一種製備茶皂苷元的方法
2023-08-09 19:32:16
專利名稱：一種製備茶皂苷元的方法
技術領域：
本發明涉及食品和醫藥領域，具體涉及一種製備茶皂苷元的方法。
技術背景
茶皂苷是茶籽或油茶籽中一種主要的五環三萜化合物。日本人青山新次郎於1931 年首次從茶籽中分離獲得茶皂苷化合物結構，它由皂苷元、糖體和有機酸三部分組成的。茶 皂苷具有抗菌、抗炎、抗氧化等多種生物活性。我國是油茶高產的國家，油茶籽中皂素的含 量佔12%，具有較大的開發價值。
國內生產的油茶皂苷多以油茶籽為原料，將油茶籽脫脂後經甲醇水或乙醇水提 取、乾燥所得，其茶皂苷的含量只有50 70%。經過技術改進，茶皂苷可直接從茶籽餅 浸提液中用苯乙烯型共聚樹脂或大孔樹脂吸附分離(中國專利CN1148598、中國專利申請 200810011095. 1、中國專利申請200810220573. X)，或用大孔樹脂與茶皂苷的低濃度有機溶 劑提取液共回流提取(中國專利申請200710168737. 4)，或採用超聲波法提取茶皂苷(中國 專利CN170686;3)、或採用超濾膜法提取茶皂苷(中國專利申請2009100^997. 9)。但以上 方法所獲得的均為茶皂苷產品，還沒有對茶皂苷元進行分離和製備的報導。發明內容
本發明的目的在於克服現有技術中存在的缺點，提供一種可有效地分離純化茶皂 苷元，又便於工業化生產的製備茶皂苷元的方法。
本發明的目的通過下述技術方案實現
一種製備茶皂苷元的方法，包括下述步驟
(1)將茶皂苷水溶液過大孔樹脂，用溶劑洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中添加有機溶劑，使茶皂苷沉澱析出，收集沉澱物；
(3)向沉澱物中加入醇鹼液或醇酸液，回流提取；
(4)將提取液的PH值調節至酸性，靜置，收集沉澱；
(5)用有機溶劑溶解沉澱，並結晶和重結晶；
(6)將結晶物乾燥，得到茶皂苷元。
步驟(1)中，所述茶皂苷是自茶葉、茶籽或油茶籽中提取的或自脫脂茶籽中提取 的茶皂苷水劑或固體乾燥物。
步驟⑴中，所述大孔樹脂為弱極性或非極性大孔樹脂。
步驟(1)中，所述洗脫溶劑是體積分數為50 70%的甲醇水溶液、乙醇水溶液或 丙酮水溶液。
步驟O)中，所述有機溶劑為甲醇、乙醇或丙酮。
步驟(3)中，所述醇液是體積分數為50 80%乙醇水溶液或甲醇水溶液，醇液加 入量為沉澱物的5 10倍質量，提取溫度70 80°C，提取時間2 8小時。
步驟(3)中，所述醇鹼液中含有佔醇鹼液質量2 5%的氫氧化鈉或氫氧化鉀。
步驟(3)中，所述醇酸液中含有佔醇酸液體積2 5%的鹽酸。
步驟中，所述提取液的pH值調節為2 5，採用鹽酸進行調節。
步驟(5)中，所述有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮或乙醚。
採用上述方法製備得到的茶皂苷元，其純度可達90 98%。
上述方法製備得到的茶皂苷元可用於製備抗氧化、抗炎鎮痛的藥物製劑。
上述方法製備得到的茶皂苷元可與藥用輔料或藥學上可配伍的藥物製成抗氧化、 抗炎鎮痛的藥物製劑。
所述藥物製劑為外用、口服或注射用藥劑型的任何一種。
所述藥物製劑為含有茶皂苷元的單方或複方製劑。
茶皂苷元是茶皂苷分子結構中基本結構單元，是茶皂苷經水解、分離製備後形成 的產品。茶皂苷元與原茶皂苷在活性上有較大的不同。茶皂苷元較茶皂苷性質穩定、脂溶 性增強。茶皂苷元的製備，有利於其衍生為新化合物。
本發明相對於現有技術具有如下的優點及效果
(1)本發明以茶皂苷為原料，經過大孔樹脂處理後，再進行酸解或鹼解處理，避免 了膠質、蛋白等成分的幹擾，得到的茶皂苷元純度高。
(2)本發明採用醇酸或醇鹼處理，可避免直接酸鹼處理導致的茶皂苷元結構的破 壞，維持了其結構完整性。
(3)本發明製備工藝簡單，反應條件溫和，便於工業化生產。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限於此。
實施例1
(1) IKg的茶皂苷固體，加入50L的水，輕攪拌使之溶解。將該溶液過大孔樹脂 D101，然後用體積分數50%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中加入乙醇，使沉澱析出，離心收集沉澱；
(3)加入沉澱物5倍質量的體積分數50 %乙醇水溶液，該乙醇水溶液含有2 %質量 的氫氧化鈉，80°C回流提取3小時；
(4)向提取液中加入鹽酸調節pH至5，靜置沉澱，離心收集沉澱；
(5)將沉澱用甲醇溶解，加入丙酮後結晶和重結晶；
(6)將結晶物真空乾燥，製得153g的茶皂苷元。
產品經HPLC法測定，測定條件色譜柱0DS 250mmX4. 6mm,柱溫25°C，流動相 水乙腈=3 7。流速:lmL/min，進樣體積10 μ L，檢測波長209nm，運行時間25min。以 相對峰面積百分率計算得茶皂苷元的純度為93%。
實施例2
(1) IKg的茶皂苷固體，加入50L的水，輕攪拌使之溶解。將該溶液過大孔樹脂 AB-8，然後用體積分數70%甲醇水溶液洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中加入甲醇，使沉澱析出，離心收集沉澱；
(3)加入沉澱物8倍質量的體積分數80 %甲醇水溶液，該甲醇水溶液含有5 %質量 的氫氧化鈉，70°C回流提取5小時；
(4)向提取液中加入鹽酸調節pH至2，靜置沉澱，離心收集沉澱；
(5)將沉澱用甲醇溶解，加入乙醚後結晶和重結晶；
(6)將結晶物真空乾燥，製得162g的茶皂苷元。
茶皂苷元的純度為96% (純度測定方法同實施例1)。
實施例3
(1) IKg的茶皂苷固體，加入50L的水，輕攪拌使之溶解。將該溶液過大孔樹脂X-5， 然後用體積分數60%丙酮水溶液洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中加入丙酮，使沉澱析出，離心收集沉澱；
(3)加入沉澱物10倍質量的體積分數70%乙醇水溶液，該乙醇水溶液含有3%質 量的氫氧化鉀，80°C回流提取8小時；
(4)向提取液中加入鹽酸調節pH至3，靜置沉澱，離心收集沉澱；
(5)將沉澱用乙醇溶解，加入乙醚後結晶和重結晶；
(6)將結晶物真空乾燥，製得147g的茶皂苷元。
茶皂苷元的純度為98% (純度測定方法同實施例1)。
實施例4
(1) IKg的茶皂苷固體，加入30L的水，輕攪拌使之溶解。將該溶液過大孔樹脂 D101，然後用體積分數60%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中加入乙醇，使沉澱析出，離心收集沉澱；
(3)加入沉澱物5倍質量的體積分數50 %甲醇水溶液，該甲醇水溶液含有2 %體積 的鹽酸，80°C回流提取2小時；
(4)靜置沉澱，離心收集沉澱；
(5)將沉澱用甲醇溶解，加入丙酮後結晶和重結晶；
(6)將結晶物真空乾燥，製得178g的茶皂苷元。
茶皂苷元的純度為90% (純度測定方法同實施例1)。
實施例5
(1) IKg的茶皂苷固體，加入30L的水，輕攪拌使之溶解。將該溶液過大孔樹脂 AB-8，然後用體積分數80%甲醇水溶液洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中加入甲醇，使沉澱析出，離心收集沉澱；
(3)加入沉澱物8倍質量的體積分數60 %甲醇水溶液，該甲醇水溶液含有5 %體積 的鹽酸，80°C回流提取3小時；
(4)靜置沉澱，離心收集沉澱；
(5)將沉澱用乙醇溶解，加入丙酮後結晶和重結晶；
(6)將結晶物真空乾燥，製得165g的茶皂苷元。
茶皂苷元的純度為92% (純度測定方法同實施例1)。
實施例6
(1) IKg的茶皂苷固體，加入30L的水，輕攪拌使之溶解。將該溶液過大孔樹脂X_5， 然後用體積分數50%丙酮水溶液洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中加入丙酮，使沉澱析出，離心收集沉澱；
(3)加入沉澱物10倍質量的體積分數80%甲醇水溶液，該甲醇水溶液含有4%體積的鹽酸，70°C回流提取4小時；
(4)靜置沉澱，離心收集沉澱；
(5)將沉澱用甲醇溶解，加入乙醚後結晶和重結晶；
(6)將結晶物真空乾燥，製得149g的茶皂苷元。
茶皂苷元的純度為97% (純度測定方法同實施例1)。
實施例7
稱取實施例1製得的茶皂苷元100g，加入藥用澱粉、糖粉和糊精按質量比 7:2: 1組成的混合物300g，混合均勻，溼法制粒，用水調節，製得顆粒鬆散，便於壓片狀 態，過20目篩，晾乾。加20g硬脂酸鎂，壓片，即得茶皂苷元的片劑。
實施例8
稱取實施例2製得的茶皂苷元100g，加入藥用微晶纖維素200g，混合均勻，溼法制 粒，用水調節，製得顆粒鬆散過20目篩，晾乾。乾燥後填充膠囊。即得茶皂苷元的膠囊劑。
實施例9
稱取實施例3製得的茶皂苷元100g，加入600g PEG6000，加熱至60°C熔化後混合 均勻，置於滴丸機內，用液體石蠟致冷，滴丸。冷卻即得茶皂苷元的滴丸劑。
實施例10
稱取實施例5製得的茶皂苷元100g，加入200g甘露醇，用滅菌水溶解後，過 0. 3 μ m微孔濾膜，罐裝入安培瓶中，-50°C冷凍乾燥M小時，即得茶皂苷元的凍乾粉針注射 劑。
實施例11
茶皂苷元的抗氧化實驗
方法稱取本發明方法製備的茶皂苷元10mg，用乙醇5mL溶解，加入50g食用 植物油，振蕩混合後，置於60士2°C恆溫水浴鍋內，每隔一定時間取樣3g，用碘量法(GB/T 5538-1995《油脂過氧化值測定法》)測定其過氧化值POV (meq/kg)，並計算抑制率IE。以 茶皂苷為陽性對照組，以不加樣的油脂為空白對照組。
結果24h後，空白對照組的POV為13. 65meq/kg,陽性對照組為6. 13meq/kg,茶皂 苷元為4. 20meq/kg。陽性對照組和茶皂苷元的抑制率分別為55. 09%和69. 23%。茶皂苷 元對油脂的抗氧化性優於茶皂苷。
實施例12
茶皂苷元的抗炎性實驗
方法取雄性小鼠(昆明種，購自廣州中醫藥大學動物中心)50隻，隨機分為5組， 每組10隻。第1組給生理鹽水，灌胃，為陰性對照組；第2組給阿司匹林200mg/kg，灌胃， 為陽性對照組；第3 5組分別實施例1 3製備的茶皂苷元200mg/kg，灌胃。每天1次， 3天後，於末次給藥Ih後，在每隻動物右耳前後兩面塗二甲苯0. 02ml致炎。各組致炎Ih 後，將動物頸椎脫白致死，沿耳廓基線剪下兩耳，用7mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓 耳片，稱重。腫脹抑制率(％)經方差分析作q檢驗，比較給藥組和對照組的差異情況。計 算公式
腫脹度=右耳片重量-左耳片的重量
權利要求
1.一種製備茶皂苷元的方法，其特徵在於包括下述步驟(1)將茶皂苷水溶液過大孔樹脂，用溶劑洗脫，收集洗脫液；(2)向洗脫液中添加有機溶劑，使茶皂苷沉澱析出，收集沉澱物；(3)向沉澱物中加入醇鹼液或醇酸液，回流提取；(4)將提取液的PH值調節至酸性，靜置，收集沉澱；(5)用有機溶劑溶解沉澱，並結晶和重結晶；(6)將結晶物乾燥，得到茶皂苷元。
2.根據權利要求1所述一種製備茶皂苷元的方法，其特徵在於所述茶皂苷是自茶葉、茶籽或油茶籽中提取的或自脫脂茶籽中提取的茶皂苷水劑或固 體乾燥物；所述大孔樹脂為弱極性或非極性大孔樹脂；所述洗脫溶劑是體積分數為50 70%的甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液。
3.根據權利要求1所述一種製備茶皂苷元的方法，其特徵在於步驟( 中，所述有機 溶劑為甲醇、乙醇或丙酮。
4.根據權利要求1所述一種製備茶皂苷元的方法，其特徵在於所述醇液是體積分數為50 80%乙醇水溶液或甲醇水溶液，醇液加入量為沉澱物的 5 10倍質量，提取溫度70 80°C，提取時間2 8小時；所述醇鹼液中含有佔醇鹼液質量2 5%的氫氧化鈉或氫氧化鉀；所述醇酸液中含有佔醇酸液體積2 5%的鹽酸。
5.根據權利要求1所述一種製備茶皂苷元的方法，其特徵在於步驟(4)中，所述提取 液的PH值調節為2 5，採用鹽酸進行調節。
6.根據權利要求1所述一種製備茶皂苷元的方法，其特徵在於步驟( 中，所述有機 溶劑為甲醇、乙醇、丙酮或乙醚。
7.權利要求1 6任一項所述製備方法製得的茶皂苷元。
8.權利要求7所述茶皂苷元的應用，其特徵在於所述茶皂苷元用於製備抗氧化、抗炎 鎮痛的藥物製劑。
9.權利要求7所述茶皂苷元的應用，其特徵在於所述茶皂苷元與藥用輔料或藥學上 可配伍的藥物製成抗氧化、抗炎鎮痛的藥物製劑。
10.根據權利要求8或9所述茶皂苷元的應用，其特徵在於所述藥物製劑為外用、口 服或注射用藥劑型的任何一種。
全文摘要
本發明公開了一種製備茶皂苷元的方法。一種製備茶皂苷元的方法，包括下述步驟(1)將茶皂苷水溶液過大孔樹脂，用溶劑洗脫，收集洗脫液；(2)向洗脫液中添加有機溶劑，使茶皂苷沉澱析出，收集沉澱物；(3)向沉澱物中加入醇鹼液或醇酸液，回流提取；(4)將提取液的pH值調節至酸性，靜置，收集沉澱；(5)用有機溶劑溶解沉澱，並結晶和重結晶；(6)將結晶物乾燥，得到茶皂苷元。本發明以茶皂苷為原料，經過大孔樹脂處理後，再進行酸解或鹼解處理，避免了膠質、蛋白等成分的幹擾，得到的茶皂苷元純度高；另外，採用醇酸或醇鹼處理，可避免直接酸鹼處理導致的茶皂苷元結構的破壞，維持了其結構完整性。
文檔編號A61P29/00GK102030804SQ20101051588
公開日2011年4月27日 申請日期2010年10月21日 優先權日2010年10月21日
發明者葉勇, 王延芳 申請人:華南理工大學