治療痛風的方法

2023-08-03 20:27:26 1

專利名稱：治療痛風的方法
技術領域：
本發明涉及治療和/或預防痛風的方法和物質。此類方法和物質可以用於治療罹 患痛風的個體或預防處於危險的個體出現痛風。
背景技術：
本發明涉及治療和/或預防個體痛風的方法和物質。此類方法和物質可以用於治 療遭受痛風的哺乳動物(例如人)個體或預防處於危險的個體出現痛風。痛風是一種引起關節劇痛和腫脹的急性關節炎形式。2002年，在美國大概有390 萬門診人次檢查痛風性關節炎。與其它風溼性疾病不同，痛風的病因學已被很好地闡明， 其病理生理學得到充分理解，且該疾病容易被診斷。對於很多患者，用非留體類抗炎藥 (NSAID)或皮質類固醇與降低血清尿酸水平的活性劑治療急性發作以及預防復發是高效 的。但是，這些療法不足以滿足很多患有急性、慢性或難治性痛風的患者，因為其缺乏足夠 的臨床療效、相關毒性或因為共存疾病。痛風是晶體在組織中，通常是在關節內和關節周圍，的沉澱，最常引起復發性急性 或慢性關節炎。該疾病的特點是尿酸單鈉(MSU)晶體在組織中，通常在關節內與關節周圍以及在 滑液和滑膜襯裡中的沉澱，以及通常地血液中尿酸的過量。當白細胞吞食尿酸晶體時，產生 劇烈的關節炎症，引起關節組織的疼痛、發熱和發紅。痛風性關節炎的原因是尿酸單鈉晶體 誘發的促炎細胞因子從白細胞中的釋放。在所牽涉的許多細胞因子中，IL-I可能在炎性網 絡系統中起著特殊的作用，因為MSU晶體會刺激IL-I自單核細胞和滑膜單核細胞釋放。急 性痛風突發通常來得突然，5至10天後消失，而且可能持續復發。IL-I β是由包括單核細胞和巨噬細胞在內的許多不同細胞類型分泌的促炎細胞 因子。當作為炎症反應的一部分釋放時，IL-I β產生一系列生物效應，所述生物效應主要 通過誘導其它炎症介質例如促腎上腺皮質素、血小板因子_4、前列腺素E2(PGE2)、IL-6和 IL-8來介導。IL-I β通過激活存在於幾乎所有細胞類型中的IL-I受體來誘導局部和全身 性炎症效應。細胞因子白介素-I(IL-I)家族已被提示牽涉許多疾病狀態。IL-I家族成員 包括IL-I α、IL-1 β和IL-IRa0儘管通過其與IL-1受體(IL-1R1和IL-1R2)結合的能力 而相關聯，但是這些細胞因子中的每一個都是不同的，由不同基因表達且具有不同的一級 胺基酸序列。而且，這些細胞因子的生理活性可以彼此區分。已經出版了表明IL-I β和其它炎症介質與痛風明顯相關的實驗(參見例如， Petrilli 等人，Joint Bone Spine(2007)74 :571_576 ;Pope 等人，Arthritis Rheum. (2007)56 3183-3188 ；Chen 等人，J. Clin. Invest. (2006) 116 :2073_2075 ；Akahoshi Τ.等人，Curr. Opin. Rheumatol. (2007) 19 146—150 ；Martinon F.等人，Nature (2006)440 237-241 ；和 Cronstein 等人，Arthritis Res. Ther. (2006)8，Supp 1. 1 :S3)。So 等人， Arthritis Res. Ther. (2007)9(2) :R28描述了在開放標籤研究中使用重組IL-I受體拮抗 劑(IL-lRa，阿那白滯素)治療急性痛風，用IOOmg的日劑量皮下給藥3天。McGonagle等 人，Ann. Rheum. Dis. (2007)66 =1683-1684 描述了使用重組 IL-I 受體拮抗劑(IL_lRa，阿那 白滯素)治療痛風患者，給患者連續每天皮下給藥lOOmg。可注射用藥的每天給藥通常是不 希望的，並可能產生患者順從性等問題，由此減少了這種治療方式的有效性/或限制了其 需要性。因此，仍需要治療痛風的有效方法，特別是對不需要頻繁(例如每天)注射的治療 組合物和方法的需要。由於現有療法存在的問題，所以需要新的痛風治療療法代替或補充現有的藥學方 法。本發明提供了用於治療痛風(例如急性痛風、慢性痛風、難治性痛風)的組合物和方法。 本文公開的方法包括，例如施用抗IL-I β抗體或其片段。用抗體，特別是顯示高親和力的 抗體，直接靶向IL-I β配體的方法提供了優於其它可能的治療方法例如IL-I β受體拮抗 劑(例如IL-IRa，阿那白滯素)的優點。基於IL-I受體拮抗劑的療法所遭遇到的挑戰是這 些治療劑需要佔據大量受體，而這是艱巨的任務，因為這些受體在除紅細胞之外的所有細 胞上廣泛表達(Dinarello, Curr. Opin. Pharmacol. 4 =378-385,2004)。在大多數免疫介導 的疾病(例如本文公開的疾病)中，在體液中可測量的或與活化細胞有關的IL-I β細胞因 子的量相對較低。因此，直接靶向IL-I β配體的治療和/或預防方法應是更優的策略，特 別是當施用具有高親和力的IL-I β抗體時。發明概述本發明涉及治療和/或預防個體痛風的組合物和方法。此類組合物和方法可以用 於治療罹患痛風或有痛風危險的哺乳動物個體(例如人)。所述方法和物質還可以用於預 防處於危險的個體出現痛風。在本發明的一個方面，提供了治療個體(例如人個體)痛風的方法，所述方法包括 給該個體施用(例如治療有效量的)抗IL-I β抗體或其片段。在本發明的一個實施方案 中，痛風是慢性痛風。在另一個實施方案中，痛風是急性痛風。在又一個實施方案中，痛風 是難治性痛風。在另一個方面，本發明提供了治療個體(例如人個體)痛風的方法，所述方法包括 給該個體施用(例如治療有效量的)抗IL-I β抗體或其片段，其中該抗體或片段的劑量足 以實現關節疼痛的至少50%的減少。在一個實施方案中，該抗IL-I β抗體或其片段足以 實現關節疼痛的至少60%的減少，關節疼痛的至少70%的減少，關節疼痛的至少80%的減 少，關節疼痛的至少90%的減少，關節疼痛的至少95%的減少或關節疼痛的100%的減少。在本發明的另一個方面，該抗體或片段的劑量足以實現C-反應蛋白(CRP)水平的 至少20%的下降，CRP水平的至少30%的下降，CRP水平的至少40%的下降，CRP水平的至 少50%的下降，CRP水平的至少60%的下降，CRP水平的至少70%的下降，CRP水平的至少 80%的下降，CRP水平的至少90%的下降。在一個優選的實施方案中，該抗體或片段的劑量 足以實現關節疼痛的至少50%的減少和CRP水平的至少20%的下降，CRP水平的至少30% 的下降、CRP水平的至少40 %的下降、CRP水平的至少50 %的下降、CRP水平的至少60 %的 下降、CRP水平的至少70 %的下降、CRP水平的至少80 %的下降和/或CRP水平的至少90 %
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在本發明的另一個方面，該抗體或片段的劑量足以實現紅細胞沉降率(ESR)的至 少20%的下降，ESR的至少40%的下降，ESR的至少50%的下降，ESR的至少60%的下降， ESR的至少70%的下降，ESR的至少80%的下降，ESR的至少90%的下降。在一個優選的實 施方案中，該抗體或片段的劑量足以實現關節疼痛的至少50%的減少和ESR的至少20%的 下降、ESR的至少40%的下降、ESR的至少50%的下降、ESR的至少60%的下降、ESR的至少 70%的下降、ESR的至少80%的下降和/或ESR的至少90%的下降。在另一個方面，本發明提供了治療個體(例如人個體)痛風的方法，所述方法包括 給該個體施用(例如治療有效量的)抗IL-I β抗體或其片段，其中該抗體或片段的劑量足 以實現關節疼痛的至少50%的減少，CRP水平的至少20%的下降和ESR的至少20%的下 降。在一個實施方案中，該抗體或片段的劑量足以實現關節疼痛的至少50%的減少，CRP水 平的至少30%的下降和ESR的至少30%的下降。在另一個實施方案中，該抗體或片段的劑 量足以實現關節疼痛的至少50%的減少，CRP水平的至少40%的下降和ESR的至少40%的 下降。在另一個實施方案中，該抗IL-I β抗體或片段的劑量足以實現關節疼痛的至少60% 的減少，CRP水平的至少20%的下降和ESR的至少20%的下降。在另一個實施方案中，該 抗IL-I β抗體或片段的劑量足以實現關節疼痛的至少60%的減少，CRP水平的至少40% 的下降和ESR的至少40%的下降。在另一個實施方案中，該抗IL-I β抗體或片段的劑量 足以實現關節疼痛的至少60%的減少，CRP水平的至少50%的下降和ESR的至少50%的下 降。在又一個實施方案中，該抗IL-I β抗體或片段的劑量足以實現關節疼痛的至少70%的 減少，CRP水平的至少20%的下降和ESR的至少20%的下降。在另一個實施方案中，該抗 IL-I β抗體或片段的劑量足以實現關節疼痛的至少70%的減少，CRP水平的至少40%的下 降和ESR的至少40%的下降。在另一個實施方案中，該抗IL-I β抗體或片段的劑量足以實 現關節疼痛的至少70%的減少，CRP水平的至少50%的下降和ESR的至少50%的下降。用於本文所公開的方法的抗IL-Ιβ抗體或抗體片段通常以高親和力結合 IL-Ιβ。在一個優選的實施方案中，本發明提供了治療個體(例如人個體)痛風的方法，所 述方法包括給該個體施用(例如治療有效量的)抗IL-I β抗體或其片段，其中該抗體或抗 體片段與IL-I β結合，解離常數為約IOnM或更少、約5ηΜ或更少、約InM或更少、約500ρΜ 或更少、約250ρΜ或更少、約IOOpM或更少、約50ρΜ或更少或約25ρΜ或更少。在特別優選 的實施方案中，該抗體或抗體片段與人IL-I β結合，解離常數為約IOOpM或更少、約50ρΜ 或更少、約IOpM或更少、約5ρΜ或更少、約3ρΜ或更少、約IpM或更少、約0. 75ρΜ或更少、約 0. 5ρΜ或更少、約0. 3ρΜ或更少、約0. 2ρΜ或更少、或約0. IpM或更少。在本發明的另一個方面，該抗IL-Ιβ抗體或抗體片段為中和抗體。在另一個方 面，該抗IL-I β抗體或抗體片段與IL-I β表位結合，從而該結合的抗體或片段基本上允許 IL-I β與IL-I受體I (IL-IRI)結合。在另一個方面，該抗IL-I β抗體或抗體片段與IL-I β 結合，但是基本上不阻止結合後的IL-I β與IL-I受體I (IL-IRI)結合。在另一個方面，該 抗體或抗體片段與IL-I α、IL-IR或IL-IRa結合不可檢測。在本發明的又一個方面，該抗 體或抗體片段與序列ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE(SEQ ID NO 1)中包含的表位結合。在另 一個方面，該抗體或其片段與具有SEQ ID NO 5的輕鏈可變區和SEQ ID NO 6的重鏈可變 區的抗體競爭結合。
在本發明的又一個方面，該抗體或抗體片段與IL-I β中包含Glu64的表位結合。 在本發明的又一個方面，該抗體或抗體片段與IL-I β的N末端胺基酸1-34結合。優選地， 該抗體或抗體片段是人工程化的、人源化的或人的。在另一個方面，本發明提供了治療表現痛風症狀、或有發生痛風的危險、患有痛 風的個體(例如哺乳動物、人)的方法，所述方法包括給該個體施用一個或多個劑量的抗 IL-I β抗體或其片段。在本發明的另一個方面，提供了用於治療個體(例如哺乳動物、人)痛風的方法， 所述方法包括給人施用抗IL-I β抗體或其片段，其中施用IL-I β抗體或抗體片段的初始 劑量後施用一個或多個後續劑量。在一個實施方案中，施用該抗體或抗體片段的初始劑量 後施用兩個或更多個後續劑量。在另一個實施方案中，施用該抗體或抗體片段的初始劑量 後施用一個或多個後續劑量，且其中所述一個或多個後續劑量在量上約等於或小於該初始 劑量。在另一個實施方案中，施用該抗體或抗體片段的初始劑量後施用一個或多個後續劑 量，且其中至少一個後續劑量在量上超過初始劑量。在又一個實施方案中，該抗體或抗體片 段為每急性痛風發作施用一次。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常 數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO 5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在一個實施方案中，施用抗體的2個或更多、3個或更多、4個或更多、5個或更多、 6個或更多、7個或更多、8個或更多、9個或更多、10個或更多、或者11個或更多個的後續劑 量。在另一個實施方案中，初始劑量和一個或多個後續劑量之每一個的施用彼此分開，間隔 至少約2周、至少約3周、至少約1個月、至少約2個月、至少約3個月、至少約4個月、至少 約5個月、至少約6個月、至少約7個月、至少約8個月、至少約9個月、至少約10個月、至 少約11個月、或至少約12個月。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常 數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO 5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在另一個實施方案中，該抗體或片段以一個或多個劑量施用，所述劑量為5mg/kg 或更少的抗體或片段、3mg/kg或更少的抗體或片段、2mg/kg或更少的抗體或片段、lmg/kg 或更少的抗體或片段、0. 75mg/kg或更少的抗體或片段、0. 5mg/kg或更少的抗體或片段、 0. 3mg/kg或更少的抗體或片段、0. lmg/kg或更少的抗體或片段、0. 03mg/kg或更少的抗體 或片段、0. 0lmg/kg或更少的抗體或片段、0. 003mg/kg或更少的抗體或片段或者0. OOlmg/ kg或更少的抗體或片段。優選地，在每一個上述實施方案中，該抗體或片段以一個或多 個劑量施用，所述劑量為至少0.01mg/kg抗體或片段、至少0.01mg/kg抗體或片段、或至 少0.03mg/kg抗體或片段。優選地，該抗體或片段以一個或多個劑量施用，所述劑量為 0. 00lmg/kg 至 lmg/kg、0. 00lmg/kg 至 0. 3mg/kg、0. 003mg/kg 至 lmg/kg、0. 003mg/kg 至 0. 3mg/kg。上述劑量是指mg (抗體或片段)/kg (待治療個體的重量)。在這些實施方案中， 可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。 此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO :5輕鏈可變區和SEQ ID NO :6重鏈可變區的抗體競 爭結合IL-I β。在另一個實施方案中，抗體或片段的初始劑量和一個或多個後續劑量各自為約 0. 0lmg/kg至約10mg/kg抗體、約0. 03至約lmg/kg抗體、約0. 03至約0. 3mg/kg抗體、約0. 05至約5mg/kg抗體、約0. 05mg/kg至約3mg/kg抗體、約0. lmg/kg至約3mg/kg抗體、約 0. lmg/kg 至約 lmg/kg 抗體、約 0. lmg/kg 至約 0. 5mg/kg 抗體、約 0. 3mg/kg 至約 5mg/kg 抗 體、約 0. 3mg/kg 至約 3mg/kg 抗體、約 0. 3mg/kg 至約 lmg/kg 抗體、約 0. 5mg/kg 至約 5mg/kg 抗體、約0. 5mg/kg至約3mg/kg抗體、約0. 5mg/kg至約lmg/kg抗體、約lmg/kg至約5mg/ kg抗體、或者約lmg/kg至約3mg/kg抗體。在某些實施方案中，施用2個或更多、3個或更 多、4個或更多、5個或更多、6個或更多、7個或更多、8個或更多、9個或更多、10個或更多、 或11個或更多個後續劑量的抗體。上述劑量是指mg (抗體或片段)/kg (待治療個體的重 量)。在下文中提及劑量時，這同樣適用。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM 的解離常數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有 SEQ ID NO 5輕鏈可變區和SEQ IDNO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在另一個方面，本發明提供了治療個體(例如人)痛風的方法，所述方法包括給該 個體施用治療有效量的抗IL-I β抗體或其片段，其中初始劑量為約5mg/kg或更少的抗體 或片段、3mg/kg或更少的抗體或片段、2mg/kg或更少的抗體或片段、lmg/kg或更少的抗體 或片段、0. 75mg/kg或更少的抗體或片段、0. 5mg/kg或更少的抗體或片段、0. 3mg/kg或更少 的抗體或片段，0. lmg/kg或更少的抗體或片段、或者0. 03mg/kg或更少的抗體或片段，並且 施用在量上約等於或小於該初始劑量的抗體或片段的多個後續劑量。在這些實施方案中， 可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。 此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO :5輕鏈可變區和SEQ ID NO :6重鏈可變區的抗體競 爭結合IL-I β。優選地，在以初始劑量和多個後續劑量的形式施用抗體或片段的上述實施方案 中，該抗體或片段的劑量為至少0. 00lmg/kg抗體或片段、至少0. 003mg/kg抗體或片段、至 少0. 0 lmg/kg抗體或片段、至少0. 03mg/kg抗體或片段，至少0. 05mg/kg抗體或片段、或至 少0.09mg/kg抗體或片段。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結 合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO 5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在本發明的又一個方面，以固定劑量的形式(不依賴於劑量/個體重量比)施用 抗體或片段。在一個實施方案中，施用一個或多個固定劑量的抗體或片段，所述固定劑量 為IOOOmg或更少的抗體或片段、750mg或更少的抗體或片段、500mg或更少的抗體或片段、 250mg或更少的抗體或片段、IOOmg或更少的抗體或片段、約25mg或更少的抗體或片段、約 IOmg或更少的抗體或片段、或者約1. Omg或更少的抗體或片段。在另一個實施方案中，以 一個或多個固定劑量施用抗體或片段，所述固定劑量為至少約0. Img的抗體或片段、至少 約Img的抗體或片段、至少約5mg的抗體或片段、或至少約IOmg的抗體或片段。在這些實 施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中 和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO 5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變 區的抗體競爭結合IL-I β。在某些實施方案中，該固定劑量為約Img至約10mg、約Img至約25mg、約IOmg至 約 25mg、約 IOmg 至約 50mg、約 IOmg 至約 IOOmgjA 25mg 至約 50mg、約 25mg 至約 lOOmg、約 50mg 至約 lOOmg、約 50mg 至約 150mg、約 IOOmg 至約 150mg、約 IOOmg 至約 200mg、約 150mg 至約 200mg、約 150mg 至約 250mg、約 200mg 至約 250mg、約 200mg 至約 300mg、約 250mg 至約
10300mg、約 250mg 至約 500mg、約 300mg 至約 400mg、約 400mg 至約 500mg、約 400mg 至約 600mg、 約 500mg 至約 750mg、約 600mg 至約 750mg、約 700mg 至約 800mg、約 750mg 至約 IOOOmg0 在一 個優選的實施方案中，以一個或多個約0. Img至約lOOmg、約1. Omg至約lOOmg、或約1. Omg 至約50mg的劑量，施用固定劑量。在另一個優選的實施方案中，固定劑量選自約Img至約 10mgJ々 Img 至約 25mg、約 IOmg 至約 25mg、約 IOmg 至約 lOOmg、約 25mg 至約 50mg、約 50mg 至約lOOmg、約IOOmg至約150mg、約150mg至約200mg、約200mg至約250mg。在這些實施 方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和 抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO 5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變區 的抗體競爭結合IL-I β。在另一個方面，本發明提供了治療個體痛風的方法，所述方法包括給該個體施用 治療有效量的抗IL-I β抗體或其片段，其中施用該抗體或抗體片段的初始劑量後施用一 個或多個後續劑量，且其中在用所述初始劑量和一個或多個後續劑量的治療過程中，允許 兩次施用之間有大於約1周且小於約6個月的時間所述抗體或抗體片段在人中的血漿濃度 減少至低於約0. 1 μ g/mL的水平。在一個實施方案中，允許兩次施用之間有大於約1周和 小於約5個月、約4個月、約3個月、約2個月、約1個月、約3周或約2周的時間，所述抗 體或抗體片段的血漿濃度減少至低於約0. 07 μ g/mL、約0. 05 μ g/mL、約0. 03 μ g/mL或約 0. 01 μ g/mL的水平。在一個實施方案中，這些血漿值是指針對用本發明抗體或片段治療的 個體所獲得的值。在一個實施方案中，個體可以是遭受痛風的患者。在這些實施方案中，可 以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此 類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO :5輕鏈可變區和SEQ ID NO :6重鏈可變區的抗體競爭 結合IL-I β。本發明考慮，依據本文方法所使用的抗IL-Ιβ抗體或片段可以以任何上述劑量、 後續施用次數和兩次施用間的給藥間隔進行施用，並且任何所公開的劑量、後續施用次數 和兩次施用間的給藥間隔可以在備選方案中彼此組合，以調節治療利益。在某些實施方案 中，所述一個或多個後續劑量在量上約等於或小於所施用的首劑量。在另一個實施方案中， 所述一個或多個後續劑量在量上約大於所施用的首劑量。優選地，該抗IL-I β抗體或片段 通過皮下、肌內或靜脈內注射進行施用。本發明考慮，抗體或片段的每個劑量可以在一個 或多個位點處進行施用。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合 IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID Ν0:5輕 鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在一個實施方案中，該抗IL-I β抗體或片段與至少一種其它的用於該疾病、病 症或併發症的醫學上接受的治療組合施用。在另一個實施方案中，減少或中斷所述至少 一種其它的用於該疾病、病症或併發症的醫學上接受的治療，而以恆定給藥方案維持用抗 IL-I β抗體或片段的治療。在另一個實施方案中，減少或中斷所述至少一種其它的用於該 疾病、病症或併發症的醫學上接受的治療，並且減少用抗IL-I β抗體或片段的治療。在另 一個實施方案中，減少或中斷所述至少一種其它的用於該疾病、病症或併發症的醫學上接 受的治療，並且增加用抗IL-I β抗體或片段的治療。在又一個實施方案中，維持所述至少 一種其它的用於該疾病、病症或併發症的醫學上接受的治療，並且減少或中斷用抗IL-I β 抗體或片段的治療。在又一個實施方案中，減少或中斷所述至少一種其它的用於該疾病、病
11症或併發症的醫學上接受的治療和用抗IL-I β抗體或片段的治療。在這些實施方案中，可 以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此 類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO :5輕鏈可變區和SEQ ID NO :6重鏈可變區的抗體競爭 結合IL-I β。在另一個方面，本文所提供的方法與至少一種另外的治療方法聯合，所述另外的 治療方法包括施用至少一種包含非IL-I β抗體或片段的活性劑的藥物組合物。在又一方 面，本發明方法阻止或延緩對至少一種另外的治療方法的需要，所述另外的治療方法包括 施用至少一種包含非IL-I β抗體或片段的活性劑的藥物組合物。在又一方面，本發明方法 減少至少一種另外的治療方法的量、頻率或持續時間，所述另外的治療方法包括施用至少 一種包含非IL-I β抗體或片段的活性劑的藥物組合物。在又一個實施方案中，維持用該至 少一種活性劑的治療。在另一個實施方案中，減少或中斷用該至少一種活性劑的治療，而以 恆定給藥方案維持用抗IL-I β抗體或片段的治療。在另一個實施方案中，減少或中斷用該 至少一種活性劑的治療，並且減少用抗IL-I β抗體或片段的治療。在另一個實施方案中， 減少或中斷用該至少一種活性劑的治療，並且增加用抗IL-I β抗體或片段的治療。在又一 個實施方案中，維持用該至少一種活性劑的治療，並且減少或中斷用抗IL-I β抗體或片段 的治療。在又一個實施方案中，減少或中斷用該至少一種活性劑的治療和用抗IL-I β抗體 或片段的治療。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的 抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO :5輕鏈可變區 和SEQ ID NO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在另一方面，本發明提供了治療個體痛風的方法，所述方法包括給該個體施用治 療有效量的抗IL-I β抗體或其片段，其中施用該抗體或抗體片段的初始劑量後施用一個 或多個後續劑量，且其中在用所述初始劑量和一個或多個後續劑量的治療過程中，所述抗 體或抗體片段在人中的血漿濃度被維持在下述水平至少約0. 03 μ g/mL、至少約0. 05 μ g/ mL、至少約0. 08 μ g/mL、至少約0. 1 μ g/mL、至少約0. 15 μ g/mL、至少約0. 2 μ g/mL、至少約 0. 25 μ g/mL、至少約 0. 3 μ g/mL、至少約 0. 4 μ g/mL、至少約 0. 5 μ g/mL、至少約 0. 6 μ g/mL、 至少約0. 8 μ g/mL、至少約1 μ g/mL、至少約1. 5 μ g/mL、至少約2 μ g/mL、至少約3 μ g/mL、 至少約4 μ g/mL、或者至少約5 μ g/mL。在一個實施方案中，這些血漿值是指針對用本發明 抗體或片段治療的個體所獲得的值。在一個實施方案中，此類個體可以是遭受痛風的患者。 在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的抗體或抗體片段 (例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO 5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6 重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在另一個方面，本發明提供了治療個體痛風的方法，所述方法包括給該個體施用 治療有效量的抗IL-I β抗體或其片段，其中在測量IL-I β誘導的IL-8生成的人全血 IL-I β抑制試驗中，所述抗體或其片段具有比IL-I β受體拮抗劑更小的IC5(I。在一個實施 方案中，在測量IL-Ιβ誘導的IL-8生成的人全血IL-Ιβ抑制試驗中，該抗體或片段的IC5tl 小於IL-I β受體拮抗劑的IC5tl的約90%、80%、70%、60%、50%。在另外的一個實施方案 中，在測量IL-I β誘導的IL-8生成的人全血IL-I β抑制試驗中，該抗體或片段的IC5tl小 於IL-Ιβ受體拮抗劑的IC5tl的約40%、30%、20%、10%。在一個優選的實施方案中，在測 量IL-I β誘導的IL-8生成的人全血IL-I β抑制試驗中，該抗體或片段的IC5tl小於IL-I β受體拮抗劑的IC5tl的約8%、5%、4%、3%、2%、1%。在一個實施方案中，該IL-I β受體拮 抗劑是阿那白滯素(即Kineret )。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解 離常數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO 5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在另一個方面，本發明提供了治療個體痛風的方法，所述方法包括給該個體施用 治療有效量的抗IL-Ιβ抗體或其片段，其中使用由Economides等人，Nature Med. ,9 47-52(2003)(其通過引用併入本文)描述的試驗，與對照抗體相比較，所述抗體或其片段 在小鼠中體內抑制IL-Ιβ刺激的IL-6釋放。在一個實施方案中，與對照抗體相比較，該抗 體或片段對小鼠內IL-I β刺激的IL-6釋放，提供至少約10%、20%、30%、40%、50%的體 內抑制。在另外的一個實施方案中，與對照抗體相比較，該抗體或片段針對小鼠內IL-Ιβ 刺激的IL-6釋放，提供至少約60%、70%、80%、90%、95%的體內抑制。在一個實施方案 中，對照抗體是同種型對照抗體。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常 數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO 5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在另一方面，本發明提供了治療個體痛風的方法，所述方法包括給該個體施用治 療有效量的抗IL-I β抗體或其片段，其中與未使用抗體的對照相比較，所述抗體或其片段 抑制人全血中表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)誘導的細胞因子生成。在一個 實施方案中，與對照相比較，該抗體或片段針對人全血中表皮葡萄球菌誘導的細胞因子生 成，提供高至少約10%、20%、30%、40%、50%的抑制。在另外的一個實施方案中，與對照相 比較，該抗體或片段針對人全血中表皮葡萄球菌誘導的細胞因子生成，提供高至少約60%、 70%、80%、90%、95%的抑制。在一個實施方案中，所述抑制的細胞因子是IL-I β、IL_la、 IL-6、IL-8、IL-lRa、TNFa或IFN γ。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解 離常數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO 5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在另一個方面，本發明公開了在測量IL-I β誘導的IL-8生成的人全血IL-I β抑 制試驗中比IL-Ιβ受體拮抗劑具有更小的IC5tl的抗IL-I β抗體或其片段在製備用於治 療痛風的組合物中的用途。在一個實施方案中，該IL-I β受體拮抗劑是阿那白滯素(即 Kineret )。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的 抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO :5輕鏈可變區 和SEQ ID NO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在本發明的另一個方面，考慮IL-I β抗體或結合片段在製備用於治療或預防本 文所公開的疾病或病症的藥物中的用途。在任何此類用途中，該藥物可與使用第二活性劑 的治療相協調。在本發明的另一個實施方案中，考慮使用本發明抗體的協同組合製備用於 治療顯示出患有如本文公開的疾病或病症的症狀或風險的患者的藥物，其中所述藥物與使 用第二活性劑的治療相協調。本發明考慮任何上述用途的實施方案，其中IL-I β結合抗體 或片段在藥物中的量為在有效減少達到療效所需的第二活性劑的劑量的劑量上。在這些實 施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中 和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO 5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變 區的抗體競爭結合IL-I β。
在本發明的又一個方面，提供了產品，其包括容器、在該容器內包含抗IL-I β抗 體或其片段的組合物、和產品說明書，所述說明書包含根據本發明的上述方法給需要治療 的人施用該抗體或片段的說明。在一個實施方案中，該容器進一步包括可藥用的載體、賦形 劑或稀釋劑。在相關的實施方案中，容器內的組合物還包括第二活性劑。在這些實施方案 中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的抗體或抗體片段(例如中和抗 體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO 5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變區的 抗體競爭結合IL-I β。本發明還考慮試劑盒。在一個實施方案中，試劑盒包含包裝在容器如小瓶或瓶子 中的治療或預防有效量的抗IL-I β抗體或片段，並且進一步包含附著在該容器上或與該 容器包裝在一起的標籤，所述標籤記載了該容器的內含物並提供了關於根據本發明的上述 方法使用容器內含物治療或預防疾病或病症的指示和/或說明。在一個實施方案中，容器 進一步包括可藥用的載體、賦形劑或稀釋劑。在一個相關實施方案中，容器進一步含有第二 活性劑。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的抗體或 抗體片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO :5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在一個實施方案中，所述產品、試劑盒或藥物用於治療或預防個體痛風。在另一個 實施方案中，產品的說明書或試劑盒的標籤包括根據任何上述劑量、後續施用次數和兩次 施用間的給藥間隔、以及本文所述的劑量、後續施用次數和兩次施用間的給藥間隔的任何 組合來施用抗體或片段的說明。在又一個實施方案中，試劑盒或產品的容器是預充式注射 器。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β的抗體或抗體 片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO :5輕鏈可變區和SEQ ID NO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。在本發明的另一個方面，提供了治療個體(例如人個體)中尿酸單鈉(MSU)晶體 誘導的促炎細胞因子釋放的方法，所述方法包括給該個體施用治療有效量的抗IL-I β抗 體或其片段。在一個實施方案中，該促炎細胞因子為IL-I β。在另一個實施方案中，該促炎 細胞因子為IL-6。在這些實施方案中，可以使用例如以小於IOOpM的解離常數結合IL-I β 的抗體或抗體片段(例如中和抗體)。此類抗體或其片段可與具有SEQ ID NO :5輕鏈可變 區和SEQ ID NO 6重鏈可變區的抗體競爭結合IL-I β。應理解，當本說明書提及利用具有某些性質(例如Kd值或IC5tl值)的抗體或其 片段的治療方法時，這也意味著包括此類抗體或其片段在製備用於這些方法的藥物中的用 途。此外，本發明還包括具有這些性質的抗體或其片段以及含有此類抗體或其片段的藥物 組合物，它們用於在下文所討論的治療方法中。附圖簡述

圖1顯示命名為ΑΒ7的抗體和Kineret 在涉及IL-1誘導的IL-8生成的體外 IL-I β抑制實驗中的結果。圖2Α顯示命名為ΑΒ5與ΑΒ7的抗體在涉及IL-1刺激的IL-6釋放的體內IL-1 β 抑制實驗中的結果。圖2Β顯示命名為ΑΒ7的抗體在涉及IL-I刺激的IL_6釋放的體內IL-I β抑制實 驗中的結果，並且比較了對人IL-I β的抑制(Α組)和對小鼠IL-I β的抑制(B組)。
圖3顯示在大鼠中施用0. 1、1或10mg/kg抗IL-I β抗體後的血清濃度。圖4顯示在食蟹猴(Cynomalgus monkey)中施用0. 3或3mg/kg抗IL-1 β抗體後 的血清濃度。圖5製作在0. 1,0. 3、1或3mg/kg的5個每月劑量後食蟹猴中抗IL-1 β抗體的血 漿濃度曲線。圖6的表格顯示通過用抗IL-I β抗體治療、人全血中表皮葡萄球菌誘導的細胞因 子生成的減少。圖7顯示在施用0. 01mg/kg抗體的劑量後人中AB7的藥代動力學。圖8顯示在2型糖尿病人個體中施用0. 01,0. 03,0. 1、0. 3或1. Omg/kg抗IL-I β 抗體後的血清濃度。圖9顯示給2型糖尿病人個體施用0.01、0.03、0. 1、0. 3或1. Omg/kg抗IL-I β抗 體後第28天CRP的百分比變化中值。圖10Α和10Β顯示在MSU晶體誘導的急性痛風小鼠模型中抗IL-I β抗體的效力。發明詳述本發明涉及用於治療個體痛風(例如急性痛風、慢性痛風、難治性痛風)的方法和 相關產品，所述方法包括給該個體施用一個或多個劑量的抗IL-I β抗體或其片段。由於現 有療法存在的問題，所以需要治療痛風的新療法代替或補充現有的藥學方法。本文所公開 的方法包括，例如施用抗IL-I β抗體或其片段。用抗體、特別是顯示高親和力的抗體直接 靶向IL-I β配體的方法比其它可能的治療方法例如IL-I β受體拮抗劑(例如IL-IRa，阿 那白滯素，Kineret )有不少優點。基於IL-I受體拮抗劑的療法所遭遇到的挑戰是需要 這些治療劑佔據大量受體，而這是艱巨的任務，因為這些受體在除紅細胞之外的所有細胞 上廣泛表達(Dinarello, Curr. Opin. Pharmacol. 4 =378-385,2004)。在大多數免疫介導的 疾病(例如本文公開的疾病)中，在體液中可測量的或與活化細胞有關的IL-I β細胞因子 的量相對較低。如下面實施例所示，已經令人驚訝地發現，抗體例如本文所公開的抗體可用 於在寬的劑量範圍內(包括在極低的劑量)達到期望的活性水平。因此，直接靶向IL-Ιβ 配體的治療和/或預防方法應提供優越的策略。IL-I β是由包括單核細胞和巨噬細胞在內的許多不同細胞類型分泌的促炎細胞 因子。當作為炎症反應的一部分釋放時，IL-I β產生一系列生物效應，所述生物效應主要 通過誘導其它炎症介質例如促腎上腺皮質素、血小板因子_4、前列腺素E2(PGE2)、IL-6和 IL-8來介導。IL-I β通過激活IL-I受體(存在於幾乎所有細胞類型上)來誘導局部和全 身性炎症作用。細胞因子白介素-I(IL-I)家族已被提示牽涉許多疾病狀態，例如類風溼性關節 炎(RA)、骨關節炎、克羅恩病、潰瘍性結腸炎(UC)、敗血性休克、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮 喘、移植物抗宿主病、動脈粥樣硬化、成人T細胞白血病、多發性骨髓瘤、多發性硬化、中風 和阿爾茨海默病。IL-I家族成員包括IL-I α、IL-1 β和IL_lRa。儘管通過其與IL_1受體 (IL-1R1、IL-1R2)結合的能力而相關聯，但是這些細胞因子中的每一個由不同基因表達且 具有不同的一級胺基酸序列。而且，這些細胞因子的生理活性可以彼此區分。已經將破壞IL-I受體信號傳遞的化合物作為治療IL-I介導的疾病(例如某些上 述疾病)的治療劑進行研究。這些化合物包括重組IL-IRa(Amgen Inc.，Thousand Oaks,
15CA)、IL-I 受體「捕獲」肽(Regeneron Inc.，Tarrytown, NY)以及動物源性 IL-I β 抗體和 重組IL-I β抗體及其片段。如上所述，已經提出IL-I受體拮抗劑(IL-IRa)多肽用於治療痛風(So等人， 2007，同前；McGonagle等人，2007，同前)，但是仍需要治療痛風的有效方法，特別是不需要 每天重複注射的方法。基於IL-I受體拮抗劑的療法所面臨的另一挑戰是需要這些治療劑 佔據大量受體，而這是艱巨的任務，因為這些受體在除紅細胞之外的所有細胞上廣泛表達 (Dinarello, Curr. Opin. Pharmacol. 4 :378_385，2004)。在大多數免疫介導的疾病(例如 本文公開的疾病)中，在體液中可測量的或與活化細胞有關的IL-I β細胞因子的量相對較 低。因此，直接靶向IL-Ιβ配體的治療和/或預防方法為優越的策略，特別是當施用具有 高親和力的IL-I β抗體時。本發明提供了使用對IL-I β有特異性的抗體或其片段治療和/或預防個體痛風 (例如哺乳動物、人)的方法和相關組合物以及產品。如下面實施例1所示，我們令人驚訝地發現，此類抗體(例如具有極高親和力)可 以是比IL-Ra(例如Kineret )強有效得多的IL-I途徑抑制劑，提供了以比其它藥物(例 如重組IL-IRa)所需的劑量和/或施用頻率更低的劑量和/或更低的施用頻率來達到療效 的機會。本文所述的用IL-I β抗體或片段的此類方法可包括對遭受痛風(例如急性痛風、 慢性痛風、難治性痛風)的個體進行治療。該方法還可包括預防有危險個體出現痛風(例 如急性痛風、慢性痛風、難治性痛風)。抗體、人源化抗體和人工程化抗體本發明的IL-I (例如IL-I β)結合抗體可以以下述形式提供多克隆抗體、單克隆 抗體(mAbs)、重組抗體、嵌合抗體、⑶R移植抗體、完全人抗體、單鏈抗體和/或雙特異性抗 體，以及片段，包括其變體和衍生物，這些形式可以通過已知技術提供，所述技術包括但不 限於酶切、肽合成或重組技術。抗體一般包括兩條重鏈多肽和兩條輕鏈多肽，但是也可以考慮具有1條重鏈和1 條輕鏈的單結構域抗體、以及缺乏輕鏈的重鏈抗體。基於重鏈恆定結構域的胺基酸序列， 存在5種類型的重鏈，稱為α、δ、ε、Y和μ。這些不同類型的重鏈分別產生5類抗體， IgA (包括 IgA1 和 IgA2)、IgD、IgE、IgG 和 IgM,包括 4 個 IgG 亞類，即 IgG1UgG2UgG3 和 IgG4。 基於恆定結構域的胺基酸序列，還存在兩種類型的輕鏈，稱為kappa ( κ )或IambdaU )。全 長抗體包括恆定結構域和可變結構域。恆定區無需存在於抗體的抗原結合片段中。本文公 開的抗體的抗原結合片段可以包括Fab、Fab』、F(ab』)2*F(v)抗體片段。如下文更詳細 地討論，IL-I β結合片段包括可以結合IL-I β的抗體片段和抗原結合多肽。抗體的每個重鏈和輕鏈序列，或其抗原結合片段，均包括具有3個互補決定區 (CDR)和非CDR構架區(FR)的可變區。除非另有說明，本文所用的術語「重鏈」和「輕鏈」 分別表示重鏈可變區和輕鏈可變區。重鏈⑶R在本文稱為⑶R-Hl、⑶R-H2和⑶R-H3。輕 鏈⑶R在本文稱為⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3。抗體序列中的可變區和⑶R可以通過下述進 行鑑定(i)根據本領域中已開發的一般法則，或(ii)將序列相對已知可變區的資料庫進 行比對。用於鑑別這些區域的方法在Kontermann和Dubel編輯，Antibody Engineering, Springer, New York, NY, 2001 禾口 Dinarello 等人，Current Protocols in Immunology,John Wiley and Sons Inc.，Hoboken，NJ，2000中得到描述。抗體序列的資料庫在下述中得 到描述，並且可以通過其獲得在www. bioinf. org. uk/abs的「The Kabatman」資料庫(由 Α.C. Martin, Department of Biochemistry & Molecular Biology University College London, London, England 維護)，和 www. vbase2. org 的 VBASE2,如在 Retter 等人，Nuc 1. Acids Res.，33 (Database issue) :D671_D674 (2005)中所述。「Kabatman，，資料庫網站也 包括用於鑑定⑶R的一般經驗法則。除非另有說明，如本文所用的術語「⑶R」如Kabat等 人，Sequences of Immunological Interest,第 5 版，U. S. Department of Health and 人 Services, 1991 中所定義。多克隆抗體優選通過相關抗原和佐劑的多次皮下(sc)或腹膜內(ip)注射而在動 物中產生。改善的抗體應答可以通過使用雙官能劑或衍生劑使相關抗原與蛋白質綴合來獲 得，所述蛋白質在待免疫的物種中是免疫原性的，例如鑰孔戚血藍蛋白、血清白蛋白、牛甲 狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑，所述雙官能劑或衍生劑為例如馬來醯亞氨基苯甲醯磺 基琥珀醯亞胺酯(通過半胱氨酸殘基綴合)、N-羥基琥珀醯亞胺(通過賴氨酸殘基)、戊二 醛、琥珀酸酐或本領域已知的其它試劑。動物用抗原、免疫原性綴合物或衍生物進行免疫，方式是例如使100 μ g或5 μ g蛋 白質或綴合物(分別對於兔或小鼠)，與3體積的弗式完全佐劑組合，且在多個位點處皮內 注射該溶液。1個月後，動物通過在多個位點皮下注射，用在弗式完全佐劑中的1/5至{分 數(1/10)}原始量的肽或綴合物加強。在加強注射後7-14天，對動物進行採血，並且針對 抗體滴度測定血清。動物加強免疫直至滴度達到平臺。優選地，動物用相同抗原但與不同 蛋白質和/或通過不同交聯劑綴合的綴合物進行加強。綴合物還可以在重組細胞培養物中 作為蛋白質融合物進行製備。此外，聚集試劑例如明礬適宜用於增強免疫應答。單克隆抗體是指從基本上均質的一群抗體得到的抗體。單克隆抗體一般是高度特 異性的，並且可以針對單個抗原位點，與一般包括針對不同決定簇(表位)的不同抗體的常 規(多克隆)抗體產品不同。除了其特異性之外，單克隆抗體還是有利的，因為它們由均質 培養物合成，不被具有不同特異性和特徵的其它免疫球蛋白汙染。依照本發明使用的單克隆抗體可以通過首先由Kohler等人，(Nature，256: 495-7，1975)所述的雜交瘤方法進行製備或可以通過重組DNA方法(參見例如美國專利 號4，816，567)進行製備。單克隆抗體還可以使用例如在Clackson等人(Nature 352 624-628,1991)和 Marks 等人(J Mol. Biol. 222 :581_597，1991)中所述的技術，從噬菌體 抗體文庫中分離。在雜交瘤方法中，小鼠或其它合適的宿主動物例如倉鼠或食蟹猴如本文所述進行 免疫，以引發產生或能夠產生將與用於免疫的蛋白質特異性結合的抗體的淋巴細胞。或者， 淋巴細胞可以在體外進行免疫。隨後使用合適的融合劑如聚乙二醇使淋巴細胞與骨髓瘤細 胞融合，以形成雜交瘤細胞(Goding，Monoclonal principles and Practice,第 59-103 頁 (Academic Press,1986))。將由此製備的雜交瘤細胞接種，且生長於合適的培養基中，所述培養基優選包括 抑制未融合的親本骨髓瘤細胞生長或存活的一種或多種物質。例如，如果親本骨髓瘤細胞 缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶(HGPRT或HPRT)，那麼用於雜交瘤的培養基一般將 包括次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT培養基)，所述物質阻止HGPRT缺陷細胞的生長。
優選的骨髓瘤細胞是這樣的細胞，其能有效地融合、支持所選擇的抗體生產 細胞穩定地高水平生產抗體，並且對培養基敏感。人骨髓瘤和小鼠-人雜交骨髓瘤 (heteromyeloma)細胞系也已得到描述，其用於產生人單克隆抗體(Kozbor，J. Immunol, 133 3001(1984) ；Brodeur 等人，Monoclonal Production ^ ^ and Applications,第 51-63頁(Marcel Dekker Inc. ,New York，1987))。示例性鼠類骨髓瘤系包括可可從Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, Calif. USA 獲得的衍生自 M0P-21 和 Μ. C.-11小鼠腫瘤的那些、以及可從美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collection, Rockville, Md. USA)獲得的 SP-2 或 X63_Ag8_653 細胞。就針對抗原的單克隆抗體的生產，分析正在生長雜交瘤細胞的培養基。優選地，由 雜交瘤細胞生產的單克隆抗體的結合特異性通過免疫沉澱或通過體外結合測定試驗進行 測定，例如放射性免疫測定(RIA)或酶聯免疫吸附測定(ELISA)。單克隆抗體的結合親和力 可以例如通過 Scatchard 分析(Munson 等人，Anal. Biochem.，107 220(1980))進行測定。鑑定了產生具有所需特異性、親和力和/或活性的抗體的雜交瘤細胞之後， 這些克隆可以通過有限稀釋操作進行亞克隆，並且通過標準方法進行生長(Goding， Monoclonal :Principles and Practice,第 59-103 頁(Academic Press, 1986))。用於這 個用途的合適培養基包括例如DMEM或RPMI-1640培養基。此外，雜交瘤細胞可以在體內作 為動物中的腹水腫瘤進行生長。由亞克隆分泌的單克隆抗體可以通過常規免疫球蛋白純化 操作，適當地從培養基、腹水液或血清中分離，所述操作例如蛋白A-S印harose、羥基磷灰石 層析、凝膠電泳、透析或親和層析。進一步可以考慮，本發明的抗體可以如本領域眾所周知和本文描述的以抗體的較 小抗原結合片段的形式進行使用。本發明涵蓋包括2條全長重鏈和2條全長輕鏈的IL-I (例如IL-I β )結合抗體。 或者，IL-I β結合抗體可以是保留對於IL-I β的結合活性的構建體，例如單鏈抗體或「微 型」抗體。此類構建體可以通過本領域已知的方法進行製備，例如PCR介導的單鏈抗體的克 隆禾口裝配，用於在大腸桿菌中表達(如Antibody Engineering, The practical approach series, J. McCafferty, H. R. Hoogenboom禾口D. J. Chiswell 編輯，Oxford University Press, 1996中所述)。在這個類型的構建體中，抗體分子的重鏈和輕鏈的可變部分由cDNA進行 PCR擴增。所得的擴增子隨後例如在第二 PCR步驟中通過接頭DNA進行裝配，所述接頭DNA 編碼由胺基酸Gly和Ser組成的柔性蛋白質接頭。這個接頭允許可變重鏈和輕鏈部分以這 樣的方式摺疊，該方式使得抗原結合袋可以重新產生並且使得可以以通常與親本全長二聚 體免疫球蛋白分子相當的親和力結合抗體。本發明的IL-I (例如IL-I β )結合抗體和片段包括本文公開的示例性抗體、片段 和序列的變體。變體包括含有一個或多個胺基酸序列置換、缺失和/或添加的肽和多肽， 其具有與本文公開的一種或多種示例性抗體、片段和序列相同或基本上相同的表位結合親 和力和特異性。因此，變體包括包含對本文公開的示例性抗體、片段和序列的一個或多個氨 基酸序列置換、缺失和/或添加的肽和多肽，其中此置換、缺失和/或添加不引起表位結合 的親和力和特異性的實質改變。例如，抗體或片段的變體可由對於抗體或片段的一個或多 個改變而引起，其中該改變的抗體或片段具有與起始序列相同或基本上相同的表位結合親 和力和特異性。變體可以是天然存在的，例如等位基因變體或剪接變體，或可以是人工構建的。變體可以由編碼所述變體的相應核酸分子進行製備。本發明抗體和IL-I β結合片段的 變體可以在輕鏈和/或重鏈胺基酸序列中具有變化，所述變化可以是天然存在的或可以通 過使用重組DNA技術在體外改造天然序列而引入。天然存在的變體包括「體細胞」變體，其 在抗外源抗原的抗體應答產生過程中在體內在相應胚系(germ line)核苷酸序列中產生。IL-I (例如IL-I β )結合抗體和結合片段的變體也可以通過誘變技術進行製備。 例如，胺基酸改變可以在整個抗體編碼區隨機地引入，所得到的變體可以就對IL-Ιβ的 結合親和力或其它性質進行篩選。或者，胺基酸變化可以在IL-I β抗體的所選擇區域中 引入，例如在輕鏈和/或重鏈CDR中，和/或在構架區中引入，並且所得到的抗體可以就 IL-I β的結合或某些其它活性進行篩選。胺基酸變化包括在CDR中的一個或多個胺基酸置 換，從單胺基酸差異到在給定CDR例如CDR3內引入多個胺基酸變更。在另一種方法中，CDR 內的每個殘基對IL-I β結合的貢獻可以通過用丙氨酸置換在該CDR內的至少一個殘基來 進行評價。Lewis等人(1995)，Mol. Immunol. 32 1065-72。對於與IL-1 β結合併非最佳 的殘基隨後可以加以改變，以便確定更優的序列。本發明也涵蓋通過插入胺基酸以增加CDR 例如CDR3的大小而產生的變體。例如，大多數輕鏈CDR3序列長為9個胺基酸。抗體中短 於9個殘基的輕鏈序列可以通過插入合適的胺基酸增加該CDR的長度，來優化與IL-Ιβ的
糹口口。變體還可以通過輕鏈或重鏈的「鏈改組」進行製備。Marks等人(1992)， Biotechnology 10 79-83。單條輕(或重)鏈可以與具有輕(或重)鏈庫(r印ertoire) 的文庫組合，並且所得到的群體就所需活性例如與IL-I β的結合進行篩選。與使用包含重 鏈和輕鏈兩者的庫的文庫時的可能情況相比較，這允許篩選與單條輕(或重)鏈組合的更 多不同重(或輕)鏈樣本。本發明的IL-I (例如IL-I β )結合抗體和片段涵蓋本文公開的示例性抗體、片段 和序列的衍生物。衍生物包括已進行化學修飾的多肽或肽、或其變體、片段或衍生物。實例 包括一個或多個聚合物，例如水溶性聚合物、N聯或0聯碳水化合物、糖、磷酸和/或其它此 類分子的共價附著。衍生物以不同於天然存在的或起始的肽或多肽的方式被修飾，例如在 附著的分子的類型或位置方面不同。衍生物還包括天然存在於肽或多肽上的一個或多個化 學基團的缺失。本發明的IL-I β結合抗體和片段可以是雙特異性的。雙特異性抗體或片段可以 具有幾種構型。例如，雙特異性抗體可以類似單個抗體(或抗體片段)，但具有2個不同抗 原結合位點(可變區)。雙特異性抗體可以通過化學技術(Kranz等人(1981)，Proc. Natl. Acad. Sci.USA，78 :5807)、通過「多瘤」 (polydoma)技術(美國專利號 4，474，893)或通過 重組DNA技術來產生。本發明的雙特異性抗體可以具有對於至少兩種不同表位的結合特異 性，其中至少一種是IL-I β的表位。IL-I β結合抗體和片段也可以是雜抗體。雜抗體是連 接在一起的2種或更多種抗體或抗體結合片段(Fab)，每種抗體或片段具有不同的特異性。對於本發明IL-I (例如IL-I β )結合抗體和片段，可以考慮製備抗體分子的抗原 結合區域的重組DNA的技術，而繞過單克隆抗體的生產。將DNA克隆到細菌表達系統內。適 合於實踐本發明的此類技術的一個例子，使用具有前導序列的噬菌體λ載體系統，所述前 導序列引起表達的Fab蛋白質移動到周質間隙(在細菌細胞膜和細胞壁之間)或分泌。可 以快速產生大量功能性Fab片段，並就其與IL-I β的結合進行篩選。此類IL-I β結合劑(對於IL-I β多肽具有特異性的Fab片段)尤其包括在本發明的IL-I β結合抗體和片段 內。本發明IL-I (例如IL-I β )結合抗體和片段可以是人源化或人工程化的抗體。如 本文所用，人源化抗體或其抗原結合片段是重組多肽，其包含來自非人抗體的抗原結合部 位的部分和人抗體的構架和/或恆定區的部分。人工程化的抗體或抗體片段是已通過在特 定位置處修飾(例如缺失、插入或置換)胺基酸而被改造的非人(例如小鼠)抗體，其中所 述胺基酸的修飾導致減少或消除該修飾抗體在人中的任何可檢測免疫原性。人源化抗體包括嵌合抗體和CDR移植抗體。嵌合抗體是包括與人恆定區連接 的非人抗體可變區的抗體。因此，在嵌合抗體中，可變區大部分是非人的，並且恆定區 是人的。嵌合抗體和用於製備其的方法在Morrison等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 6841-6855(1984), Boulianne 等人，Nature, 312 643-646 (1984)和 PCT 申請公開 WO 86/01533中得到描述。儘管它們可以比小鼠單克隆抗體更小免疫原性，但嵌合抗體的施用 已與針對抗體的非人部分的抗小鼠抗體應答(HAMA)相關聯。嵌合抗體也可以通過將來自 具有合適抗原結合特異性的小鼠抗體分子的基因與來自具有合適生物活性的人抗體分子 的基因剪接在一起來產生，所述生物活性例如為激活人補體和介導ADCC的能力。Morrison 等人(1984)，Proc. Natl. Acad. Sci. ,81 6851 ；Neuberger 等人(1984)，Nature, 312 :604。 一個例子是將Fc區替換為不同同種型的Fc區。CDR移植抗體是包括與來自人「受體」抗體的構架區連接的來自非人「供體」抗體 的CDR的抗體。一般地，CDR移植抗體包括比嵌合抗體更多的人抗體序列，因為它們包括來 自人抗體的恆定區序列和可變區(構架)序列，因此，例如，本發明的CDR-移植人源化抗 體可以包含重鏈，所述重鏈包含來自人抗體的構架區(例如人抗體的FR-I、FR-2或FR-3) 的連續胺基酸序列(例如約5個或更多、10個或更多、或甚至15個或更多連續胺基酸殘 基)，或任選地，人抗體的整個構架區的大多數或全部。CDR移植抗體和用於製備其的方法 在 Jones 等人，Nature, 321 :522_525 (1986)，Riechmann 等人，Nature, 332 :323_327 (1988) 和Verhoeyen等人，Science，239 1534-1536 (1988))中得到描述。可以用於產生人源化抗 體的方法也在美國專利4，816，567,5, 721，367,5, 837，243和6，180，377中得到描述。CDR 移植抗體被認為比嵌合抗體較不可能誘導針對非人抗體部分的免疫反應。然而，已報告來 自供體抗體的構架序列是供體抗體的結合親和力和/或特異性所需的，推測這是因為這些 構架序列影響供體抗體的抗原結合部分的摺疊。因此，當供體非人CDR序列被移植到未改 變的人構架序列上時，在某些情況下，相對於最初非人供體抗體，所得到的CDR移植抗體 可能顯示結合親合力的喪失。參見例如，Riechmann等人，Nature, 332 =323-327(1988)和 Verhoeyen 等人，Science, 239 1534-1536 (1988)。人工程化的抗體包括例如「鑲嵌」抗體和使用HUMANENGINEERING 技術(參見例 如，美國專利5，766，886和5，869，619)製備的抗體。HUMAN ENGINEERING 技術是商業可 得的，並且涉及改變非人抗體或抗體片段，例如小鼠或嵌合抗體或抗體片段，改變方式是對 抗體的胺基酸序列進行特異性變化，以便產生在人中具有減少的免疫原性、然而仍保留原 始非人抗體的所需結合性質的修飾抗體。一般地，該技術涉及將非人(例如小鼠)抗體的 胺基酸殘基分類為「低風險」、「中等風險」或「高風險」殘基。分類使用總體風險/回報計 算來進行，所述計算評價相對於置換將影響所得抗體的摺疊和/或抗原結合性質的風險，
20進行該具體置換的預期益處(例如，在人中的免疫原性)。因此，低風險位置是預期在該處 的置換是有利的位置，因為預期這將減少免疫原性而不顯著影響抗原結合性質。中等風險 位置是預期在該處的置換可減少免疫原性，但有較大可能影響蛋白質摺疊和/或抗原結合 的位置。高風險位置包含最可能參與正確摺疊或抗原結合的殘基。一般地，非人抗體中的 低風險位置用人殘基進行置換，高風險位置很少置換，和有時，但不是不受限制地，在中等 風險位置處進行人源化置換。在非人抗體可變區序列中具有脯氨酸的位置通常分類為至少 中等風險位置。在非人(例如小鼠)抗體序列的給定低等或中等風險位置處進行置換的特定 人胺基酸殘基可以通過下述進行選擇使來自非人抗體的可變區的胺基酸序列與特定的 或共有的人抗體序列的相應區域比對。根據該比對，可以將非人序列的低等或中等風險 位置處的胺基酸殘基置換為人抗體序列中的相應殘基。用於製備人工程化蛋白質的技 術在 Studnicka 等人，Protein Engineering, 7 805-814 (1994)，美國專利 5，766，886、 5，770，196,5, 821，123和5，869，619、和PCT申請公開WO 93/11794中更詳細地進行描述。「鑲嵌」抗體是非人或人源化(例如嵌合或⑶R移植抗體)抗體，其已經經過改造 以替換某些暴露於溶劑的胺基酸殘基，以便進一步減少其免疫原性或增強其功能。因為推 測嵌合抗體的表面殘基較不可能影響正確的抗體摺疊但更可能引發免疫反應，所以嵌合抗 體的鑲嵌可以包括，例如鑑定嵌合抗體的非人構架區中暴露於溶劑的殘基，和將它們中的 至少一個用來自人構架區的相應表面殘基替換。鑲嵌可以通過任何合適的工程技術來完 成,包括上述HUMAN ENGINEERING 技術的使用。在一個不同方法中，可以通過使CDR移植抗體「去人源化」來恢復結合親合力。去 人源化可以包括使來自供體抗體的構架區的殘基復原至⑶R移植抗體，從而恢復正確折 疊。類似的「去人源化」可以通過下述來達到(i)在「受體」抗體中包括「供體」構架區的 部分，或(ii)將「供體」抗體構架區的部分(連同移植的供體CDR)移植到受體抗體中。對於抗體、人源化抗體、人工程化抗體和用於其製備的方法的進一步討論，參見 Kontermann 禾口 Dubel 編輯，Antibody Engineering, Springer, New York, NY, 2001。示例性人源化或人工程化抗體包括IgG、IgM、IgE、IgA和IgD抗體。本發明抗體可 以是任何類型(IgG、IgA、IgM、IgE、IgD等)或同種型，並且可以包括κ或λ輕鏈。例如， 人抗體可以包含IgG重鏈或確定的片段，例如至少一種同種型，IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。 作為進一步例子，本發明抗體或片段可以包含IgGl重鏈和IgGl輕鏈。本發明抗體和片段可以是人抗體，例如結合IL-I β多肽且由人胚系免疫球蛋白 核酸序列的天然體細胞變體的核酸序列編碼的抗體，及其片段、合成變體、衍生物和融合 物。此類抗體可以通過本領域已知的任何方法來產生，例如通過使用轉基因哺乳動物(例 如轉基因小鼠)，其中在該哺乳動物染色體中天然免疫球蛋白庫已被人V基因替換。此類哺 乳動物表現出以正常方式實施該人胚系抗體基因的VDJ重組和體細胞高變，從而產生具有 全人序列的高親和力抗體。針對靶蛋白質的人抗體也可以使用如下轉基因動物來產生，所述轉基因動物不具 有內源性免疫球蛋白生產，且經過改造而包含人免疫球蛋白基因座。例如，WO 98/24893公 開了具有人Ig基因座的轉基因動物，其中由於內源性重鏈和輕鏈基因座的失活，該動物不 產生功能性內源免疫球蛋白。WO 91/00906還公開了能夠產生針對免疫原的免疫應答的轉基因非靈長類哺乳動物宿主，其中抗體具有靈長類恆定區和/或可變區，且其中內源性免 疫球蛋白編碼基因座被置換或失活。WO 96/30498和美國專利號6，091，001公開了使用 Cre/Lox系統修飾哺乳動物中的免疫球蛋白基因座，以便例如替換恆定區或可變區的全部 或部分，從而形成修飾的抗體分子。WO 94/02602公開了具有滅活的內源Ig基因座和功能 性人Ig基因座的非人哺乳動物宿主。美國專利號5，939，598公開了製備轉基因小鼠的方 法，其中該小鼠缺乏內源性重鏈，且表達包含一個或多個異種恆定區的外源性免疫球蛋白 基因座。還參見，美國專利號6，114, 598,6,657, 103和6，833，268。使用上文描述的轉基因動物，可以產生針對所選擇的抗原分子的免疫應答，可以 從動物中取出抗體生產細胞，且用於產生分泌人單克隆抗體的雜交瘤。免疫接種方案、佐劑 等是本領域已知的，並且可以在對例如轉基因小鼠進行免疫中使用，如WO 96/33735中所 述。這個出版物公開了對各種抗原分子的單克隆抗體，包括IL-6、IL-8、TNFa、人⑶4、L選擇 蛋白、gp39和破傷風毒素。單克隆抗體可以就抑制或中和相應蛋白質的生物活性或生理活 性的能力進行測試。WO 96/33735公開了針對IL-8的單克隆抗體，其衍生自用IL-8免疫的 轉基因小鼠的免疫細胞、阻斷IL-8誘導的嗜中性粒細胞的功能。對用於免疫轉基因動物的 抗原具有特異性的人單克隆抗體也公開於WO 96/34096和美國專利申請號20030194404 ； 以及美國專利申請號20030031667。用於製備單克隆抗體的另外轉基因動物包括在美國專利號5，770，429和 Fishwild等人(Nat. Biotechnol. 14 :845_851，1996)中描述的Medarex HuMAb-MOUSE ，其 包含來自未重排人抗體基因的編碼人抗體的重鏈和輕鏈的基因序列。對HuMAb-MOUSE 的 免疫使得能夠產生針對靶蛋白質的全人單克隆抗體。此外，Ishida等人(Cloning Stem Cells. 4 :91_102，2002)描述了 TransChromo Mouse (TCM0USE )，其包含兆鹼基大小的人DNA區段，並且摻入完整的人免疫球蛋白(hlg) 基因座。TCM0USE 具有hlg的全多樣庫，包括IgG的所有亞類(IgGl-G4)。用各種人抗原 對TC MOUSE 的免疫產生包含人抗體的抗體應答。還參見Jakobovits 等人，Proc. Natl. Acad. Sd. USA, 90 2551 (1993) Jakobovits 等人，Nature, 362 255-258 (1993) ；Bruggermann 等人，Year in Immunol，7 :33 (1993)；禾口 美國專利號5，591，669、美國專利號5，589，369、美國專利號5，545，807 ；和美國專利公開 號20020199213。美國專利公開號20030092125描述了用於使動物的免疫應答偏向所需表 位的方法。人抗體也可以通過體外活化的B細胞來產生(參見美國專利號5，567，610和 5，229，275)。人抗體也可以通過抗體展示文庫的體外篩選來產生。參見Hoogenboom等人 (1991)，J. Mol. Biol. 227 381 ；禾口 Marks 等人(1991)，J. Mol. Biol. 222 :581。各種包含抗 體的噬菌體文庫已得到描述，並且可以容易地製備。文庫可以包含各種各樣的人抗體序列， 例如人Fab、Fv和scFv片段，可以針對合適靶篩選這些序列。噬菌體展示文庫可以包含非 抗體的肽或蛋白質，可以篩選該肽或蛋白質以鑑定IL-I β的選擇性結合劑。製備重組人抗體基因庫的技術的發展和用於將所編碼抗體片段展示在絲狀噬菌 體表面上的技術的發展，已提供了直接製備人抗體的手段。通過噬菌體技術產生的抗體以 抗原結合片段_通常為Fv或Fab片段-的形式在細菌中產生，且因此缺乏效應子功能。效 應子功能可以通過2種策略之一而引入這些片段可以被改造成完全抗體用於在哺乳動物
22細胞中表達，或改造成能夠觸發效應子功能的具有第二結合位點的雙特異性抗體片段。本發明涵蓋用於產生靶特異性抗體或其抗原結合部分的方法，其包括下述步驟 在噬菌體上合成人抗體文庫，用靶蛋白質或其部分篩選文庫，分離結合靶的噬菌體，並且由 噬菌體獲得抗體。例如，用於製備在噬菌體展示技術中使用的抗體文庫的一種方法包括下 述步驟用靶抗原或其抗原性部分免疫包含人免疫球蛋白基因座的非人動物，以產生免疫 應答，從經過免疫的動物中提取抗體生產細胞；從提取的細胞中分離RNA，將RNA逆轉錄以 產生cDNA，使用引物擴增cDNA，並且將cDNA插入噬菌體展示載體內，從而使得抗體在噬菌 體上表達。本發明的重組靶特異性抗體可以以這種方式獲得。噬菌體展示方法通過在絲狀噬菌體表面上展示抗體庫、且隨後通過與所選抗原的 結合來選擇噬菌體，從而模擬免疫選擇。一種此類技術在WO 99/10494中得到描述，其描 述了使用此類方法分離針對MPL和msk受體的高親和力和功能性激動劑性抗體。本發明 的抗體可以通過篩選重組組合抗體文庫，優選地scFv噬菌體展示文庫進行分離，其中所述 文庫使用由人淋巴細胞的mRNA製備的人\和Vh cDNA來製備。用於製備和篩選此類文庫 的方法是本領域已知的。參見例如，美國專利號5，969，108。存在用於產生噬菌體展示文 庫的商業可得的試劑盒(例如，Pharmacia Recombinant Phage Antibody System，目錄 號27-9400-01 ；和Stratagene SurfZAP. TM.噬菌體展示試劑盒，目錄號240612)。還存在 可以用於產生且篩選抗體展示文庫的其它方法和試劑(參見例如，Ladner等人美國專利 號 5，223，409 ;Kang 等人 PCT
發明者A·M·索林格 申請人:愛克索馬技術有限公司