一種截短側耳素的提取純化方法
2023-05-10 16:44:41
專利名稱：一種截短側耳素的提取純化方法
技術領域：
本發明涉及一種獸藥的提取純化方法，具體涉及一種截短側耳素的提取純化方 法，屬於藥物製備技術領域。
背景技術：
截短側耳素(Pleuromutilin)是由側耳菌(Pleurotus mutilus)產生的一類廣譜 的二萜烯類抗生素，它通過作用於細菌核糖體50S亞基，抑制蛋白質合成，導致菌體死亡。 截短側耳素類是一大類具有較好抗菌活性的抗生素家族，主要用作家禽和家畜的飼料添加 劑，在飼料中添加該類物質，可有效預防許多傳染病，例如能夠有效抑制革蘭氏陽性菌，尤 其以葡萄球菌、鏈球菌最為明顯，同時對於支原體感染也有治療作用。截短側耳素還用作截 短側耳素類半合成衍生物的前體，目前已有衍生物泰妙菌素和沃尼妙林，它的許多衍生物 的抑菌活性和範圍比截短側耳素強，同時抗菌譜更廣泛。專利200510122954. 0公開了一種泰妙菌素合成過程中用的截短側耳素原 料的製備方法，專利201010180181. 2公開了 一種截短側耳素的溶劑提取工藝，專利 200910073722. 9公開了一種截短側耳素提取工藝，專利200810046089. X公開了一種高純度截短側耳素原料的發酵提取製備方法。在這些工藝中一般採用乙酸丁酯或甲醇、乙醇浸 提截短側耳素，也有採用甲基異丁基甲酮作為浸提劑，這些方法雖然提取率高，但是所得產 品帶有雜質，其純度不高，且不易純化。
發明內容
本發明針對上述不足，提供了一種截短側耳素的提取純化方法，該方法能夠提高 截短側耳素的提取率，且所得產品純度高，在98%以上。本發明是通過以下措施實現的一種截短側耳素的提取純化方法，其特徵是包括以下步驟(1)截短側耳素粗品提取將截短側耳素幹菌絲用甲基異丁基甲酮浸取多次，浸取後壓濾得浸取液，浸取液濃縮、 結晶、過濾、乾燥得截短側耳素粗品；(2)純化2. 1將截短側耳素粗品加入甲醇水溶液中，攪拌至全溶； 2. 2將上述溶液減壓濃縮，濃縮至溶液沸點明顯升高，餾出物基本無甲醇為止； 2. 3向濃縮液中加入石油醚進行攪拌萃取，靜置分層後進行分離，取水相，水相再次加 入石油醚進行攪拌萃取，靜置分層後分離得水相；2. 4將水相加入乙酸丁酯進行攪拌萃取，靜置分層進行分離，取水相再次用乙酸丁酯萃 取，兩次萃取的乙酸乙酯相合併進入下一步；2. 5將上述乙酸乙酯相在濃縮結晶罐中進行真空蒸發，濃縮至溶液粘稠、基本無溶劑蒸 出為止，然後向濃縮液中加入乙醚，逐漸降溫至0-4°C，在此溫度下結晶；2.6晶體完全析出後，將結晶分離，用冷乙醚洗滌，洗滌後過濾、乾燥； 2. 7將乾燥後的晶體用乙酸乙酯溶解，用活性炭脫色，然後溶液濾去活性炭，採用步驟 2. 5,2. 6的方法進行濃縮、結晶、過濾、乾燥得截短側耳素。上述提取純化方法中，截短側耳素粗品提取的具體步驟為1. 1向截短側耳素幹菌絲中加入甲基異丁基甲酮浸取三次，浸取後壓濾，將三次所得的 浸取液合併，第一次浸取所用截短側耳素(g)與甲基異丁基甲酮(ml)的比值為1 :3-5，後 兩次浸取所用截短側耳素(g)與甲基異丁基甲酮(ml)的比值為1 :2-4，每次浸取時間均為 lh；1. 2浸取液用降膜濃縮器濃縮至晶體含量為15 20wt%，然後轉入結晶罐，在緩慢攪拌 條件下，以5 10°C /h的降溫速度降至0-4°C，保溫至晶體完全析出；1.3將晶體分離，用預冷的甲基異丁基甲酮洗滌，然後過濾，用真空乾燥器乾燥至晶體 含溼量 20%，然後降 溫結晶、甲基異丁基甲酮洗滌得截短側耳素粗品，與步驟1. 3中粗品混合，濃縮所得的甲基 異丁基甲酮循環利用。上述提取純化方法中，步驟2. 1中，截短側耳素粗品(g)與甲醇水溶液(ml)的比 值為1:8-15，甲醇水溶液的濃度為50-70體積％。上述提取純化方法中，步驟2. 3中，第一次萃取時，石油醚的加入量為濃縮液的 30-50體積％，第二次萃取時，石油醚的加入量為水相的30-50體積％，萃取時間均為15min。上述提取純化方法中，步驟2. 4中，兩次萃取乙酸乙酯的加入量(ml)為截短側耳 素粗品(g)的8-15倍，萃取時間為30min。上述提取純化方法中，步驟2. 5中，乙醚的加入量(ml)為濃縮液(g)的8-15倍，降 溫速度為5 10°C /h。上述提取純化方法中，步驟2. 6中，晶體乾燥至乾燥失重低於1%，乾燥所用設備為 真空烘箱或雙錐乾燥機。上述提取純化方法中，步驟2. 5的結晶母液和步驟2. 6的乙醚洗滌液合併，蒸餾回 收乙醚。上述提取純化方法中，步驟2. 7中，乙酸乙酯的加入量(ml)為晶體(g)的8-15倍， 脫色時活性炭的用量為溶液的3-5wt%，脫色溫度為50-60°C，脫色時間為30min。上述提取純化方法中，步驟2. 1中，截短側耳素粗品(g)與甲醇水溶液(ml)的比值 為1:10，甲醇水溶液的濃度為60體積％ ；步驟2. 4中，兩次萃取乙酸乙酯的加入量(ml)為 截短側耳素粗品(g)的10倍；步驟2. 5中，乙醚的加入量(ml)為濃縮液(g)的10倍；步驟 2. 7中，乙酸乙酯的加入量(ml)為晶體(g)的10倍。本發明的提取純化方法是以發酵所得的截短側耳素幹菌絲為原料的，截短側耳素 幹菌絲的製備為現有技術，並不是本發明的創新點，本領域技術人員可以根據現有技術的 記載製備截短側耳素幹菌絲。有益效果本發明在浸提截短側耳素粗品時採用甲基異丁基甲酮代替乙酸丁酯， 提取率增高，高於90%，在純化過程中，通過選擇合適的工藝步驟及萃取、洗滌劑，除去截短 側耳素中所含的雜質，純化度高，所含截短側耳素純度在98%以上。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發明進行進一步的闡述，應該明白的是，下述說明僅是 為了解釋本發明，並不對其內容進行限定。實施例1一、截短側耳素粗品提取1、向截短側耳素幹菌絲中加入3倍(g:ml)的甲基異丁基甲酮(MIBK)，攪拌浸取1小 時，浸取結束後過濾，浸取液經精過濾後進入濃縮器，菌絲再用4倍MIBK浸取兩次，每次1 小時，浸取結束後壓濾，所得浸取液合併進入濃縮器。壓濾所用設備為板框壓濾機。2、浸取液用降膜濃縮器濃縮至接近析出晶體(晶體含量約為15 20wt%)，濃縮 液迅速轉入結晶罐，在緩慢攪拌條件下，濃縮液以5-10°C /h的降溫速度緩慢降溫，降至 0-4°C，在此溫度保溫，晶體逐漸析出，直至結晶完全。3、將結晶分離，用溫度在0_4°C之間的甲基異丁基甲酮洗滌晶體，然後再次過濾， 洗滌液併入結晶母液，晶體用真空乾燥器乾燥至含溼量20%，然後用結晶罐進行降溫結晶，晶體經洗滌，乾燥得得截短側耳素粗品，與上面得到 的粗品混合，濃縮蒸餾所得的溶劑MIBK可循環使用。二、截短側耳素粗品純化1、將截短側耳素粗品用60體積％的甲醇水溶液溶解，甲醇水溶液的量為粗品的12 倍(質量體積)，將溶液用濃縮器減壓濃縮，蒸發至溶液沸點明顯升高，餾出物基本沒有甲 醇為止(密度計檢測)。此時開始有固體析出，需注意避免堵塞管路，將濃縮液轉移入萃取 罐。2、向萃取罐加入濃縮液40體積％量的石油醚，攪拌15分鐘，靜置分層，分離將上 層醚相轉入暫存罐，下層水相轉入另一萃取罐，向水相再次加入水相40體積％量的石油醚， 攪拌15分鐘，靜置分層，分離將兩次醚相合併，蒸餾回收石油醚，剩餘的殘渣為雜質。3、將石油醚兩次萃取後所得的水相用乙酸丁酯萃取，攪拌萃取30min，靜置分層， 分離將水相再用乙酸丁酯萃取一次，攪拌萃取30min，靜置分層，分離將兩次萃取所得的乙 酸丁酯相混合，進入濃縮結晶罐，兩次所加乙酸丁酯的體積用量(ml)為截短側耳素粗品的 質量(g)的10倍。4、乙酸丁酯相在濃縮結晶罐中真空加熱蒸發，濃縮至粘稠、基本無溶劑蒸出為止， 然後在攪拌下向濃縮液中加入乙醚，在5-10°C /h的降溫速度緩慢降溫至0-4°C，保溫至晶 體析出完全，乙醚的用量(ml)為濃縮液(g)的10倍。使用過濾器或離心機進行晶體分離， 用溫度0-4°C的冷乙醚洗滌晶體，晶體用真空烘箱或雙錐乾燥機乾燥至乾燥失重低於1%。 將結晶母液和乙醚洗滌液混合，蒸餾回收乙醚，所得殘渣為雜質。5、將上述乾燥的晶體加入乙酸乙酯，在脫色罐中攪拌升溫至完全溶解，乙酸乙酯 加入量(ml)為晶體質量的10倍。在溶液中加入3 5wt%的活性炭，在50-60°C攪拌脫色 30分鐘，溶液在保溫條件下經活性碳過濾器過濾後，進入濃縮結晶罐。經降溫濃縮結晶、過 濾乾燥得截短側耳素，純度為99. 5%，收率高於90%。實施例2方法步驟同實施例1，不同的是 一、截短側耳素粗品提取1、開始，向截短側耳素幹菌絲(g)中加入5倍的甲基異丁基甲酮(ml)進行浸取，然後菌 絲再用2倍的MIBK浸取兩次。二、截短側耳素粗品純化1、將截短側耳素粗品用65體積％的甲醇水溶液溶解，甲醇水溶液的量為粗品的10倍 (質量體積)。2、第一次萃取石油醚的加入量為濃縮液的50體積％，第二次萃取石油醚的加入量 為水相的30體積％。3、乙酸丁酯萃取時，兩次所加乙酸丁酯的體積用量(ml)為截短側耳素粗品的質量 (g)的8倍。
4、乙醚的用量(ml)為濃縮液(g)的8倍。5、乙酸乙酯加入量(ml)為晶體質量的8倍。最終所得截短側耳素純度為98. 9%， 收率高於90%。實施例3方法步驟同實施例1，不同的是 一、截短側耳素粗品提取1、開始，向截短側耳素幹菌絲(g)中加入5倍的甲基異丁基甲酮(ml)進行浸取，然後菌 絲再用2倍的MIBK浸取兩次。二、截短側耳素粗品純化1、將截短側耳素粗品用70體積％的甲醇水溶液溶解，甲醇水溶液的量為粗品的8倍 (質量體積)。2、第一次萃取石油醚的加入量為濃縮液的30體積％，第二次萃取石油醚的加入量 為水相的50體積％。3、乙酸丁酯萃取時，兩次所加乙酸丁酯的體積用量(ml)為截短側耳素粗品的質量 (g)的15倍。4、乙醚的用量(ml)為濃縮液(g)的9倍。5、乙酸乙酯加入量(ml)為晶體質量的9倍。最終所得截短側耳素純度為98. 3%， 收率高於90%。實施例4方法步驟同實施例1，不同的是 一、截短側耳素粗品提取1、開始，向截短側耳素幹菌絲(g)中加入4倍的甲基異丁基甲酮(ml)進行浸取，然後菌 絲再用3倍的MIBK浸取兩次。二、截短側耳素粗品純化1、將截短側耳素粗品用60體積％的甲醇水溶液溶解，甲醇水溶液的量為粗品的12倍 (質量體積)。2、第一次萃取石油醚的加入量為濃縮液的40體積％，第二次萃取石油醚的加入量 為水相的50體積％。
3、乙酸丁酯萃取時，兩次所加乙酸丁酯的體積用量(ml)為截短側耳素粗品的質量 (g)的9倍。4、乙醚的用量(ml)為濃縮液(g)的15倍。5、乙酸乙酯加入量(ml)為晶體質量的15倍。最終所得截短側耳素純度為98. 5%， 收率高於90%。
權利要求
1.一種截短側耳素的提取純化方法，其特徵是包括以下步驟(1)截短側耳素粗品提取將截短側耳素幹菌絲用甲基異丁基甲酮浸取多次，浸取後壓濾得浸取液，浸取液濃縮、 結晶、過濾、乾燥得截短側耳素粗品；(2)純化2.1將截短側耳素粗品加入甲醇水溶液中，攪拌至全溶；2. 2將上述溶液減壓濃縮，濃縮至溶液沸點明顯升高，餾出物基本無甲醇為止； 2. 3向濃縮液中加入石油醚進行攪拌萃取，靜置分層後進行分離，取水相，水相再次加 入石油醚進行攪拌萃取，靜置分層後分離得水相；2. 4將水相加入乙酸丁酯進行攪拌萃取，靜置分層進行分離，取水相再次用乙酸丁酯萃 取，兩次萃取的乙酸乙酯相合併進入下一步；2. 5將上述乙酸乙酯相在濃縮結晶罐中進行真空蒸發，濃縮至溶液粘稠、基本無溶劑蒸 出為止，然後向濃縮液中加入乙醚，逐漸降溫至0-4°C，在此溫度下結晶； 2.6晶體完全析出後，將結晶分離，用冷乙醚洗滌，洗滌後過濾、乾燥； 2. 7將乾燥後的晶體用乙酸乙酯溶解，用活性炭脫色，然後溶液濾去活性炭，採用步驟 2. 5,2. 6的方法進行濃縮、結晶、過濾、乾燥得截短側耳素。
2.根據權利要求1所述的提取純化方法，其特徵是截短側耳素粗品提取的具體步驟為1. 1向截短側耳素幹菌絲中加入甲基異丁基甲酮浸取三次，浸取後壓濾，將三次所得的 浸取液合併，第一次浸取所用截短側耳素(g)與甲基異丁基甲酮(ml)的比值為1 :3-5，後 兩次浸取所用截短側耳素(g)與甲基異丁基甲酮(ml)的比值為1 :2-4，每次浸取時間均為 lh；1. 2浸取液用降膜濃縮器濃縮至晶體含量為15 20wt%，然後轉入結晶罐，在緩慢攪拌 條件下，以5 10°C /h的降溫速度降至0-4°C，保溫至晶體完全析出；1.3將晶體分離，用預冷的甲基異丁基甲酮洗滌，然後過濾，用真空乾燥器乾燥至晶體 含溼量 20%，然後降 溫結晶、甲基異丁基甲酮洗滌得截短側耳素粗品，與步驟1.3中粗品混合，濃縮所得的甲基 異丁基甲酮循環利用。
3.根據權利要求1或2所述的提取純化方法，其特徵是步驟2.1中，截短側耳素粗品 (g)與甲醇水溶液(ml)的比值為1:8-15，甲醇水溶液的濃度為50-70體積％。
4.根據權利要求1或2所述的提取純化方法，其特徵是步驟2.3中，第一次萃取時， 石油醚的加入量為濃縮液的30-50體積％，第二次萃取時，石油醚的加入量為水相的30-50 體積％，萃取時間均為15min。
5.根據權利要求1或2所述的提取純化方法，其特徵是步驟2.4中，兩次萃取乙酸乙 酯的加入量(ml)為截短側耳素粗品(g)的8-15倍，萃取時間為30min。
6.根據權利要求1或2所述的提取純化方法，其特徵是步驟2.5中，乙醚的加入量 (ml)為濃縮液(g)的8-15倍，降溫速度為5 10°C /h。
7.根據權利要求1或2所述的提取純化方法，其特徵是步驟2.6中，晶體乾燥至乾燥失重低於1%，乾燥所用設備為真空烘箱或雙錐乾燥機。
8.根據權利要求1或2所述的提取純化方法，其特徵是步驟2.5的結晶母液和步驟 2.6的乙醚洗滌液合併，蒸餾回收乙醚。
9.根據權利要求1或2所述的提取純化方法，其特徵是步驟2.7中，乙酸乙酯的加入 量(ml)為晶體(g)的8-15倍，脫色時活性炭的用量為溶液的3-5wt%，脫色溫度為50_60°C， 脫色時間為30min。
10.根據權利要求1或2所述的提取純化方法，其特徵是步驟2.1中，截短側耳素粗 品(g)與甲醇水溶液(ml)的比值為1:10，甲醇水溶液的濃度為60體積％;步驟2.4中，兩 次萃取乙酸乙酯的加入量(ml)為截短側耳素粗品(g)的10倍；步驟2. 5中，乙醚的加入量 (ml)為濃縮液(g)的10倍；步驟2. 7中，乙酸乙酯的加入量(ml)為晶體(g)的10倍。
全文摘要
本發明公開了一種截短側耳素的提取純化方法，步驟為將截短側耳素幹菌絲用甲基異丁基甲酮浸取，處理得粗品；粗品用甲醇溶解，先後用石油醚和乙酸丁酯萃取，經濃縮、結晶、乙醚洗滌、活性炭脫色得截短側耳素成品。本發明在浸提截短側耳素粗品時採用甲基異丁基甲酮代替乙酸丁酯，提取率增高，高於90%，在純化過程中，通過選擇合適的工藝步驟及萃取、洗滌劑，除去截短側耳素中所含的雜質，純化度高，所含截短側耳素純度在98%以上。
文檔編號C07C67/58GK102050737SQ201010582400
公開日2011年5月11日 申請日期2010年12月10日 優先權日2010年12月10日
發明者王斌, 王永恆, 胡江林, 趙碩珍 申請人:山東勝利股份有限公司