東方杉組培快繁技術及其基本培養基的製作方法

2023-05-09 23:53:11

專利名稱：東方杉組培快繁技術及其基本培養基的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種組織培養快速繁殖技術，尤其是指東方杉組培快繁技術和與之相關的適宜東方杉的基本培養基MHJ的配方。
背景技術：
東方杉是中國著名林木育種家葉培忠教授於1963年用中國柳杉和墨西哥落羽杉進行跨屬雜交而獲得的新樹種。經過幾十年的扦插選育形成了一新樹種的雛形，上海在引進後發現東方杉在上海沿海一帶生長良好。這一罕見的杉科屬間雜交新樹種有以下幾個特點樹形高大優美，繼承了柳杉和墨西哥落羽杉的優美樹形；落葉期短(1月中旬至3月上旬)，比水杉、池杉和落羽杉要短1-2個月，使其的觀賞期較長；枝條韌性強，使其抗風能力強；抗澇耐潮溼能力強，在河中生長10年的大樹生長仍然良好；抗鹽鹼能力強，能在PH值8.6、含鹽量0.39％的土壤上生長旺盛；速生性好，浦東川沙林場的25年樹齡的平均胸徑達43釐米。東方杉具有耐潮溼、耐鹽鹼和抗颱風等優良特性，與其它杉科樹種相比東方杉在景觀、生長、抗性方面有明顯的優勢，很具大量推廣的意義。
由於東方杉目前只有少量栽培，沒有種子供播種繁殖，扦插繁殖成活率又很低，使得東方杉不能得到大量繁殖並推廣。利用組織培養技術對東方杉進行工廠化離體快繁可解決其繁殖困難的難題。通過工廠化組培育苗，可快速為在城市綠化、沿海防風、溼地造林、鹽鹼地綠化、河提林帶建設等提供東方杉這一新優良樹種的大量種苗。

發明內容
本發明的目的在於提供一種利用組織培養技術對東方杉進行工廠化離體快繁的東方杉組培快繁技術。
本發明的再一目的是提供一種適合東方杉的培養基。
本發明在MS培養基的基礎上通過對各種元素的改良，總結出了適宜於東方杉生長的基本培養基配方。
本發明東方杉培養基的基本配方如表1表1東方杉的基本培養基MHJ的配方

本發明東方杉組培快繁技術依序包括外植體消毒、無菌苗的建立、試管苗的繁殖、生根培養、移栽。
所述的外植體消毒是把枝條切成20-30cm的小段，用洗潔精進行表面清洗，然後用自來水衝洗乾淨，再用70％酒精消毒30s左右，倒出酒精後用無菌水衝洗2-3次，然後再用0.1％的升汞溶液消毒10-15min，最後用無菌水衝洗3-4次，把消毒好的外植體接種到初代培養基上，置於25℃±2℃培養室進行初代培養，光照時間為15h左右。
所述無菌苗的建立是消毒後的無菌莖段在培養基D-1上培養2周後，腋芽開始萌發抽出，30天後芽高達0.5cm-1.0cm，把芽切下並接種到D-2培養基上進行培養，30天後高達3-5cm，培養條件為溫度25℃±2℃，光照時間為每天15h左右。
D-1培養基為MHJ+6-BA0.2-1.0mg/l+活性碳1-5g/l。
D-2培養基為MHJ+活性碳1-5g/l。
所述試管苗的繁殖包括微型扦插、芽團的繁殖，其中第一，微型扦插是把高5cm左右的苗切下莖頂，在D-2培養基上繼續生長培養，餘下的莖段切成0.5cm左右的小段接到D-1培養基上誘導腋芽萌發抽出新芽，每個莖段可抽出1-2個新芽，新芽切下後進行高生長培養到一定高度後再切成莖段進行微型扦插繁殖，擴繁比例達到1∶5，培養條件同上。
第二，芽團的繁殖在切下莖段上抽出的新芽後，把餘下的莖段切掉基部愈傷，再接種在D-3培養基上進行繼續培養形成芽團，芽團在培養30天左右後，以1∶2的比例切出新的芽。
其中，D-3培養基為MHJ+6-BA0.05-0.5mg/l+NAA0.01-0.1mg/l+活性碳1-5g/l。
所述的生根培養是從芽團上或莖段上切下的高約2cm的芽接到生根培養基D-4上培養60天後開始生根。
D-4培養基為1/2MHJ+活性碳1-5g/l。
所述移栽組培生根的苗是先在室內逐漸開蓋煉苗5-7天，移栽到苗床上繼續煉苗2-3周，然後，移栽到營養缽中。
其中營養缽內為山泥∶泥碳土＝1∶1。
本發明給出了東方杉的組培快繁方法，並可應用於大規模工廠化生產中，本發明提供了東方杉的莖段微型扦插、芽團擴繁等組培快速增殖方法，移栽成活率高達90％以上；摸索出了試管苗生根培養基和移栽方法，解決了東方杉的試管無性繁殖問題。
具體實施例方式
表2東方杉的基本培養基MHJ的配方

實施例1按配方一，東方杉組培快繁方法第一、確定適宜東方杉的基本培養基MHJ的配方見表2之配方一；第二、在經過外植體消毒、無菌苗的建立後，東方杉試管苗通過莖段微型扦插、芽團繁殖方法進行組培快速增殖，其中a)微型扦插把試管苗的莖頂切下扦插在(D-2)培養基MHJ+活性碳5g/l上，繼續高生長培養，餘下的莖段切成0.5cm左右的小段扦插到(D-1)培養基MHJ+6-BA1.0mg/l+活性碳5g/l上誘導腋芽萌發抽出新芽，新芽切下後進行高生長培養到5cm高后再切成莖段循環進行微型扦插繁殖，擴繁比例達到1∶5左右；b)芽團繁殖在切下莖段上抽出的新芽後，切掉莖段基部愈傷和基部老莖段，把曾抽出新芽的腋芽部分的小段再接種在(D-3)培養基MHJ+6-BA0.5mg/l+NAA0.1mg/l+活性碳5g/l上進行繼續培養形成叢生芽芽團，芽團在培養30天後可以1∶2的比例切出新的芽。
第三、進行試管苗的生根培養將高2cm以上的頂芽接種在(D-4)培養基1/2MHJ+活性碳5g/l上培養60天後試管苗生根。生根的試管苗進行室內煉苗，即先在室內逐漸開蓋煉苗5-7天後，移到大棚苗床上煉苗2-3周，然後移栽到帶土的營養缽中，營養缽內為山泥∶泥碳土＝1∶1。移栽成活率達90％。
實施例2按表2之配方二，東方杉組培快繁方法
第一、確定適宜東方杉的基本培養基MHJ的配方見表2之配方二；第二、在經過外植體消毒、無菌苗的建立後，東方杉試管苗通過莖段微型扦插、芽團繁殖方法進行組培快速增殖，其中a)微型扦插把試管苗的莖頂切下扦插在(D-2)培養基MHJ+活性碳3g/l上，繼續高生長培養，餘下的莖段切成0.5cm左右的小段扦插到(D-1)培養基MHJ+6-BA0.5mg/l+活性碳3g/l上誘導腋芽萌發抽出新芽，新芽切下後進行高生長培養到5cm高后再切成莖段循環進行微型扦插繁殖，擴繁比例達到1∶5左右；b)芽團繁殖在切下莖段上抽出的新芽後，切掉莖段基部愈傷和基部老莖段，把曾抽出新芽的腋芽部分的小段再接種在(D-3)培養基MHJ+6-BA0.2mg/l+NAA0.05mg/l+活性碳3g/l上進行繼續培養形成叢生芽芽團，芽團在培養30天後可以1∶2左右的比例切出新的芽。
第三、進行試管苗的生根培養將高2cm以上的頂芽接種在(D-4)培養基1/2MHJ+活性碳3g/l上培養60天後試管苗生根。生根的試管苗進行室內煉苗後移到大棚苗床上煉苗，然後移栽到帶土的營養缽中，移栽成活率達90％。
實施例3按表3之配方三，東方杉組培快繁方法第一、確定適宜東方杉的基本培養基MHJ的配方見表2之配方三；第二、在經過外植體消毒、無菌苗的建立後，東方杉試管苗通過莖段微型扦插、芽團繁殖方法進行組培快速增殖，其中a)微型扦插把試管苗的莖頂切下扦插在(D-2)培養基MHJ+活性碳1g/l上，繼續高生長培養，餘下的莖段切成0.5cm左右的小段扦插到(D-1)培養基MHJ+6-BA0.2mg/l+活性碳1g/l上誘導腋芽萌發抽出新芽，新芽切下後進行高生長培養到5cm高后再切成莖段循環進行微型扦插繁殖，擴繁比例達到1∶5左右；b)芽團繁殖在切下莖段上抽出的新芽後，切掉莖段基部愈傷和基部老莖段，把曾抽出新芽的腋芽部分的小段再接種在(D-3)培養基MHJ+6-BA0.05mg/l+NAA0.01mg/l+活性碳1g/l上進行繼續培養形成叢生芽芽團，芽團在培養30天後可以1∶2左右的比例切出新的芽。
第三、進行試管苗的生根培養將高2cm以上的頂芽接種在(D-4)培養基1/2MHJ+活性碳1g/l上培養60天後試管苗生根。生根的試管苗進行室內煉苗後移到大棚苗床上煉苗，然後移栽到帶土的營養缽中，移栽成活率達90％。
權利要求
1.一種適宜東方杉組培的基本培養基，由大量元素、鐵鹽、有機物、微量元素、及其他物質組成，所述大量元素包括NH4NO3600-800mg/L、KNO3895-1000mg/L、KH2PO4200-270mg/L、MgSO4450-703mg/L、CaCl2440-465mg/L，鐵鹽包括FeSO4.7H2O 20.85-27.8mg/L、Na2EDTA.2H2O 27.98-37.3mg/L，有機物包括鹽酸硫胺素VB10.1-1mg/L、鹽酸吡哆醇VB60.4-0.5mg/L、煙酸0-0.5mg/L、甘氨酸0-2mg/L、肌醇100-500mg/L，微量元素包括H3BO315-31mg/L、MnSO4.H2O10.5-15.16mg/L、ZnSO4.7H2O8.6-14.4mg/L、KI 0.415-0.83mg/L、Na2MoO4.2H2O 0.125-0.25mg/L、CoCl2.6H2O 0.025-0.125mg/L、CuSO4.5H2O 0.025-0.25mg/L，其它包括蔗糖20g/L-30g/L、瓊脂5g/L-8g/L。
2.一種利用權利要求1東方杉組培的基本培養基進行東方杉組培快繁方法，包括外植體消毒、無菌苗的建立、試管苗的繁殖、生根培養、移栽，其中，所述試管苗的繁殖通過莖段微型扦插、芽團繁殖的方法進行組培快速增殖。
3.根據權利要求2所述的東方杉組培快繁方法，其特徵在於所述微型扦插是把試管苗的莖頂切下扦插在D-2培養基上繼續高生長培養，餘下的莖段切成0.5cm左右的小段扦插到D-1培養基上誘導腋芽萌發抽出新芽，新芽切下後進行高生長培養到一定高度後再切成莖段循環進行微型扦插繁殖，擴繁比例達到1∶5；所述芽團繁殖是在切下莖段上抽出的新芽後，切掉莖段基部愈傷和基部老莖段，把曾抽出新芽的腋芽部分的小段再接種在D-3培養基上進行繼續培養形成叢生芽芽團，芽團在培養30天左右後以1∶2的比例切出新的芽。
4.根據權利要求3所述的東方杉組培快繁方法，其特徵在於所述的D-1培養基為MHJ+6-BA0.2-1.0mg/l+活性碳1-5g/l；所述的D-2培養基為MHJ+活性碳1-5g/l；所述的D-3培養基為MHJ+6-BA0.05-0.5mg/l+NAA0.01-0.1mg/l+活性碳1-5g/l。
5.根據權利要求2所述的東方杉組培快繁方法，其特徵在於所述無菌苗的建立是消毒後的無菌莖段在培養基D-1上培養2周後，腋芽開始萌發抽出，30天後芽高達0.5cm-1.0cm，把芽切下並接種到D-2培養基上進行培養，30天後高達3-5cm，培養條件為溫度25℃±2℃，光照時間為每天15h左右。
6.根據權利要求2所述的東方杉組培快繁方法，其特徵在於所述生根培養是將高2cm以上的頂芽接種在D-4培養基上，培養60天至試管苗生根。
7.根據權利要求5所述的東方杉組培快繁方法，其特徵在於所述的D-4培養基1/2MHJ+活性碳1-5g/l。
8.根據權利要求2所述的東方杉組培快繁方法，其特徵在於所述移栽，系將組培生根的苗先在室內逐漸開蓋煉苗5-7天，移栽到苗床上繼續煉苗2-3周，然後，移栽到營養缽中。
9.根據權利要求8所述的東方杉組培快繁方法，其特徵在於其中營養缽內為山泥∶泥碳土＝1∶1。
全文摘要
本發明東方杉組培快繁技術及其基本培養基涉及一種組織培養快速繁殖技術，尤其是指東方杉組培快繁技術和與之相關的適宜東方杉的基本培養基MHJ的配方。本發明所述的東方杉組培的基本培養基，由大量元素、鐵鹽、有機物、微量元素、及其他物質組成，本發明以東方杉組培的基本培養基進行東方杉組培快繁方法，包括外植體消毒、無菌苗的建立、試管苗的繁殖、生根培養、移栽，其中，所述試管苗的繁殖通過莖段微型扦插、芽團繁殖的方法進行組培快速增殖。本發明可應用於大規模工廠化生產中，移栽成活率高達90％以上，解決了東方杉的試管無性繁殖問題。
文檔編號A01H4/00GK1633836SQ20041006666
公開日2005年7月6日 申請日期2004年9月24日 優先權日2004年9月24日
發明者宋學孟, 蘇敏, 龐瑞華, 王凌健, 陳權, 董舉文, 樓文阜, 何燕紅 申請人:上海光兆植物速生技術有限公司