一種製備可控降解中藥膠原方法及其製備的中藥膠原的製作方法

2023-07-18 03:32:26

專利名稱：一種製備可控降解中藥膠原方法及其製備的中藥膠原的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥膠原，具體涉及一種可控降解中藥膠原製備方法及其製備的 中藥膠原。
背景技術：
膠原，尤其是一型膠原，是生物體各種結締組織的主要組成分。具有促進組織愈 合、可體內降解且降解碎片具有組織相容性的特性，已成為組織工程中應用最廣的生物材 料。膠原經過修飾後可以提高組織相容性及幹預血管生成。應用膠原作為支架製造促血管 生長生物材料植入促血管生長之生長因子為目前國際研究開發的前沿與熱點之一。但是將 膠原作為載藥支架釋藥有效藥物的研究尚處起步階段。查閱文獻有關將中藥植物有效成分 直接與膠原蛋白結合，完全去除交聯劑，通過對膠原的可控降解來釋放藥物的研究，尚未見 報導。

發明內容
發明目的針對現有技術中存在的不足，本發明的目的是提供一種可控降解中藥 膠原製備方法，以實現有效控制膠原的降解及藥物的釋放。本發明的另一目的是提供上述 方法製備的中藥膠原。技術方案為了實現上述發明目的，本發明採用的技術方案如下一種製備可控降解中藥膠原方法，包括以下步驟(1)將含有羧基團的中藥與EDC/NHS按重量比0. 5 5 1，浸入0. 05M MES溶液 中，控溫37°C，反應IOmin後加入膠原或明膠，擠出氣泡，60次/min搖晃反應4h，完成藥物 與膠原多肽的結合；其中，EDC與NHS的體積比為1 0.6，中藥與膠原或明膠的重量比為 1:1;(2)過濾去除步驟(1)中的EDC/NHS藥液，加入0. IM Na2HPO4溶液，控溫37°C，反 應2h後，過濾去除Na2HPO4溶液，加入4M氯化鈉液，每6h更換一次氯化鈉液，24h換液4次， 過濾去氯化鈉液，用三蒸水洗5遍後，凍幹機凍幹，包裝；其中，Na2HPO4溶液、氯化鈉液和三 蒸水與中藥的體積比均為21(3)用鈷60或環氧乙烷消毒4h，常溫保存，即可。步驟(1)中，所述的含有羧基團的中藥為黃芪多糖。一種採用上述的製備可控降解中藥膠原方法製備出的可控降解中藥膠原。一種採用上述的製備可控降解中藥膠原方法製備出的可控降解黃芪多糖膠原。本發明的可控降解膠原，由含有羧基團中藥與膠原組成，成分為中藥有效成分與 膠原蛋白，配比範圍根據臨床需要進行調整。含有羧基團中藥膠原是一種隨膠原降解而原 位釋放含有羧基團中藥的可控降解釋藥系統。通過交聯劑使含有羧基團中藥的羧基團與膠 原多肽鏈共價結合，膠原肽鏈之間亦互相交聯，交聯劑在反應完成後通過充分洗滌洗出。目前，藥物直接載入膠原，引起迅速釋放，達不到長期釋放的要求，膠原在體內降
3解迅速，通過交聯劑修飾膠原可以控制膠原降解速率，但是目前臨床應用的修飾膠原膠原 一定的細胞毒性。本發明的可控降解膠原，採用水溶性交聯劑將含有羧基團中藥與膠原多 肽共價結合，剩餘的交聯劑將膠原多肽共價結合，結合後交聯劑將以原型通過洗滌洗出膠 原，膠原內交聯劑零殘留。通過交聯劑與膠原及含有羧基團中藥的比例來控制膠原的降解 及藥物的釋放。可控降解含有羧基團中藥膠原涉及組織工程與藥物可控釋放製劑學。臨床 可用於創面覆蓋促進組織修復、組織缺損填充、手術中創面填塞止血、抗腫瘤血管新生等。有益效果本發明的可控降解膠原製備方法，步驟少，操作簡單，具有一定的通用 性。所製備出的可控降解膠原，釋放含有羧基團中藥提高療效，同時增加組織相容性。臨床 可用於創面覆蓋促進組織修復、組織缺損填充、手術中創面填塞止血、抗腫瘤血管新生等。


圖1是可控降解中藥膠原的結構示意圖。其中，1為膠原，2為中藥，3為EDC/NHS 交聯劑。圖2是實施例3的各組微血管的計數圖。從圖中明顯看出，20μ g/ml黃芪多糖+ 膠原組微血管密度明顯高於其他各組，存在顯著差異D與C、E組比較P < 0. 05 ;D與A、B 組比較P < 0.01。
具體實施例方式下面結合附圖和具體實施例對本發明做進一步的解釋。以下實施例所使用到的藥品和試劑如下EDC為碳化二亞胺，交聯劑；NHS為N-羥基琥珀醯亞胺；MES為脂肪醇醚琥珀酸酯
磺酸鹽。0. 05M MES為採用500ml蒸餾水加5. 3325gMES配置；0. IM Na2HPO4為採用蒸餾水 500ml 加 Na2HP045. 5g 配置；4M NaCl 為採用蒸餾水 500ml 加 117g NaCl 配置。實施例1一種製備可控降解中藥膠原方法，包括以下步驟(1)將含有羧基團的中藥與EDC/NHS按重量比0. 5 5 1，浸入0. 05M MES溶液 中，控溫37°C，反應IOmin後加入膠原或明膠，擠出氣泡，60次/min搖晃反應4h，完成藥物 與膠原多肽的結合；其中，EDC與NHS的體積比為1 0.6，中藥與膠原或明膠的重量比為 1:1;(2)過濾去除步驟(1)中的EDC/NHS藥液，加入0. IM Na2HP04溶液，控溫37°C，反 應2h後，過濾去除Na2HP04溶液，加入4M氯化鈉液，每6h更換一次氯化鈉液，24h換液4 次，過濾去氯化鈉液，用三蒸水洗5遍後，凍幹機凍幹，包裝；其中，Na2HP04溶液、氯化鈉液 和三蒸水與中藥的體積比均為21(3)用鈷60或環氧乙烷消毒4h，常溫保存，即可。該可控降解中藥膠原的結構如附圖1所示，1為膠原，2為中藥，3為EDC/NHS交聯 劑實施例2控溫37°C，在 0. 05mol/L MES 緩衝液中(ρΗ5· 6)，以交鏈劑 EDC/NHS (1 0. 6)活化黃芪多糖中羥基團，反應lOmin，將膠原浸入反應液，60次/min輕微晃動，反應4h，反應 前，輕微擠壓以排出膠原內氣體。反應完成後，用0. lmol/L Na2HPO4洗滌2h，以中止反應。 過濾去除Na2HPO4溶液，用4mol/L NaCl溶液洗滌，24h換液4次，過濾去除氯化鈉溶液，用 三蒸水洗滌，24h換液5次。接著將標本消毒後備用。實施例3以黃芪多糖均勻分布於I型膠原中，接著行低溫(-20°C )凍幹形成黃芪多糖膠原 海綿(直徑lcm，厚度0.2cm)。空白膠原組即為I型膠原，接著行低溫(-20°C )凍幹形成 膠原海綿。分組情況如表1所示。表1分組情況表
權利要求
一種製備可控降解中藥膠原方法，其特徵在於，包括以下步驟(1)將含有羧基團的中藥與EDC/NHS按重量比0.5～5∶1，浸入0.05M MES溶液中，控溫37℃，反應10min後加入膠原或明膠，擠出氣泡，60次/min搖晃反應4h，完成藥物與膠原多肽的結合；其中，EDC與NHS的體積比為1∶0.6，中藥與膠原或明膠的重量比為1∶1；(2)過濾去除步驟(1)中的EDC/NHS藥液，加入0.1M Na2HPO4溶液，控溫37℃，反應2h後，過濾去除Na2HPO4溶液，加入4M氯化鈉液，每6h更換一次氯化鈉液，24h換液4次，過濾去氯化鈉液，用三蒸水洗5遍後，凍幹機凍幹，包裝；其中，Na2HPO4溶液、氯化鈉液和三蒸水與中藥的體積比均為2∶1(3)用鈷60或環氧乙烷消毒4h，常溫保存，即可。
2.根據權利要求1所述的製備可控降解中藥膠原方法，其特徵在於，步驟(1)中，所述 的含有羧基團的中藥為黃芪多糖。
3.一種採用權利要求1所述的製備可控降解中藥膠原方法製備出的可控降解中藥膠原。
4.一種採用權利要求1所述的製備可控降解中藥膠原方法製備出的可控降解黃芪多 糖膠原。
全文摘要
本發明公開了一種製備可控降解中藥膠原方法及其所製得的可控降解中藥膠原。該方法包括將含有羧基團的中藥與EDC/NHS浸入0.05M MES溶液中，控溫37℃反應10min後加入膠原或明膠，擠出氣泡，60次/min搖晃反應4h；濾去藥液，加入0.1M Na2HPO4溶液，控溫37℃反應2h後，過濾去除Na2HPO4溶液，加入4M氯化鈉液，24h換液4次過濾去氯化鈉液，用三蒸水洗5遍後，凍幹機凍幹，包裝；以鈷60或環氧乙烷消毒，常溫保存即可。本發明的可控降解膠原製備方法，步驟少，操作簡單，具有一定的通用性。所製備出的可控降解膠原，釋放含有羧基團中藥提高療效，同時增加組織相容性。
文檔編號A61P35/00GK101979094SQ201010298920
公開日2011年2月23日 申請日期2010年9月28日 優先權日2010年9月28日
發明者姚昶 申請人:江蘇省中醫院