培養微生物的緻密培養基的製備方法
2023-08-09 20:14:01 2
專利名稱：培養微生物的緻密培養基的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種培養微生物的緻密培養基的製備方法，這種培養基以聚丙烯醯胺凝膠為基礎的。
按本發明方法製備的緻密培養基可用於醫學和生物技術。
培養微生物的緻密培養基的已知製備方法是通過重量比為15.0～20.0∶0.019～0.132的丙烯醯胺與N，N′-亞甲基雙丙烯醯胺，在有引發劑存在時，在生理溶液中進行共聚合直到形成凝膠，洗滌，在50～60℃的溫度下，於生理溶液中溶脹16～20小時，然後用營養基質浸潤。
這種緻密的培養基具有近似於瓊脂培養基的緻密性，有彈性並且是透明的。它保證在微生物接種和剝離時細菌環很好地滑動而且不損傷其表面，這種良好的滑動是通過長時間的溶脹步驟(16～20小時)而獲得的，這樣，從整體來說實際上延長了整個工藝過程。
培養微生物的培養基的已知製備方法，包括重量比為0.5～40.0∶2.5～12的丙烯醯胺和N，N′-亞甲基雙丙烯醯胺在有引發劑存在時，在生理溶液中進行共聚合。將所製得的聚丙烯醯胺凝膠進行洗滌並用營養基質浸潤(SU.A.977466)。所說的緻密培養基在浸潤、消毒和在微生物接種時具有高的損傷。用細菌環從這種培養基表面上剝離某些種類微生物是有困難的。
上述方法中共聚合工藝是在沒有空氣進入的專門的成形設備中進行的，以使在形成聚丙烯醯胺凝膠時避免出現不光滑的表面，而有礙於在培養基製備中使用。這樣的工藝難以大量製備培養基，例如，在培養皿或其他實驗室器皿中。
本發明的任務是提供培養微生物的緻密培養基的製備方法，該方法在共聚合時使用結構劑，因而保證了培養基在微生物接種時具有類似於瓊脂培養基的良好的細菌環的滑動效應特性。
任務是這樣解決的，本發明推薦的培養微生物的緻密培養基的製備方法包括丙烯醯胺和N，N′-亞甲基雙丙烯醯胺在生理溶液中，在有引發劑存在時進行共聚合，直到形成凝膠，洗滌，並用營養基質浸潤凝膠，按照本發明，其中丙烯醯胺和N，N′-亞甲基雙丙烯醯胺的共聚合是在平均分子量為7.2×104的支化聚丙烯醯胺存在時進行的，他們之間的相應重量比為7.0～15.0∶0.11～0.21∶0.028～0.11。
本發明的方法在簡化工藝時保證培養基有良好的性質。由於有結構劑，共聚合易於在空氣中進行而不需用特殊裝置。
為了加速共聚反應要求使用所說的支化聚丙烯醯胺的水溶液。在浸潤聚丙烯醯胺凝膠時適於使用含有0.02～0.2克/升的聚氧化乙烯的營養基質。在培養基上它促進形成表面單層，這保證了在微生物接種時細菌環的滑動有很明顯的效果。
根據本發明的方法，培養微生物的緻密培養基按以下方法製備。
準備反應混合物，該混合物含有原料單體溶液，分子量為7.2×104的支化聚丙烯醯胺和在生理溶液中的引發劑溶液。可以使用所說的支化聚丙烯醯胺的水溶液。在反應混合物中丙烯醯胺和支化聚丙烯醯胺的比例為7.0～15.0∶0.028～0.11。
作為生理溶液可使用0.5%或0.9%的氯化鈉水溶液，5%葡萄糖水溶液，林格-羅加溶液，漢薩溶液，愛拉溶液(PacTBOPPuHZeP-Лока，ХЗНкСа，ЗРла)和其他。共聚作用在空氣中於培養皿或由不同材料製成的其他容器內進行。
在上述比例的支化聚丙烯醯胺存在時進行共聚合促使製得的聚丙烯醯胺凝膠具有接近瓊脂培養基的緻密度。此外，使用支化聚丙烯醯胺導致聚丙烯醯胺凝膠的補充結構，這就可能在培養皿中於空氣中聚合時得到具有平滑表面的凝膠。以前要達到這種效能只能在使用惰性氣體的專門設備中於無空氣進入情況下進行聚合。按本申請的方法在製備培養基的過程中去掉了溶脹凝膠16～20小時的步驟。
全部上述的優點大大簡化了製備培養基的工藝。
聚丙烯醯胺凝膠經洗滌後，用加熱、輻照或化學方法進行消毒。所說凝膠用培養微生物的基質浸潤，這可以在消毒之前或之後進行。推薦使用含有0.02～0.2的分子量在500000以上的聚氧化乙烯營養基質。
基質成分取決於微生物和細胞的具體的組或種的需要。
用一般的研究方法測定培養基的性質及研究微生物的生物性質。
以下列出實施本發明方法的具體實施例。
例1.
為製備凝膠按以下方法準備5種溶液A、B、C、D、E(所指的組成量是以100毫升溶液計算的)。
1.製備溶液A0.5毫升N，N，N′，N′-四甲基乙二胺(TEMEд)溶解在99.5毫升生理溶液中。
2.製備溶液B0.735克N，N′-亞甲基雙丙烯醯胺(MБA)溶解在50毫升生理溶液中，加熱到60℃，加入24.5克丙烯醯胺(AA)，攪拌直到完全溶解，將所得溶液過濾並用生理溶液加到100毫升。
3.製備溶液C0.2克過硫酸銨(ПA)溶解在50毫升生理溶液中，並加到100毫升體積。
4.製備溶液D將10.0克分子量為7.2×104的支化聚丙烯醯胺(PПA)在50～60℃溫度下溶解在50毫升生理溶液中。將溶液體積加到100毫升。
5.製備溶液E將0.5毫升溶液D與99.5毫升溶液C混合，並仔細攪拌。
由比例A∶B∶E＝1∶2∶4的三種溶液製備反應混合物，該比例相當於丙烯醯胺，N，N′-亞甲基丙烯醯胺和支化聚丙烯醯胺重量比為7.0∶0.21∶0.028。混合物倒入培養皿中，並置於空氣中。進行共聚合10～15分鐘直到形成凝膠，然後用生理溶液洗滌凝膠1小時。
緻密的培養基是通過使用XOTTuHгeH胰蛋白重煮浸潤所製得的凝膠而製備的。
用金黃色葡萄球菌接種培養基，並在37℃溫度下培養24小時。緻密培養基具有好的粘附性質，緻密性和透明性，彈性，具有平滑的表面，它保證在接種微生物時細菌環有效滑動而不損傷表面。生長的微生物呈現出它們特有的培養的及形態學上的特徵。
例2.
為製備聚丙烯醯胺凝膠使用與例1相同的A、B、C、D溶液。
製備溶液E
將1.0毫升溶液D加到99.0毫升溶液C中，並仔細攪拌。
反應混合物是由按比例A∶B∶E＝1∶2∶4的溶液配製，該比例相當於丙烯醯胺、N，N′-亞甲基丙烯醯胺和支化聚丙烯醯胺的重量比為7.0∶0.21∶0.057。將混合物倒入培養皿中，並放置在空氣中聚合。共聚合進行5～10分鐘直到形成凝膠，然後將凝膠用生理溶液洗滌1小時。
所得凝膠用肉-腖湯在56℃溫度下浸潤3小時，然後消毒30分鐘。
用大腸桿菌接種培養基在37℃下培養24小時，生長的微生物呈現出它們特有的培養和形態學上的特徵。緻密的培養基具有良好的粘附性、緻密性、透明性、彈性、具有平滑的表面，保證在微生物接種時細菌環的滑動效應而不損傷表面。
例3.
為了製備聚丙烯醯胺凝膠按下面的方法準備A、B、C三種溶液。
1.製備溶液A將0.23毫升N，N，N′，N′-四甲基乙二胺溶解在50毫升生理溶液中並加到100毫升。
2.製備溶液B將0.4克N，N′-亞甲基雙丙烯醯胺溶解在50毫升生理溶液中，加熱到60℃，加入53克丙烯醯胺，攪拌直到完全溶解。將所得溶液過濾並加到100毫升。
3.溶液C和D的製備同例1。
4.製備溶液E將2毫升溶液D倒入98毫升溶液C中，仔細攪拌。
由製備好的溶液準備反應混合物，為此將溶液按A∶B∶E＝1∶2∶4的比例混合，這相當於丙烯醯胺，N，N′-亞甲基丙烯醯胺和支化聚丙烯醯胺的重量比為15.0∶0.11∶0.11，倒入培養皿。在空氣中進行共聚合10～15分鐘直到形成凝膠。所得凝膠用生理溶液洗滌1小時。用肉-腖湯在50～60℃溫度下將凝膠浸潤3小時，消毒後接種孢子培養物。
製得的培養基是緻密的，具有良好的粘附性、彈性、緻密性、透明性、平滑表面，用細菌環接種微生物時具有明顯的良好滑動效應。培養物生長是標準的。
例4.
聚丙烯醯胺凝膠的製備與例1相同，而浸潤是在含有0.2克/升聚氧化乙烯的XuTTuHгeP胰蛋白重煮中於56℃下進行3小時。浸潤過的凝膠消毒30分鐘並接種金黃色葡萄球菌。
所得的緻密培養基具有良好的粘附性，彈性、緻密性、透明性，用細菌環接種微生物時有明顯的滑動效應而不損傷表面。培養物生長是標準的。
例5.
聚丙烯醯胺凝膠如例3製備，而浸潤是用肉-腖湯(該肉腖湯含有0.02克/升的聚氧化乙烯)在56℃下進行3小時，然後消毒30分鐘。
製得的緻密培養基具有良好的粘附性，彈性、緻密性、透明性，用細菌環接種微生物時有明顯的滑動效應而不損傷培養基表面。
用大腸桿菌作為試驗微生物。
培養物是以標準菌落型生長。
權利要求
1.培養微生物的緻密培養基的製備方法，包括丙烯醯胺和N，N′-亞甲基雙丙烯醯胺在生理溶液中有引發劑存在時進行共聚合直到形成凝膠，洗滌並用營養基質浸潤，其特徵在於，丙烯醯胺和N，N′-亞甲基雙丙烯醯胺的共聚合是在有平均分子量為7.2×104的支化聚丙烯醯胺存在時進行的，它們相應的重量比為7.0～15.0∶0.11～0.21∶0.028～0.11。
2.按照權利要求1的方法，其特徵在於，使用所說聚丙烯醯胺的水溶液。
3.按照權利要求1-2的方法，其特徵在於，浸潤所說的凝膠是用含有0.02～0.2克/升的聚氧化乙烯的營養基質進行的。
全文摘要
培養微生物的培養基的製備方法，包括丙烯醯胺，N，N′-亞甲基雙丙烯醯胺在有平均分子量為7.2×10
文檔編號C08F220/56GK1030428SQ88106010
公開日1989年1月18日 申請日期1988年6月23日 優先權日1987年6月25日
發明者弗拉基米爾·弗拉迪斯拉弗維奇·蓋新斯基, 弗拉基米爾·佩夫洛維奇·新諾包可夫, 尼古拉·尼古拉伊維奇·馬琴科, 萬萊利·格裡高利伊維奇·弗伊技柴可夫斯基, 泰地安娜·伊萬諾夫娜·可萊茵尤可娃, 弗拉基米爾·維克多羅維奇·奧尼斯琴科 申請人:包格奠爾茲院士基輔醫學院