一種複方丹參浸膏中單糖、二糖的分離純化方法
2023-08-08 13:06:31
一種複方丹參浸膏中單糖、二糖的分離純化方法
【專利摘要】本發明涉及一種複方丹參浸膏中單糖、二糖成分的分離純化方法，本發明採用固相萃取法，對複方丹參浸膏中的糖類成分進行分離純化，先得到複方丹參浸膏總糖提取物，然後採用凝膠色譜法，對複方丹參浸膏總糖提取物中的低聚糖成分實現了很好的分離，得到了三個單糖、二糖成分，分別是果糖、D-葡萄糖和蔗糖。
【專利說明】一種複方丹參浸膏中單糖、二糖的分離純化方法
【技術領域】:
[0001]本發明屬於中藥領域，具體涉及一種複方丹參浸膏中單糖、二糖的分離純化方法。【背景技術】:
[0002]複方丹參滴丸是由丹參、三七和冰片製成的滴丸劑，在臨床上廣泛用於冠心病、心絞痛的預防、治療、急救，現已成為國內心血管市場上的主導品牌之一。複方丹參浸膏為複方丹參滴丸的製劑中間體，是由丹參和三七藥材，經水提、醇沉、濃縮後得到的浸膏(複方丹參浸膏的製備方法屬於現有技術)。
[0003]複方丹參滴丸上市十餘年中逐步建立了完善的工藝質量控制體系，目前正在以藥品的形式進行FDA申報研究。但是相對於西藥，複方丹參浸膏目前的已知組分仍然較低，提升產品工藝質量控制水平，需要針對其中更多的中藥化學成分進行深入研究，從而更加準確地把握產品質量，降低用藥風險，同時為國際註冊提供支持。
[0004]糖類在中草藥中分布十分廣泛，也是中藥材及中藥產品中的主要組成成分，所佔含量比例很高。測定結果表明，複方丹參浸膏中的糖類成分含量達到約50%，因此糖類成分的研究對於複方丹參浸膏的全面質量控制有著重要意義。
[0005]從複方丹參浸膏中分離出了多種糖類成分，獲得這些成分可以用於分析複方丹參滴丸中不同糖類成分的比例關係，了解它們的作用，同時可以用於控制產品的質量。本發明在於提供一種從複方丹參浸膏中分離單糖、二糖成分的方法，該方法快速，準確，操作簡單，分離效果好，得到的產品純度高，收率高，可用於糖類成分的定性和定量檢測。
【發明內容】
:
[0006]本發明經過長期反覆的摸索，最終得到一種複方丹參浸膏中單糖、二糖成分的分離純化方法，並分離得到三個糖類成分，經結構確認，確認該三個化合物為果糖、D-葡萄糖和蔗糖。
[0007]該分離純化方法包括如下步驟:
[0008](I)複方丹參浸膏總糖提取物的製備；
[0009](2)複方丹參浸膏總糖提取物過聚丙烯醯胺凝膠層析柱；
[0010](3)單糖、二糖成分的收集。
[0011]其中步驟(1)所述複方丹參浸膏總糖提取物的製備方法為:
[0012]複方丹參浸膏加水超聲溶解，上至已處理好的固相萃取柱，流速為0.5-1.0mL/min，再用水分次洗滌，收集上樣液和洗滌流出液，蒸乾，得複方丹參浸膏總糖提取物。
[0013]其中所述固相萃取柱採用Cleanert PS-SPE萃取柱，使用前經過處理，處理方法為:將固相萃取柱用甲醇衝洗，之後再用水衝洗。
[0014]其中所述複方丹參浸膏為丹參和三七藥材經水提、醇沉、濃縮後得到的浸膏，其製備方法具體為:分別取 41.06份丹參、8.03份三七藥材，粉碎，放入提取罐中，加入上述生藥5倍量的鹼水(pH=7.0),提取2小時，過濾，收集初濾液，藥渣加入4倍量水，煎煮I小時，濾過，與第一次提取的濾液混合，減壓濃縮，直至溶液體積(L)與生藥質量(Kg)的比為
0.9-1.1，加入95%的乙醇直至含醇量至69-71%，靜置12小時，濾過，濾液濃縮回收乙醇成浸膏，相對密度為1.32-1.40。該方法屬於現有技術。
[0015]其中步驟(2)所述過聚丙烯醯胺凝膠層析柱是將得到的複方丹參浸膏總糖提取物用超純水溶解，溶解後上樣至已處理好的層析柱，層析柱的柱溫為25-35°C，用超純水進行洗脫，每IOmin收集I管洗脫液，收集相當於0.80-0.95柱體積的流份。
[0016]其中，聚丙烯醯胺凝膠層析柱為現有技術，可以用以下方法得到:
[0017]稱取一定量的聚丙烯醯胺凝膠，倒入超純水中，在室溫下潤漲12小時以上，真空脫氣，用自動沉降法裝柱到需要的高度(10(Tl20cm)，再用2~3倍床體積的超純水以恆定的流速平衡層析柱。
[0018]優選的，步驟(2)中層析柱的柱溫為30°C。
[0019]步驟(2)中所述上樣量為0.075-0.125g複方丹參浸膏總糖提取物/100克聚丙烯
醯胺凝膠。
[0020]步驟(2)中所述層析柱的洗脫流速為0.0184-0.0367柱體積/小時。
[0021]其中步驟(3)所述的單糖、二糖成分的收集方法為:用HPLC方法對洗脫液進行檢測，分別收集保留時間為10.1±0.2min、13.0±0.2min和18.0±0.2min的色譜峰的洗脫液合併，蒸乾，得到三種洗脫物，分別為化合物1，2，3。
[0022]所述HPLC對洗脫液進行檢測的方法為:
[0023]採用HPLC-ELSD 法，HPLC 採用 Prevail TM Carbohydrate ES 色譜柱，色譜條件為以乙腈為流動相A,水為流動相B,梯度洗脫設置為:
[0024]
【權利要求】
1.一種複方丹參浸膏中單糖、二糖成分的分離純化方法，包括如下步驟: (O複方丹參浸膏總糖提取物的製備； (2)複方丹參浸膏總糖提取物過聚丙烯醯胺凝膠層析柱； (3)單糖、二糖成分的收集。
2.如權利要求1所述的方法，其中步驟(1)所述複方丹參浸膏總糖提取物的製備方法為: 複方丹參浸膏加水超聲溶解，上至已處理好的固相萃取柱，流速為0.5-1.0mL/min，再用水分次洗滌，收集上樣液和洗滌流出液，蒸乾，得複方丹參浸膏總糖提取物。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述固相萃取柱採用CleanertPS-SPE萃取柱，使用前經過處理，處理方法為:將固相萃取柱用甲醇衝洗，之後再用水衝洗。
4.如權利要求1所述的方法， 其中步驟(2)所述過聚丙烯醯胺凝膠層析柱是將得到的複方丹參浸膏總糖提取物用超純水溶解，溶解後上樣至已處理好的層析柱，層析柱的柱溫為25-35°C，用超純水進行洗脫，收集相當於0.80-0.95柱體積的流份。
5.如權利要求4所述的方法，其中，聚丙烯醯胺凝膠層析柱用以下方法得到: 稱取聚丙烯醯胺凝膠，倒入超純水中，在室溫下潤漲12小時以上，真空脫氣，裝柱，裝柱高度為100-120cm，再用2~3倍床體積的超純水以恆定的流速平衡層析柱。
6.如權利要求4所述的方法，其中層析柱的柱溫為30°C。
7.如權利要求4所述的方法,其中上樣量為0.075-0.125g複方丹參浸膏總糖提取物/100克聚丙烯醯胺凝膠。
8.如權利要求4所述的方法，其中所述層析柱的洗脫流速為0.0184-0.0367柱體積/小時。
9.如權利要求1所述的方法，其中步驟(3)所述的單糖、二糖成分的收集方法為:用HPLC方法對洗脫液進行檢測，分別收集保留時間為10.1±0.2min、13.0±0.2min和18.0±0.2min的色譜峰的洗脫液，合併，蒸乾，得到三種洗脫物:果糖、葡萄糖、蔗糖。
10.如權利要求9所述的方法，其中所述HPLC對洗脫液進行檢測的方法為: 採用HPLC-ELSD法，HPLC採用Prevail TM Carbohydrate ES色譜柱，色譜條件為以乙腈為流動相A,水為流動相B,梯度洗脫設置為:
【文檔編號】C13K11/00GK103589811SQ201210290204
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2012年8月15日 優先權日:2012年8月15日
【發明者】徐波, 牛濤, 陳紅, 劉巖 申請人:天津天士力現代中藥資源有限公司