥物有效結合的能力，但是這些系統通常對疏水性藥物的結合，特別是對那些低水溶性的疏水性藥物的結合表現出局限性。目前，雖然僅發現一篇關於殼聚糖的納米顆粒與極低水溶性藥物的應用的參考文獻(A.M.DeCampos，'A.Sanchez和M.J.Alonso,/"Li^arm.，2001，224，159-168),但是在本研究中，需要使用有機溶劑的製備方法是必需的。另一方面，公知環糊精是低溶解性分子的絡合劑以及用於有效成分給藥的載體。其中，化學改性的環糊精由於其更高的化學多樣性目前被最廣泛地用於藥物技術中。例如，通過曱基、羥丙基或羧曱基基團對羥基的取代賦予分子更大的水溶性和更好的毒性特徵。其它環糊精有可能賦予配合物有限的溶解性(用於緩釋系統的製劑)或溫度依賴的溶解性。近來，環糊精作為藥物賦形劑的其它潛在效用已展現出來。因此，已證實環糊精的配位作用能夠降低某些不穩定藥物的降解動力學，或減少形成諸如胰島素等不活潑的肽聚集體的傾向。此外，已顯示，某些環糊精由於其與脂質的配位作用使得該環糊精在細胞膜中產生輕微變性，從而具有促進藥物吸收的能力。多篇文獻公開了環糊精和殼聚糖作為溶液、凝膠中的聚合物或作為肉眼可見的固體基質的共同應用(US2002150616、US5476654、US5330764、US6677346、US6497901、US5849327)。美國專利申請US2002150616提出由低溶解性藥物、環糊精和親水性聚合物組成的混合物。EP07308697〉開了同樣由聚合物和環糊精的混合物組成的藥物釋放系統。文獻US5843347、US5840341和US5639473公開了溶液中、肉眼可見的顆粒中或微粒中的聚合物組合物。所描述的用於形成顆粒的方法，例如擠壓(US5843347)，或用於形成油包水乳液的方法(US5639473)不可能產生比若干微米更小的顆粒。WO9961062涉及含有環糊精的聚合微粒的製備，其中該環糊精具有保護藥物使其不與聚合物基質發生潛在不利的相互作用的功能。專利US6630169公開了作為通過跨黏膜途徑給藥的疫苗載體的微觀結構的形成。專利US5639473涉及通過與二硫基團交聯使親水聚合物(例如殼聚糖)或寡糖(例如環糊精)改性。根據所述發明的描述，所提出的方法導致顆粒系統在0.1微米至20微米之間。WO03027169公開了用共價結合的環糊精形成親水聚合物衍生物以及其對藥物系統(包括微粒和納米顆粒)的形成的效用。專利US619757公開了製備方法，其包括在構成基質的多糖或寡糖乳液中進行交聯以在這些分子中產生醚型鍵。專科US5700459和US6649192公開了形成用於藥物應用的殼聚糖的納米顆粒的方法。在這兩個專利中，通過聚陽離子(例如殼聚糖)和聚陰離子(例如三聚磷酸鹽)的相互作用形成納米顆粒。US5700459提及某些環糊精(氨基環糊精)可以用作諸如殼聚糖的另一潛在聚陽離子的替代物。WO9704747提出了將藥物或藥物-環糊精配合物在納米級水凝膠基質中進行包嚢，隨後將其用脂質體和/或黏膜粘附佐劑進行包衣。所提出的方法需要將聚合物從有機相沉澱至水相中，並且將包含環糊精的藥物加入到聚合物沉澱於其中的水相中，以上兩步驟不同時發生。所述方法的這一因素可導致某些藥物的包嚢化效果不佳。值得強調的是，為形成微粒而設計的微嚢化技術通常不同於為形成納米顆粒而設計的納米技術。WO98042447>開了殼聚糖的納米顆粒的形成。發明的簡要說明本發明發現，由殼聚糖和環糊精的納米顆粒組成的系統允許生物活性分子的有效結合，也允許其隨後在適合的生物環境中釋放。與不帶有環糊精的殼聚糖的納米顆粒相比，這些納米顆粒顯示出改進的包嚢或結合疏水性藥物的能力。此外，環糊精賦予該納米顆粒系統新的特徵，例如對所結合的生物活性分子的保護作用增強以及促進吸收的能力增加，尤其對於那些低滲透性分子更是如此。因此，體內研究已證實了本發明系統通過與鼻黏膜的相互作用，又穿過鼻上皮，經上皮屏障輸送低滲透性藥物的能力。存在於本發明系統中的納米顆粒所顯示出的附加特徵是其在細胞培養基中的高穩定性，且更顯著的是其在模擬的腸液中的高穩定性，已顯示出納米顆粒的物理化學性質在模擬的腸液中至少4小時內無變化。該性質使這些系統適用於通過不同的給藥途徑，尤其是口服給藥，其使得藥物在合適的生物環境中釋放。此外，不同藥物的釋放研究顯示，納米顆粒可以以可控的、漸進的速率釋放有效成分。另一方面，結合併釋放基於核酸的大分子，例如DNA質粒的可能性使得可以通過體外研究，觀察納米顆粒以非常有效的方式轉染細胞培養物的能力，這使得本發明系統潛在地適用於基因治療。因此，本發明的一方面涉及包含納米顆粒的系統，該納米顆粒淨皮設計用於生物活性分子的釋放，且包含a)至少40%重量比的殼聚糖或其衍生物以及b)小於60%重量比的環糊精或其衍生物，其中將組分a)和組分b)混合而不形成共價鍵。任選地，納米顆粒可另外包含使殼聚糖以納米結構形式凝膠化的離子交聯劑。本發明的第二方面涉及納米顆粒系統，諸如上述所定義的納米顆粒系統，其還包含生物活性分子。在另一方面中，本發明涉及藥物組合物，該藥物組合物包含諸如上述所定義的納米顆粒系統和能夠預防、減輕或治癒疾病的生物活性分子。此外，技術人員可以使用被截留在納米結構中的肽、蛋白質或多糖，該肽、蛋白質或多糖"本身"不被認為是活性生物分子，但是其可促進給藥系統的效能。本發明的另一方面涉及包含如上所定義的納米顆粒系統和抗原的疫苗。在優選的方面中，該組合物或疫苗被設計用於跨黏膜給藥。在另一方面中，本發明涉及包含如上所述的納米顆粒系統的化妝用糹且合物。本發明的另一方面是獲得諸如所定義的被設計用於釋放生物活性分子的系統的方法，其包括a.在水介質中或在水與極性溶劑的混合物中製備殼聚糖或其衍生物的溶液；b.在任選加入交聯劑的水介質中或在任選加入交聯劑的水與極性溶劑的混合物中製備環糊精或其衍生物的溶液；以及c.在攪拌下，以自發獲得殼聚糖-環糊精的納米顆粒的方式混合步驟a)和b)的溶液。或者，任選地a.在水介質中或在水與極性溶劑的混合物中製備殼聚糖或其衍生物與環糊精或其衍生物的溶液；b.在水介質中或在水與極性溶劑的混合物中製備交聯劑的溶液；c.在攪拌下，以自發獲得殼聚糖-環糊精的納米顆粒的方式混合步驟a)和b)的溶液。可將生物活性分子直接加入到步驟a)或b)的溶液中；然而，在該方法的變體中，在將活性分子加入到步驟a)或b)之前，可將其溶解於水介質中或水與極性溶劑的混合物中。本發明的最後一方面涉及如以上所述的系統在基因治療藥物的製備中的用途。附圖的詳細說明圖l:殼聚糖-(羥丙基-/3-環糊精)製劑的TEM圖像。由25mM的羥丙基-i8-環糊精和2mg/ml的三聚磷酸鹽(左圖)或1.25mg/ml的三聚磷酸鹽(右圖)製備該製劑。圖2:殼聚糖-(羥丙基-!S-環糊精)製劑的SEM圖像。由25mM的環糊精和2mg/ml的三聚磷酸鹽製備該製劑。圖3:在37。C下，殼聚糖和環糊精的納米顆粒在pH6.4的HBSS中的穩定性(平均值±S.D.，n=3)。CS:殼聚糖；SBE-CD:磺丁基醚-環糊精；CM-CD:羧曱基-環糊精；TPP:三聚磷酸鈉；HBSS:Hanks平衡鹽溶液。圖4:在37°C和pH6.8下，殼聚糖和環糊精的納米顆粒在模擬的腸液中的穩定性(平均值±S.D.,n=3)。(□)CS/CM-CD/TPP=4/5.5/0;0)CS/CM-CD/TPP=4/4.5/0.25。CS:殼聚糖；SBE-CD:磺丁基醚-(3-環糊精；CM-CD:羧曱基-P-環糊精；TPP:三聚磷酸鈉。圖5:在37。C和pH6.8下，殼聚糖和羧曱基-P-環糊精的納米顆粒在模擬的腸液中的穩定性(平均值±S.D.,n=3)。(□)CS/CM-CD/TPP=4/3/0.5;CS/CM-CD/TPP=4/1.5/0.75。CS:殼聚糖；CM-CD:羧曱基-P-環糊精；TPP:三聚磷酸鈉。圖6:藥物三氯生和呋塞米從殼聚糖-(羥丙基-環糊精)製劑中的釋放曲線圖。製劑TRICHPoCD(三氯生和羥丙基-a-環糊精的製劑)、TRICHP/3CD(三氯生和羥丙基-(8-環糊精的製劑)、FURHPoCD(吹塞米和羥丙基-a-環糊精的製劑)、FURHPj3CD(呋塞米和羥丙基-/3-環糊精的製劑)(平均值±Std.Dev.,n=3)。圖7:殼聚糖-磺丁基環糊精納米顆粒的瓊脂糖凝膠。泳道(l)分子量標準、(2)溶液中的DNA、(3)無DNA的納米顆粒、(4)帶有DNA的納米顆粒、(5)帶有脫乙醯幾丁質酶降解的DNA的納米顆粒。培養時間為30分鐘。圖8:用1jitg的在殼聚糖-磺丁基環糊精中的pGFP質粒轉染的細胞的螢光圖像。在第48h達到轉染水平。圖9:用螢光素-環糊精標記的殼聚糖的納米顆粒在海藻糖(5%)中的穩定性。FI-CS/SBE國CD4/4;(□)FI-CS/CM-CD4/6。FI-CS:螢光素標記的殼聚糖；SBE-CD:磺丁基醚-P-環糊精；CM-CD:羧曱基-p-環糊精；TPP:三聚磷酸鈉。發明的詳細描述本發明的系統包含分散於水介質中的納米顆粒，所述納米顆粒具有包含殼聚糖和環糊精的結構，其中可加入生物活性分子。所述結構是通過兩組分之間的靜電相互作用接合，這兩種組分之間沒有任何共價鍵。任選地，納米顆粒可還包含離子交聯劑，該離子交聯劑使殼聚糖通過離子致凝膠化作用(ionotropicgelation)發生交聯的，從而促進納米顆粒的自發形成。術語"納米顆粒，，應理解為由殼聚糖和環糊精之間的靜電相互作用形成的結構，其中當將用作交聯劑的聚陰離子鹽加入到系統中時，所述結構還可以被交聯。所得到的不同納米顆粒組分之間的靜電相互作用以及任選地通過加入交聯劑引起的殼聚糖的交聯產生特有的、獨立的、可觀察的物理實體，其平均粒徑小於1(im，即平均粒徑為lnm至999nm。"平均粒徑"應理解為由水介質中共同移動的殼聚糖和環糊精所組成的納米顆粒群體的平均直徑。通過本領域技術人員公知的標準方法可測定這些系統的平均粒徑，所述標準方法例如將在下文的實驗部分中進行描述。jim,其平均粒徑優選為1nm至999nm，優選為10nm至800nm。所述顆粒的平均粒徑主要受到殼聚糖相對於環糊精的比例、殼聚糖的脫乙醯化的程度以及顆粒形成條件(殼聚糖的濃度、環糊精的濃度、交聯劑的濃度(若有的話)以及它們之間的比率)的影響。另一方面，所述納米顆粒可顯示帶有電荷(使用CLK作為稀釋介質，通過Z電位來測定)，取決於上述變量，其量值可在0mV直至+60mV內變化。納米顆粒的正電荷是受關注的，因為其有助於該納米顆粒與生物表面的相互作用，尤其是與那些帶負電荷的粘液表面的相互作用。然而，中性電荷可能更適於其腸胃外給藥。上述定義的包含被設計用於生物活性分子釋放的納米顆粒的系統，其混合物中的殼聚糖含量大於40%重量比，優選為至少40%重量比至95.5%重量比之間。另一方面，混合物中的環糊精含量小於60%重量比，優選為0.5%重量比至小於60%重量比。殼聚糖殼聚糖是源自殼質(聚-N-乙醯基-D-葡萄糖胺)的天然聚合物，其中N-乙醯基基團的重要部分通過水解去除。脫乙醯的程度優選為30%至95%，更優選為50%至95%,這表明5%至50%的氨基基團被乙醯化。因此，殼聚糖顯示出氨基多糖結構和陽離子特性。其包含式(I)的單體單元的重複(i)formulaseeoriginaldocumentpage14其中n是整數，此外，還包含了m個其中氨基基團被乙醯化的單元。n+m之和表示聚合度，即殼聚糖鏈中的單體單元數。用於產生本發明的納米膠嚢的殼聚糖的分子量為1kDa至2,000kDa，優選為5kDa至500kDa，更優選為5kDa至200kDa。可使用的商用殼聚糖的實例是UPG113、UPCL213和UPCL113,其可從NovaMatrix、Drammen、Norway處才尋至!J。包含用於產生納米顆粒的殼聚糖的單體單元的數目為5至5000單體，優選為60至600單體。作為殼聚糖的替代物，也可以使用其衍生物，應理解其衍生物為其中一個或多個羥基基團和/或一個或多個氨基基團被改性的殼聚糖，以便增強殼聚糖的穩定性或增強其粘合特性。這些衍生物包括乙醯化的、烷基化的或磺化的殼聚糖、硫醇化衍生物等等，正如Roberts,C/n'^iCAemWo;(曱殼質化學)，Macmillan，1992，166所描述的。優選地，當使用衍生物時，其選自O-烷基醚、O-醯基酯、三曱基殼聚糖、用聚乙二醇改性的殼聚糖等等。其它可能的衍生物是鹽，諸如檸檬酸鹽、硝酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、穀氨酸鹽等等。無論如何，本領域技術人員能夠確定可對殼聚糖實施的改性，而不影響最終製劑的穩定性和商業用途。環糊精環糊精在結構上由通過a(l-4)糖苷鍵結合的6、7或8個D-吡喃葡萄糖基單元組成，其分別被稱作a、P或y。這些寡糖的最穩定的三維構型是復曲面的，其中伯羥基和仲羥基向溶劑取向。在該構型中，在超環面內形成的空穴顯示出高疏水性，其是環糊精和藥物之間通過範德華力和氫橋的共同作用形成包合配合物的原因。環糊精衍生物應理解為如下環糊精或其混合物，其中在葡萄糖的2-、3-和6-位上的部分或全部羥基基團的氫被其它官能團所取代，如二羥基烷基基團、糖類殘基、羥基烷基基團、磺酸酯基團、磺烷基基團、烷基基團、烷醯基(alkanoyl)基團、乙醯基基團或苯甲醯基基團。用於本發明的環糊精或其衍生物可以是商業購得的或通過本身已知的方法合成。環糊精或其衍生物的實例包括天然環糊精(a、/5或力、羥丙基環糊精、羧曱基環糊精、磺丁基環糊精、氨基環糊精、二曱基環糊精、環糊精磷酸酯(cyclodextrinphosphate),鞋乙基環糊精、乙醯基環糊精、乙基環糊精、三曱基環糊精、羧乙基環糊精、葡糖基環糊精、6-0-a-麥芽糖基環糊精、丁基環糊精、硫酸化環糊精、N,N-二乙基氨基乙基環糊精、叔丁基曱矽烷基環糊精、曱矽烷基[(6-0-叔丁基二曱基)-2，3,-二-0-乙醯基)-環糊精、琥珀醯-(2-羥丙基)-環糊精、琥珀醯-環糊精、磺丙基-環糊精、聚環糊精。在本發明的具體實施方案中，環糊精是羥丙基-a-環糊精、羥丙基-p-環糊精、磺丁基乙基-P-環糊精或其混合物。可將它們中的任意環糊精用於本發明系統中。平均取代度(DS)是指每單位環糊精的被取代的羥基的平均數，然而摩爾取代度(MS)是指每單位的葡糖酐的羥基基團數。在本發明中，所使用的環糊精顯示出平均取代度的範圍是4.2至7，儘管也可以使用具有超出該範圍的DS的環糊精。本發明的納米顆粒系統的特徵在於，在包含殼聚糖和任選的環糊精的聚陽離子相與由環糊精、或由交聯劑或由兩者的組合形成的聚陰離子相混合後，通過納米顆粒的自發沉澱形成所述納米顆粒系統。重要的是兩相均為水性的，因此在製備本發明的系統中避免使用或最小化地使用有機溶劑。所述交聯劑是使殼聚糖發生交聯的陰離子鹽，其促使納米顆粒的自發形成。在本發明中，該交聯劑是聚磷酸鹽，優選使用三聚磷酸鈉(TPP)。當環糊精是陰離子時，其自身可形成陰離子相，則TPP的存在是不必要的，因為通過帶負電荷的環糊精和帶正電荷的殼聚糖之間的靜電相互作用可形成所述納米顆粒。然而，共同加入TPP和陰離子環糊精在某些情況下可改變交聯密度以及促進納米顆粒的穩定性。另一方面，在不帶有陰離子電荷的環糊精的情況中(不帶任何電荷或帶有正電荷)，有必要向聚陰離子相中加入TPP以使殼聚糖交聯並促使納米顆粒的形成。殼聚糖-環糊精的納米顆粒是具有很高的結合生物活性分子能力的系統。該結合能力取決於所加入的分子的類型以及特定的配方參數。在該發明中，此類型的納米顆粒尤其旨在結合疏水性活性分子和低滲透性活性分子，無論其是疏水性的還是親水性的。因此，本發明的第二方面是如上定義的納米顆粒系統還包含生物活性分子。術語"生物活性分子"是指用於治療、治癒、預防或診斷疾病的或用於改善人和動物的身體和精神健康的任何物質。這些生物活性分子可包括低分子量的藥物至多糖、蛋白質、肽和脂質類型的分子，以及基於核酸的分子及其組合。在具體的實施方案中，根據FDA定義，生物活性分子是屬於II類(非滲透性水溶性)、III類(可滲透性疏水性)以及優選的IV類(非滲透性疏水性)的藥物。可與本發明系統一起使用的生物活性分子包括下述II類分子達那唑(Danazol)、酮康唑(Ketoconazole)、曱芬那酸(mefenamicacid)、尼索地平(Nisoldipine)、硝苯地平(Nifedipine)、尼卡地平(Nicardipine)、非洛地平(Felodipine)、阿4乇伐醌(Atovaquone)、灰黃黴素(Griseofulvin)、曲格列酮(Troglitazone)、格列本脲(Glybenclamide)、卡馬西平(Carbamazepine);III類分子無環鳥苦(Acyclovir)、新黴素B(NeomycinB)、卡託普利(Captopril)、依那普利拉(Enalaprilate)、阿侖膦酸鈉(Alendronate)、阿替洛爾(Atenolol)、西咪替丁(Cimetidine)、雷尼替丁(Ranitidine);IV類分子氯噻漆(Chlorothiazide)、呋塞米(Furosemide)、妥布黴素(Tobramycin)、頭孢呋辛(Cefuroxime)、伊曲康唑(Itraconazole)、環孑包菌素(Cyclosporin)。在優選的實施方案中，生物活性分子是三氯生(triclosan)。在另一優選的實施方案中，生物活性分子是呋塞米(furosemide)。在另一具體的實施方案中，生物活性分子是肽、多糖或蛋白質類型的大分子或基於核酸的大分子(寡核芬酸、DNA、siRNA)。在優選的實施方案中，生物活性分子是胰島素。在另一優選的實施方案中，生物活性分子是肝素。在另一優選的實施方案中，生物活性分子是DNA。本發明的另一方面是包含上文所定義的納米顆粒系統和抗原的疫苗。抗原通過該包含納米顆粒的系統進行給藥，可以實現免疫應答。所述疫苗可包含蛋白質、多糖或者其可以是DNA疫苗。嚴格地講，DNA疫苗是編碼將引起免疫應答的抗原的表達的DNA分子。通過包括活性分子和聚合物之間形成非共價相互作用，或者活性分子與環糊精結合形成包合配合物，且該配合物與聚合物基質形成非為了向殼聚糖的納米顆粒中充分加入生物活性分子，使用活性分子-環糊精的配位方法，由於活性分子與環糊精的配位作用，這需要首先溶解合理量的活性分子，然後將足量的配合物包嚢在納米結構中。本發明的另一方面是藥物組合物，其包含上文所定義的納米顆粒系統以及能夠預防、減輕或治癒疾病的生物活性分子。藥物組合物的實例包括通過口服、含服或舌下途徑給藥的任意液態(納米顆粒的懸法液)或固態組合物(凍幹或霧化的納米顆粒，形成可用於製備粒劑、片劑或膠嚢的粉末)，或者通過經皮、眼部、鼻腔、陰道或腸胃外途徑給藥的液態或半固態形式的組合物。在非腸胃外途徑的情況中，通過賦予所述納米顆粒相當數量的正電荷可改善該納米顆粒與皮膚或黏膜的接觸，賦予該納米顆粒相當數量的正電荷將有助於其與上述的帶負電荷的表面相互作用。在腸胃外途徑的情況中，更具體地在靜脈給藥的情況中，這些系統可以調節與之結合的藥物或分子的體內分布。在優選的方面中，所述藥物組合物通過跨黏膜途徑給藥。殼聚糖-環糊精混合物的正電荷通過與黏膜和帶負電荷的上皮細胞的表面的相互作用提供了該藥物在粘液表面上的較好吸收。加入到納米顆粒中的活性成分的比例可高達為相對於系統總重的40%重量比。然而，在每種情況中，合適的比例取決於待加入的活性成分、設計該比例所為的適應證以及釋放效率。本發明的納米顆粒系統還可以加入不顯示治療效果，但產生化妝用組合物的化妝品用活性分子。這些化妝用組合物包括用於局部給藥的任意液態組合物(納米顆粒的懸浮液)或乳液。在可加入到該納米顆粒的化妝用活性分子中，技術人員可以列舉抗痤瘡劑、抗真菌劑、抗氧化劑、除臭劑、止汗劑、去頭屑劑、皮膚增白劑、助曬劑、紫外線吸收劑、酶、化妝用抗微生物劑等等。本發明的另一方面涉及製備諸如上文所定義的殼聚糖-環糊精納米顆粒的方法，其包括a.在水介質中或在水與極性溶劑的混合物中製備殼聚糖或其衍生物的溶液；b.在任選加入交聯劑的水介質中或在任選加入交聯劑的水與極性溶劑的混合物中製備環糊精或其衍生物的溶液；以及c.在攪拌下，混合步驟a)和b)的溶液以使得自發地產生殼聚糖-環糊精納米顆粒。或者，任選地的a.在水介質中或在水與極性溶劑的混合物中製備殼聚糖或其衍生物和環糊精或其衍生物的溶液；b.在水介質中或在水與極性溶劑的混合物中製備交聯劑的溶液；c.在攪拌下，混合步驟a)和b)的溶液以使得自發地產生殼聚糖-環糊精納米顆粒。無毒溶劑可以用作極性溶劑，其包括乙腈、醇和丙酮等等。同樣地，所使用的水介質可以含有不同類型的鹽。在所述方法的變體中，所得到的殼聚糖/環糊精/交聯劑的質量比是4/4/1至4/80/1。然而，也可以使用殼聚糖相對於環糊精或相對於交聯劑的更高比率，這取決於所使用的環糊精的類型。因此，對於天然環糊精(例如HPPCD)，環糊精的存在似乎不影響納米顆粒的形成過程。可以直接將所述生物活性分子加入到步驟a)或b)的溶液中，以使得自發產生含有該生物活性分子的殼聚糖-環糊精納米顆粒。然而，在所述方法的變體中，在製備所述顆粒(步驟c)前，可以將所述分子在先前的步驟中溶解在水相或水相和極性溶劑的混合物中，並加入到步驟a)或b)。然而，對於低溶解性藥物，如果將該活性分子與環糊精一起在同一步驟中進行溶解，則可得到較高的濃度。製備殼聚糖-環糊精納米顆粒的方法還可以包括另外的步驟，其中所述納米顆粒被凍幹。從藥學觀點上看，獲得凍幹形式的納米顆粒是重要的，因為這改善了其在貯存過程中的穩定性並減少了待處理的產品的體積。在濃度為1%至5%重量比的低溫防護劑的存在下，殼聚糖-環糊精納米顆粒可以被凍幹，該低溫防護劑例如為葡萄糖、蔗糖或海藻糖。事實上，本發明的納米顆粒的另一優點為凍幹前後的粒徑未顯著受到影響。即，納米顆粒具有被凍幹並重新懸浮時其物理性質未經任何改變的優點。本發明的系統已證實其在與上皮細胞的相互作用以及促進多核苷酸在細胞中轉染方面是非常有效的載體。被包含在所述系統中的納米顆粒可將遺傳物質引入到細胞中，例如基於核酸的分子、寡核苷酸、siRNA或多核芬酸，優選編碼所關注的蛋白的DNA質粒，這使該系統潛在地適用於基因治療。在特別的實施方案中，所述DNA質粒是pEGFP。體外研究可以觀察DNA質粒的極為有效的釋放，這實現了相當數量水平的細胞轉染。因此，本發明的另一方面涉及本發明的納米顆粒系統在製備基因治療藥物中的用途。在特別方面中，該系統包含多核苷酸，該多核苷酸含有能夠在待治療患者的細胞中功能性表達其自身的基因。在這點上，可使用本發明系統來治療的疾病的某些實例是使用抗VEGF反義藥物治療的黃斑變性、大皰性表皮鬆解症和嚢性纖維化。該系統還可用於用短暫性轉4匕方案(transitorytransformationschemes)使創傷癒合。最後，由於其高轉染能力，包含合成或天然多核苷酸的本發明的系統和組合物可用於靶細胞的轉染，優選腫瘤性或"正常"哺乳動物細月包，以及幹細月包或細胞系。此外，本發明的系統和組合物是用於細胞的遺傳操作的有用工具。在這點上，本發明還涉及本發明的系統對細胞的遺傳操作的用途。優選地，本發明的系統用於核酸在體外或先體外後體內的釋放。這種釋放針對靶細胞，其包括真核細胞，例如哺乳動物細胞、細胞系，並且這種釋放可導致體外或先體外後體內的細胞轉染或細胞轉化。因此，本發明還涉及被設計用於真核細胞轉染的試劑盒，其包括本發明的系統以及適當的稀釋劑和/或用於細胞洗滌的緩衝液。以下我們描述了本發明的一些示例性實施例；然而，不應當認為它們是對本發明的限制。實施例使用光子相關光譜(PCS)和雷射多鐠勒測速技術來表徵含有不同組合物和不同聚合物之比的製劑的物理化學性質。通過透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯^:鏡(SEM)研究了納米顆粒的形態學。使用元素分析技術研究所製備的納米顆粒的組合物。該研究證實納米顆粒基質中殼聚糖-環糊精混合物的存在。實施例1.作為殼聚糖類型和TTP濃度的函數，對殼聚糖-環糊精納米顆粒的性質進行評估用不同的殼聚糖(CS)(0.2%w/w)來製備羥丙基-j8-環糊精(HPi8CD)的固定濃度的(6.29mM)溶液(3ml)。在;茲力攪拌下將這些溶液培養24h，然後用0.45-/xm過濾器進行過濾並且通過加入濃度為1.25mg/ml或2mg/ml的不同體積的三聚磷酸鹽使其交聯，以使得殼聚糖/三聚磷酸鹽的質量比總是維持在4:1。通過16000xg的離心將納米顆粒分離並將其重新懸浮於水中。通過光子相關光譜(PCS)測定納米顆粒的粒徑。作為所使用的殼聚糖的分子量和用作交聯劑的三聚磷酸鹽的濃度的函數，該納米顆粒的平均粒徑以及多分散指數的結果如表1所示。表l:殼聚糖的分子大小(CSMw)、HP/3CD的存在和交聯劑三聚磷酸鹽(TPP)的濃度對納米顆粒的平均粒徑和多分散性的影響(平均值±std.dev.,n=3)tableseeoriginaldocumentpage21實施例2.作為環糊精的類型和濃度的函數，對殼聚糖-環糊精納米顆粒的性質的評估(TTP濃度=2mg/ml)使用不同量的羥丙基環糊精(a-或)3-)(0至25mM)製備0.2%(w/w)的殼聚糖溶液(3ml)，尤其是0.2%(w/w)的殼聚糖鹽酸鹽(chitosanhydrochloride)(ProtasanC1110)溶液。在磁力攪拌下將這些溶液培養24h，然後通過0.45-/mi的孔徑大小過濾該溶液並且通過加入濃度為2mg/ml的0.75ml的三聚磷酸鹽使其交聯。通過16000xg的離心將納米顆粒分離並將其重新懸浮於水中。通過光子相關光譜(PCS)表徵所得顆粒的粒徑及其多分散性、由雷射多譜勒測速儀表徵Zeta電勢以及通過稱重所分離的納米顆粒樣品的幹殘渣表徵產率。結果如表2所示。圖1(左圖)和圖2顯示了分別通過TEM和SEM進4亍分析的由25mM的HP/3CD製備的顆粒的形態學，證實形成球形納米顆粒。表2:羥丙基環糊精的類型和濃度對殼聚糖-環糊精納米顆粒的性質(粒徑、多分散性、Zeta電勢和產率)的影響(平均值±std.dev.,n=3)HPCD濃度(mM)HPCD類型粒徑(nm)多分散指數7+山執,、,、(pi)Zeta電勢(mV)0---686±10.5+33.8±3.43.14625±40.6+34.7±2.3/3590±10.3+35.3±3.86.29a645±70.6+33.8±0.5/5624±00.3+36.2±0.525a690±30.4+35.3士3.8670士40.6+33.1±3.3實施例3.作為環糊精的類型和濃度的函數，對殼聚糖-環糊精納米顆粒的性質的評估(TTP濃度=1.25mg/ml)使用不同量的羥丙基環糊精(a-或(0至25mM)來製備0.2%(w/w)的殼聚糖(ProtasanC1110)溶液(3ml)。在^茲力攪拌下將這些溶液培養24h，然後通過0.45卞m的孔徑大小過濾該溶液並且通過加入濃度為1.25mg/ml的1.2ml的三聚磷酸鹽使其交聯。通過16000xg的離心將納米顆粒分離並將其重新懸浮於水中。通過光子相關光語(PCS)表徵所得顆粒的粒徑及其多分散性、由雷射多譜勒測速儀表徵Zeta電勢以及通過稱重所分離的納米顆粒樣品的幹殘渣表徵產率。結果如表3所示。圖1(右圖)顯示了通過TEM分析的由25mM的HP/3CD製備的顆粒的形態學。表3:羥丙基環糊精的類型和濃度對殼聚糖-環糊精納米顆粒的性質(粒徑、多分散性、Zeta電勢和產率)的影響(平均值±Std.Dev.,n=3)tableseeoriginaldocumentpage23實施例2和實施例3中所得到的結果顯示，環糊精的摻雜物(inclusion)影響所得的納米顆粒的粒徑，但不過分地改變其數值。對於Z電位，在存在環糊精的情況下製備的納米顆粒呈現極為相似的數值。該數據使我們推論出環糊精不妨礙納米顆粒的形成過程，以及它們不一定與納米顆粒的形成過程相關。另一方面，當環糊精的濃度增加時，產率顯著增加。實施例4.殼聚糖和環糊精的納米顆粒在細胞培養物中的穩定性在交聯劑TPP的存在下，在磁力攪拌下，通過將磺丁基醚-p-環糊精(SBE-CD)水溶液或羧曱基-P-環糊精(CM-CD)水溶液與殼聚糖(CS)的水溶液混合，以如下方式用兩種類型的環糊精製備殼聚糖的納米顆粒，該方式為不同組分之間的比率為CS/SBE-CD/TPP:(4/3/0.25)CS/CM-CD)/TPP:(4/4/0.25)然後，通過離心將該納米顆粒分離，隨後在37°C下，在Hanks鹽溶液(HBSS)中將其進行培養。該緩衝溶液(其含有無機鹽和葡萄糖)很可能最廣泛地用於使用細胞培養物的實驗中，這是由於該緩沖液可以將該細胞維持在生理學pH以及滲透壓下，因此在短期內將其保持在存活狀態而不促進其生長。通過測定納米顆粒的粒徑變化來進行穩定性研究。如圖3所示，殼聚糖和環糊精的納米顆粒在實驗條件下是穩定的。實施例5.殼聚糖和環糊精的納米顆粒在模擬的腸液中的穩定性在存在TPP或不存在TPP的情況下，按照實施例4所描述的通過離子膠凝法來製備殼聚糖和羧曱基-P-CD的納米顆粒。在37。C下，pH=6.6的模擬腸液中評定這些納米顆粒的穩定性。該介質重現了小腸的條件，但是也可反映納米顆粒在鼻黏膜上的穩定性。納米顆粒經證實在4小時內是穩定的，正如圖4所示，因此其對於不同給藥途徑似乎是合適的系統。實施例6.將胰島素包嚢進殼聚糖和環糊精的納米顆粒中的能力的評估使用不同濃度的殼聚糖和TPP以及，在某些情況下，向初始水溶液中加入0.24%的胰島素濃度，按照實施例4或5所描述的製備殼聚糖和羧曱基-P-CD的納米顆粒。然後，通過離心分離該納米顆粒。圖4顯示裝載或未裝載胰島素的納米顆粒的物理化學性質。表4:裝載或未裝載胰島素的CS/CM-CD/TPP納米顆粒的物理化學性質。(*)裝載胰島素的納米顆粒CS/CM畫CD/TPP粒徑(nm)多分散指數Zeta電勢(mV)4/3/0200±130.11-0.16+2.0±1.44/4/0238±160.08-0.10+27.0±2.44/3.5/0("482±330.04-0.19+29.6±0.84/2/0.5299±250.36-0.46+32.0±0.34/3/0.25264±180.23-0.37+27.0±0.64/4/0.25("436±340.10-0.23+25.9±1.84/3/0.5(*)555±1190.02-0.52+31.4±1.44/2/0.75(*)631±1530.29-0.41+31.2±1.54/1.5/0,75(*)613±1240.11-0.5831.0±1,54/0/1(*)454±1200.22-0.3137.1±1.3正如所觀察到的，已裝載的納米顆粒的粒徑為430nm至635nm，所述粒徑比未裝載胰島素的納米顆粒的粒徑大高達一倍。另一方面，表5顯示了將胰島素裝載在納米顆粒中的能力。技術人員可以觀察到可以將胰島素非常有效地加入到該納米顆粒中，顯示超過85%的結合效率。表5:將胰島素包嚢進CS/CM-CD/TPP納米顆粒中的效率(胰島素的濃度為0.24%)tableseeoriginaldocumentpage25此外，在37。C下，對裝載月夷島素的CS/CM-CD/TPP納米顆粒在pH6.8的模擬的腸液中的穩定性進行評估，如實施例5所描述。在第一個兩小時內，相對於初始粒徑，納米顆粒的粒徑未增加(圖5)。實施例7.作為環糊精的類型和濃度的函數，對三氯生的溶解度、其在納米顆粒中的包囊效率及裝載量的評估根據實施例2中描述的方法獲得殼聚糖-環糊精的納米顆粒，但是向初始溶液中加入足量的藥物三氯生以使該溶液過飽和。在過濾(通過0.45/mi)過程中棄去未被環糊精-聚合物混合物溶解的藥物，隨後通過離子致交聯(ionotropiccrosslinking)將所述聚合物交聯(參見實施例2)。表6顯示三氯生在用於形成所述顆粒的初始溶液中所達到的溶解度、將三氯生包嚢進納米顆粒中的效率以及三氯生在這些納米顆粒中達到的裝載量。通過分光光度法測定三氯生^280nm)。包嚢效率(EE)是指相對於納米顆粒製備過程中所加入的藥物量，截留在殼聚糖-環糊精系統中的藥物的百分比。由仍然溶於納米顆粒懸濁液介質中的未包嚢藥物的計算來間接測定藥物裝載。該值與理論藥物含量之間的差異被認為是裝載在納米顆粒中的藥物量。片劑中出現的藥物裝載百分比是相對於100mg納米顆粒中被包嚢的藥物量的百分比。表6:所使用的環糊精的類型和濃度對三氯生的增溶作用、所得到的其在最終納米顆粒中的包嚢效率(EE)及裝載量的影響(中間值±Std.Dev.,n=3)tableseeoriginaldocumentpage26實施例8.作為環糊精的類型和濃度的函數，對呋塞米的溶解度、其在納米顆粒中的包嚢效率及裝載量的評估根據實施例3中描述的方法，製備殼聚糖-環糊精的納米顆粒，但是向初始溶液中加入足量的藥物呔塞米以使所述溶液過飽和。在過濾(通過0.45pim)過程中棄去未被環糊精-聚合物混和物溶解的藥物，隨後將該聚合物交聯(參見實施例3)。表7顯示呋塞米在用於形成所述顆粒的初始溶液中所達到的溶解度、將呋塞米包嚢進納米顆粒中的效率以及呋塞米在這些納米顆粒中達到的裝載量。通過分光光度法測定所述呋塞米0=230nm)。為了測定已包嚢的呋塞米的量，在將其分離後，測定顆粒上清液中呋塞米的量(未結合的量)，並計算差值。表7:所使用的環糊精的類型和濃度對呋塞米的增溶作用、所得到的其在最終納米顆粒中的包嚢效率(EE)及裝載量的影響(中間值±Std.Dev.,n=3)HPCDHPCD濃度呔塞米的類型(mM)溶解度(mg/1)呋塞米的EEw呋塞米的裝載量/307.8±1.322.3±1.43.1442.3±2.417.1±3.06.2995.4±10.112.1±1.3253873±10.37.2±3.125253.5±9.88.8±2.70.23±0.070.89±0.041.43±0.242.39±0.721.92±0.55實施例9.藥物三氯生或呋塞米從殼聚糖-環糊精的納米顆粒中的釋放製備帶有三氯生和呋塞米的殼聚糖-環糊精的納米顆粒。為了製備含有三氯生的製劑，遵循實施例7中所描述的方法(含有25mM的HPCDa或/3的製劑)以及，為了製備含有呋塞米的製劑，遵循實施例8中所描述的方法(含有25mM的HPCDa或j3的製劑)。分離所述納米顆粒並使其重新懸浮在乙酸鹽緩衝液(pH6.0,低離子強度)中。在37。C下，在水平攪拌(100rpm)下，在該介質中培養該納米顆粒。在不同的時間(0.5h、1.5h和4.5h)從培養介質中取出樣品，將藥品從溶液中分離(以200000xg離心30分鐘)並用分光光度法進行測定，如實施例7和8所述。所製備的製劑的藥物釋放曲線圖如圖6所示。實施例10.作為環糊精的類型和濃度的函數，對三氯生的溶解性、其在納米顆粒中的包嚢效率及裝載量的評估在80%水和20%乙醇的混合物中，以足量製備殼聚糖(ProtasanC1110,0.2%)、HP/3CD(0,1.28mM和2.56mM)以及三氯生的溶液(3ml),以使溶液過飽和。在磁力攪拌下將這些溶液培養24h，然後通過0.45-zmi過濾器進^亍過濾，並且通過加入濃度為1.25mg/ml的1.2ml溶於80%水和20%乙醇的混合物的三聚磷酸鹽使其交聯。通過16000xg的離心將納米顆粒分離並將其重新懸浮於水中。通過光子相關光譜(PCS)來表徵所得的納米顆粒的粒徑及其多分散性。通過用脫乙醯幾丁質酶(Chitosanase-RD,PiasCo，Japan)降解等分的重新懸浮的納米顆粒來測定被包嚢的藥物的量，並通過分光光度法進行評定(X-280nm)。結果如表8所示。表8:所用的環糊精的濃度對三氯生在用於製備納米顆粒的相中的增溶作用、得到的納米顆粒的包嚢效率(EE)以及三氯生在納米顆粒中的最終裝載量的影響(中間值±Std.Dev.,n=3)丄，《，、落解的三氯生粒徑(nm)(mg/1)HP/5CD濃度(mM)1.282.56499±33568±25517±14719±792536±2833521±213三氯生的EE(%)22.3±1.437.7±7.333.5±2.7三氯生的裝載量(％)2.2±0.97.4±1.38.7±0.2實施例11.作為環糊精類型的函數，對含有或不含有質粒DNA的殼聚糖-環糊精納米顆粒的粒徑及多分散性的評估製備下列溶液(A)曱基-z3-環糊精(Me-iS-CD)(7.4mM)、三聚磷酸鹽(1.25mg/ml)和編碼綠色螢光蛋白的質粒(pGFP)(0.5mg/ml);以及(B)磺丁基-|8-環糊精(0.18mM)(SB-j8-CD)和編碼綠色螢光蛋白的質粒(0.5mg/ml)。在攪拌下對這兩種溶液培養1h。在磁力攪拌下，將0.24-ml體積的溶液A或B加入到1.2ml的0.1%(w/w)殼聚糖中，形成納米顆粒通過光子相關光譜(PCS)來表徵所得顆粒的粒徑及多分散性。結果如表9所示。表9:環糊精的類型對含有或不含有質粒DNA的殼聚糖-環糊精納米顆粒的粒徑及多分散性的影響(平均值±Std.Dev.,n=3)。*表達為數值的範圍tableseeoriginaldocumentpage29含有DNA的殼聚糖-磺丁基環糊精的製劑在將其分離前在瓊脂糖凝膠中進行電泳。對照包括溶液中的質粒、無質粒的製劑以及含有用脫乙醯幾丁質酶(Chitosanase-RD,PiasCo，Japan)降解的質粒的製劑。結果如圖7所示。實施例12.轉染細胞培養物的效率的體外研究製備如實施例11中所述的納米顆粒的製劑。通過離心(16000xg,30分鐘)將所述製劑分離並將其重新懸浮於低離子強度、pH6.0的緩衝液中。將含有lpg或2/zgDNA的一定量的製劑與細胞培養物一起培養。獲得的細胞轉染結果如圖8所示。螢光圖顯示了作為納米顆粒-pGFP系統轉染結果的表達綠色螢光蛋白的細胞集落。不含載體的質粒不顯示出轉染細胞的能力，即沒有可觀察到的螢光細胞集落。實施例13.環糊精的類型和殼聚糖、環糊精和三聚磷酸鹽之間的質量比對納米顆粒系統的最終組成的影響分別按照實施例3和11製備殼聚糖-HP/3CD和殼聚糖-SB^CD的納米顆粒。在用於製備該納米顆粒的初始溶液中使用不同量的環糊精。在將該納米顆粒分離後，通過元素分析技術(考慮到氮碳比或氮硫比)測定納米顆粒的實際組成(殼聚糖%、環糊精％、抗衡離子％)。通過熱解重量分析法測定樣品的溼度。表10:環糊精的類型以及殼聚糖(CS)、環糊精(CD)和三聚磷酸鹽(TPP)之間的質量比對所製備的系統的最終組成的影響(乾重的百分比)(平均值±Std.Dev.,n=3)。*約等於零tableseeoriginaldocumentpage30實施例14.殼聚糖-環糊精納米顆粒通過大鼠的鼻黏膜進行輸送的研究為了評估本發明的納米顆粒系統作為被設計用於藥物給藥的載體的潛力，測定所述納米顆粒穿過鼻上皮的能力。使用不同比例的組分，用兩種特定製劑一殼聚糖/磺丁基乙基-P-環糊精(CS/SBE-P-CD)和殼聚糖/羧甲基-P-環糊精(CS/CM-P-CD)進行該研究。殼聚糖預先用螢光素標記(FI-CS)。通過碳二亞胺與EDAC的反應來完成該標記方法，這使得螢光標記與該殼聚糖分子形成共價—睫，如屍Aamz.及m.，2004，21，803-10中所述。表11顯示了^^皮評估的用螢光素標記的納米顆粒的物理化學性質。表11.被評估的用螢光素標記的納米顆粒的物理化學性質tableseeoriginaldocumentpage30將這些納米顆粒的懸浮液(其穩定性先前已在5%w/w海藻糖的轉移介質中進行評估，圖9)通過鼻內途徑向完全清醒的大鼠給藥。在預置時間過去後(具體地，給藥後10分鐘)，大鼠由於頸脫位而無痛苦死去，用多聚甲醛固定鼻黏膜，切除，然後用共焦顯微鏡(CLSM，Zeiss501,Jena，Germany)在488nm下觀察。所觀察到的圖像顯示這些納米顆粒表現出顯著的與鼻黏膜的相互作用。權利要求1.包含用於釋放生物活性分子的納米顆粒的系統，其中所述納米顆粒包含a)至少40％重量比的殼聚糖或其衍生物以及b)小於60％重量比的環糊精或其衍生物，其中組分a)和組分b)是混合的，且在所述兩種組分之間沒有任何共價鍵。2.如權利要求l所述的系統，其中所述納米顆粒還包含能夠以納米結構的形式離子交聯殼聚糖的陰離子鹽。3.如權利要求1和2所述的系統，其中所述殼聚糖或其衍生物的比例為至少40%重量比至95.5%重量比。4.如權利要求1至3所述的系統，其中相對於所述殼聚糖，所述環糊精或其衍生物的比例為0.5%重量比至小於60%重量比。5.如權利要求1至4所述的系統，其中殼聚糖的聚合度或形成所述殼聚糖或其衍生物的單體單元的數目為5至5，000,優選為30至600。6.如權利要求1至5所述的系統，其中所述殼聚糖或其衍生物的分子量為1kDa至2,000kDa，優選為5kDa至500kDa,更優選為5kDa至200kDa。7.如權利要求1至6所述的系統，其中所述殼聚糖或其衍生物的脫乙醯度為30%至95%，優選為50%至95%。8.如權利要求1至7所述的系統，其中所述環糊精選自天然環糊精(a、0或力、羥丙基環糊精、羧曱基環糊精、磺丁基環糊精、氨基環糊精、二曱基環糊精、環糊精磷酸酯、羥乙基環糊精、乙醯基環糊精、乙基環糊精、三曱基環糊精、羧乙基環糊精、葡糖基環糊精、6-O-a-麥芽糖基環糊精、丁基環糊精、硫酸化環糊精、N,N-二乙基氨基乙基環糊精、叔丁基曱矽烷基環糊精、曱矽烷基[(6-0-叔丁基二曱基)-2,3,-二-O-乙醯基)-環糊精、琥珀醯-(2-輕丙基)-環糊精、琥珀醯-環糊精、磺丙基-環糊精、聚環糊精。9.如權利要求8所述的系統，其中所述環糊精是羥丙基-a-環糊精、羥丙基-P-環糊精、磺丁基乙基-p-環糊精或其混合物。10.如權利要求1至9所述的系統，其中所述環糊精顯示出的平均取代度為4.2至7。11.如權利要求1至IO所述的系統，所述系統還包含生物活性分子，所述生物活性分子選自由低分子量藥物、多糖、蛋白質、脂質、寡核苷酸、核酸以及其組合。12.如權利要求1至11所述的系統，其中所述生物活性分子是根據FDA採用的生物藥劑學分類系統所定義的第2類、第3類或第4類藥物；其優選為第4類藥物。13.如權利要求2所述的系統，其中所述交聯劑是聚磷酸鹽，優選為三聚磷酸鈉。14.如權利要求1至13所述的系統，其中所述納米顆粒的平均粒徑為1nm至999跳優選為100rnn至800亂15.如;f又利要求1至14所述的系統，其中在lmMKC1中測定的電荷(Z電勢)為0至+60mV。16.藥物組合物，其包含權利要求1至15中任一權利要求所定義的系統和能夠預防、減輕或治癒疾病的生物活性分子17.如權利要求16所述的組合物，其通過口服、含服、舌下、局部、經皮、眼部、鼻腔、陰道或腸胃外途徑給藥。18.如權利要求16和17所述的組合物，其中所述生物活性分子選自多糖、蛋白質、脂質、寡核苷酸、基於核酸的分子及其組合。19.如;f又利要求16至18所述的組合物，其中所述生物活性分子是根據FDA採用的生物藥劑學分類系統所定義的第2類、第3類或第4類藥物。20.如權利要求16至18中任一權利要求所述的組合物，其中所述生物活性分子是三氯生、呋塞米、胰島素、肝素或由核酸組成的分子。21.化妝用組合物，其包含權利要求1至10和13至15中任一權利要求所定義的系統和化裝用活性分子。22.如權利要求21所述的化妝用組合物，其中所述化妝用活性分子選自抗痤瘡劑、抗真菌劑、抗氧化劑、除臭劑、止汗劑、去頭屑劑、皮膚增白劑、助曬劑、紫外線吸收劑、酶和化妝用抗微生物劑。23.疫苗，其包含權利要求1至15中任一權利要求所定義的用於釋放生物活性分子的系統和抗原。24.如權利要求23所述的疫苗，其中所述抗原選自蛋白質、多糖和DNA分子。25.獲得權利要求1至15中任一權利要求所述的被設計用於控制釋放生物活性分子的系統的方法，其包括a)在水介質中或在水與極性溶劑的混合物中製備殼聚糖或其衍生物的溶液；b)在任選加入交聯劑的水介質中或在任選加入交聯劑的水與極性溶劑的混合物中製備環糊精或其衍生物的溶液；以及c)在攪拌下，以自發獲得所述殼聚糖-環糊精納米顆粒的方式混合步驟a)和b)的所述溶液。或者，任選地a)在水介質中或在水與極性溶劑的混合物中製備殼聚糖或其衍生物和環糊精或其衍生物的溶液；b)在水介質中或在水與極性溶劑的混合物中製備所述交聯劑的溶液；c)在攪拌下，以自發獲得所述殼聚糖-環糊精納米顆粒的方式混合步驟a)和b)的所述溶液。26.如權利要求25所述的獲得納米顆粒的方法，其中所述交聯劑是三聚磷酸鹽，優選為三聚磷酸鈉。27.如權利要求25和26中任一權利要求所述的方法，其中將所述生物活性分子預先溶於步驟a)或b)中，或者預先溶於加入到a)或b)中的另一水相或有^L相中。28.如權利要求25所述的方法，其中所述生物活性分子選自多糖、蛋白質、肽、脂質、基於核酸的分子及其組合。29.如權利要求25和28所述的方法，其中所述生物活性分子是根據FDA(生物藥劑學分類系統)所定義的第2類、第3類或第4類藥物；優選地，所述生物活性分子是第4類藥物。30.如權利要求28和29所述的方法，其中所述生物活性分子是三氯生、呋塞米，胰島素、肝素或DNA質粒。31.權利要求1至15所述的系統在製備基因治療藥物中的用途。全文摘要本發明涉及包含被設計用於生物活性分子釋放的納米顆粒的系統，其中該納米顆粒包含a)至少40％重量比的殼聚糖或其衍生物以及b)小於60％重量比的環糊精或其衍生物，其中組分a)和組分b)是混合的，且在兩者之間不存在任何共價鍵。該系統使得生物活性分子與其有效結合，以及隨後允許該生物活性分子在合適的生物環境中釋放。文檔編號A61K9/51GK101217947SQ200680020888公開日2008年7月9日申請日期2006年6月1日優先權日2005年6月2日發明者M#+[a]何賽·阿隆索費爾南德斯,保拉·穆拉,弗蘭切斯卡·馬埃斯特雷利,馬羅什·加西亞富恩特斯申請人:聖地牙哥聯合大學