一種林蛙蛋白和骨鈣的提取方法

2023-04-25 11:59:56 3

一種林蛙蛋白和骨鈣的提取方法
【專利摘要】一種林蛙蛋白和骨鈣的提取方法，步驟為：將剔去林蛙肉後的林蛙皮及林蛙骨清洗破碎後，加入胃蛋白酶酶解，離心，取上清液備用；分離出的殘渣再加入木瓜蛋白酶繼續酶解，離心，取上清液將兩次酶解上清液；合併兩次酶解所取的上清液，納米濾膜過濾，將截留的大分子蛋白，冷凍乾燥，得林蛙蛋白；酶解後的殘渣加入乳酸菌和天然西紅柿培養基發酵，組織破碎，離心，取上清與酶解步驟透過納米濾膜的流出液合併，濃縮乾燥，得林蛙骨鈣。採用分步酶解，增加了林蛙蛋白的產出，酶解後的殘渣用乳酸菌發酵富集，得到第二種提取物林蛙骨鈣，提高了林蛙活性成分獲取率；採用納米濾膜富集、冷凍乾燥，保持了蛋白和多肽的活性。工藝過程簡單，無環境汙染。
【專利說明】一種林蛙蛋白和骨鈣的提取方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬於生物化學領域，具體涉及林蛙蛋白的酶解提取和骨鈣乳酸菌發酵提取 方法。

【背景技術】
[0002] 長白山林蛙是我國東北地區長白山集藥、食、補於一體的珍貴蛙種，由於近年來人 工養殖技術的成熟和完善，其資源十分豐富。作為一種高價值的藥用動物，長白山林蛙在食 品、藥品、化妝品、保健品等方面有著廣泛的應用。林蛙皮及林蛙骨是摘取林蛙油後作為飼 料或廢棄物的物質。本發明立足於長白山林蛙資源豐富以及蛙皮蛙骨中含有大量生物活性 物質這一優勢，發明一種複合酶酶解與乳酸菌發酵聯用技術，提取林蛙骨鈣和林蛙蛋白，用 於開發保健食品和化妝品的原料。
[0003] 目前現有的技術多是對林蛙皮進行單一酶酶解或利用酸解方法得到林蛙皮 蛋白，這種方法提取效率低，生產成本高，酶解或水解後的溶液多通過噴霧乾燥的方式進行 乾燥，生產周期長，不適合於工業化生產。而且現有技術多為單一酶解或酸水解林蛙皮單一 部位，然而由於林蛙本身的特殊性，導致林蛙皮很難脫骨剝離。


【發明內容】

[0004] 本發明的目的是提供一種林蛙蛋白和骨鈣的提取方法，用於林蛙活性成分提取， 克服現有的提取方法存在的前述不足。
[0005] 本發明的林蛙蛋白和骨鈣的提取方法包括： 1、 將林蛙剔去蛙肉，取其皮、骨清洗破碎； 2、 向破碎後的林蛙皮、骨混合物中加入1/1000-1/750的胃蛋白酶和8 -10倍重量的 水，在PH6-8的條件下37-45°C酶解5-10小時，離心，取上清液備用； 3、 將步驟2分離出的殘渣加入木瓜蛋白酶在PH6-8的條件下37-45°C繼續酶解5-10小 時，離心，取上清液備用； 4、 將步驟2和步驟3得到的酶解上清液合併，用分子量500-1000的納米濾膜收集，被 截留的大分子蛋白，冷凍乾燥，得林蛙蛋白； 5、 將步驟3酶解後的殘渣加入原林蛙皮、骨混合物重量2% -10%的乳酸菌和2-10倍重 量的天然西紅柿培養基，再加入培養基重量的1%_5%的葡萄糖，發酵30-40小時，組織破碎， 離心，取上清液，將本步驟中所得上清液與步驟（4)透過納米濾膜含小分子量蛋白的流出液 合併，濃縮乾燥，得林蛙骨鈣。
[0006] 本發明的積極效果是： 提取過程中林蛙皮及林蛙骨同時利用，避免的資源浪費、降低了原料前處理的難度，提 高了工作效率； 採用複合酶分步酶解的方法，提高了酶解的效率，增加了林蛙蛋白的產出，酶解後的殘 渣再通過乳酸菌發酵游離並富集林蛙骨中的鈣質，得到第二種提取物林蛙骨鈣，提高了林 蛙活性成分獲取率； 用的是納米濾膜富集後冷凍乾燥的方法，避免了加熱過程，保持了蛋白和多肽的活 性； 工藝過程簡單，生產成本低，無環境汙染，適合於產業化生產。

【具體實施方式】
[0007] 1、將剔去林蛙肉後的林蛙皮及林蛙骨清洗、破碎、稱重； 2、 向破碎後的林蛙皮及林蛙骨中加入林蛙骨、皮重量1/800的胃蛋白酶和9倍重量的 水，在PH6的條件下45°C酶解5小時，離心，取上清液備用； 3、 將步驟2分離出的殘渣加入原林蛙骨、皮重量1/800的木瓜蛋白酶和9倍重量的水， 在PH6的條件下45°C繼續酶解5小時，離心，取上清液； 4、 將兩次酶解上清液合併，用分子量500的納米濾膜收集，將被截留的大分子蛋白，冷 凍乾燥，得林蛙蛋白。
[0008] 5、將酶解後的殘渣加入原林蛙骨、皮等重量5%的乳酸菌(保加利亞乳桿菌、嗜酸 乳桿菌)和5倍重量的天然西紅柿培養基，再加入培養基重量的3%的葡萄糖，發酵30小時， 組織破碎，離心，取上清，將本步驟中所得上清液與步驟（4)透過納米濾膜含小分子量蛋白 的流出液合併，濃縮乾燥，即得林蛙骨鈣。
【權利要求】
1. 一種林蛙蛋白和骨鈣的提取方法，其特徵是包括下述步驟： (1) 將林蛙剔去蛙肉，取其皮、骨清洗破碎； (2) 向破碎後的林蛙皮、骨混合物中加入其重量1/1000-1/750的胃蛋白酶和8 -10 倍重量的水，在PH6-8的條件下37-45°C酶解5-10小時，離心，取上清液備用； (3) 將步驟（2)分離出的殘渣加入原林蛙皮、骨混合物重量1/1000-1/750的木瓜蛋白 酶和8 -10倍重量的水，在PH6-8的條件下37-45°C繼續酶解5-10小時，離心，取上清液備 用； (4) 將步驟（2)和步驟（3)得到的酶解上清液合併，用分子量500-1000的納米濾膜收 集，被截留的大分子蛋白，冷凍乾燥，得林蛙蛋白； (5) 將步驟（3)酶解後的殘渣加入原林蛙皮、骨混合物重量2% -10%的乳酸菌和2-10 倍重量的天然西紅柿培養基，再加入培養基重量的1%_5%的葡萄糖，發酵30-40小時，組織 破碎，離心，取上清液，將本步驟中所得上清液與步驟（4)透過納米濾膜含小分子量蛋白的 流出液合併，濃縮乾燥，得林蛙骨鈣。
【文檔編號】C12P21/06GK104212862SQ201310214520
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2013年6月3日 優先權日:2013年6月3日
【發明者】王蓮萍, 李英, 鄒慧, 李慶傑, 楊麗, 周立梅, 閆小娟, 趙寶琴, 楊 嘉, 隹雙雙, 赫之也 申請人:吉林省現代中藥工程研究中心有限公司