一種高活性雙歧桿菌乾粉製劑的複合保護劑的製作方法

2023-07-12 10:01:56 3

專利名稱：一種高活性雙歧桿菌乾粉製劑的複合保護劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種高活性雙歧桿菌乾粉製劑的複合保護劑，屬於雙歧桿菌製品製備技術領域。
背景技術：
雙歧桿菌(Bifidobacteria)是人體腸道中典型的有益菌，人體腸道中雙歧桿菌的數量作為衡量機體健康的重要指標已日益受到人們的重視。但由於機體衰老、環境汙染、飲食改變、濫用抗生素、放化療等原因，往往使人體腸道的雙歧桿菌數量下降，導致腸道微生態失調，引起菌群易位，誘發內源感染，造成機體病變。因此，研製開發雙歧桿菌製品，通過外源方式補充雙歧桿菌在人體腸道定植的數量，對於調整人體腸道微生態平衡，提高免疫力，促進健康，具有重要意義。近年來，國內外雙歧桿菌製品行業發展迅猛，成為全球發展最快的行業之一，在食品和醫藥工業中佔有越來越重要的地位，產品已達70多種。然而，由於雙歧桿菌具有對營養要求苛刻、專性厭氧、對低pH環境敏感等特殊的生物學性狀，目前上市的許多雙歧桿菌製品普遍存在活菌含量低、活菌保藏期短等質量問題。尤其是液態製品，在冷藏條件下，活菌保藏期(活菌含量≥1×106cfu/mL)一般只有5～7d。因此，提高雙歧桿菌製品的活菌含量、延長活菌保藏期是目前雙歧桿菌活菌製品研發過程中亟待解決的技術關鍵問題。為了提高雙歧桿菌液態製品的活菌含量並延長活菌保藏期，國內外研究者曾先後採用提高基質pH值、獲得人工馴化的耐氧菌株和耐酸菌株的技術並配合冷藏和冷凍保藏的方法。在冷藏的條件下，採用提高基質pH值、獲得人工馴化的耐氧菌株和耐酸菌株的技術，其液態活菌保藏期(活菌含量≥1×106cfu/mL)最多可延至15d～21d；而採用冷凍保藏的方法，雖然可以顯著延長液態活菌保藏期，但維持冷凍費用較高，運輸不方便，對冷凍保藏中心的依賴性過強。雙歧桿菌乾粉製品系採用雙歧桿菌優良菌種經液體深層高密度培養，濃縮分離，與保護劑介質混溶，再經乾燥過程，無菌包裝而製成。乾燥工藝有真空低溫乾燥法、噴霧乾燥法和真空冷凍乾燥法(簡稱凍幹法)。真空低溫乾燥法和噴霧乾燥法製備的雙歧桿菌乾粉製品，一般活菌含量相對偏低；而利用凍幹技術製備的雙歧桿菌乾粉製品，不僅活菌含量高、保藏期長，而且保藏和運輸方便，機械化程度高，便於工業化批量生產；它既可直接口服，又可作為添加劑、發酵劑用於研製開發其它雙歧桿菌功能性食品和醫藥製劑，具有極其廣闊的推廣前景。影響雙歧桿菌凍幹製品活菌含量(細胞凍幹存活率)和活菌保藏期(細胞貯藏穩定性)的主要因素有菌株特性、培養基、培養條件、收穫期、起始細胞濃度、凍幹保護劑及其pH值、冷凍速度、乾燥過程、殘留水分、包裝形式、保藏溫度等。其中，凍幹保護劑是最為複雜、最難選擇的關鍵因素，它不僅影響雙歧桿菌在凍幹過程中的細胞存活率，也影響保藏期間的細胞穩定性。所以，凍幹保護劑的配方及其製備方法屬於商業機密。

發明內容
本發明的目的在於提供一種高活性雙歧桿菌乾粉製劑的複合保護劑，解決了雙歧桿菌乾粉製品及其功能性食品、醫藥製劑生產過程中存在的活菌含量低、保藏期短問題。
本發明的構思是這樣的。發明者以自行分離選育的活力高、耐氧性和抗逆性強的雙歧桿菌(兩歧雙歧桿菌Bbm和長雙歧桿菌Blm)為試驗菌株，研究了十九種食品級單一保護劑對雙歧桿菌細胞凍幹存活率的影響，初步篩選出抗冷凍或抗乾燥的單一保護劑。在此基礎上，研究了不同的複合保護劑對雙歧桿菌細胞凍幹存活率的影響，篩選優化出五種優良的抗冷凍乾燥的複合保護劑。對五種複合保護劑製成的雙歧桿菌凍乾粉劑進行細胞加速試驗，進一步篩選出一種既抗冷凍乾燥又耐貯藏的優良複合保護劑。具體地，本發明所說的高活性雙歧桿菌乾粉製劑的複合保護劑配方組成為β-環狀糊精10g、乳糖2-5g、海藻糖0.5-2g、酵母膏0.5-2g、維生素E 0.05-0.1g、蒸餾水100mL。
本發明的複合保護劑製備工藝為
①按量稱取β-環狀糊精，105℃乾熱滅菌60min，冷卻；②按量稱取維生素E，過濾除菌；③預先用鹼液調節配製複合保護劑所用蒸餾水的pH值至7.0左右；④在預先調節pH值的蒸餾水中按量添加乳糖、海藻糖和酵母膏，加熱溶解混均；⑤115℃滅菌10min，冷卻至室溫；⑥添加β-環狀糊精和維生素E，混均即可。
利用本發明的複合保護劑製成的雙歧桿菌凍乾粉劑，以不同封存方式(常壓封存、真空封存)進行包裝，在不同溫度(-18℃、4℃)下貯藏，定期檢測凍乾粉劑的活菌數，確定了採用該複合保護劑製成的雙歧桿菌凍乾粉劑的保藏條件和保藏期，從而直接考察了採用該複合保護劑的實際應用效果。研究結果表明採用此複合保護劑製成的兩歧雙歧桿菌Bbm或長雙歧桿菌Blm單一菌株凍乾粉劑，其活菌含量均達1.0×1011cfu/g以上；採用該複合保護劑配方製成的長雙歧桿菌Blm和兩歧雙歧桿菌Bbm的單一菌株凍乾粉劑，在同一封存方式不同保藏溫度下或同一保藏溫度不同封存方式下，保藏1年，活菌含量下降不足1個log數量級，均在1010cfu/g以上。
本發明取得的技術效果是(1)本發明提供的用於製備長雙歧桿菌和兩歧雙歧桿菌的單一菌株凍乾粉劑的高效複合保護劑原料易得、成本低廉；(2)本發明的複合保護劑工藝簡單、製作方便；(3)採用本發明的高效複合保護劑製成的雙歧桿菌凍乾粉劑，解決了在研製開發高活力雙歧桿菌乾粉製劑過程中的技術關鍵問題。
(4)採用本發明的高效複合保護劑製成的兩歧雙歧桿菌或長雙歧桿菌凍乾粉劑，不僅活菌含量高、保藏期長、保藏和運輸方便、便於工業化批量生產，而且可以根據需要，製成膠囊、片劑、粉劑等不同產品形式，既可直接口服，又可作為添加劑、發酵劑用於研製開發其它雙歧桿菌功能性食品和醫藥製劑。
具體實施例方式
以下實施例用於說明本發明。
實施例1一、本發明的複合保護劑配方β環狀糊精10g、乳糖5g，海藻糖1g、酵母膏1g、維生素E0.1g、水100mL(預先用鹼液調節蒸餾水的pH值至7.0左右)。
二、製備將組成該複合保護劑的各組分(β-環狀糊精、維生素E除外)準確稱量，混合；加熱溶解，冷卻至室溫；115℃滅菌10min，冷卻至室溫；採用無菌操作添加過濾除菌的維生素E和105℃乾熱滅菌60min的β-環狀糊精，混勻即得成品。雙歧桿菌Bbm的凍幹菌粉活菌數達1.28×1011cfu/g。
實施例2一、本發明的複合保護劑配方β環狀糊精10g、乳糖3g，海藻糖2g、酵母膏1g、維生素E0.06g、水100mL(預先用鹼液調節蒸餾水的pH值至7.0左右)。
二、製備將組成該複合保護劑的各組分(β-環狀糊精、維生素E除外)準確稱量，混合；加熱溶解，冷卻至室溫；115℃滅菌10min，冷卻至室溫；採用無菌操作添加過濾除菌的維生素E和105℃乾熱滅菌60min的β-環狀糊精，混勻即得成品。雙歧桿菌Blm的凍幹菌粉活菌數達1.14×1011cfu/g。
實施例3一、本發明的複合保護劑配方β環狀糊精10g、乳糖4g，海藻糖0.8g、酵母膏2g、維生素E0.1g、水100mL(預先用鹼液調節蒸餾水的pH值至7.0左右)。
二、製備將組成該複合保護劑的各組分(β-環狀糊精、維生素E除外)準確稱量，混合；加熱溶解，冷卻至室溫；115℃滅菌10min，冷卻至室溫；採用無菌操作添加過濾除菌的維生素E和105℃乾熱滅菌60min的β-環狀糊精，混勻即得成品。雙歧桿菌Bbm的凍幹菌粉活菌數達1.20×1011cfu/g。
實施例4
一、複合保護劑配方β環狀糊精10g、乳糖2g，海藻糖3g、酵母膏2g、維生素E 0.1g、水100mL(預先用鹼液調節蒸餾水的pH值至7.0左右)。
二、製備將組成該複合保護劑的各組分(β-環狀糊精、維生素E除外)準確稱量，混合；加熱溶解，冷卻至室溫；115℃滅菌10min，冷卻至室溫；採用無菌操作添加過濾除菌的維生素E和105℃乾熱滅菌60min的β-環狀糊精，混勻即得成品。雙歧桿菌Blm的凍幹菌粉活菌數達1.08×1011cfu/g。
實施例5一、本發明的複合保護劑配方β環狀糊精10g、乳糖5g，海藻糖2g、酵母膏0.5g、維生素E0.1g、水100mL(預先用鹼液調節蒸餾水的pH值至7.0左右)。
二、製備將組成該複合保護劑的各組分(β-環狀糊精、維生素E除外)準確稱量，混合即得成品；加熱溶解，冷卻至室溫；115℃滅菌10min，冷卻至室溫；採用無菌操作添加過濾除菌的維生素E和105℃乾熱滅菌60min的β-環狀糊精，混勻即得成品。雙歧桿菌Bbm的凍幹菌粉活菌數達1.11×1011cfu/g。
權利要求
1.一種高活性雙歧桿菌乾粉製劑的複合保護劑，其特徵在於其配方組成為β-環狀糊精10g、乳糖2-5g、海藻糖0.5-2g、酵母膏0.5-2g、維生素E 0.05-0.1g、蒸餾水100mL。
2.按權利要求1所述的複合保護劑，其特徵在於其配方組成為β-環狀糊精10g、乳糖5g、海藻糖1g、酵母膏1g、維生素E 0.1g、蒸餾水100mL。
3.按權利要求1所述的複合保護劑，其特徵在於其配方組成為β-環狀糊精10g、乳糖3g、海藻糖2g、酵母膏1g、維生素E 0.06g、蒸餾水100mL。
4.按權利要求1所述的複合保護劑，其特徵在於其配方組成為β-環狀糊精10g、乳糖4g、海藻糖0.8g、酵母膏2g、維生素E 0.1g、蒸餾水100mL。
5.按權利要求1所述的複合保護劑，其特徵在於其配方組成為β-環狀糊精10g、乳糖2g、海藻糖3g、酵母膏2g、維生素E 0.1g、蒸餾水100mL。
6.按權利要求1所述的複合保護劑，其特徵在於其配方組成為β-環狀糊精10g、乳糖5g、海藻糖2g、酵母膏0.5g、維生素E 0.1g、蒸餾水100mL。
全文摘要
本發明公開了一種高活性雙歧桿菌乾粉製劑的複合保護劑，其配方組成為β－環狀糊精10g、乳糖2－5g、海藻糖0.5－2g、酵母膏0.5－2g、維生素E0.05－0.1g、蒸餾水100mL。用其製成的雙歧桿菌凍乾粉劑，活菌含量均達1.0×10
文檔編號C12N1/20GK1844352SQ200610012689
公開日2006年10月11日 申請日期2006年5月12日 優先權日2006年5月12日
發明者田洪濤, 種克, 孫紀錄, 王佔武 申請人:河北農業大學