Ngf基因-聚陽離子納米顆粒複合物及其製備方法和應用的製作方法

2023-05-02 15:39:06 2

Ngf基因-聚陽離子納米顆粒複合物及其製備方法和應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合物及其製備方法和應用。所述納米顆粒複合物包含NGF基因物質和聚陽離子，所述的聚陽離子是聚精胺咪唑-4,5-二亞胺或聚精胺咪唑-4,5-二醯胺，所述的聚陽離子與NGF基因物質的質量比為5~100。本發明的納米顆粒複合物毒性小、轉染效率高，可以在體內循環過程中兼顧到達靶細胞之前的穩定性和進入靶細胞之後的生物響應性，聚陽離子自身可在體內完成無毒化的代謝，因此可通過顱內局部注射用於帕金森病及其併發症的治療。
【專利說明】NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合物及其製備方法和應用

【技術領域】
[0001] 本發明涉及非病毒基因載體【技術領域】，具體地說，涉及NGF基因-聚陽離子納米顆 粒複合物及其製備方法和應用。

【背景技術】
[0002] 在基因治療的發展過程中，基因運載系統即基因載體的研究始終是人們關注的焦 點，基因載體能否安全有效地運載基因到指定地點是基因治療是否能在臨床上應用的關鍵 所在。基因載體可分為病毒型載體和非病毒型載體兩大類。雖然目前使用最多的仍然是病 毒型載體，其轉染效率可達90%以上，但病毒載體存在自身難以克服的局限性，如能誘導宿 主免疫反應及潛在的致癌性，製備複雜，而且所能裝載的外源DNA大小有限，使其應用受到 很大限制。於是，人們開始著眼於非病毒型載體的研究。目前已有的非病毒型載體介導基因 轉染的方法有裸DNA注射、磷酸鈣介導、電轉移法、陽離子脂質體及陽離子聚合物介導等， 前三者雖然沒有病毒載體的缺點，但轉染效率不盡如人意。陽離子脂質體轉染效率較高、重 復性好，但轉染時需除血清，體內不穩定一直是困擾醫學界的難題。從目前發展趨勢看，陽 離子聚合物載體在基因轉移方面呈現顯著優勢。
[0003] 陽離子聚合物又稱聚陽離子，種類很多，目前研究較多的有多肽類：聚賴氨酸、 聚穀氨酸及其衍生物；多聚胺類：聚乙烯亞胺、聚丙烯亞胺樹狀物；聚甲基丙烯酸類：聚醯 胺-胺型樹狀物、聚甲基丙烯酸乙酯2 - (二甲胺);以及一些天然高分子如殼聚糖、明膠等。 這些聚合物結構上的一個共同特點是分子內含有許多氨基，在生理PH下會發生質子化，這 些質子化的氨基可以中和DNA質粒表面的負電荷，使DNA分子由伸展結構壓縮為體積相對 較小的DNA粒子，或將目的基因包裹在其中，使DNA免受核酸酶的降解，它們可以作為基因 載體。
[0004] 陽離子聚合物-DNA複合物主要是通過細胞內吞作用將DNA轉移進入細胞，形成內 含體（endosome)，DNA從內含體釋放，進入細胞質中，再進一步進入核內轉錄、表達。
[0005] 聚精胺咪唑-4，5-二亞胺（Polyspermine imidazole-4, 5-imine，PSI)結構式如 下：

【權利要求】
1. 一種NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合物，其特徵在於，它包含NGF基因物質和聚陽 離子，所述的聚陽離子是聚精胺咪哇-4，5-二亞胺或聚精胺咪哇-4，5-二醜胺，所述的聚 陽離子與NGF基因物質的質量比為5^100。
2. 根據權利要求1所述的NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合物，其特徵在於，所述的聚 陽離子與NGF基因物質的質量比為4(T50。
3. 根據權利要求1所述的NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合物，其特徵在於，它是由W 下方法製備得到的： (1) 將聚陽離子溶液快速加入到相同體積的NGF基因溶液中，混合均勻； (2) 將混合溶液於室溫下賠育20?30分鐘，即得NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合 物。
4. 根據權利要求1所述的NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合物，其特徵在於，所述的聚 精胺咪Ii巾-1，5-二亞胺結構式為：
其中，n 為 10(T500。
5. 根據權利要求1所述的NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合物，其特徵在於，所述的聚 精胺咪哇-4，5-二醜胺結構式為：
其中，n 為 10(T500。
6. 根據權利要求1所述的NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合物，其特徵在於，所述的 NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合物的粒徑為100?300納米。
7. 權利要求1所述的NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合物的製備方法，其特徵在於，包 括W下步驟： (1) 將聚陽離子溶液快速加入到相同體積的NGF基因溶液中，混合均勻； (2) 將混合溶液於室溫下賠育20?30分鐘，即得NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合 物。
8. 根據權利要求7所述的製備方法，其特徵在於， 所述的聚精胺咪哇-4，5-二亞胺結構式為：
所述的聚精胺咪哇-4，5-二醜胺結構式為：


其中，n 為 10(T500。
9. 根據權利要求7所述的製備方法，其特徵在於，所述的NGF基因-聚陽離子納米顆粒 複合物的粒徑為100?300納米。
10. 權利要求1所述的NGF基因-聚陽離子納米顆粒複合物在製備治療帕金森病或異 動症藥物中的應用。
【文檔編號】A61K48/00GK104258418SQ201410509538
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月28日 優先權日:2014年9月28日
【發明者】劉振國, 袁偉恩, 原明璐, 車俊怡 申請人:上海交通大學醫學院附屬新華醫院