一種秦巴硒菇的水浸物及其製備方法和應用的製作方法

2023-04-26 23:32:46 2

專利名稱：一種秦巴硒菇的水浸物及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於藥物製造領域。
背景技術：
秦巴硒菇，又稱巴西蘑菇(Agaricus blazei Mushroom)。1998年由中科院植物研究所在陝西紫陽縣人工栽培成功，因該菌種來源於巴西原始森林，其子實體中富含硒，故得名。巴西蘑菇是一種營養價值極高的真菌類植物，南美巴西當地人民常作為美味佳餚，款待上等賓客。又因其具有很高的藥用價值，又稱為陽光食品。1945年被美國真菌學家W.A.Murill首次發現。20世紀60年代末，在巴西的日本咖啡種植者傳入日本。1965年巖出在室內人工栽培獲得成功，日本命名為姬松茸(拉丁名Agaricus blazeimurill)，是一種食藥兼用的珍稀菌種。國際科學家主要通過物理和化學方法提純的各種有效成分如水提醇沉法獲得的粗製多糖和水溶性物質並進行了大量的動物實驗和體外實驗，證實此提取物具有抗腫瘤、抗病毒、降血脂、降血壓、治療搪尿病、保護肝臟功能及提高機體免疫力等多方面的醫療保健功能，尤其治療某些腫瘤疾病效果優於目前所報導的其他菌種的提取成分。關於用不同溫度製備的秦巴硒菇水浸物、水浸物的製備方法及其在抗血液系統細胞病變尤其在抑制早幼粒細胞性白血病細胞增殖的應用研究，尚未見報導。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種秦巴硒菇的水浸物及其製備方法和應用，以克服現有的秦巴硒菇的有效成分提取方法成本昂貴、提取效果差、易造成有效成分喪失、提取方法複雜不利於大規模工業化生產和日常家庭進行提取的缺陷。
技術方案本發明的目的之一是提供一種秦巴硒菇的水浸物，即秦巴硒菇以0～60℃的水浸出的水溶物。
上述的秦巴硒菇的水浸物的一種優選方案是，所說的水的溫度為0～4℃；更優選的溫度為4℃。
上述的秦巴硒菇的水浸物的另一種優選方案是，所說的秦巴硒菇以0～4℃的水經30分鐘以上浸出的水溶物，優選以4℃的水浸出。
本發明的另一目的是提供一種秦巴硒菇的水浸物的製備方法，包括如下步驟(1)將秦巴硒菇置於0～60℃的水中；(2)分離上清溶液，即獲得水浸物。
上述的秦巴硒菇的水浸物的製備方法的一種優選方案是，所說的水的溫度為0～4℃；更優選的溫度為4℃。
上述的秦巴硒菇的水浸物的製備方法的另一種優選方案是，所說的秦巴硒菇經30分鐘以上的水浸出。
本發明的第三個目的是提供一種秦巴硒菇的水浸物的應用，包括抑制血液系統病變細胞的增殖；特別是抑制早幼粒細胞性白血病細胞的增殖。
本發明所說的秦巴硒菇的水浸物包括水浸物的母液、水浸物溶液和水浸物經乾燥後的固體成分。
秦巴硒菇做為保健用品，進行製取水浸液服用。
有益效果現有技術多是採用物理方法如利用水提醇沉提取各種多糖有效成分，如粗製多糖，本發明的秦巴硒菇的水浸物是以0～60℃的水浸出的水溶性有效成分，提取方法簡單、成本低廉、提取效果明顯優於其它溫度和方法、不易造成有效成分的喪失、提取方法的簡化也有利於大規模的工業化提取。
本發明的秦巴硒菇水浸物在應用中具有良好的抗癌效果，其抗癌作用與劑量呈線性關係，即水浸物的濃度越大，抗癌效果越強。4℃水浸物在70ng/mL的濃度下即可有效抑制早幼粒細胞性白血病細胞的增殖。
由於本發明的秦巴硒菇的水浸物為水溶性的有效成分，易於口服，也易於和其他抗腫瘤成分相溶(容)，為製備保健品和藥品提供了便捷的途徑。
本文所用的術語「浸出率」是指每毫升浸出液所含的固體物質的重量。
本文所說的術語「水」是指化學意義上的一氧化二氫(H2O)，在實際應用中可使用去離子水、蒸餾水、雙蒸水、過濾淨化水、自來水等經過物理或化學方法淨化或純化製得的水。


圖1為等體積的秦巴硒菇不同溫度的水浸物溶液對K562細胞系集落形成的影響的量效曲線圖2為等重量的秦巴硒菇不同溫度的水浸物固體成分對K562細胞系集落形成的影響的量效曲線具體實施方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。
下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照製造廠商所建議的條件。實施例中數據結果的統計學處理採用t檢驗和相關分析。
實施例1本實施例說明經過培養取得受試腫瘤細胞的過程，和檢測秦巴硒菇水浸物有效活性的方法。
靶細胞K562細胞為早幼粒細胞白血病細胞系，自中科院上海細胞所細胞庫購進。細胞培養於含10％FCS的RPMI1640培養液，置37℃，飽和溼度，5％CO2培養箱中培養。實驗時，按白細胞直接計數法讀取細胞數，備用。
秦巴硒菇有效成分下腫瘤細胞集落的形成取對數生長的K562細胞，計數，待用。將1×103細胞，20％的胎牛血清(FCS)、分別加入不同濃度的秦巴硒菇有效成分、RPMI1640(Gibco)培養液和終濃度為0.3％瓊脂充分溫勻後，接種於24孔培養板中，置飽和溼度、37℃、5％CO2培養箱中培養5天於後，倒置光顯微鏡下計數≥50個K562細胞組成的集落數。
實施例2
本實施例說明以不同溫度的水製備的秦巴硒菇的有效成分，即所說的水浸物。
稱取秦巴硒菇5克，置乾淨的試劑瓶中，加入雙蒸水50毫升，擰緊瓶蓋，分別放入60℃水浴鍋、0℃冰水浴、4℃冰箱和室溫(25℃)靜置30min，期間混搖一次。而後，在無菌條件下，從不同溫度水浸液中各取10mL，分別置離心管中，3000/min離心20min。取上清，經0.2μm微孔濾膜除菌，作為活性測定的母液。
實施例3本實施例說明秦巴硒菇不同溫度的水浸物中固體物含量測定方法和結果。
取9個1.5mL EP管，標記，分析天平稱重，記錄。無菌條件下取出0℃，4℃，室溫和60℃的浸出液100μL，分別加入四個EP管中，在無塵條件下，將含有母液的EP管開蓋，插入超級微量恆器中，80℃蒸發4小時，待EP管內水分蒸發乾時，稱取每一管的重量，減去空管重量，獲得物為固體物質的淨重。
結果表明，不同溫度對秦巴硒菇的有效成分的浸出率不一樣，0℃的浸出液含有的固體成分為164ng/mL，4℃的浸出液含有的固體成分為184ng/mL，室溫(25℃)的浸出物含量為22.34ng/mL，而60℃溶液中含有固體成分564ng/mL。即在0-60℃範圍內，溫度越高固體物的浸出率越高。
實施例4本實施例說明等體積的秦巴硒菇不同溫度的水浸物溶液對K562細胞系集落形成的影響。
表1和圖1結果提示，不同溫度提取的水浸物溶液對K562細胞均有抑制集落形成的作用，加入細胞培養基的水浸物溶液體積越大，集落形成越少，二者呈現顯著的線性關係。經相關分析，在60℃、0℃、4℃和室溫(25℃)相關值分別為r＝-0.976，0.989，0.985和0.964。
說明秦巴硒菇水浸物溶液具有良好的抗癌效果，其抗癌作用與劑量呈線性關係，即體積/體積濃度越大，抗癌效果越強。
表1不同溫度提取的水浸物溶液對K562細胞集落形成的影響


實施例5本實施例說明等重量的秦巴硒菇不同溫度的水浸物固體成分對K562細胞系集落形成的影響。
由表2和圖2可知，不同溫度水提物的浸出物的固體成分其抗腫瘤活性有明顯的差別，在等重量的情況下，集落形成數量有很大差異。280ng/mL組經t檢驗，0℃組25℃組的p＜0.001，4℃組60℃組的p＜0.01，4℃組25℃組(室溫組)的p＜0.001。顯然，0℃和4℃組浸出物的固體成分的抗癌活性最強。
說明秦巴硒菇水浸物的固體成分具有良好的抗癌效果，其抗癌作用與劑量呈線性關係，即重量/體積濃度越大，抗癌效果越強。4℃水浸物在280ng/mL的濃度下即可有很強的效抑制早幼粒細胞性白血病細胞增殖的效果。
表2不同溫度提取的水浸物固體成分對K562細胞集落形成的影響

儘管本發明描述了具體的例子，但是有一點對於本領域技術人員來說是明顯的，即在不脫離本發明的精神和範圍的前提下可對本發明作各種變化和改動。因此，所附權利要求覆蓋了所有這些在本發明範圍內的變動。
權利要求
1.一種秦巴硒菇的水浸物，其特徵在於，是秦巴硒菇以0～60℃的水浸出的水溶物。
2.根據權利要求1所述的秦巴硒菇的水浸物，其特徵在於，所說的水的溫度為0～4℃。
3.根據權利要求2所述的秦巴硒菇的水浸物，其特徵在於，所說的水的溫度為4℃。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的秦巴硒菇的水浸物，其特徵在於，所說的秦巴硒菇經30分鐘以上浸出的水溶物。
5.權利要求1所述的秦巴硒菇的水浸物的製備方法，包括如下步驟(1)將秦巴硒菇置於0～60℃的水中；(2)分離上清溶液，即獲得水浸物。
6.根據權利要求5所述的秦巴硒菇的水浸物的製備方法，其特徵在於，所說的水的溫度為0～4℃。
7.根據權利要求6所述的秦巴硒菇的水浸物的製備方法，其特徵在於，所說的水的溫度為4℃。
8.根據權利要求5-7中任一項所述的秦巴硒菇的水浸物的製備方法，其特徵在於，所說的秦巴硒菇經30分鐘以上的水浸獲得水溶物。
9.權利要求1所述的秦巴硒菇的水浸物的應用，包括抑制血液系統病變細胞的增殖。
10.根據權利要求9所述的秦巴硒菇的水浸物的應用，其特徵在於，抑制早幼粒細胞性白血病細胞的增殖。
全文摘要
本發明公開了一種秦巴硒菇的水浸物及其製備方法和應用，特別地指以0～60℃的水浸出的秦巴硒菇的有效成分。同時指明了其抑制早幼粒細胞性白血病細胞系增殖的應用。本發明還提供了這種有效成分的製備方法，為今後秦巴硒菇在抗腫瘤上的開發應用提供了可行的方案。
文檔編號A61P35/00GK1957954SQ20051011005
公開日2007年5月9日 申請日期2005年11月4日 優先權日2005年11月4日
發明者李興玉, 李靜, 高霞 申請人:上海師範大學