山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法

2023-07-12 13:37:06 2

專利名稱：：山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法
技術領域：
：本發明涉及冷水性魚類遠緣雜交方法，具體涉及一種利用山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法。技術背景山女鱒(Oco^ywc/2ws屬鮭禾鬥、鮭屬，原產於日本，20世紀50年代被馴養成家養魚類。我國於1996年由黑龍江水產研究所引進，該魚體態雍容，色彩典雅，肉質細嫩，品味鮮爽，深受人民的珍愛，市場價格較高。但山女鱒屬於小型魚類，性成熟個體小(一般只有300g左右)，並且在池養條件下，山女鱒雌雄成熟不同步，雄魚比雌魚早成熟約半個月，從而導致卵子授精時採用的精子質量較差，人工養殖條件下存在出苗率低、抗逆性差、繁殖後親魚死亡率高(親魚雌魚繁殖後死亡率達40%以上，雄魚達70%以上)。因此，如何解決山女鱒雌雄同步繁殖、抗逆性差、繁殖後親魚死亡率高等問題成為山女鱒行業健康、穩定、可持續性發展的關鍵所在。
發明內容本發明的目的是為了解決山女鱒在人工養殖條件下存在出苗率低、抗逆性差、繁殖後親魚死亡率高的問題，而提供了山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法。本發明中山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法是由下述步驟實現的一、虹鱒與山女鱒分別馴化培育，使虹鱒雌魚和山女鱒雄魚達到同步性成熟；二、擠出虹鱒雌魚卵子放入授精盆，再將山女鱒雄魚精液擠入裝有卵子授精盆中，用柔軟、乾淨的羽毛快速均勻攪拌1分鐘，然後加入孵化用水放置12分鐘，之後用清水洗去多餘的精液和破損的卵皮，得到受精卵；三、受精卵放入孵化用水靜置3040分鐘待充分吸水膨脹、卵膜硬化並富有彈性，然後裝入孵化桶中進行流水孵化，孵化用水的水溫為413°C，孵化過程中避光，並保持水質清新、pH值為68、水流通暢，孵化用水的溶氧量為59mg/L，並且每天用600ppm的福馬林溶液消毒，消毒時間為15分鐘，仔魚出膜後即完成山女鱒與虹鱒遠緣雜交。步驟一中山女鱒的馴化培養方法步驟如下8月份起將山女鱒雄魚和雌魚分開餵養，山女鱒雄魚除正常接收日光照射外，每晚增加人工光照35小時，山女鱒雌魚採用遮蓋法把日照時控制在8~10小時/天，魚卵受精後保留上浮苗中的後1/3魚苗進行培育。步驟一中虹鱒的馴化培養方法步驟如下8月下旬起控制虹鱒光照時間為8~10小時/天，魚卵受精後保留上浮苗中的前1/3魚苗進行培育。本發明的方法可操作性較強、適配性好，避免了激素誘導方法的局限性。本發明培育的雜交種子一代生長快、肉質細嫩、抗逆性強、繁育後成活率高，養殖成本相對較低，與山女鱒自交進行對比生長速度提高10~15%，成活率提高30%，受精率在90%以上，孵化率在80%以上，死亡率低於8.7%，並且肉色、嫩度、pH值、失水力及系水力指標均符合優質冷水魚品質要求，雜交魚的失水力及系水力指標均優於虹鱒和山女鱒。具體實施方式具體實施方式一本實施方式山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法是由下述步驟實現的一、虹鱒與山女鱒分別馴化培養，使虹鱒雌魚和山女鱒雄魚達到同步性成熟；二、擠出虹鱒雌魚卵子放入授精盆，再將山女鱒雄魚精液擠入裝有卵子授精盆中，用柔軟、乾淨的羽毛快速均勻攪拌，使精卵充分接觸，然後加入孵化用水放置12分鐘，之後用清水洗去多餘的精液和破損的卵皮，得到受精卵；三、受精卵放入孵化用水靜置3040分鐘，待充分吸水膨脹、卵膜硬化並富有彈性，然後裝入孵化桶中進行流水孵化，孵化用水的水溫為413°C，孵化過程中避光，並保持水質清新、pH值為6~8、水流通暢，孵化用水的溶氧量為59mg/L，並且每天用600ppm的福馬林溶液消毒，消毒時間為15分鐘，仔魚出膜後即完成山女鱒與虹鱒遠緣雜交。本實施方式採用的孵化用水是經過過濾的地下湧泉水，具體水質指標為Fe0.261mg/L、懸浮物2.6mg/L、NHl-N:0.461mg/L、亞硝酸鹽0.00374mg/L。本實施方式方法得到雜交種的受精率在90%以上，孵化率在80%以上，死亡率低於8.7%，並且生長速度快，與山女鱒自交進行對比生長速度提高10~15%(見表l)，本實施方式方法培育的雜交種一代中雌雄比例約為1:l。表l孵化後仔魚150天生長情況表種類叉長(cm)體重(g)虹鱒自交5.71±0.662.15±0.65山女鱒自交5.68±0.581.90±0.56本實施方式方法得到的雜交種6.04±0.192.77±0.96採用下述實驗對虹鱒、山女鱒及本實施方式方法雜交種的肌肉質地比較，具體內容如下實驗用魚虹鱒、山女鱒及本實施方式方法雜交種(虹鱒早X山女鱒S)均為黑龍江水產研究所渤海冷水魚實驗場培育的二齡魚，實驗魚在室外培育期間伺育條件基本保持一致，均為10mx2mx0.5m(LxWxH)的水泥池，各池魚投餵同種餌料，投飼率相同，取規格基本一致的試驗魚各30尾進行實驗。實驗方法1、取樣方法分別取虹鱒、山女鱒、本實施方式方法雜交種各30尾，在背鰭下方、脊椎骨上方部位去鱗、去皮後採樣。嫩度和失水率用取樣器採樣；肉色、PH的肌肉取魚體同側背鰭下方、脊柱骨上方的肌肉。每尾魚所取部位要求一致。2、肉色的測定肉色測量儀為日產數字顯示色差計DF-400，參數的表示方式為亮度(1值)、紅度(a值)、黃度(b值)。使用時先將色度儀用校正板標準化，然後將鏡頭垂直置於肉樣上，鏡頭口緊扣肉麵(不能漏光)，按下攝像按扭，記錄色度參數，連續記錄3次數據，計算其平均值。3、嫩度的測定.嫩度的測量採用東北農業大學工程學院研製的數顯式肌肉嫩度儀C-LM3型。測量時用直徑為1.27cm，長度為1.5cm的圓形取樣器沿脊椎骨方向鑽切肉樣塊，剔除肌間刺，隨即肌肉嫩度儀測量剪切力值，每個肉樣剪切3次，計算平均值。4、pH值的測定pH值的測定採用瑞士產OETA320型酸度計來進行。取背部肌肉5g，剔除肌間刺剪碎，置勻漿管內，立即加蒸餾水10ml，勻漿10min，提取上清液，用酸度計(測量前用PH4和PH7標準液校正)測定pH值，每條魚重複2次，測量下一個樣本前用蒸餾水衝洗乾淨。5、失水率的測定失水率的測定採用的是南京土壤儀器廠生產的應變式無側限壓力儀，WW-2A型。測量時，使用直徑為3.0cm，長度為l.Ocm的圓形取樣器垂直於體軸方向鑽切肉樣塊，用電子分析天平稱重(WD，將肉樣夾在紗布中間，上下各墊16層濾紙，濾紙外層各放一塊硬質塑料墊板，然後置於鋼環允許膨脹儀平臺上，加壓68.66kPa.並保持Smin，撤去壓力後立即測量壓後的肉樣重(W2)，按失水率(。/。)KW!—W2)/W,xl00。/。公式計算。6、系水力的測定用測失水率後的樣測定各肉樣的含水量(A)，置恆溫箱內(烘前將放樣品的培皿烘乾)，55。C烘24h，置於乾燥皿內回潮24h，本實驗前後值相差0.0067g(遠小於0.5g的標準)，再烘2h即可，並利用失水率測定結果計算出失水量(B)，然後按系水力(。/。)氣W,A-WiB)/W!Axl00。/。公式計算。7、數據處理採用MicrosoftExcel2003及SPSS12.0統計軟體對結果進行數據統計分析，顯著性檢驗採用Dunean法和Test法。上述實驗的結果見表2。表2tableseeoriginaldocumentpage7tableseeoriginaldocumentpage8由表2和3可見，所得結果表明本實施方式方法雜交種肉色介於虹鱒與山女鱒親本之間，其的嫩度與山女鱒親本差異不顯著(/>.05)，而遠好於虹鱒(;<.01)。本實施方式方法雜交種的肉色、嫩度、pH值、失水力及系水力指標均符合優質冷水魚品質要求，肉質較好，雜交種的失水力及系水力指標均優於虹鱒和山女鱒(/<0.01)。具體實施方式二本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟一中山女鱒的馴化培養方法步驟如下8月份起將山女鱒雄魚和雌魚分開餵養，山女鱒雄魚除正常接收日光照射外，每晚增加人工光照35小時，山女鱒雌魚採用遮蓋法把日照時控制在810小時/天，魚卵受精後保留上浮苗中的後1/3魚苗進行培育。其它與具體實施方式一相同。具體實施方式三本實施方式與具體實施方式二不同的是步驟一中山女鱒連續馴化培育3~6個世代。其它與具體實施方式二相同。具體實施方式四本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟一中虹鱒的馴化培養方法步驟如下8月下旬起控制虹鱒光照時間為810小時/天，魚卵受精後保留上浮苗中的前1/3魚苗進行培育。其它與具體實施方式一相同。具體實施方式五本實施方式與具體實施方式四不同的是步驟一中虹鱒連續馴化培育36個世代。其它與具體實施方式四相同。具體實施方式六本實施方式與具體實施方式四不同的是步驟一中虹鱒雌魚選取的是第2次產卵的虹鱒雌魚。其它與具體實施方式四相同。具體實施方式七本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟一虹鱒雌魚繁殖親本為體重超過平均體重15%20%以上的、繁殖時間比大群體平均繁殖時間提前1020天的虹鱒雌魚得到虹鱒雌魚。其它與具體實施方式一相同。具體實施方式八本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟一中山女鱒雄魚繁殖親本為色彩典雅、幼鮭斑明顯、繁殖後存活60天以上、體重超過平均體重15%~20%以上、繁殖時間比大群體平均繁殖時間推遲1020天的山女鱒雄魚。其它與具體實施方式一相同。具體實施方式九本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟三中受精卵放入孵化用水中30~40分鐘便充分吸水膨脹、卵膜硬化並富有彈性。其它與具體實施方式一相同。具體實施方式十本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟三中孵化用水的水溫為61TC。其它與具體實施方式一相同。本實施方式水溫更有利於孵化。具體實施方式十一本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟三中孵化用水的水溫為9'C。其它與具體實施方式一相同。具體實施方式十二本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟三中孵化用水的流速為0.3X10'3m3.S"0.4X10_3m3.s"。其它與具體實施方式一相同。具體實施方式十三本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟三中孵化用水的流速為0.34Xl(r3m3.S"。其它與具體實施方式一相同。具體實施方式十四本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟三中孵化用水的溶氧量為6~8mg/L。其它與具體實施方式一相同。具體實施方式十五本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟三中孵化用水的溶氧量為7mg/L。其它與具體實施方式一相同。具體實施方式十六本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟三中孵化用水的pH值為6.57.5。其它與具體實施方式一相同。具體實施方式十七本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟三中孵化用水的pH值為7。其它與具體實施方式一相同。權利要求1、山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法，其特徵在於山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法是由下述步驟實現的一、虹鱒與山女鱒分別馴化培育，從而實現虹鱒雌魚和山女鱒雄魚同步性成熟；二、擠出虹鱒雌魚卵子放入授精盆，再將山女鱒雄魚精液擠入裝有卵子授精盆中，用柔軟、乾淨的羽毛快速均勻攪拌1分鐘使精卵充分結合，然後加入孵化用水放置1～2分鐘後用清水洗去多餘的精液和破損的卵皮，得到受精卵；三、受精卵放入孵化用水中30～40分鐘，待充分吸水膨脹、卵膜硬化並富有彈性，然後裝入孵化桶中進行流水孵化，孵化水溫為4～13℃，孵化過程中避光，並保持水質清新、pH值為6～8、水流通暢，溶氧量為5～9mg/L，並且每天用600ppm的福馬林溶液消毒，消毒時間為15分鐘，仔魚出膜後即完成山女鱒與虹鱒遠緣雜交。2、根據權利要求1所述的山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法，其特徵在於步驟一中山女鱒的馴化培養方法步驟如下8月下旬起將山女鱒雄魚和雌魚分開餵養，山女鱒雄魚除正常接收日光照射外，每晚增加人工光照35小時，山女鱒雌魚採用遮蓋法把日照時控制在8~10小時/天，自交魚卵受精後保留上浮苗中的後1/3魚苗進行培育。3、根據權利要求2所述的山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法，其特徵在於步驟一中山女鱒連續馴化培育3~6個世代。4、根據權利要求1所述的山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法，其特徵在於步驟一中虹鱒的馴化培養方法步驟如下8月下旬起控制虹鱒光照時間為810小時/天，自交魚卵受精後保留上浮苗中的前1/3魚苗進行培育。5、根據權利要求4所述的山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法，其特徵在於步驟一中虹鱒連續馴化培育3~6個世代。6、根據權利要求4所述的山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法，其特徵在於步驟一中虹鱒雌魚要選取第2次產卵的親魚。7、根據權利要求1所述的山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法，其特徵在於步驟三的孵化用水的水溫為6~irc。8、根據權利要求1所述的山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法，其特徵在於步驟三孵化過程中孵化用水的流速為0.3X10'3m3.s"0.4X10-3m3.s'1。.9、根據權利要求1所述的山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法，其特徵在於步驟三孵化過程中孵化用水的溶氧量為6~8mg/L。10、根據權利要求1所述的山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法，其特徵在於步驟三孵化過程中孵化用水的pH值為6.5~7.5。全文摘要山女鱒與虹鱒遠緣雜交方法，它涉及冷水性魚類遠緣雜交方法。本發明解決了山女鱒在人工養殖條件下存在的雌雄成熟不同步、出苗率低、抗逆性差、繁殖後親魚死亡率高等問題。本發明方法步驟如下一、分別培育，使繁殖親本達到同步性成熟；二、人工受精；三、孵化。本發明的方法可操作性較強、適配性好，避免了激素誘導方法的局限性。本發明培育出的雜交種的子一代生長快、肉質細嫩、抗逆性強、繁育後成活率高，養殖成本相對較低，與山女鱒自交進行對比生長速度提高10～15％，成活率提高30％，受精率在90％以上，孵化率在80％以上，繁殖後死亡率低於8.7％，並且肉色、嫩度、pH值、失水力及系水力指標均符合優質冷水魚品質要求。文檔編號A61D19/00GK101322478SQ20081013686公開日2008年12月17日申請日期2008年8月1日優先權日2008年8月1日發明者張玉勇,牟振波,白慶利,石連玉申請人:中國水產科學研究院黑龍江水產研究所