新型可溶性cd83多肽、製劑及使用方法

2023-07-10 17:57:46

專利名稱：新型可溶性cd83多肽、製劑及使用方法
技術領域：
本發明涉及新型可溶性CD83(sCD83)多肽和編碼該多肽的核酸、改良的(sCD83) 製劑，以及該蛋白質和製劑在治療或預防變態反應、自身免疫性疾病和移植排斥中的用途。
背景技術：
CD83為來自蛋白質的免疫球蛋白(「Ig」)超家族的分子(參見例如Zhou等人 (1999) J. Immunol. 149 :735_742 ；還參見美國專利 No. 7，169，898 ；綜述參見 Fujimoto 和 Tedder ((2006) J. Med. Dent. Sci. 53 :86_91)。CD83作為成熟樹突細胞的差示標記物。儘管 CD83的確切功能還有待確定，但已報導可溶形式的CD83結合未成熟和成熟樹突細胞兩者 (參見Lechmann等人(2001) (J. Exp. Med. 194:1813-1821))。作者還報導，該蛋白質降低在 體外成熟的樹突細胞的CD80和CD83表達，且其在體外抑制樹突細胞刺激T細胞的能力(還 參見 Lechmann 等人(2002) Trends in Immunology 23 :273_275)。同樣，Kruse 等人(2000) (J. Exp. Med. 191 1581-1589)報導 GC7 (N(I)-脒基-1，7-二氨基庚烷)幹擾 CD83mRNA 的核 質易位，從而阻止⑶83的表面表達和顯著抑制這些DC對T淋巴細胞的激活。其他人還報 導了體內可溶形式的CD83的存在(參見例如Hock等人(2002) Int. Immunol. 13 :959_967)。 用HSV-I-感染的DC進行的研究表明，病毒感染導致CD83降解，並抑制CD83mRNA的轉運； 通過HSV-I的該可能的逃避機理進一步支持⑶83對DC生物學的重要性(參見例如Kruse 等人(2000) J. Virol. 74 :7127_7136)。成熟的CD83包括三個結構域胞外Ig樣結構域、跨膜結構域和細胞質結構域。人 ⑶83胞外結構域(h⑶83ext，s⑶83的一種形式)包含由至少兩個外顯子編碼的單個Ig樣 (V型)結構域(參見例如 Zhou等人(1999) J. Immunol. 149 :735_742 ；GenBank ID#Z11697)， 且在成熟的樹突細胞(「mDC」)的細胞表面上強烈表達。美國專利No. 7，169，898 公開了人 CD83 (hCD83) cDNA 的核酸序列(SEQ ID NO :1)。 全長h⑶83所對應的胺基酸序列示於SEQ ID N0:2。SEQ ID NO :2的胺基酸殘基1_19對應信 號序列，其從成熟蛋白質(胺基酸殘基20-205)中切割出來。hCD83胞外結構域(hCD83ext) 由SEQ ID N0:3編碼。對應的hCD83ext胺基酸序列示於SEQ ID NO :4，同時也是SEQ ID NO 2的胺基酸殘基20-144。跨膜結構域和細胞質結構域分別對應SEQ IDNO 2的胺基酸殘 基145-166和SEQ ID NO 2的胺基酸殘基167-205。野生型hCD83ext包含3個糖基化位點 (即SEQ ID NO 4的胺基酸殘基60、77和98)和5個半胱氨酸殘基(即SEQ ID NO 2的氨 基酸殘基27、35、100、107和129，其對應SEQ ID NO :4的胺基酸殘基8、16、81、88和110)。hCD83ext 抑制 DC 介導的 T 細胞刺激(Lechmann 等人 J. Exp. Med. (2001) 194 1813-1821)，並對治療多發性硬化症的小鼠模型有效(實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)； Zinser等人(2004) J. Exp. Med. 200 :345_351)。這些研究使用hCD83胞外結構域，該結構域 另外還包含在蛋白質氨基末端的凝血酶切割位點的4胺基酸部分(Gly-Ser-Pro-Gly ；SEQ ID NO 41)和跨膜結構域的第一個胺基酸(lie)，並且示於SEQ ID NO :5。PCT公布W02004/046182公開了可溶性CD83突變體，其中SEQ ID NO 5的第5個
4半胱氨酸殘基從半胱氨酸突變為絲氨酸，以產生SEQ ID N0:6(以下稱為h⑶83ext-m5)， 並提議在治療自身免疫性疾病(如多發性硬化症)和移植中使用hCD83eXt-m5和野生型 hCD83ext。Zinser 等人(Immunobiology (2006) 211 :449_453)公開了 野生型 hCD83ext 形 成同型二聚體，藉此胞外結構域的前4個半胱氨酸(即SEQ ID NO 2的胺基酸殘基27、35、 100和107，其對應SEQ ID NO :5和NO :6的胺基酸殘基12、20、85和92)參與分子內二硫鍵 的形成，且第5個半胱氨酸(即SEQ IDNO 1的胺基酸殘基129或SEQ ID NO 5和NO 6的 胺基酸殘基114)決定同型二聚體的分子間橋連。Zinser等人還公開了兩個h⑶83ext同 種型(即野生型二聚體和hCD83ext-m5突變單體)在體外測試中具有相似的抑制能力，且 兩個h⑶83ext同種型的生物學(體內)半衰期類似，為2-3小時。此外，通過使用EAE模 型，Zinser等人公開了可溶性⑶83的單體突變體同種型(即h⑶83ext_m5)與二聚體野生 型hCD83ext同種型具有相似的體內抑制活性。考慮到sCD83的重要的治療應用，本申請人認識到需要用於治療或預防不希望的 免疫應答(例如自身免疫性疾病、變態反應和移植排斥)的改良的SCD83多肽及其製劑。本 發明滿足了該需求，並提供了其他優勢。序列表簡述SEQ ID NO 1表示包含信號序列的編碼全長人⑶83蛋白質的cDNA。SEQ ID NO 2表示包含信號序列的編碼全長人⑶83蛋白質的胺基酸序列。SEQ ID NO 3表示編碼人CD83胞外結構域(hCD83ext)的胺基酸序列的cDNA。SEQ ID NO 4表示人CD83胞外結構域(hCD83ext)的胺基酸序列。SEQ ID NO 5表示在氨基末端還包含胺基酸殘基(Gly-Ser-Pro-Gly ；SEQ ID NO 41)和在羧基末端還包含跨膜結構域的第一個胺基酸(Ile)的人CD83胞外結構域的胺基酸 序列。SEQ ID NO 6表示其中在位置114的第5個半胱氨酸已突變為絲氨酸殘基的SEQ ID NO 5的變體。SEQ IDSEQ ID
切割位點隔開。SEQ ID
結構域。SEQIDSEQIDSEQIDSEQIDSEQIDSEQIDSEQIDSEQIDSEQIDSEQID
5
NO 7表示其中殘基Xaa表示任何胺基酸的SEQ ID NO 5的變體。
NO 8表示GST-hCD83ext融合蛋白。GST和hCD83ext結構域通過凝血酶
NO :9表示還包含跨膜結構域的第一個胺基酸(Ile)的野生型h⑶83胞外
NO 10表示編碼SEQ ID NO 9的m5 C2S突變體的DNA。
NO 11 表示 SEQ ID NO 9 的 m5 C2S 突變體。
NO 12表示編碼SEQ ID NO 9的m2 C2S突變體的DNA。
NO 13 表示 SEQ ID NO 9 的 m2C2S 突變體。
NO 14表示編碼SEQ ID NO 9的m3 C2S突變體的DNA。
NO 15 表示 SEQ ID NO 9 的 m3C2S 突變體。
NO 16表示編碼SEQ ID NO 9的m4 C2S突變體。
NO 17 表示 SEQ ID NO 9 的 m4 C2S 突變體。
NO 18表示編碼SEQ ID NO 9的m2，3 C2S突變體的DNA。
NO 19 表示 SEQ ID NO 9 的 m2，3 C2S 突變體。
SEQIDNO20表示編碼SEQ ID NO 9的m3，4 C2S突變體的DNA。
SEQIDNO21 表示 SEQ ID NO 9 的 m3，4 C2S 突變體。
SEQIDNO22表示編碼SEQ ID NO :9的m2，5 C2S突變體的DNA。
SEQIDNO23 表示 SEQ ID NO 9 的 m2，5 C2S 突變體。
SEQIDNO24表示編碼SEQ ID NO :9的m3，5 C2S突變體的DNA。
SEQIDNO25 表示 SEQ ID NO 9 的 m3，5 C2S 突變體。
SEQIDNO26表示編碼SEQ ID NO :9的m4，5 C2S突變體的DNA。
SEQIDNO27 表示 SEQ ID NO 9 的 m4, 5 C2S 突變體。
SEQIDNO28表示編碼SEQ ID NO :9的m2，3，5 C2S突變體的DNA。
SEQIDNO: 表示 SEQ ID N0:9 的 m2，3，5 C2S 突變體。
SEQIDNO30表示編碼SEQ ID NO :9的m3，4，5 C2S突變體的DNA。
SEQIDNO:31 表示 SEQ ID N0:9&m3，4，5 C2S 突變體。
SEQIDNO:32表示用於在SEQ ID NO :9的第2個半胱氨酸上進行C2S誘變的引物。
SEQ ID NO 33表示用於在SEQ ID NO 9的第3個半胱氨酸上進行C2S誘變的引 物。
SEQ ID NO :；34表示用於在SEQ IDNO :9的第四個半胱氨酸上進行C2S誘變的引物。
SEQ ID NO :；35表示來自Pan trogloytes (黑猩猩)的CD83蛋白質，且對應NCBI 參考序列XP_518M8. 2。
SEQ ID NO :36 表示來自 Canis lupus famiIiaris (狗)的 CD83 蛋白質，且對應 NCBI 參考序列XP_852647. 1。
SEQ ID NO :37表示來自Bos taurus (牛)的CD83蛋白質，且對應NCBI參考序列 ΝΡ_001040055. 1。
SEQ ID NO :38表示來自Mus musculus (小鼠)的CD83蛋白質，且對應NCBI參考 序列NP_033986. 1。
SEQ ID NO :39表示來自Rattus norvegicus (挪威大鼠)的CD83蛋白質，且對應 NCBI 參考序列XP_341510. 2。
SEQ ID NO :40表示來自Gallus gallus (紅原雞)的CD83蛋白質，且對應NCBI參 考序列XP_418^. 1。
SEQ ID NO :41 對應 Gly-Pro-Ser-Gly。


圖1為使用選項-maxitiers 2、通過MUSCLE版本3. 6產生的蛋白質序列比對 (參見 Edgar RC (2004) Nucleic Acids Res 32(5) :1792-7)。NP_00424. 1 (SEQ ID NO :2) 為人 CD83 蛋白質(SEQ ID NO :2)。XP_518248. 2 為黑猩猩 CD83 蛋白質(SEQ ID NO :35)。 XP_852647. 1 為狗 CD83 蛋白質(SEQ ID NO :37)。NP_001040055. 1 為牛 CD83 (SEQIDN0 37)。NP_033986. 1 為小鼠 CD83 (SEQ ID NO :38)。XP_341510. 2 為大鼠 CD83 (SEQIDN0 :39)。 XP_41829. 1為紅原雞⑶83 (SEQ ID NO :40)。加下劃線的胺基酸殘基可被任意胺基酸取代。 加下劃線和粗體胺基酸優選可被保守胺基酸取代。未加下劃線的胺基酸殘基為未取代的。6
圖2為質粒pGEX2HiCD83ext的示意圖。
圖3顯示使用80 (泳道2)、40 (泳道3)、20 (泳道4)、10 (泳道5_8)或5 (泳道9_13) U/mL的凝血酶在柱上進行凝血酶切割GST-h⑶83ext後，被洗脫的級分的SDS-PAGE解析圖。 泳道7和8顯示用10U/mL凝血酶消化和穀胱甘肽洗脫後獲得的GST級分。泳道11-13顯 示用5U/mL凝血酶消化和穀胱甘肽洗脫後獲得的GST級分。泳道1 分子量標記。凝血酶 (Sigma)中存在的汙染物蛋白質示於虛線框內。
圖4A顯示通過使用陰離子交換色譜法的h⑶83ext的精製(polishing)步驟的典 型的二峰色譜圖包括兩個主要的峰。圖4B顯示每個精製級分的SDS-PAGE分析。泳道2_5 表示第一個峰，泳道6-9表示第二個峰。泳道1表示上樣到陰離子交換色譜柱進行精製的 GST處理後(post-GST)樣品。請注意h⑶83ext在第一個峰中，而其他汙染物蛋白質在第 二個峰中。用硝酸銀染色凝膠。
圖5顯示使用還原SDS-PAGE和考馬斯藍染色的不同h⑶83ext樣品批次的分析。 蛋白質樣品儲存在_20°C，並在20mM Tris、50mM NaCl、50%甘油中配製，泳道3的樣品不含 甘油。這些批次是在幾個不同的日期製成的，因此在進行分析之前已被儲存不同的時間長 度(即泳道2-10分別為4、3、3、2、10.5、9.5、6.5、6、6個月)。箭頭指示單體的位置。此外， 可以看見較高分子量的物質，可能對應多聚體形式。較低分子量形式對應降解產物，或可能 通過非常規的分子內二硫鍵介導的修飾的單體。
圖6顯示使用非還原SDS-PAGE和考馬斯藍染色的不同h⑶83ext樣品批次的分 析，且突出顯示單體和二聚體的遷移。蛋白質樣品儲存在-20°C，並且除了不含甘油的泳道 3的樣品以外，在20mM Tris、50mM NaCl、50%甘油中配製。這些批次是在幾個不同的日期 製成的，因此在進行分析時已具有不同的「年齡」(即泳道2-10分別為4、3、3、2、10· 5,9. 5、 6. 5、6、6個月)。泳道3、6和7中的箭頭突出顯示幾種可能通過非常規分子內二硫鍵介導 的不常見的h⑶83ext物質。
圖7顯示通過(A)還原SDS-PAGE、(B)非還原SDS-PAGE和(C)Western印跡法的 hCD83ext樣品的分析。SDS凝膠用硝酸銀進行染色，以使得較高多聚合物質(如三聚體和 四聚體)可見。通過Wfestern印跡法確定所有的這些物質與h⑶83ext有關。
圖8為顯示來自h⑶83m-2，5的精製步驟的峰的AEC色譜圖。
圖9顯示純化的⑶83m-2，5級分的還原SDS-PAGE分析。
圖10顯示純化的⑶83m-2，5級分的非還原SDS-PAGE分析。
圖11顯示使用圓二色性(⑶)的⑶83m-2，5的光譜分析。
圖12顯示CD83m_2，5的分光螢光分析。
圖13顯示使用圓二色性的⑶83m-2的光譜分析。
圖14為顯示來自h⑶83m-3的精製步驟的峰的AEC色譜圖。
圖15顯示使用SDS-PAGE (圖15)、⑶(圖16和圖17)和分光螢光法(圖18)對純 化的⑶83m-3SDS-PAGE分析進行結構表徵，結果與野生型h⑶83ext和⑶83m_5相似。
圖16顯示使用CD，對配製在20mM Tris、50mM NaCl.pH 7. 5中的CD83m_3和野生 型CD83 (批次004-04)的光譜分析。
圖17顯示使用⑶的⑶83m-3 (配製為pH 7. 0或7. 5)的光譜分析。
圖18顯示配製為7. 0或7. 5的⑶83m_3的分光螢光分析。7
圖19顯示單體形式的h⑶83ext_m3、h⑶83ext_m5和單體和二聚體形式的野生型 hCD83ext的非還原SDS-PAGE分析。
圖20顯示單體形式的hCD83ext-m3 (m3)、hCD83ext_m5 (m5)和單體和二聚體形式 的不同日製成的三種野生型hCD83ext製劑(004_4、007和02 的非還原SDS-PAGE分析， 其經過或未經過NEM的預處理以防止二硫鍵的擾亂。
圖21顯示hCD83ext-m3、hCD83ext_m5和三種不同的野生型hCD8;3ext製劑的大小 排阻色譜法的結果。所有的製劑均經過NEM處理，以防止二硫鍵的擾亂。第一個(左)峰 表示二聚體，而第二個(右)峰表示單體。
圖 22 顯示 hCD83ext-m3 (m3)、hCD83ext_m5 (m5)和三種不同的野生型 hCD8;3ext 制 劑(wt 004-4、wt 007 和 wt 023)的還原 SDS-PAGE 分析。
圖23顯示突變單體hCD83ext_m5和兩種不同的野生型hCD83ext製劑(004-4和 023)的大小排阻色譜法的結果。
圖M顯示兩種不同的h⑶83ext_m5製劑(501和502)和6種不同的野生型 hCD8;3ext 製劑(007、100、021、023、80 和 90)的非還原 SDS-PAGE 分析。
圖25顯示不同的hCD83ext_m5和野生型hCD8;3ext製劑的非還原Western印跡分 析。
圖沈顯示通過產生TNFa的單核細胞的百分比或通過每個細胞產生的TNF α的 平均量測量的，不同的野生型hCD83ext、hCD83ext-m3和hCD83ext_m5製劑通過LPS/IFN γ 刺激的靈長類PBMC來抑制TNF α的產生的能力。
圖27顯示通過產生TNFa的單核細胞的百分比或通過每個細胞產生的TNF α的 平均量(MFU)測量的，野生型hCD83ext、hCD83ext-m3和hCD83ext-m5(均配製為pH7. 6)通 過LPS/IFN γ刺激的靈長類PBMC來抑制TNF α的產生的能力。
圖觀顯示通過產生TNFa的單核細胞的百分比或通過每個細胞產生的TNF α的 平均量(MFU)測量的，野生型hCD83ext (配置為pH 4. 5或5. 5)和hCD83ext_m5 (配置為pH 7. 6)通過LPS/IFN γ刺激的靈長類PBMC來抑制TNF α的產生的能力。
圖四顯示通過產生TNFa的單核細胞的百分比或通過每個細胞產生的TNF a 的平均量(MFU)測量的，野生型h⑶83ext(配置為pH 4. 5或5. 5)或突變體形式的 hCD83ext-m3 (配置為 pH 5. 5)和 hCD83ext_m5 兩種製劑(配置為 pH 7. 6)通過 LPS/IFN γ 刺激的靈長類PBMC來抑制TNF α的產生的能力的差異。
圖30顯示通過產生TNFa的單核細胞的百分比測量的，野生型h⑶83ext (批次 ARG-021，配製為pH 7. 6)和4種單體突變hCD83ext_m3 (配置為pH 4. 5或5. 5)通過LPS/ IFN γ刺激的人PBMC來抑制TNF α的產生的能力的差異。
圖31-35顯示通過非還原(左泳道)和還原(右泳道)SDS-PAGE分析的pH和溫 度對野生型h⑶83ext (批次021)的影響。
圖36為顯示P0D140上大鼠腎臟同種異體移植的病理分級的圖。中值分數0 = 正常；1 =最小改變；2 =輕度改變；3 =中等改變；4 =顯著改變。
圖37為顯示P0D140上大鼠腎臟同種異體移植的免疫組織化學分級的圖。0 =正 常；1 =最小改變；2 =輕度改變；3 =中等改變；4 =顯著改變。8發明內容
本發明提供了具有改良的穩定性的新型可溶性CD83(sCD83)多肽。一方面，提供 了分離的s⑶83多肽，其包含胺基酸序列SEQ ID NO 7或與胺基酸序列SEQ ID NO :7具 有至少70%同一性的胺基酸序列；其中胺基酸殘基1、2、3、4和130中的一個或多個可選地 缺失，且胺基酸殘基12、20、85、92和114為表1任一排中所示的胺基酸。優選地，胺基酸殘 基85為半胱氨酸以外的胺基酸，最優選地，胺基酸殘基85為絲氨酸。
在另一方面，提供了分離的s⑶83多肽，其包含胺基酸序列SEQ ID NO :7或與氨基 酸序列SEQ ID NO :7具有至少70%同一性的胺基酸序列；其中SEQ ID NO 7的胺基酸殘基 12、20、85和92中的一個或多個缺失或為半胱氨酸以外的胺基酸；且可選地，胺基酸殘基1、 2、3、4和130中的一個或多個缺失。
優選地，分離的sCD83 多肽包含選自 SEQ ID NO 13、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :27、SEQ IDNO 29和SEQ ID NO 31的胺基酸序列；其中可選地，胺基酸殘基1 缺失。
在另一方面中，提供了編碼本發明的多核苷酸的核酸以及包含該多核苷酸的載體 和細胞。該載體和細胞可用於產生本文公開的sCD83組合物。
本文提供的SCD83多肽可用於治療或預防受試者中不希望的免疫應答，例如自身 免疫性疾病、移植排斥和變態反應。因此，提供了包含新型SCD83多肽的藥物組合物，以及 使用該新型sCD83多肽組合物治療自身免疫性疾病、移植排斥和變態反應的方法。
在再另一方面中，提供了在哺乳動物移植受體中改善移植結果的方法，包括向所 述受體施用治療有效量的前述sCD83多肽和一種或多種免疫抑制劑，其中該免疫抑制劑與 所述多肽協同作用以改善移植結果。
具體實施方式
本發明人已發現，可溶性CD83(sCD83)、特別是對應SEQ ID NO :5和SEQ ID NO: 6的h⑶83ext多肽在儲存中失去穩定性。令人驚奇的是，據發現，h⑶83ext的第3個半胱 氨酸殘基的突變導致提高的穩定性和類似的生物活性。該結果是意想不到的，因為如上討 論，Zinser 等人(Immunobiology (2006) 211 :449-453)公開了 h⑶83ext 形成同型二聚體， 而h⑶83ext的前4個半胱氨酸參與分子內二硫鍵的形成。因此，根據Zinser所述，人們將 會預期，hCD83ext的前四個半胱氨酸中的每一個對維持胞外結構域的適當的構型都是關鍵 的。意想不到的是，對這些半胱氨酸殘基的突變會提高穩定性。此外，發現當在低PH下、優 選在pH 4. 0-5. 0，最優選在pH約4. 5緩衝時，還可以進一步提高穩定性。野生型s⑶83蛋 白質看起來是不穩定的，且對影響溫度、PH、脫醯胺作用和水解的條件敏感。
表1示出了在hCD83ext的5個半胱氨酸殘基中的一個或多個具有胺基酸取代的 一些本發明的新型SCD83多肽。術語「不是Cys」是指半胱氨酸以外的任意標準或非標準 的胺基酸。優選地，半胱氨酸殘基的取代為保守取代，從而具有極性、不帶電R基團的氨基 酸(如絲氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸、天冬醯胺、穀氨醯胺，和非標準胺基酸硒代半胱氨酸)取 代半胱氨酸。可選地，半胱氨酸殘基可以缺失，而不被取代。表1顯示SEQ ID N0:7中為半 胱氨酸殘基的取代或缺失的潛在位點的5個胺基酸位置。SEQ ID NO :7為SEQ ID NO 5的 變體，其中SEQ ID而5的5個半胱氨酸殘基(即殘基12、20、85、92和114)中的一個或多9個可缺失或被可替代的胺基酸取代。
表 1
SEQ ID NO 7的CD83ext變體的非限定性實例
權利要求
1.一種分離的s⑶83多肽，其包含胺基酸序列SEQ ID NO 7或與胺基酸序列SEQ ID NO :7具有至少70%同一性的胺基酸序列；其中SEQ ID NO :7的胺基酸殘基12、20、85和92 中的一個或多個缺失或為半胱氨酸以外的胺基酸；且可選地，胺基酸殘基1、2、3、4和130中 的一個或多個缺失。
2.如權利要求1所述的多肽，其中胺基酸殘基85為半胱氨酸以外的胺基酸殘基。
3.如權利要求2所述的多肽，其中胺基酸殘基12、20、92和114為半胱氨酸。
4.如權利要求3所述的多肽，其中胺基酸殘基85為絲氨酸。
5.如權利要求1-4中任一項所述的多肽，其中所述序列同一性為至少95%。
6.如權利要求5所述的多肽，其中所述序列同一性為100%。
7.如權利要求1所述的多肽，其由選自SEQID N0:7、SEQ ID NO :7的胺基酸殘基 1-129、SEQ ID NO 7的胺基酸殘基5-1 和SEQ ID NO 7的胺基酸殘基5-130的序列組 成。
8.如權利要求7所述的多肽，其中胺基酸殘基12、20、92和114為半胱氨酸。
9.如權利要求8所述的多肽，其中胺基酸殘基85為絲氨酸。
10.一種分離的 sCD83 多肽，其包含選自 SEQ ID NO 13,SEQ ID NO 15,SEQ ID NO: 17、 SEQ ID NO :19, SEQ ID N0:21、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :25, SEQ ID NO :27、SEQ ID NO: 29和SEQ ID NO :31的胺基酸序列；其中可選地，胺基酸殘基1 缺失。
11.一種含有權利要求1-10中任一項所述的多肽的藥物組合物。
12.—種編碼權利要求1-10中任一項所述的多肽的多核苷酸。
13.一種治療或預防哺乳動物受試者中不需要的免疫應答的方法，包括向所述受試者 施用權利要求1-10中任一項所述的多肽。
14.如權利要求13所述的方法，其中所述不希望的免疫應答選自自身免疫性疾病、移 植排斥和變態反應。
15.如權利要求14所述的方法，其中所述自身免疫性疾病選自系統性紅斑狼瘡、1型糖 尿病、天皰瘡、格雷夫斯病、橋本甲狀腺炎、重症肌無力、自體心肌炎、多發性硬化症、類風溼 性關節炎、牛皮癬、自身免疫性葡萄膜視網膜炎、血管炎、慢性炎性腸病、克羅恩病或潰瘍性 結腸炎、白赫鐵列夫症、強直性脊柱炎和慢性阻塞性肺病(COPD)。
16.如權利要求15所述的方法，其中所述不希望的免疫應答為移植排斥。
17.如權利要求13-16中任一項所述的方法，其進一步包括施用環孢菌素A(CsA)；雷帕 黴素加上抗-⑶45RB單克隆抗體；和他克莫司(Π(506)加上嗎替麥考酚酯(MMF)中的一種 或多種。
18.權利要求1-10中任一項所述的多肽在製備用於治療或預防哺乳動物受試者中不 希望的免疫應答的藥物中的用途。
19.如權利要求18所述的用途，其中所述不希望的免疫應答選自自身免疫性疾病、移 植排斥和變態反應。
20.如權利要求19所述的用途，其中所述自身免疫性疾病選自系統性紅斑狼瘡、1型糖 尿病、天皰瘡、格雷夫斯病、橋本甲狀腺炎、重症肌無力、自體心肌炎、多發性硬化症、類風溼 性關節炎、牛皮癬、自身免疫性葡萄膜視網膜炎、血管炎、慢性炎性腸病、克羅恩病或潰瘍性 結腸炎、白赫鐵列夫症、強直性脊柱炎和慢性阻塞性肺病(COPD)。
21.一種改善哺乳動物移植受體中移植結果的方法，其包括向所述受體施用治療有效 量的權利要求1-10中任一項所述的多肽和一種或多種免疫抑制劑，其中所述免疫抑制劑 與所述多肽協同作用以改善移植結果。
22.如權利要求21所述的方法，其中所述免疫抑制劑為環孢菌素A。
23.如權利要求21所述的方法，其中所述免疫抑制劑為雷帕黴素加上抗-CD45RB單克 隆抗體；或他克莫司(Π(506)加上嗎替麥考酚酯(MMF)。
全文摘要
本發明提供了用於治療或預防不希望的免疫應答的組合物和方法。該組合物涉及新型可溶性CD83(sCD83)多肽和編碼該多肽的核酸、改良的(sCD83)製劑，以及該多肽和製劑在治療或預防變態反應、自身免疫性疾病和移植排斥中的用途。本發明提供了包含SEQ ID NO7或與SEQ ID NO7具有至少70％同一性的胺基酸序列的sCD83多肽；其中，SEQ ID NO7的胺基酸殘基12、20、85和92中的一個或多個為半胱氨酸以外的胺基酸；且可選地，胺基酸殘基1、2、3、4和130中的一個或多個缺失。
文檔編號A61K48/00GK102036690SQ200980118634
公開日2011年4月27日 申請日期2009年5月22日 優先權日2008年5月23日
發明者C-H·周, M·莫-楊, S·布蘭德 申請人:阿哥斯醫療公司