一種測定紅花黃色素含量的方法

2023-05-02 16:57:46 1

專利名稱：一種測定紅花黃色素含量的方法
技術領域：
本發明涉及一種紅花黃色素檢測方法，具體地說，涉及一種檢測紅花黃 色素及含量的方法。屬於藥物領域。
背景技術：
紅花屬菊科植物紅花CaW/ww^f/""w/iwL.的乾燥花，具有活血化淤、通 經之功效。紅花是當今世界研究和應用的"熱點"植物之一，對它的化學成 分的研究，己有大量文獻報導，紅花黃色素經藥理研究證明是紅花的主要藥 效部位，其中主要活性成分為紅花黃色素。
現有技術已有大量紅花黃色素或者紅花黃色素有效部位及其製劑的文獻 報導。關於紅花黃色素或者紅花黃色素的測定方法，也有一些報導。為了有 效地控制紅花黃色素或者紅花黃色素藥物製劑質量，確保原料或者中間體品 質，需要提供一種便捷、有效地紅花黃色素產品質量品價方法，特別是檢測 方法，從而可以保證藥品製劑質量有效和可控。

發明內容
為此，本發明主要目的是提供一種有效、可控、便捷地檢測紅花黃色素 的方法，進而可以有效地評估紅花黃色素產品質量和品質。
為實現上述發明目的，本發明技術方案如下
本發明提供一種檢測紅花黃色素的方法，其包括如下步驟-
(1) 紅花黃色素的檢測，用薄層色譜法或者紫外分光光度法檢測紅花黃色素
的供試品中紅花黃色素；
(2) 總黃酮的含量測定，用紫外分光光度法，以羥基紅花黃色素A為對照品，
測定波長為360nm，測定紅花黃色素的供試品中總黃酮含量；
(3) 羥基紅花黃色素A的含量測定，用高效液相色譜法，以羥基紅花黃色素 A為對照品，用十八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相，用甲醇、乙腈、水和 磷酸的混合溶劑為流動相，測定波長為360nm，理論塔板數按羥基紅花
黃色素A峰計算應不低於3000，測定紅花黃色素供試品中羥基紅花黃 色素A的含量。
本發明所述的紅花黃色素，均系從紅花中提取、分離、純化得到的總黃 酮，可以通過現有技術已知方法從紅花原藥材中提取、分離、純化得到紅花 黃色素。例如CN1600817A、 CN1935176A、 CN101007828A等專利申請中公 開的紅花中提取、分離、純化得到的紅花黃色素或者紅花黃色素或者紅花提 取物產品等。前述專利申請公開內容引入本申請作為參考。
本發明上述所述的方法，其中步驟(1)紅花黃色素的檢測，可以通過薄 層色譜法檢測。例如可以紅花黃色素作為對照品，採用聚醯胺薄層色譜、矽 膠薄層色譜等方法檢測供試品中的紅花黃色素。也可以採用紫外分光光度法， 檢測樣品在一定波長範圍內測定其最大吸收波長，測定樣品中的紅花黃色素。
其中，作為優選實施方案，本發明採用薄層色譜法檢測紅花黃色素的供 試品中紅花黃色素。並且優選步驟(1)所述的薄層色譜，是以聚醯胺為吸附 劑，水、乙醇、甲酸和乙醯丙酮的混合溶劑為展開劑，以羥基紅花黃色素A 為對照品，薄層色譜展開後，供試品與對照品色譜相應的位置尚顯現相同的 點。
其中，更加優選所述的展開劑為水、乙醇、甲酸和乙醯丙酮的混合溶劑， 按體積比配伍，水:乙醇:甲酸:乙醯丙酮為5:1.5:1:0.5的混合溶劑。
作為本發明的另一實施方案，其中步驟(1)紫外分光光度法檢測紅花黃 色素的供試品中紅花黃色素，在221 227nm波長處有最大吸收峰。
其中，本發明上述所述的檢測方法，其中步驟(3)中所述的流動相，優 選按體積比配伍，甲醇:乙腈:水:磷酸為32:3:64.5:0.5的混合溶劑。
本發明另一目的，是提供一種檢測注射用紅花黃色素的方法，其中所述 的紅花黃色素系從紅花中提取分離、純化得到的總黃酮，其包括如下步驟
(1) 紅花黃色素的檢測，用薄層色譜法或者紫外分光光度法檢測出注射用紅 花黃色素中的紅花黃色素；
(2) 總黃酮的含量測定，用紫外分光光度法，以羥基紅花黃色素A為對照品， 檢測波長為360nm，測定出注射用紅花黃色素中的總黃酮含量；
(3) 羥基紅花黃色素A的含量測定，用高效液相色譜法，以羥基紅花黃色素
A為對照品，用十八垸基矽垸鍵合矽膠為固定相，用甲醇:乙腈:水:磷酸 的體積比為32:3:64.5:0.5的混合溶劑為流動相，檢測波長為360nm，理 論塔板數按羥基紅花黃色素A峰計算應不低於3000，測定出注射用紅 花黃色素中的羥基紅花黃色素A含量。
其中，上述所述的方法，優選步驟(1)採用薄層色譜法檢測注射用紅花
黃色素中的紅花黃色素，薄層色譜是以聚醯胺為吸附劑，水:乙醇:甲酸:乙醯
丙酮的體積比為5:1.5:1:0.5的混合溶劑為展開劑，羥基紅花黃色素A為對照 n
叫o
上述所述的方法，其中步驟(i)採用紫外分光光度法檢測注射用紅花黃
色素中的紅花黃色素，在221 227nm波長處有最大吸收峰。
上述所述的注射用紅花黃色素的檢測方法，其檢測紅花黃色素凍乾粉針 劑，規格為50mg/每瓶，其中步驟(2)中總黃酮含量不得少於38.25mg，步 驟(3)中羥基紅花黃色素A含量應為31.5 38.5mg。
本發明所述的注射用紅花黃色素，也是從紅花中提取、分離、純化得到 的純度較高的總黃酮，可以通過現有技術己知方法從紅花原藥材中提取、分 離、純化得到紅花黃色素。例如CN1600817A、 CN1935176A、 CN101007828A 等專利申請中公開的紅花中提取、分離、純化得到的紅花黃色素或者紅花黃 色素或者紅花提取物產品等。前述專利申請公開內容引入本申請作為參考。
例如本發明所述的注射用紅花黃色素，可以通過如下方法製備得到稱 取紅花，加10-13倍藥材重量的去離子水，於100 'C提取20-25分鐘，過濾， 濾渣加10倍藥材重量的去離子水再按上述條件重複提取一次，過濾。合併二 次提取液，冷卻至室溫，用離心機離心後，取離心液備用。
將上述離心液緩緩加到已處理平衡好的HZ801大孔吸附樹脂柱中，柱徑 高比為1 : 12，上樣流速為每分鐘10ml。上樣結束後，用常溫的去離子水以 每分鐘20ml的流速洗脫。收集富含紅花黃色素的洗脫液，洗脫液於80 90 。C減壓濃縮，得紅花黃色素粗品濃縮液。
紅花黃色素粗品濃縮液上凝膠LH-20柱，柱的徑高比為1:5，上樣量為 柱床體積的10%，注射用水洗脫，流速為每分鐘5ml，收集含紅花黃色素部 分。收集液經80 卯'C減壓濃縮後，得紅花黃色素精品濃縮液，經冷凍乾燥，
得注射用紅花黃色素(或者稱為紅花黃色素凍乾粉針)。
作為優選，本發明所述的注射用紅花黃色素，其中總黃酮含量不低於75 %，羥基紅花黃色素A含量為60X 80。/。。
作為優選，本發明所述的注射用紅花黃色素，為紅花黃色素凍乾粉針， 製劑規格為50mg/瓶，其中總黃酮含量不得少於38.25mg，紅花黃色素含量應 為31.5 38.5mg。
本發明發現，通過對紅花黃色素產品中紅花黃色素鑑別、總黃酮含量檢 測以及羥基紅花黃色素A含量檢測的步驟，可以有效地評價紅花的有效部位 紅花黃色素，可以控制紅花黃色素或者紅花黃色素藥用製劑的中間體質量， 進而能夠有效地控制紅花黃色素藥品製劑質量，確保製劑安全、有效和可控。 特別是通過採用特定的混合溶劑配比，運用薄層色譜法這一簡便、快捷的方 法，能夠非常有效地鑑別出紅花黃色素產品中紅花黃色素，專屬性和準確性 高，取得令人驚喜的發明效果。本發明方法，不僅可以有效地評估紅花黃色 素及其藥物製劑的質量和品質，是質控有效措施，而且方法簡便、快捷、有 效，準確性和專屬性高的優點。
具體實施例方式
以下實施例是為了進一步解釋和說明本發明內容，不應被理解為對本發 明主旨進行限定或限制。
實施例l:紅花黃色素供試品檢測
供試品注射用紅花黃色素(規格50mg、生產廠家浙江永寧藥業股 份有限公司、批號080303) 步驟一紅花黃色素檢測
採用聚醯胺薄層板，對照品為羥基紅花黃色素A，展開劑為水-乙醇-甲酸-
乙醯丙酮(5:1.5:1:0.5)。取供試品適量，加水製成每lml中含2mg的溶液， 作為供試液。另取對照品加水製成每lml中含2mg的溶液作為對照液。取聚 醯胺薄層板，規格10X20cm，吸取上述兩種溶液各2)il，分別點於同一薄層 板上，以展開劑展開後取出、晾乾。結果供試品中在與對照品相同位置顯示 一個斑點。展開系統較好，羥基紅花黃色素A的Rf約為0.7，分離度較好。 步驟二總黃酮含量測定對照品溶液的製備精密稱取經五氧化二磷真空乾燥24小時後的羥基紅
花黃色素A對照品適量，加水製成每lml含45)ig的溶液作為對照品溶液。
標準曲線的製備精密量取上述對照品溶液0、 1.0、 2.0、 4.0、 6.0、 8.0ml 分別置於10ml容量瓶中，加水至刻度搖勻，同時以水作空白。採用日本島津 UV-260紫外風光光度計進行測定，在360nm的波長處測定吸收度，以吸收度 為縱坐標，濃度為橫坐標，製得標準曲線。
測定取本品25mg，精密稱定，置於100ml量瓶中，加水溶解並稀釋至 刻度。精密量取2ml，置於25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，採用日本 島津UV-260紫外風光光度計進行測定，在360nm的波長處測定吸收度，從 標準曲線上讀出供試品溶液中總黃酮量。
結果測得供試品中總黃酮含量為43.66mg。
步驟三羥基紅花黃色素A含量測定
對照品溶液製備精密量取經五氧化二磷真空乾燥24小時後的羥基紅花 黃色素A對照品適量，加水製成每lml含0.20mg的溶液，搖勻即得。
供試品溶液製備取本品25mg，精密稱定，置於100ml量瓶中，加水溶 解並稀釋至刻度，搖勻即得。
色譜條件採用高效液相色譜法，用十八垸基矽烷鍵合矽膠為固定相，用 甲醇:乙腈:水:磷酸的體積比為32:3:64.5:0.5的混合溶劑為流動相，檢測波長為 360nm，理論塔板數按羥基紅花黃色素A峰計算應不低於3000。
測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2(^1,注入液相色譜儀， 測定峰面積，計算即得。
結果測得本品按幹品計算含羥基紅花黃色素A為36.7mg。
實施例2:薄層色譜檢測紅花黃色素 供試品自製注射用紅花黃色素 對照品羥基紅花黃色素A
薄層版聚醯胺薄層板 展開劑
1、 甲醇-水(8:2)
2、 水-乙醇-乙醯丙酮(4:2:1.5)
3、 乙醇-水(3:2)
4、 乙醇-水-丁酮-乙醯丙酮(3:13:3:1)
5、 苯-甲醇-丁酮(6:2:2)
6、 水-乙醇-甲酸-乙醯丙酮(5:1.5:1:0.5)
取供試品適量，加水製成每lml中含2mg的溶液，作為供試液。另取對 照品加水製成每lml中含2mg的溶液作為對照液。取聚醯胺薄層板，規格10 X20cm，吸取上述兩種溶液各2^1，分別點於同一薄層板上，以展開劑展開 後取出、晾乾。結果如下表l。
表l:紅花黃色素薄層結果
展開劑序號結果
1前沿與原點兩個斑點
2帶狀無點
3原點未展開
4原點
5原點未展開
61個點，Rf約0.7
結果表明，展開劑6可以有效地檢測樣品中紅花黃色素，展開系統較好， 羥基紅花黃色素A的Rf約為0.7，分離度較好。
己經根據優選實施例對本發明作了描述。應當理解的是前面的描述和實 施例僅僅為了舉例說明本發明而已。在不偏離本發明的精神和範圍的前提下， 本領域技術人員可以設計出本發明的多種替換方案和改進方案，其均應被理 解為在本發明的保護範圍之內。
權利要求
1、一種檢測紅花黃色素的方法，其中所述的紅花黃色素系從紅花中提取、分離、純化得到的總黃酮，其包括如下步驟(1)紅花黃色素的檢測，用薄層色譜法或者紫外分光光度法檢測紅花黃色素供試品中的紅花黃色素；(2)測定總黃酮的含量，用紫外分光光度法，以羥基紅花黃色素A為對照品，測定波長為360nm，測定紅花黃色素供試品中的總黃酮含量；(3)測定羥基紅花黃色素A的含量，用高效液相色譜法，以羥基紅花黃色素A為對照品，用十八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相，用甲醇、乙腈、水和磷酸的混合溶劑為流動相，測定波長為360nm，理論塔板數按羥基紅花黃色素A峰計算應不低於3000，測定紅花黃色素供試品中羥基紅花黃色素A的含量。
2、 根據權利要求l所述的方法，其中步驟(1)採用薄層色譜法檢測紅花黃色素供 試品中的紅花黃色素。
3、 根據權利要求2所述的方法，其中步驟(1)所述的薄層色譜是以聚醯胺為吸附 齊U，水、乙醇、甲酸和乙醯丙酮的混合溶劑為展開劑，羥基紅花黃色素A為對 照品。
4、 根據權利要求3所述的方法，其中所述的展開劑為水:乙醇:甲酸:乙醯丙酮的體 積比為5:1.5:1:0.5的混合溶劑。
5、 根據權利要求l所述的方法，其中步驟(1)採用紫外分光光度法檢測紅花黃色 素供試品中的紅花黃色素，在221 227nm波長處有最大吸收峰。
6、 根據權利要求1一5所述的檢測方法，其中步驟(3)中所述的流動相為甲醇:乙 腈:水:磷酸的體積比為32:3:64.5:0.5的混合溶劑。
7、 一種檢測注射用紅花黃色素的方法，其中所述的紅花黃色素系從紅花中提取、 分離、純化得到的總黃酮，其包括如下步驟(1)紅花黃色素的檢測，用薄層色譜法或者紫外分光光度法檢測出注射用紅花黃 色素中的紅花黃色素； (2) 總黃酮的含量測定，用紫外分光光度法，以羥基紅花黃色素A為對照品， 檢測波長為360nm，測定出注射用紅花黃色素中的總黃酮含量；(3) 羥基紅花黃色素A的含量測定，用高效液相色譜法，以羥基紅花黃色素A 為對照品，用十八垸基矽垸鍵合矽膠為固定相，用甲醇:乙腈:水:磷酸的體積 比為32:3:64.5:0.5的混合溶劑為流動相，檢測波長為360nm，理論塔板數按 羥基紅花黃色素A峰計算應不低於3000，測定出注射用紅花黃色素中的羥 基紅花黃色素A含量。
8、 根據權利要求7所述的方法，其中步驟(1)採用薄層色譜法檢測注射用紅花黃 色素中的紅花黃色素，薄層色譜是以聚醯胺為吸附劑，水:乙醇:甲酸:乙醯丙酮 的體積比為5:1.5:1:0.5的混合溶劑為展開劑，羥基紅花黃色素A為對照品。
9、 根據權利要求7所述的方法，其中步驟(1)採用紫外分光光度法檢測注射用紅 花黃色素中的紅花黃色素，在221 227nm波長處有最大吸收峰。
10、 據權利要求7-9所述的方法，其中步驟(2)中總黃酮含量不得少於 38.25mg，步驟(3)中羥基紅花黃色素A含量應為31.5 38.5mg。
全文摘要
本發明涉及一種測定紅花黃色素含量的方法，具體地說，通過對紅花黃色素產品中紅花黃色素鑑別、總黃酮含量檢測以及羥基紅花黃色素A含量檢測的步驟，可以有效地評價紅花的有效部位紅花黃色素，可以控制紅花黃色素或者紅花黃色素藥用製劑的中間體質量，進而能夠有效地控制紅花黃色素藥品製劑質量，確保製劑安全、有效和可控。本發明方法還具有方法簡便、快捷、有效，準確性和專屬性高的優點。
文檔編號G01N30/02GK101339174SQ20081013529
公開日2009年1月7日 申請日期2008年8月11日 優先權日2008年8月11日
發明者敏 盧, 葉鳳起, 張建宇, 彭黎明, 林德君, 陸仙芸, 黃海燕 申請人:浙江永寧藥業股份有限公司