可分泌抗心肌肌鈣蛋白i單抗的雜交瘤細胞及應用的製作方法
2023-07-06 09:58:01
專利名稱：可分泌抗心肌肌鈣蛋白i單抗的雜交瘤細胞及應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及心肌肌鈣蛋白I免疫檢測領域，尤其是涉及一種可分泌抗心肌肌鈣蛋白I單抗的雜交瘤細胞及應用。
背景技術：
20世紀80年代前，世界衛生組織(WHO) —直將心肌酶譜活性作為急性心肌梗死(AMI)的診斷標準之一。20世紀80年代末,科研人員發現,肌I丐蛋白(troponin, Tn)的敏感性和特異性高於磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶和天冬氨酸氨基轉移酶等生物標誌物。心肌肌鈣蛋白I(cTnl)僅存於心肌，是心肌細胞的標誌物，其異常改變可影響心臟的舒縮功能，並可用於診斷心肌壞死，判斷心肌損傷等，成為心肌細胞損傷敏感性和特異性最強的標誌物之一，是公認的快速診斷AMI和急性冠脈症候群(acutecoronary syndromes, ACS)以及協助ACS危險分層和反映其預後的主要生化標誌。正常人血液中cTnl含量一般低於0.3 μ g/L。當心肌細胞胞膜完整性因缺血或缺氧等受到破壞時，游離的cTnl可迅速透過細胞膜進入血流。因此，在發病初期快速、靈敏且準確的測定人血中的cTnl及其變化趨勢對急性心肌梗死的診斷、急性冠狀動脈症候群的危險分層、監測各種因素導致的心肌損傷等有著重要的臨床意義。然而傳統的ELISA法存在測定周期偏長、靈敏度相對低、線性範圍偏窄等諸多不足；化學發光法和酶聯螢光分析法靈敏度高，特異性好，但是需要專用設備，使用不方便，投入也比較大。單克隆抗體可用於分析抗原的細微結構及檢驗抗原抗體未知的結構關係，生產出針對複雜生物混合物中的特定分子的抗體，可用於分離、分析及純化該特定分子抗原；其試劑可用於臨床診斷和治療。研究發現，人cTnl(hcTnl)是一種全α型蛋白質，有五個螺旋區域，呈伸展式構型，其抗體識別相應抗原表位不依賴於蛋白質的三級結構，使其大部分胺基酸序列易被免疫系統識別。cTnl合成肽與多種單抗的反應表明，該蛋白質中絕大多數胺基酸序列具有抗原性，特別是N端和C端的序列抗原性非常強。因此，在cTnl的快速檢測領域，研究開發適合於快速檢測用的抗體具有重要意義。
發明內容
基於此，有必要提供一種可快速簡便的應用於hcTnl檢測的可分泌抗心肌肌鈣蛋白I單抗的雜交瘤細胞及其分泌的單克隆抗體。此外，還有必要提供上述雜交瘤細胞或單克隆抗體在醫學檢測領域的應用。一種可分泌抗心肌肌鈣蛋白I單抗的雜交瘤細胞，保藏號為CCTCC No:C201317。一種由上述可分泌抗心肌肌鈣蛋白I單抗的雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體。上述可分泌抗心肌肌鈣蛋白I單抗的雜交瘤細胞可應用在製備心肌肌鈣蛋白I的檢測試劑或設備領域中。上述單克隆抗體可應用在製備心肌肌鈣蛋白I檢測試劑或設備領域中。
一種心肌肌鈣蛋白I的檢測試紙，包括上述單克隆抗體。
在優選的實施例中，所述檢測試紙包括支撐薄片、樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜、吸收墊、檢測線及質控線，所述樣品墊、所述金標墊、所述硝酸纖維素膜及所述吸收墊從所述支撐薄片的一端向另一端依次設置在所述支撐薄片上，所述樣品墊與所述金標墊部分重疊，所述金標墊與所述硝酸纖維素膜部分重疊，所述硝酸纖維素膜與所述吸收墊部分重疊，所述檢測線及所述質控線設在所述硝酸纖維素膜上，且所述檢測線設在靠近所述金標墊的一端，所述質控線設在靠近所述吸收墊的一端，所述金標墊上塗覆有所述單克隆單體包附膠體金顆粒形成膠體金標記的單克隆抗體，所述檢測線為親和純化的抗心肌肌鈣蛋白I的兔多抗，所述質控線為羊抗鼠IgG抗體。一種檢測試劑盒，包括上述心肌肌鈣蛋白I的檢測試紙。上述雜交瘤細胞，命名為cTnI_C4，於2013年I月24日保藏在湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學保藏中心(即中國典型培養物保藏中心)，保藏號是CCTCC No:C201317。上述雜交瘤細胞的分泌產量高，其分泌得到的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體具有高親和力、高特異性等優點，可廣泛應用在製備心肌肌鈣蛋白I的檢測領域，如檢測試劑或檢測設備的製備領域等，在特異性、靈敏度和檢測率等方面較之傳統的檢測方法具有顯著的優勢。
圖1為一實施方式的檢測試紙的正面示意圖；圖2為圖1中檢測試紙的縱截面示意圖；圖3為檢測試劑盒示意圖。
具體實施例方式本實施方式的可 分泌抗心肌肌鈣蛋白I單抗的雜交瘤細胞保藏在中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏號為CCTCC No:C201317。該雜交瘤細胞可分泌出抗心肌肌鈣蛋白I的單克隆抗體。該雜交瘤細胞及其分泌的單克隆抗體可用於製備心肌肌鈣蛋白I的檢測試劑或設備領域中。一實施方式的心肌肌鈣蛋白I的檢測試劑盒包括殼體、檢測試紙和其他檢測試劑。如圖1和圖2所示，本實施方式的檢測試紙100包括支撐薄片110、樣品墊120、金標墊130、硝酸纖維素膜140、吸收墊150、檢測線160及質控線170。樣品墊120、金標墊130、硝酸纖維素膜140及吸收墊150從支撐薄片110的一端向另一端依次設置在支撐薄片110上。樣品墊120與金標墊130部分重疊，金標墊130與硝酸纖維素膜140部分重疊，硝酸纖維素膜140與吸收墊150部分重疊。檢測線160及質控線170設在硝酸纖維素膜上，且檢測線160設在靠近金標墊130的一端，質控線170設在靠近吸收墊150的一端。支撐薄片110採用不吸水的材料製作。樣品墊120用於樣品點樣。單克隆單體包附膠體金顆粒形成膠體金標記的單克隆抗體均勻塗覆在金標墊130上。檢測線160為親和純化的抗心肌肌鈣蛋白I的兔多抗，質控線170為羊抗鼠IgG抗體。如圖3所示，檢測試紙100可置於檢測試劑盒的殼體200內。殼體200上開設有加樣孔210及觀察窗220。加樣孔210對應樣品墊120的位置。檢測線160及質控線170裸露於觀察窗220中，方便觀察。其他檢測試劑可以根據需要直接在實驗室製備。上述檢測試劑盒利用雙抗體夾心法來檢測被檢材料中的心肌肌鈣蛋白I。檢測時，樣品中所有的cTnl先和金標記抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體結合，由於毛細管作用，反應複合物沿硝酸纖維素膜140向前泳動，若樣品中有cTnl，到達檢測線160時，遇到包被在硝酸纖維素膜140上的抗心肌肌鈣蛋白I的兔多抗，就會形成兔多抗-心肌肌鈣蛋白1-金標記單克隆抗體複合物，從而富集在檢測線160上,形成紅色沉澱線；未結合cTnl的金標記單克隆抗體則通過檢測線160，被羊抗鼠IgG抗體捕獲，富集在質控線170上，形成紅色沉澱線。當檢測線160與質控線170上同時有紅色沉澱線時判為陽性結果。若樣品中不含有cTnl，反應複合物到達檢測線160時，遇到捕獲多抗就不會形成兔多抗-cTnl-金標記單克隆抗體複合物，反應複合物通過檢測線160，僅富集在質控線170上形成紅色沉澱線，此時判為陰性結果。此外，在其他實施方式中，該檢測試劑盒的結構不限於上文描述。上述單克隆抗體除應用在上述膠體金標記的單抗檢測試劑盒外，還可以用於其他心肌肌鈣蛋白I檢測試劑盒或設備中。本領域技術人員可以理解，將本實施方式的單克隆抗體直接或間接結合其他信號基團(如磁性微球、辣根過氧化酶等)，或將本實施方式的單克隆抗體作為包被抗體(例如ELISA)，則可用於其他形式的心肌肌鈣蛋白I檢測試劑或設備。故本實施方式所製備得到的雜交 瘤細胞及其分泌的單克隆抗體可廣泛適用於製備心肌肌鈣蛋白I檢測試劑或設備。下面主要結合附圖及具體實施例對可分泌抗心肌肌鈣蛋白I單抗的雜交瘤細胞及相關應用作進一步詳細的說明。實施例1雜交瘤細胞的建立與抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體的製備1.抗原免疫將人重組心肌肌鈣蛋白I抗原(1.5mg/ml，深圳市菲鵬生物股份有限公司生產，貨號AG-CTN1-HP0005)與等體積的弗氏完全佐劑(外觀:琥珀色細胞懸浮液；組份=ParaffinOi 185%,Mannide Monooleatel5%,Mycobacterium smegmatislmg/ml)混合，得到油狀乳液。將該乳液以0.2ml的劑量皮下施給BALB/c小鼠(廣州省實驗動物中心，6周齡雌性，5隻)背部位點，第一次免疫14天後腹腔增強免疫(抗原與等量弗氏不完全佐劑混合)，增強免疫到四針後，採尾血進行效價檢測，效價達到融合要求。融合前3天，用相同劑量抗原腹腔注射追加免疫，免疫方法同上。2.雜交瘤細胞的製備(I)飼養細胞的製備以BALB/c鼠腹腔巨噬細胞作飼養細胞。在融合前I天，將BALB/c鼠拉頸處死並用75%酒精全身浸泡，在超淨臺內，無菌操作下用剪刀剪開腹部皮膚，暴露腹膜，用注射器腹腔注入RPMI1640基礎培養液5ml，反覆衝洗，回收衝洗液，IOOOrpm,離心5分鐘，留沉澱，用RPMI1640篩選培養液(含HAT的RPMI1640完全培養液中)重懸，調整細胞濃度I X IO5個/ml，加入96孔板，15(^1/孔，在37°〇、5%0)2環境中培養過夜。(2)免疫脾細胞的製備小鼠末次免疫後三天，在無菌條件下取出脾臟，置於平皿中，RPMI1640基礎培養液衝洗一次，放於小燒杯的尼龍網上磨碎過濾，製成細胞懸液。離心，棄上清，RPMI1640基礎培養液重懸，如此重複三次，得到免疫脾細胞，計數。(3)骨髓瘤細胞的製備將小鼠骨髓瘤細胞Sp2/0 (深圳市菲鵬生物股份有限公司保存)經8-氮鳥嘌呤篩選後，培養至對數生長期，取兩大瓶製成細胞懸液，離心，棄上清，用RPMI1640基礎培養液重懸，如些重複三次，得到骨髓瘤細胞，計數。(4)細胞融合及HAT選擇雜交瘤將骨髓瘤細胞與免疫脾細胞按1:10的細胞數量比例混合，在50ml塑膠離心管內用RPMI1640基礎培養液洗I次，在1200rpm下離心8分鐘，棄上清，將細胞混勻，緩慢加入Iml50%的PEG1500融合，融合I分鐘後加入15ml的RPMI1640基礎培養液終止細胞融合。IOOOrpm,離心5分鐘，棄上清，用50ml的RPMI1640篩選培養液輕輕混懸，平分於10塊96孔板，50 μ I/孔，在37°C、5%C02環境中培養。培養至第六天，換HT培養液(含HT的RPMI1640完全培養液)兩次。(5)抗體的檢測用0.06M pH9.6碳酸緩衝溶液稀釋人重組心肌肌鈣蛋白I抗原(深圳市菲鵬生物股份有限公司生產，貨號AG-CTN1-HP0005)，使其終濃度為8 μ g/ml。加入96孔聚苯乙烯板，每孔0.1ml, 370C 2小時或4°C過夜。次日，用含10%小牛血清或1%脫脂奶粉的0.02MpH7.2PBS，0.15ml/孔，37°C封閉2小時，用於檢測。重組融合後第七天，取細胞上清0.1ml於上述96孔檢測板中，37°C 30分鐘，水洗六次後加入2000倍稀釋的辣根過氧化酶標記的羊抗鼠IgG (深圳市菲鵬生物股份有限公司生產，貨號BA-PAB-MU0001)，37°C 30分鐘同上洗後，每孔加入100μ I含0.1% (Μ/V)鄰苯二胺，0.1% (V/V)雙氧水，ρΗ5.0檸檬酸磷酸緩衝液，370C 15分鐘，加入稀硫酸溶液，每孔50 μ 1，測450nm吸收值。RPMI1640完全培養液作為陰性對照，以測定值與對照值得比3 2.0為陽性細胞孔。分泌抗體陽性細胞孔以I個細胞/孔在96孔培養板上用有限稀釋法克隆，篩選陽性孔依上法連續克隆三次，擴大培養後，用含10%DMS0的培養液凍存，細胞密度為IO6個/ml。細胞融合一次共獲得I株能穩定分泌抗體的細胞株，即可分泌抗心肌肌鈣蛋白I單抗的雜交瘤細胞，命名為cTn1-C4雜交瘤細胞，於2013年I月24日保藏在湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學保藏中心(即中國典型培養物保藏中心)，保藏號是CCTCC No:C201317。3.單克隆抗體的製備選6 8周健壯的BALB/c小鼠，每隻小鼠腹腔注射0.5ml的降植烷；10天後腹腔注射I X IO6個雜交瘤細胞。接種細胞7 10天後可產生腹水，密切觀察動物的健康狀況與腹水徵象，待腹水儘可能多，而小鼠頻於死亡之前，處死小鼠，用滴管將腹水吸入試管中，一般一隻小鼠可獲5 IOml腹水。收集腹水，離心取上清，放於_20°C冰箱保存。取腹水上清，用3倍體積的PBS稀釋後濾紙過濾。將所得的濾液在lml/min的流速下加到一個已用PBS平衡的蛋白G親和層析柱(購自Amersham Biosciences公司)。然後用PBS以lml/min的流速洗滌未被蛋白G吸附的物質直至在0D280nm下的吸附值達到基線為止。再用0.1M的甘氨酸洗脫液(pH2.5)洗脫並回收該抗體。所回收的溶液用0.1M TRIS(pH8.8)中和，通過超濾將抗體濃度調節到一個合適的濃度，_20°C分裝凍存。4.效價測定`
以間接ELISA法檢測，上述cTnI_C4雜交瘤細胞培養上清效價2.18X 103，腹水抗體效價1.59X 106。具體實驗步驟如下:(I)包被:將免疫的cTnl抗原稀釋至8ug/ml，IOOul/孔加至酶標板，37度2小時或者4度過夜；(2)用洗板機洗板5次，每次每孔注洗液350ul，停留20秒；最後拍幹；(3)用洗滌液洗去包被液，用封閉液封閉，每孔150ul，37度放置1.5h_2h ；(4)洗板機洗板5次，每次每孔注洗液350ul，停留20秒；最後拍幹；(5)加樣品:分 別將稀釋成不同梯度的細胞培養上清和腹水加入用cTnl包被好的酶標板，IOOul/孔，37度反應I小時(同時做陰性對照孔和陽性對照孔)；(6)洗板機洗板5次，每次每孔注洗液350ul，停留20秒；最後拍幹；(7)加辣根過氧化酶標記的羊抗鼠IgG (用封閉液稀釋2000倍)，IOOul/孔，37度反應I小時；(8)洗板機洗板5次，每次每孔注洗液350ul，停留20秒；最後拍幹；(9)加顯色液TMB:即用即配，IOOul/孔，37度避光反應30分鐘；(10)終止反應:於各反應孔中加入2M的硫酸，50ul/孔；(11)酶標儀讀數:450nm，630nm波長測定，最終測定cTnI_C4雜交瘤細胞培養上清與重組cTnl抗原的反應效價為2.18X IO3,腹水抗體與重組cTnl抗原反應效價為
1.59 X IO605.單克隆抗體鑑定親和力:上述cTnI_C4雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體以ELISA法檢測，其親和力常數(Kaff)為1.16X109。以下為具體測定cTn1-C4雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體親和力的過程:以定量的小鼠IgG作標準品，用純化羊抗鼠IgG抗體分別作包被抗體和酶標抗體，用雙抗體夾心ELISA測定雜交瘤細胞培養上清中的單抗總蛋白濃度。然後將高度純化的cTnl抗原(8ug/ml)以原倍、1:2和1:4三種倍比稀釋度包板於微孔酶標板,加入已知濃度且進行倍比稀釋的單抗上清液，反應後繼續加酶標羊抗鼠IgG抗體。最後以各單抗不同濃度的對數值為橫坐標，以其相應的OD492值為縱坐標，繪製出包不同濃度板抗原的三條反應曲線，取各曲線上部趨於平坦段的OD492值為0D-100，查出其0D-50點的單抗濃度[Ab]t，故可得[Ab] t, [Ab' ]t和[Ab" ]t三個值,按下列Beatty等推導公式計算Kaff值:當包被抗原濃度比為1:2時:Kaff^l/2 (2 [Ab' ]t_[Ab]t)或Kaff2=l/2 (2 [Ab" ] t_[Ab' ] t)1:4 時:Kaff3=3/2 (2 [Ab" ] t_[Ab] t)這樣單抗每次測定可得三個Kaff值，平均值即其親和力常數Kaff。實施例2心肌肌鈣蛋白I膠體金檢測試紙的製備1.硝酸纖維素膜的製備包被緩衝液的配製:含6%甲醇、0.0lM pH7.2PBS緩衝液為包被緩衝液，0.22 μ m膜濾過，置4°C備用，有效期一周。1000ml6%甲醇的0.0lM pH7.2PBS緩衝液配方:NaCL8g、KCL0.2g、Na2HPO4.12H202.9g、KH2PO40.2g、甲醇 60ml，雙蒸去離子水定容至 1000ml。
硝酸纖維素膜的製備:用包被緩衝液將抗心肌肌鈣蛋白I兔多克隆抗體(深圳市菲鵬生物股份有限公司生產，貨號PAB-CTN1-AP0002)稀釋到I 5mg/ml，調整機器，劃線為T線，即為檢測線，T線靠近金標墊端，距金標墊端約5mm ;用包被緩衝液將羊抗鼠IgG抗體(深圳市菲鵬生物股份有限公司生產，貨號BA-PAB-MU0001)稀釋到I 5mg/ml，調整機器，劃線為C線，即為控制線，C線靠近吸收墊，距吸收墊約3mm。兩線距離5 8mm，均勻。37°C烘乾，封裝備用。2.膠體金、金標記單克隆抗體的製備(1)溶液的配製①氯金酸的配製:用雙蒸去離子水溶解氯金酸，配成1%溶液，置4°C備用，有效期四個月。1OOOml 1%氯金酸溶液配方:10g氯金酸:雙蒸去離子水定容至1000ml。②檸檬酸三鈉的配製:用雙蒸去離子水溶解檸檬酸鈉，配成1%溶液，0.22 μ m膜濾過，置4度備用，有效期容至IOOOml。③0.1M碳酸鉀的配製:用雙蒸去離子水配製，0.22μπι膜濾過，置4度備用，有效期四個月。IOOOml0.1M碳酸鉀溶液配方:13.8g碳酸鉀；雙蒸去離子水定容至1000ml。④2%PEG_20000的配製:用雙蒸去離子水配製，0.22 μ m膜濾過，置4°C備用，有效期四個月。1000ml2%PEG-20000溶液配方:20g PEG-20000 ;雙蒸去離子水定容至1000ml。⑤標記洗滌保存液的配製:2%牛血清白蛋白(BSA)，0.05%疊氮鈉(NaN3), 0.0lMpH7.2PBS溶液，0.22 μ膜濾過，置4°C備用，有效期四個月。IOOOml標記洗滌保存液配方:20g BSA, 0.5g NaN3、0.0lM ρΗ7.2PBS 溶液定容至 1000ml。(2)膠體金的製備:用雙蒸去離子水將1%氯金酸稀釋成0.01%，置電爐煮沸，按每IOOml0.01%氯金酸加入2mll%檸檬酸三鈉，繼續煮沸，直到液體呈亮紅色即停止加熱，冷卻至室溫後補足失水。製備好的膠體金外觀應純淨、透亮、無沉澱和漂浮物，有效期一周。(3)膠體金標記單克隆抗體的製備:用0.1M碳酸鉀調膠體金的pH值至8.2,按8 10 μ g抗體/ml膠體金加入實施例1中製備得到的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體，磁力攪拌器混勻30min，攪拌下加入BSA至終濃度為1%靜置I小時。13000rpm、4°C離心30min，棄上清，沉澱用標記洗滌保存液洗滌兩次，用十分之一初始膠體金體積的標記洗滌保存液將沉澱重懸，置4°C備用，有效期一周。3.金標墊的製備(1)封閉液的配製:2%BSA, 0.l%TritonX-100、0.05%NaN3,0.0lM ρΗ7.2PBS 溶液，0.22 μ m 膜濾過，置 4度備用，有效期四個月。IOOOml 封閉液配方:20g BSA,0.5g NaN3、lml TritonX_100、0.0lMpH7.2PBS溶液定容至1000ml。(2)金標墊的製備:將金標墊浸泡於封閉液中30min後，於37°C烘乾。然後將製備好的金標記抗體均勻的鋪在金標墊上，每毫升溶液鋪20平方釐米，冷凍乾燥，封裝，置4°C備用。4.試紙條樣品墊的製備(1)封閉液的配製:2%BSA, 0.l%TrtionX-100、0.05%NaN3,0.0lM ρΗ7.2PBS 溶液，0.22 μ m 膜濾過，置 4度備用，有效期四個月。IOOOml 封閉液配方:20g BSA,0.5g NaN3、lml TrtionX_100、0.0lMpH7.2PBS溶液定容至1000ml。(2)樣品墊的製備:將樣品墊浸泡於封閉液中30min後，於37°C烘乾，封裝，置4°C備用。5.檢測試紙的組裝將吸收墊(購自Millipore公司)、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊設置在不吸水的支撐薄片上，切成3mm寬的小條。每十小條一包，加入乾燥劑，真空封裝，得到所述檢測試紙。實施例3檢測心肌肌鈣蛋白I的試劑盒1.快速檢測心肌肌鈣蛋白I的試劑盒包括:實施例2製作的檢測試紙及樣品稀釋液。其中，樣品稀釋液為8%NaCl溶液。配製方法:80gNaCl，加蒸餾水定容至1000ml。2.膠體金法心肌肌鈣蛋白I的檢測(I)直接吸取120 μ I採集好的人血清或血漿加入到試紙卡加樣孔，等待15min後
即可觀察結果。(2)結果判定:當試紙條出現肉眼可見的紅色質控線，沒有出現肉眼可見的紅色檢測線，結果判為陰性；當試紙條出現肉眼可見的紅色質控線，同時也出現肉眼可見的紅色檢測線，結果判為陽性。檢測線顏色越深說明被檢測樣品的心肌肌鈣蛋白I水平越高。當試紙條沒有出現肉眼可見的紫紅色質控線，不管有沒有出現肉眼可見的紫紅色檢測線，結果都判為檢測試紙條失效，應廢棄。實施例4快速診斷心肌肌鈣蛋白I試劑盒的應用以羅氏心肌肌鈣蛋白I診斷試劑盒(TiOponin I STAT)檢出的陽性樣本和陰性樣本作為本試劑盒的檢測樣本，其中205例心肌肌鈣蛋白I檢測陽性樣本，800例檢出陰性樣本，檢測結果見表I。結果表明，本試劑盒檢出陽性標本201份，相對靈敏度為98.05% ；800份陰性樣本檢出771份，其中29份為假陽，相對特異性為96.38%。該結果與羅氏心肌肌鈣蛋白I檢測試劑盒的結果符合率為96.72%。說明實施例3製作的檢測試劑盒完全可以用於常規的心肌肌鈣蛋白I快速診斷。表I實施例3的心肌肌鈣蛋白I檢測試劑盒的檢測結果
權利要求
1.一種可分泌抗心肌肌鈣蛋白I單抗的雜交瘤細胞，保藏號為CCTCC No:C201317。
2.權利要求1所述的可分泌抗心肌肌鈣蛋白I單抗的雜交瘤細胞在製備心肌肌鈣蛋白I檢測試劑或設備中的應用。
3.一種由權利要求1所述的可分泌抗心肌肌鈣蛋白I單抗的雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體。
4.權利要求3所述的單克隆抗體在製備心肌肌鈣蛋白I檢測試劑或設備中的應用。
5.一種心肌肌鈣蛋白I的檢測試紙，其特徵在於，包括如權利要求3所述的單克隆抗體。
6.如權利要求5所述的心肌肌鈣蛋白I的檢測試紙，其特徵在於，包括支撐薄片、樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜、吸收墊、檢測線及質控線，所述樣品墊、所述金標墊、所述硝酸纖維素膜及所述吸收墊從所述支撐薄片的一端向另一端依次設置在所述支撐薄片上，所述樣品墊與所述金標墊部分重疊，所述金標墊與所述硝酸纖維素膜部分重疊，所述硝酸纖維素膜與所述吸收墊部分重疊，所述檢測線及所述質控線設在所述硝酸纖維素膜上，且所述檢測線設在靠近所述金標墊的一端，所述質控線設在靠近所述吸收墊的一端，所述金標墊上塗覆有所述單克隆單體包附膠體金顆粒形成膠體金標記的單克隆抗體，所述檢測線為親和純化的抗心肌肌鈣蛋白I的兔多抗，所述質控線為羊抗鼠IgG抗體。
7.一種檢測試 劑盒，包括如權利要求5或6所述的心肌肌鈣蛋白I的檢測試紙。
全文摘要
本發明涉及一種可快速簡便的應用於hcTnI檢測的可分泌抗心肌肌鈣蛋白I單抗的雜交瘤細胞、其分泌的單克隆抗體及在檢測心肌肌鈣蛋白I領域的應用。該雜交瘤細胞，保藏在湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學保藏中心(即中國典型培養物保藏中心)，保藏號是CCTCC NoC201317。上述雜交瘤細胞的分泌產量高，其分泌得到的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體具有高親和力、高特異性等優點，可廣泛應用在製備心肌肌鈣蛋白I的檢測領域，如檢測試劑或檢測設備的製備領域等，在特異性、靈敏度和檢測率等方面較之傳統的檢測方法具有顯著的優勢。
文檔編號G01N33/68GK103173420SQ20131011973
公開日2013年6月26日 申請日期2013年4月8日 優先權日2013年4月8日
發明者楊耿周, 朱碧銀, 林育佳, 劉莉莉 申請人:深圳市菲鵬生物股份有限公司