擬南芥的抑菌水培方法與流程
2023-07-17 12:00:11 1
本發明涉及一種擬南芥的抑菌水培方法。
背景技術：
擬南芥屬於被子植物門，雙子葉植物綱。二年生草本，我國內蒙、新疆、陝西、甘肅、西藏、山東、江蘇、安徽、湖北、四川、雲南等省區均有發現。擬南芥的優點是植株小、結子多。擬南芥的基因組是目前已知植物基因組中最小的。擬南芥是自花受粉植物，基因高度純合，用理化因素處理突變率很高，容易獲得各種代謝功能的缺陷型。由於有上述這些優點，所以擬南芥是進行遺傳學研究的好材料，被科學家譽為「植物中的果蠅」。在科學研究中經常需要用到擬南芥幼苗或者不同時期的小苗，由於水培擬南芥具有快速、方便、幼苗生長快且幼苗生長過程受到脅迫程度較低等原因，實驗人員普遍傾向於水培擬南芥。但是，隨著培養時間延長或者培養室使用時間較長，多會出現培養液中雜菌較多、汙染嚴重，以致嚴重影響擬南芥幼苗生長，嚴重影響實驗進度。
技術實現要素：
本發明的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷，並提供至少後面將說明的優點。
本發明還有一個目的是提供一種擬南芥的抑菌水培方法。
本發明提供的技術方案為：
一種擬南芥的抑菌水培方法，包括如下步驟：
步驟一、將擬南芥種子放入質量體積濃度60％-90％的酒精溶液中浸泡10-30min，之後於溫度0～4℃和黑暗條件下處理3～4天，置於固體培養基中培育成根長1.2cm以上的幼苗；
步驟二、將步驟一中得到的根長1.2cm以上的幼苗移至第一液體培養液中培養，並在該第一液體培養液的底層鋪設一層蛭石，於溫度18～22℃、溼度60％～80％、光照2000～3000lux和24h光照的條件下，培養10～15天，得到小苗；所述第一液體培養液包含：1/5～1/3MS，0.1-1.0mg/L 6-BA、0.05-0.5mg/L KT、0.1-0.5mg/L IAA和0.10％-0.40％(w/v)的貝殼碳酸鈣；
步驟三、更換第二液體培養液，同時在該第二液體培養液的低層也鋪設一層蛭石，於溫度18～22℃、溼度60％～80％、光照2000～3000lux和24h光照的條件下，繼續培養小苗10～15天；所述第二液體培養液包含：1/5～1/3MS，0.1-0.4mg/L KT，0.5-1.0mg/L 6-BA，0.1-0.8mg/L NAA和0.60％-0.90％(w/v)的蛋殼粉末；
步驟四、循環重複步驟二和步驟三，直至將擬南芥小苗培養至需求的時期。
優選的是，所述的擬南芥的抑菌水培方法中，所述固體培養基為1/2MS固體培養基。
優選的是，所述的擬南芥的抑菌水培方法中，所述第一液體和第二液體培養液中均還包含：3％～5％(v/v)的蒲公英汁，所述蒲公英汁為蒲公英擠壓後過100目篩得到的液體。
優選的是，所述的擬南芥的抑菌水培方法中，所述第一液體培養液和第二液體培養液中蛭石層的厚度為對應的液體培養液深度的1/5～1/3。
優選的是，所述的擬南芥的抑菌水培方法中，步驟一中，酒精溶液與擬南芥種子的體積比為3:1。
優選的是，所述的擬南芥的抑菌水培方法中，所述第一液體培養液和第二液體培養液的液面高度為0.5～1m。
本發明至少包括以下有益效果：
本發明首先採用酒精溶液對種子進行浸泡，之後進行後續步驟，能夠有效去除種子中的有害蟲軟及細菌等，去除種子中可能含有的細菌等，同時在固體培養基中萌發，進一步減少了在液體培養液中被汙染的可能；
本發明的液體培養液中的第一混合物層還有蛭石和貝殼碳酸鈣，一是能夠吸收足夠的營養液，保持培養中的液體溼度和營養成分，二是貝殼碳酸鈣可有效抑制細菌的滋生，保持水體乾淨；第二混合物層中含有的蛋殼粉末同樣也具有抑制細菌滋生的作用，同時這幾種成分都能夠促進植株的生長，一舉多得；
本發明將蒲公英汁液運用於培養液中，能夠有效抑制液體中雜菌和其他雜草的生長。
利用液體培養液循環培養至植株生長至需求的時期，獲取到的材料生長一致、生長狀態良好，無雜菌汙染，為科學實驗的精確研究做好良好的準備。
本發明的其它優點、目標和特徵將部分通過下面的說明體現，部分還將通過對本發明的研究和實踐而為本領域的技術人員所理解。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明做進一步的詳細說明，以令本領域技術人員參照說明書文字能夠據以實施。
應當理解，本文所使用的諸如「具有」、「包含」以及「包括」術語並不配出一個或多個其它元件或其組合的存在或添加。
本發明提供一種擬南芥的抑菌水培方法，包括如下步驟：
步驟一、將擬南芥種子放入質量體積濃度60％-90％的酒精溶液中浸泡10-30min，之後於溫度0～4℃和黑暗條件下處理3～4天，置於固體培養基中培育成根長1.2cm以上的幼苗；
步驟二、將步驟一中得到的根長1.2cm以上的幼苗移至第一液體培養液中培養，並在該第一液體培養液的底層鋪設一層蛭石，於溫度18～22℃、溼度60％～80％、光照2000～3000lux和24h光照的條件下，培養10～15天，得到小苗；所述第一液體培養液包含：1/5～1/3MS，0.1-1.0mg/L 6-BA、0.05-0.5mg/L KT、0.1-0.5mg/L IAA和0.10％-0.40％(w/v)的貝殼碳酸鈣；
步驟三、更換第二液體培養液，同時在該第二液體培養液的低層也鋪設一層蛭石，於溫度18～22℃、溼度60％～80％、光照2000～3000lux和24h光照的條件下，繼續培養小苗10～15天；所述第二液體培養液包含：1/5～1/3MS，0.1-0.4mg/L KT，0.5-1.0mg/L 6-BA，0.1-0.8mg/L NAA和0.60％-0.90％(w/v)的蛋殼粉末；
步驟四、循環重複步驟二和步驟三，直至將擬南芥小苗培養至需求的時期。
在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述固體培養基為1/2MS固體培養基。
在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述第一液體培養液和第二液體培養液中均還包含：3％～5％(v/v)的蒲公英汁，所述蒲公英汁為蒲公英擠壓後過100目篩得到的液體。
在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述第一液體培養液和第二液體培養液中蛭石層的厚度為對應的液體培養液深度的1/5～1/3。
在本發明的其中一個實施例中，作為優選，步驟一中，酒精溶液與擬南芥種子的體積比為3:1。
在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述第一液體培養液和第二液體培養液的液面高度為0.5～1m。
實施例1
一種擬南芥的抑菌水培方法，包括如下步驟：
步驟一、將擬南芥種子放入質量體積濃度60％的酒精溶液中浸泡10min，之後於溫度0℃和黑暗條件下處理3天，置於固體培養基中培育成根長1.2cm以上的幼苗；所述固體培養基為1/2MS固體培養基。酒精溶液與擬南芥種子的體積比為3:1。
步驟二、將步驟一中得到的根長1.2cm以上的幼苗移至第一液體培養液中培養，並在該第一液體培養液的底層鋪設一層蛭石，於溫度18℃、溼度60％、光照2000lux和24h光照的條件下，培養10天，得到小苗；所述第一液體培養液包含：1/5MS，0.1mg/L 6-BA、0.05mg/L KT、0.1mg/L IAA和0.10％(w/v)的貝殼碳酸鈣；
步驟三、更換第二液體培養液，同時在該第二液體培養液的低層也鋪設一層蛭石，於溫度18℃、溼度60％、光照2000lux和24h光照的條件下，繼續培養小苗10天；所述第二液體培養液包含：1/5MS，0.1mg/L KT，0.5mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA和0.60％(w/v)的蛋殼粉末；
步驟四、循環重複步驟二和步驟三，直至將擬南芥小苗培養至需求的時期。所述第一液體培養液和第二液體培養液中均還包含：3％(v/v)的蒲公英汁，所述蒲公英汁為蒲公英擠壓後過100目篩得到的液體。所述第一液體培養液和第二液體培養液中蛭石層的厚度為對應的液體培養液深度的1/5。所述第一液體培養液和第二液體培養液的液面高度為0.5m。
實施例2
一種擬南芥的抑菌水培方法，包括如下步驟：
步驟一、將擬南芥種子放入質量體積濃度90％的酒精溶液中浸泡30min，之後於溫度4℃和黑暗條件下處理4天，置於固體培養基中培育成根長1.2cm以上的幼苗；所述固體培養基為1/2MS固體培養基。酒精溶液與擬南芥種子的體積比為3:1。
步驟二、將步驟一中得到的根長1.2cm以上的幼苗移至第一液體培養液中培養，並在該第一液體培養液的底層鋪設一層蛭石，於溫度22℃、溼度80％、光照3000lux和24h光照的條件下，培養15天，得到小苗；所述第一液體培養液包含：1/3MS，1.0mg/L 6-BA、0.5mg/L KT、0.5mg/L IAA和0.40％(w/v)的貝殼碳酸鈣；
步驟三、更換第二液體培養液，同時在該第二液體培養液的低層也鋪設一層蛭石，於溫度22℃、溼度80％、光照3000lux和24h光照的條件下，繼續培養小苗15天；所述第二液體培養液包含：1/3MS，0.4mg/L KT，1.0mg/L 6-BA，0.8mg/L NAA和0.90％(w/v)的蛋殼粉末；
步驟四、循環重複步驟二和步驟三，直至將擬南芥小苗培養至需求的時期。所述第一液體培養液和第二液體培養液中均還包含：5％(v/v)的蒲公英汁，所述蒲公英汁為蒲公英擠壓後過100目篩得到的液體。所述第一液體培養液和第二液體培養液中蛭石層的厚度為對應的液體培養液深度的1/3。所述第一液體培養液和第二液體培養液的液面高度為1m。
儘管本發明的實施方案已公開如上，但其並不僅僅限於說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用於各種適合本發明的領域，對於熟悉本領域的人員而言，可容易地實現另外的修改，因此在不背離權利要求及等同範圍所限定的一般概念下，本發明並不限於特定的細節和這裡示出與描述的實施例。