製造脂質體的系統和方法

2023-08-06 03:06:56 3

專利名稱：：製造脂質體的系統和方法製造脂質體的系統和方法相關申請的交叉參考本申請是要求於2005年7月27日遞交的題目為"製造脂質體的系統和方法(SYSTEMSANDMETHODSFORMANUFACTURINGLIPOSOMES)"的美國申請號60/703,380的利益的非臨時申請，將其通過參考全部結合於此。發明背景己經知道許多用於將活性物質施用到細胞中的系統，諸如脂質體、納米顆粒、聚合物顆粒、免疫-和配體-複合體以及環糊精(參見，抗微生物和抗癌化學治療中的藥物轉運(DrugTransportinantimicrobialandanticancerchemotherapy).C.Papadakou編，CRC出版社，1995)。脂質體典型地在實驗室中通過聲處理、洗滌劑透析、乙醇注射或稀釋、French壓力擠出(Frenchpressextrusion)、醚輸注和反相蒸發製備而成。已知具有多個雙層的脂質體是多層脂質囊(multilamellarlipidvesicles,MLVs)。由於捕獲在層間的流體只在每層膜降解時釋放，所以MLVs是延時釋放藥物的候選。己知具有單一雙層的脂質體是單層脂質囊(UV)。UVs可以製成小的(SUVs)或大的(LUVs)。上述用於脂質體生產的一些方法利用可以導致磷脂原材料和包封的藥物變性的苛刻的或極端的條件。另外，這些方法對於大量脂質體的大規模生產不容易縮放(scalable)。此外，通過常規乙醇稀釋形成脂質囊涉及將脂質注射或逐滴加入到水性緩衝劑中。這樣得到的囊典型地在大小上不均勻，並且含有單層和多層囊的混合物。將常規脂質體配製成攜帶包含在水性內部空間(水溶性藥物)或參與脂質雙層(水不溶性藥物)的治療劑。在血流中具有短半衰期的活性劑特別適合通過脂質體遞送。例如，已知許多抗腫瘤藥在血流中具有短半衰期，以致它們的腸胃外應用是不可行的。然而，經由血流用於活性劑的部位特異性遞送的脂質體的應用受到網狀內皮系統(RES)的細胞將脂質體從血液中快速清除的嚴重限制。美國專利號5，478,860，其於1995年12月26日授予Wheeler等，並且通過引用結合於此，公開了用於遞送疏水性化合物的微乳組合物。這樣的組合物具有許多用途。在一個實施方案中，所述疏水性化合物是包含藥物的治療劑。該專利還公開體外和體內遞送疏水性化合物到細胞的方法。Knopov等的PCT公布WO01/05373,其通過引用結合於此，公開了用提供湍流環境(例如，雷諾數>2000)的靜態混合器(staticmixer)利用乙醇注射-型方法製備脂質囊的技術。然後，可以在囊形成之後負載治療劑。公布的美國申請2004/0142025，其通過引用結合於此，公開了使用順序的逐步稀釋方法形成脂質顆粒的技術。所公開的方法在非湍流的攪拌環境中產生具有低於200nm的大小的脂質顆粒。然而，所公開的方法傾向於產生不太最佳的囊大小和低於最佳的均勻性，特別是對於包封siRNA的脂質體。此外，對於包封的質粒，需要酸性緩衝溶液。儘管在美國專利號5,478,860，US20040142025和WO05373中公開的進展，還存在對於用於配製和生產脂質囊，特別是包封治療劑諸如核酸的脂質囊的改進的方法和裝置的需要。本發明實現了這些及其它需要。發明概述本發明提供用於製備任選地包含治療劑的脂質囊的方法和裝置。所述治療劑可以包括，例如，蛋白質、核酸、反義核酸、藥物等。本發明可以用於形成包含包封的核酸或小分子藥物的脂質囊。在一方面，脂質囊在低壓下快速製備，並且方法是完全可以縮放的。在某些優選的實施方案中，所述方法不包括靜態混合器或專門的擠出設備。按照一個實施方案，本發明提供用於生產脂質體的方法。所述方法典型地包括，在第一儲蓄器(reservoir)中提供水溶液，所述第一儲蓄器與第二儲蓄器中的有機脂質溶液流體連通，並且將所述水溶液與所述有機脂質溶液在第一混合區域混合以產生脂質體溶液。有機脂質溶液與所述水溶液混合，以便基本上瞬時產生包封治療產品的脂質體。而後立即將該脂質體溶液與緩衝溶液混合，以產生稀釋的脂質體溶液。可以將所述脂質體溶液引入到緩衝溶液儲蓄器中，或者所述脂質體溶液可以與緩衝劑在第二混合區域中混合。在某些方面，水溶液如緩衝劑，包含治療產品，以致所述治療產品被包封在脂質體中。在其它方面，所述有機脂質溶液包含治療產品。適當的治療產品包括，但不限於，蛋白質、核酸、反義核酸、核酶、tRNA、snRNA、siRNA(小幹擾RNA)、shRNA、ncRNA、預先濃縮的DNA、適體和抗原。在某些優選的方面，所述治療產品是核酸。在另一個實施方案中，本發明提供用於生產包封治療產品的脂質體的系統。所述系統典型地包括容納水溶液的第一儲蓄器，和容納有機脂質溶液的第二儲蓄器，其中所述水溶液和有機脂質溶液中的一種包含治療產品。所述系統還典型地包括泵機構，其設置成將水溶性溶液和有機脂質溶液以基本上相等的流速泵抽到混合區域中，其中所述有機脂質溶液與所述水溶液在混合區域中混合，從而基本上瞬時形成包封治療產品的脂質體溶液。所述系統還典型地包括收集儲蓄器，所述收集儲蓄器包含緩衝溶液，與混合區域流體連通，其中所述脂質體溶液基本上在形成後立即引入到收集儲蓄器中，由此形成稀釋的脂質體溶液。在又一個實施方案中，本發明提供用於生產包封治療產品的脂質體的系統。所述系統典型地包括容納水溶液的第一儲蓄器，和容納有機脂質溶液的第二儲蓄器，其中所述水溶液和有機脂質溶液中的一種包含治療產品。所述系統還典型地包括第一泵機構，其設置成將水溶性溶液和有機脂質溶液以基本上相等的流速泵抽到混合區域中，其中所述有機脂質溶液與所述水溶液在第一混合區域中混合，從而基本上瞬時形成包封治療產品的脂質體溶液。所述系統還典型地包括容納緩衝溶液的緩衝劑儲蓄器，和第二泵機構，其設置成將所述緩衝溶液以可控的流速泵抽到第二混合區域中，其中所述脂質體溶液基本上在第一混合區域中形成之後立即引入到第二混合區域中，由此在第二混合區域中形成稀釋的脂質體溶液。參考本說明書的其餘部分，包括附圖和權利要求，將了解本發明的其它特點和優點。本發明的其它特點和優點，以及本發明的各種實施方案的結構和操作，將參考附圖在下文詳細描述。在附圖中，相同的參考數字表示同一或功能相似的元件。附圖簡述圖1說明用於製備SNALP的方法的示意圖。圖2提供按照本發明的一個實施方案製備脂質體的方法的示意圖。圖3a和3b分別顯示按照本發明的兩個實施方案的裝置300和裝置302的實施例。圖4是按照本發明的一個實施方案的裝置400的代表性示意圖的實例。圖5顯示按照一個實施方案的T形連接器和相關的流動動力學。發明詳述I.定義術語"核酸"是指含有至少兩個核苷酸的聚合物。"核苷酸"包含糖脫氧核糖(DNA)或核糖(RNA)，鹼基，和磷酸基團。核苷酸通過磷酸基團連接在一起(儘管合成的核酸可以使用核苷酸接頭而不是磷酸基團製備)。"鹼基"包括嘌呤和嘧啶，其進一步包括天然化合物腺嘌呤、胸腺嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、肌苷、和天然類似物，以及嘌呤和嘧啶的合成衍生物，其包括但不限於，放置新的反應基團諸如但不限於胺、醇、硫醇、羧化物和垸基滷化物的修飾。DNA可以以下列形式反義、質粒DNA、質粒DNA的部分、預先濃縮的DNA、聚合酶鏈式反應(PCR)的產物、載體(Pl，PAC,BAC，YAC，人工染色體)、表達盒、嵌合序列、染色體DNA、或這些基團的衍生物。RNA可以以下列形式寡核苷酸RNA、tRNA(轉運RNA)、snRNA(小核RNA)、rRNA(核糖體RNA)、mRNA(信使RNA)、反義RNA、siRNA(小幹擾RNA)、shRNA(短髮夾RNA)、ncRNA(非編碼RNA)、適體、核酶、嵌合序列、或這些基團的衍生物。"反義"是幹擾DNA禾口/或RNA功能的多核苷酸。這可以導致表達的抑制。天然核酸具有磷酸骨架，人工核酸可以包含其它類型的骨架和鹼基。這些包括PNAs(肽核酸)、硫代磷酸酯(phosphothioates)、和天然核酸磷酸骨架的其它變體。另外，DNA和RNA可以是單鏈、雙鏈、三鏈或四鏈的。術語"基因"是指包含產生多肽或前體(例如，單純皰疹病毒)必需的編碼序列的核酸(例如，DNA)序列。多肽可以由全長編碼序列或由編碼序列的任何部分所編碼，只要保留全長或片段的需要的活性或功能特性(例如，酶促活性、配體結合、信號轉導、等等)。當用於本文時，術語"水溶液"是指完全或部分包含水的組合物。當用於本文時，術語"有機脂質溶液"是指完全或部分包含具有脂質的有機溶劑的組合物。術語"脂質"是指一組脂肪酸的酯的有機化合物，並且特徵是在水中不溶，但是在許多有機溶劑中是可溶的。通常將它們分成至少三類(l)"簡單脂質"其包括脂肪和油以及蠟；(2)"化合物脂質"其包括磷脂和糖脂；(3)"衍生的脂質"諸如類固醇。術語"兩親性脂質"部分地指任何適合的材料，其中脂質材料的疏水部分定向到疏水相中，而親水部分定向到水相。兩親性脂質通常是脂質囊的主要成分。親水性質來自極性或帶電基團諸如糖類，磷酸酯合，羧基、硫酸根合、氨基、巰基、硝基、羥基和其它類似基團的存在。疏水性可以通過包含非極性基團而賦予，所述基團包括，但不限於，長鏈飽和和不飽和脂族烴基團和由一個或多個芳族、脂環族或雜環基團取代的這樣的基團。兩親性化合物的實例包括，但不限於，磷脂、氨基脂和鞘脂類。磷脂的代表性實例包括，但不限於，磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲氨酸、磷脂醯肌醇、磷脂酸、棕櫚醯油醯磷脂醯膽鹼、溶血磷脂醯膽鹼、溶血磷脂醯乙醇胺、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二油醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯膽鹼或二亞油醯磷脂醯膽鹼。缺乏磷的其它化合物，諸如鞘脂、鞘糖脂家族、二醯基甘油和(3-醯氧基酸也在被稱為兩親性脂質的組中。另外，上述的兩親性脂質可與其它脂質混和，所述脂質包括甘油三酯類和固醇類。術語"中性脂質"指在選定的pH值以不帶電荷或中性兩性離子形式存在的許多脂質種類中的任何一種。在生理pH值下，這樣的脂質包括，例如，二醯基磷脂醯膽鹼、二醯基磷脂醯乙醇胺、神經醯胺、鞘磷脂、腦磷脂、膽固醇、腦苷脂和二醯基甘油。術語"非陽離子脂質"指如上所述的任何中性脂質以及陰離子脂質。有用的非陽離子脂質包括，例如，二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)、二油醯磷脂醯膽鹼(DOPC)、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、二油醯磷脂醯甘油(DOPG)、二棕櫚醯磷脂醯甘油(DPPG)、二油醯磷脂醯乙醇胺(DOPE)、棕櫚醯油醯磷脂醯膽鹼(POPC)、棕櫚醯油醯-磷脂醯乙醇胺(POPE)、和二油醯-磷脂醯乙醇胺4-(N-馬來醯亞胺基甲基)-環己垸-l-羧酸酯(DOPE-mal)、二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻醯磷乙醇胺(DMPE)、二硬脂醯-磷脂醯-乙醇胺(DSPE)、16-0-單甲基PE、16-0-二甲基PE、18-l-反式PE、l-硬脂醯-2-油醯-磷脂醯乙醇胺(SOPE)、和1,2-二反油酸基(didaidoyl)-sn-甘油基-3-磷乙醇胺(反式DOPE)。術語"陰離子脂質"指在生理pH值下帶負電荷的任何脂質。這些脂質包括，但不限於，磷脂醯甘油、心磷脂、二醯基磷脂醯絲氨酸、二醯基磷脂酸、N-十二垸醯磷脂醯乙醇胺、N-琥珀醯磷脂醯乙醇胺、N-戊二醯磷脂醯乙醇胺，賴氨醯磷脂醯甘油、棕櫚醯油醯磷脂醯甘油(POPG)，和其它與中性脂質連接的陰離子修飾基團。術語"陽離子脂質"指許多脂質種類中的任何一種，其在選定的pH值，諸如生理pH值下攜帶淨正電荷。這些脂質包括，但不限於，N,N-二油基-N,N-二甲基氯化銨("DODAC");N-(2,3-二油基氧基)丙基)-N，N,N-三甲基氯化銨("DOTMA");N,N-二硬脂基-N,N-二甲基溴化銨("DDAB");N-(2,3-二油醯氧基)丙基)-N,N，N-三甲基氯化銨("DOTAP");3-(N-(N，，N，-二甲基氨基乙烷)-氨基甲醯基)膽固醇("DC-Chol")和N-(l，2-二肉豆蔻基氧基丙-3-基)-N,N-二甲基-N-羥乙基溴化銨("DMRIE")。另外，許多陽離子脂質商業製劑是可用的，其可以用於本發明。這些包括，例如，LIPOFECTIN0i購陽離子脂質體，其包含DOTMA和l,2-二油醯j-3-磷乙醇胺("DOPE"),來自GIBCO/BRL,GrandIsland,紐約，美國)；LIPOFECTAMINE(商購陽離子脂質體，其包含N-(l-(2,3-二油基氧基)-丙基)-N-(2-(精胺甲醯胺基)乙基)-N，N-二甲基三氟乙酸銨("DOSPA")和("DOPE")，來自GIBCO/BRL);和TRANSFECTAM⑧(商購陽離子脂質，其包含在乙醇中的雙十八烷基醯氨基甘氨醯羧基精胺("DOGS")，來自普洛麥格公司(PromegaCorp.)，Madison,威斯康辛，美國)。下述脂質是陽離子的並且在低於生理pH值時具有正電荷DODAP,DODMA,DMDMA，1,2-二亞油酸基氧基-N,N-二甲基氨基丙烷(1，2-DiLinoleyloxy-N,N-dimethylaminopropane)(DLinDMA)，1,2-亞油精基氧基-N,N-二甲基氨基丙烷(1,2-Dilinolenyloxy-N，N-dimethylaminopropane)(DLenDMA)等。除了陽離子和非陽離子脂質之外，本發明的SNALP可以包括雙層穩定組分(BSC)，諸如ATTA-脂質或PEG-脂質，諸如偶聯於二烷氧基丙基的PEG(PEG-DAA)，如在例如WO05/026372中所述，偶聯於二醯基甘油的PEG(PEG-DAG)，如在例如美國專利公開號20030077829和2005008689中所述，偶聯於磷脂醯乙醇胺(PE)的PEG(PEG-PE)，或綴合於神經醯胺的PEG，或其混合物(參見，美國專利號5,885，613)。在一個優選的實施方案中，所述BSC是抑制SNALP聚集的綴合的脂質。在某些方面中，所述陽離子脂質典型地構成在所述顆粒中存在的總脂質的約2%-約70%，約5%-約50%，約10%-約45%，約20°/。-約40%，或約30%-約40%。所述非陽離子脂質典型地構成在所述顆粒中存在的總脂質的約5%-約90%，約10%-約85%，約20%-約80%，約30°/。-約70%，約40%-約60%，或約48%。PEG-脂質綴合物典型地構成在所述顆粒中存在的總脂質的約0.5%-約20%，約1.5%-約18%，約4%-約15%，約5°/。-約12%，或約2%。本發明的核酸-脂質顆粒還可以包含膽固醇。如果存在，膽固醇典型地構成在所述顆粒中存在的總脂質的約0°/。-約10%，約2%-約10%，約10%-約60%，約12%-約58%，約20%-約55%，或約48%。對於本領域的技術人員將容易地是顯而易見的是，所述核酸-脂質顆粒的成分的比例可以改變。在一些實施方案中，在形成的核酸-脂質顆粒中的核酸脂質的比例(質量/質量比例)將在約0.01-約0.2，約0.03-約0.01，或約0.01-約0.08範圍內。起始材料的比例也落在這一範圍之內。在另一個實施方案中，所述核酸-脂質顆粒製劑使用約400嗎核酸/10mg脂質，或核酸脂質的比例為約0.01-約0.08或約0.04，其對應1.25mg總脂質/50嗎核酸。"脂質囊"指可用於遞送化合物的任何脂質組合物，其包括，但不限於，脂質體，其中水體積被兩親性脂雙層所包封；或其中脂質塗覆包含大分子組分的內部，所述大分子組分諸如質粒，具有減小的水性內部；或脂質聚集體或微團，其中被包封的成分包含在相對混亂的脂質混合物中。當用於本文時，"包封的脂質"可以指為化合物提供完全包封、部分包封或兩者的脂質製劑。當用於本文時，術語"SNALP"指穩定的核酸脂質顆粒。SNALP代表塗覆包含核酸的內部的脂質囊，諸如具有減少的水性內部的質粒。II.概述本發明提供用於製備脂質囊的方法和裝置。所述方法可以用於製備具有廣泛範圍的脂質成分的脂質囊，所述廣泛範圍的脂質成分包括，但不限於，陽離子脂質、陰離子脂質、中性脂質、聚乙二斷PEG)脂質、親水性聚合物脂質、促溶脂質和固醇。疏水活性可以結合到含有脂質的有機溶劑(例如，乙醇)中，並且核酸和疏水活性可以添加到水性成分中。在某些方面，本發明的方法可以用於製備微乳，其中脂質單層包繞油基核。在某些方面，所述方法和裝置用於製備脂質囊，或脂質體，其中在脂質體形成的同時在脂質體內部包封治療劑。III.製備方法圖1是本發明的方法的代表性流程圖100的實例。這一流程圖只是舉例說明，並且不應該限制本發明權利要求的範圍。本領域的普通技術人員應該認識到其它變化、改進和備選方案。在一個方面中，本方法提供脂質溶液IIO，諸如在良好製備操作(GoodManufacturingPractice(GMP))下合成的臨床等級的脂質，其隨後增溶在有機溶液120(例如，乙醇)中。類似地，在GMP下製備治療產品，例如，治療活性劑，諸如核酸112或其它試劑。然後，將含有緩衝劑(例如，檸檬酸鹽)的治療劑溶液(例如，核酸)115與增溶在低級垸醇中的脂質溶液120混合，以形成脂質體製劑130(在本文還稱為"脂質體懸浮液"或"脂質體溶液")。基本上在脂質體形成的同時將治療劑捕獲在脂質體中。典型地，在負電荷核酸和正電荷陽離子脂質之間的靜電相互作用導致包封作用。例如，如果使用可滴定的陽離子脂質，在接近或超過所述陽離子脂質pKa的更高的pH值可以獲得低NA包封效率。然而，本領域的技術人員應該意識到，本發明的方法和裝置同等適用於在所述囊形成之後脂質體的活性捕獲或負載。在某些方面，所述脂質體溶液基本上立即與緩衝溶液140混合，以稀釋脂質體溶液(例如，脂質體的懸浮液)。按照本發明的方法和系統，向攪拌環境諸如在攪拌室中連續引入脂質和緩衝溶液的作用引起用所述緩衝劑溶液對所述脂質溶液的連續稀釋，由此基本上在攪拌的同時產生脂質體。立即稀釋脂質體懸浮液，例如，將脂質體懸浮液與緩衝液混合，幫助防止脂質體粒度增加，這是如果允許所述脂質體懸浮液靜置延長的時間階段，例如數分鐘或數小時的典型的情形。此外，立即稀釋還提高脂質體的均勻性，特別是在siRNA是所包封的治療劑的情形中。當用於本文時，短語"用緩衝溶液連續稀釋脂質溶液"(及變化)一般意指所述脂質溶液在水合過程中充分快速地稀釋，具有充分的力完成囊的產生。在本發明的方法中，所述有機脂質溶液典型地包含有機溶劑，諸如低級烷醇。如上文提及，在一個方面中，將所述脂質體立即用緩衝劑(例如，檸檬酸鹽)稀釋140，以增加核酸(例如，質粒)捕獲並保持粒度。所述稀釋可以通過將脂質體溶液立即引入到控制量的緩衝溶液中的方式進行，或者通過將脂質體溶液與控制流速的緩衝劑在第二混合區域中混合而進行。在樣品濃縮160之前，通過使用例如陰離子交換柱體150而去除游離的治療劑(例如，核酸)。此外，通過使用超濾步驟170去除垸醇，濃縮所述樣品(例如，濃縮至約0.9mg/mL質粒DNA)，去除烷醇，並且將緩衝劑用置換緩衝劑(例如，用鹽水緩衝劑)180取代。其後，將所述樣品過濾190並且裝入管瓶195。現在將使用如在圖1中列出的步驟在下文中更詳細地討論本方法。1.脂質增溶(solubilization)和治療劑溶解(dissolution)在一個實施方案中，按照本發明的方法生產的脂質體囊包括穩定的核酸脂質顆粒(即，SNALP)製劑。本領域的技術人員應該理解，下述描述只是舉例說明的目的。本發明的方法適用於廣泛範圍的脂質囊類型和大小。這些脂質囊包括，但不限於，己知為單層脂質囊的單一雙層脂質囊，其可以製成小的(SUVs)或大的(LUVs)，以及多層脂質囊(MLVs)。其它囊包括，微團、脂質-核酸顆粒、病毒體等。本領域的技術人員應該了解本發明的方法和裝置適用的其它脂質囊。按照本方法和裝置製備的脂質體的優選大小為直徑在約50-200nm之間。在某些方面，脂質體製劑具有這樣的大小分布，其中平均大小(例如，直徑)是約70nm至約200nm，並且更典型地平均大小為約100nm或更小。在某些方面，本發明的脂質體製劑(例如，SNALP製劑)包含4種脂質成分磷脂；膽固醇；PEG-脂質；和陽離子脂質。在一個方面中，所述磷脂是DSPC，所述PEG-脂質是PEG-S-DSG，並且所述陽離子脂質是DODMA。在一個方面中，摩爾組成是約20:45:10:25的DSPC:Chol:PEG-DSG:DODMA。在另一個方面，所述SNALP製劑是20:48:2:30的DSPC:膽固醇PEG-C-DMA:DlinDMA。在某些實施方案中，脂質增溶在其中的有機溶劑的濃度為約45。/。v/v-約100。/。v/v。在某些方面，所述有機溶劑是低級垸醇。適合的低級垸醇包括，但不限於，甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、它們的異構體以及它們的組合。在一個實施方案中，所述溶劑是乙醇，其體積約為50-90y。v/v。在一個方面中，脂質佔約lmL/g-約5mL/g的體積。例如，在適當的溫度使用高架攪拌器，將脂質增溶120。在一個方面中，溶液的總脂質濃度為約15.1(例如，對於SNALP製劑約11.6)mg/mL(20mM)。在某些方面，治療劑(例如，核酸)包含在水溶液中(例如，緩衝劑)並且稀釋至終濃度。在一個方面中，例如，所述終濃度為在檸檬酸鹽緩衝液中約0.9mg/mL，pH約4-6。在這種情形中，質粒溶液的體積與烷醇-脂質溶液的體積相同。應該理解，當使用本發明的直接稀釋方法時，緩衝溶液不必是酸性的，例如，緩衝溶液的pH值可以是7.0或更高。在一個實施方案中，使用高架混合器在套層不鏽鋼容器中進行治療劑(例如，核酸)溶液的製備。樣品不需要加熱進行製備，儘管在某些情形中，它是在與脂質囊形成之前的脂質溶液相同的溫度。在一個實施方案中，治療劑包含在脂質溶液中。在某些方面，在脂質溶液中的治療劑是親脂性的。適當的親脂性試劑包括紫杉醇(taxol)，紫杉醇衍生物，其包括，例如，protaxIII和紫杉醇(paclitaxol)，親脂性苯並卟啉，維替泊芬膦甲酸的脂質前藥，l-0衝八垸基-sn-甘油-3-膦醯基甲酸酯(ODG-PFA)，二油醯[3H]碘代脫氧尿嘧啶([3H]IDU-012)，脂質衍生的HIV蛋白酶抑制肽，諸如iBOC-[L-Phe]-[D-(3-Nal]-Pip-[a-(OH)-Leu]-Val(7194)和其它脂質衍生的藥物或前藥。2.脂質體形成在已經製備溶液如脂質溶液120和水性治療劑(例如，核酸)溶液115之後，將它們混合在一起130，例如，使用蠕動泵混合器或無脈動齒輪泵進行。在一個方面中，將所述溶液以基本上相等的流速泵入混合環境中，儘管也可以使用不相等的流速。在某些方面，所述混合環境包括"T"-型連接器或混合室。在這種情形中，優選地，流體管道，並且因此流體流動在"T"-連接器內的狹窄孔內匯合，作為相對彼此以大約180。的相對流動。可以使用具有更狹窄的相對引入角度的其它混合室或連接器，諸如例如在27°和90°之間和在90°和180°之間。當溶液流在混合環境中匯合併且混合時，脂質囊基本上瞬時形成。當包含溶解的脂質的有機溶液和水溶液(例如，緩衝劑)同時並且連續地混合時形成脂質囊。有利地並且意外地，通過混合所述水溶液和有機脂質溶液，所述有機脂質溶液經歷連續的、順序的逐步稀釋，從而基本上同時產生脂質體溶液(脂質體的懸浮液)。泵機構可以設置成將相等或不同流速的脂質和水溶液提供到混合環境中，這在高烷醇環境中產生脂質囊。有利地，並且意外地，如這裡教導的用於混合脂質溶液和水溶液的方法和裝置在基本上與脂質體形成同時提供治療劑在所形成的脂質體中的包封，包封效率達到約90%。如果需要，在這裡討論的其它處理步驟可以用於進一步改進包封效率和濃度。在一個實施方案中，在將溶解在有機溶劑(例如，乙醇)中的脂質通過與水溶液(例如，緩衝劑)混合以逐步方式稀釋時形成脂質囊。這種受控的逐步稀釋通過將水性和脂質流在孔如T-連接器中混合，並且隨後立即稀釋在緩衝溶液中而實現。如果需要，得到的脂質，溶劑和溶質濃度可以在囊形成過程中保持不變。在一個方面中，形成具有小於約150nm，例如，約IOOnm或更小的平均直徑的脂質囊，其有利地不需要通過高能處理諸如膜擠出、聲處理或微流態化而進一步減小尺寸。本發明方法的一個實施方案顯示在圖2中。在一個方面中，使用本發明的方法，通過沒有梯度的兩階段逐步稀釋而製備囊。例如，在第一逐步稀釋中，在高烷醇(例如，乙醇)環境(例如，約20。/。-約55。/。v/v的乙醇)中形成囊。然後，可以通過以逐步方式將烷醇(例如，乙醇)濃度降低到小於或等於約25%v/v，諸如約17%v/v-約25。/。v/v而穩定這些囊。在某些方面中，治療劑存在於水溶液中，或在脂質溶液中，治療劑在脂質體形成的同時被包封。如在圖2中所示，在一個實施方案中，脂質最初溶解在約40%-約100%v/v，更典型地約65%-約90%v/v，並且最典型地約80°/。-約90%v/v的烷醇環境中(A)。接著，通過與水溶液混合而逐步稀釋所述脂質溶液，這導致在約20.0-55%的烷醇(例如，乙醇)濃度中形成囊(B)。通過混合水溶液和有機脂質溶液，所述有機脂質溶液進行連續、順序的逐步稀釋，從而產生脂質體。此外，可以通過將囊另外逐步稀釋到低於或等於約25%，優選地約19-25。/。的垸醇濃度而進一步穩定脂質囊諸如SNALP(—種脂質-顆粒)(C)。在某些方面，所述另外的順序稀釋(C)基本上在脂質體形成後立即進行。例如，在脂質體溶液形成和稀釋(C)之間經過小於1分鐘是有利的，更有利地是小於10秒，並且甚至更有利地是小於1秒或2秒。在某些方面，對於兩種順序稀釋(A—B和B—C)，得到的乙醇、脂質和溶質濃度在接收容器中都保持不變。與通過在更低的乙醇濃度稀釋而形成的囊相比較，在初始混合步驟之後的這些更高的乙醇濃度，脂質單體重排成雙層以更有序的方式進行。不受任何具體理論的限制，據信這些更高的乙醇濃度促進核酸與陽離子脂質在雙層中的締合。在一個方面中，核酸包封發生在高於22%的烷醇(例如，乙醇)濃度範圍內。在一個方面中，脂質囊以約60-約400mL/分鐘的速率形成。在混合步驟130後，脂質濃度為約1-12mg/mL,並且治療劑(例如，核酸)濃度為約0.05-0.23mg/mL。在某些優選的方面中，脂質濃度為約1.25mM0.72mg/mL並且治療劑(例如，核酸)濃度為約0.06mg/mL，從而提供約為12的脂質核酸比例。緩衝劑濃度為約l-3mM，並且烷醇濃度為約45%v/v-約90。/。v/v。在優選的方面中，緩衝劑濃度為約3mM，並且垸醇濃度為約45%v/v-約600/。v/v。3.脂質體稀釋返回圖1，在囊形成步驟130後，通過在去除游離核酸之前立即稀釋140脂質囊懸浮液(脂質體溶液)，而提高治療劑(例如，核酸)包封程度，並且保持粒度，並且甚至減小粒度。例如，在稀釋步驟140之前，如果治療劑捕獲在約50-60%，在稀釋步驟140之後，它可以增加到約80-90%。在歩驟140中，通過與水溶液諸如緩衝劑混合(例如，1:1，20mM擰檬酸鹽緩衝液，300mMNaCl，pH6.0)，脂質體製劑稀釋到約10%-約40%，優選約20%的烷醇。然後，任選地允許稀釋的樣品在室溫下溫育。4.去除游離的治療劑在立即稀釋140之後，約70-80%或更多的治療劑(例如，核酸)被捕獲在脂質囊(例如，SNALP)內，並且游離的治療劑可以從製劑去除150。在某些方面，使用陰離子交換層析。有利地，使用陰離子交換樹脂導致高動力學的核酸去除能力，能夠單獨使用，可以預先滅菌和驗證，並且是完全可縮放的。另外，所述方法導致游離治療劑(例如，核酸，諸如大約總質粒的25%)的去除。樣品體積在層析後沒有改變，並且治療劑(例如，核酸)和脂質濃度分別為約0.04-0.05和0.7mg/mL。在這一點上，可以關於包封的治療劑檢測樣品。5.樣品濃縮在某些情形中，例如，使用超濾160(例如，切向流透析)，將脂質體溶液任選地濃縮約5-50倍，優選地10-20倍。在一個實施方案中，將樣品轉移到超濾系統的給料儲蓄器中，並且去除緩衝劑。可以使用各種方法諸如通過超濾去除所述緩衝劑。在一個方面中，使用裝滿聚碸中空纖維，例如具有約0.5mm-約l.Omm的內徑和30，000標稱截留分子量(NMWC)的聚碸中空纖維的柱體，去除緩衝劑。還可以使用具有約l,OOOMWCO-約750,000MWCO的中空纖維。將脂質體保留在所述中空纖維內並且再循環，而溶劑和小分子通過流經中空纖維的孔而從所述製劑去除。在這一步驟中，濾液稱為穿透溶液。當完成濃縮步驟時，治療劑(例如，核酸)和脂質濃度分別可以增加到約2和60mg/mL。在一個實施方案中，烷醇濃度保持不變，但是烷醇.*脂質的比例減小約50倍。6.垸醇去除在一個實施方案中，將濃縮的製劑對約5-20個體積的，優選約10個體積的水溶液(例如，緩衝劑)(例如，pH4.0的檸檬酸鹽緩衝劑(25mM檸檬酸鹽，100mMNaC1))進行滲濾，以去除垸醇170。還可以使用中性緩衝劑或糖基緩衝劑。在完成步驟170的垸醇濃度小於約1%。脂質和治療劑(例如，核酸)濃度保持不變，並且治療劑捕獲的水平也保持恆定。7.緩衝劑置換在已經去除烷醇之後，然後通過對另一種緩衝劑(例如，對10個體積的鹽水，含有IOmMHepes或磷酸鹽的150mMNaCl，pH7.4)滲濾而置換水溶液180。可以使用任何種類的緩衝劑，例如，中性的、糖基的等。典型地，脂質與治療劑(例如，核酸)的濃度比例保持不變，並且核酸捕獲的水平大約恆定。在某些情形中，通過用約為濃縮樣品10%體積的緩衝劑漂洗柱體可以提高樣品收率。在某些方面，然後將這種漂洗物添加到濃縮樣品中。8.無菌過濾在某些優選的實施方案中，可以任選地進行脂質濃度約12-120mg/mL的樣品的無菌過濾190。在某些方面，在低於約40psi的壓力下進行過濾，使用囊式濾器(capsulefilter)和具有加熱套層的加壓分配容器。稍微加熱樣品可以改善過濾的容易度。9.無菌填充使用與常規脂質體配製方法相似的方法進行無菌填充步驟195。本發明的方法導致在最終產物中約50-60%的輸入治療劑(例如，核酸)。在某些方面，最終產物的治療劑與脂質的比例為約0.01-0.2。IV.治療劑本發明的脂基藥物製劑和組合物用於全身或局部遞送治療劑或生物活性劑，並且還用於診斷檢測中。下述討論一般指脂質體；然而，相同的討論完全適用於本發明其餘的藥物遞送系統，這對於本領域的技術人員是顯而易見的。如上文所討論，治療劑優選地在囊形成過程中結合到脂質囊內。在一個實施方案中，疏水活性與脂質一起結合到有機溶劑中，而核酸和親水治療劑可以添加到水性成分中。在某些情形中，所述治療劑包括下列各項的一種蛋白質、核酸、反義核酸、核酶、tRNA、snRNA、siRNA、shRNA、ncRNA、預先濃縮的DNA、適體、抗原及它們的組合。在優選的方面，所述治療劑是核酸。所述核酸可以編碼蛋白質，諸如例如，單純皰疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)、胞嘧啶脫氨酶、黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶、p53、嘌呤核苷磷酸化酶、羧酸酯酶、脫氧胞苷激酶、硝基還原酶、胸苷磷酸化酶、或細胞色素P4502B1。在某些方面，治療劑結合在有機脂質成分中。在某些情形中，所述治療劑是親脂性的。適當的親脂性試劑包括紫杉醇(taxol)，紫杉醇衍生物，其包括，例如，protaxIII和紫杉醇(Paclitaxol)，親脂性苯並卟啉，維替泊芬膦甲酸的脂質前藥，l-0-十八烷基-sn-甘油-3-膦醯基甲酸酯(ODG-PFA)，二油醯[3H]碘代脫氧尿嘧啶([3H]IDU-012)，脂質衍生的HIV蛋白酶抑制肽，諸如iBOC-[L-PheHD-卩-Nal]-Pip-[a-(OH)-Leu〗畫Val(7194)和其它脂質衍生的藥物或前藥。在另一個實施方案中，本發明的脂質囊可以在囊形成之後負載一種或多種治療劑。在某些方面，使用本發明施用的所述治療劑可以是為待治療的疾病選擇的適當療法的多種藥物的任何藥物。通常所述藥物是抗腫瘤劑，諸如長春新鹼，多柔比星，米託蒽醌，喜樹鹼，順鉑，博來黴素，環磷醯胺，甲氨蝶呤，鏈脲黴素(streptozotodn),等。特別優選的抗腫瘤藥物包括，例如，放線菌素D,長春新鹼，長春鹼，半胱氨酸阿拉伯糖苷,蒽環黴素，烷基藥劑(alkyktiveagents),鉑化合物，抗代謝物，和核苷類似物，諸如甲氨蝶呤和嘌呤與嘧啶類似物。還可以理想地通過本方法將抗感染藥劑遞送到特定組織。本發明的組合物還可以用於其它藥物的選擇性遞送，所述其它藥物包括但不限於局部麻醉劑，例如，地布卡因和氯丙嗪;卩-腎上腺素阻斷劑，例如，普萘洛爾，噻嗎洛爾和拉貝洛爾；抗高血壓藥物，例如，可樂定和肼屈嗪；抗抑鬱藥，例如，丙米嗪，阿米替林和多塞平(doxepim);抗驚厥藥(anti-conversants),例如，苯妥英；抗組月安藥，例如，苯海拉明，氯苯那敏和異丙嗪；抗生素/抗細菌藥，例如，慶大黴素(gentamycin),環丙沙星和頭孢西丁；抗真菌藥，例如，咪康唑，特康唑,益康唑，異康唑，布他康唑(butaconazole),克黴唑，伊曲康唑，制黴菌素,萘替芬和兩性黴素B;抗寄生物藥，激素，激素拮抗劑，免疫調節劑，神經遞質拮抗劑，抗青光眼藥，維生素，麻醉品，和顯象劑。V.裝置在一個實施方案中，本發明提供用於實施本發明方法的系統和裝置。圖3a和3b分別顯示按照本發明的兩個實施方案的裝置300和裝置302的實例。這些圖表只是舉例說明，並且不應該限制本文權利要求的範圍。本領域的普通技術人員應該認識到其它的變化、改進和備選方案。如所示，裝置300和裝置302分別包括兩個儲蓄器，一個水溶液儲蓄器305和一個有機溶液儲蓄器310，分別用於容納水溶液和有機溶液。在某些方面，在低壓(例如，<10psi)快速製備脂質囊製劑，並且本發明的裝置和方法是完全可縮放的(scaleable)(例如，0.5mL-5000L)。在1-L規模，以約0.4-0.8L/分鐘形成脂質囊。在某些優選的方面，所述裝置不使用靜態混合器也不使用專門的擠出設備。在一個實施方案中，混合室320包括T-連接器，其具有任選的軟管倒鉤，其中流體管道324和326以約180。相互影響。還可以改變混合的角度，並且可以在約90°-約180°或者甚至27°-約90°的角度形成小於約100nm的脂質囊。在某些方面，使用基本上相等的流體管道流速製備充分限定和可再現平均直徑的脂質囊。在其它方面，在一些情形中，通過改變流體管道的流速而製備充分限定的和可再現的平均直徑的脂質囊，例如，以確保充分的混合。在某些方面中，流速之間的方差小於50%，更典型地小於約25%，並且甚至更典型地小於約5%。圖5顯示按照一個實施方案的T-連接器和相關的流動動力學。在實施例部分(下文)更詳細地顯示和討論流速的實例。與現有系統比較，本發明在低得多的(和基本上相等的)流速提供非湍流和提高的剪切速率。例如，在約500/s-約3300/s的剪切速率在約0.075-約0.4L/min的流速(兩個流動管道)的混合環境中，本發明有利地提供非湍流(N,.e<2000)。對於混合室的管下遊計算這些值；難以預測在T-連接器的混合點發生什麼。可能產生湍流，但是只是在混合室中的混合點產生。例如，使用蠕動泵315，容積式泵，無脈動齒輪泵，通過給脂質-乙醇和緩衝劑容器305、310加壓，或者通過組合兩種或多種這些和/或其它泵機構，可以驅動所述兩種流體成分的混合。在一個方面中，使用配有505L泵頂的Watson-Marlow505Di/L泵；矽氧烷管道(例如，鉬處理的，3.2mm內徑(ID),2.4mm壁厚；從WatsonMarlow獲得，貨號913A032024)可以用於進入聚丙烯或不鏽鋼T-連接器中的流體管道(例如，具有l/8"內徑(ID))。典型地，脂質囊在室溫下形成，但是按照本發明脂質囊可以在升高的溫度形成。與其它現有方法不同，對於緩衝劑組成沒有一般要求。事實上，本發明的方法和裝置可以通過將烷醇中的脂質與水混合而配製脂質囊。在某些方面，本發明的方法和裝置形成直徑小於約100nm的脂質囊。當製備包含核酸的脂質囊(諸如SNALP)時，核酸與陽離子脂質和反荷離子的比例可以最優化。對於精製製劑，在混合和乙醇去除步驟後優選70-95%的核酸("NA")包封。通過立即稀釋這一初始SNALP製劑，有利地提高NA包封的水平。令人驚訝地，當在混合環境中混合溶液(治療劑在一種溶液成分中)時，本發明的方法和裝置提供達到約90%的包封效率。在圖3a和3b中顯示兩種備選的稀釋方案，例如，直接稀釋。在圖3a中所示的實施方案中，將在混合區域320中形成的脂質體溶液立即並且直接引入到收集容器360中，收集容器360中含有控制量的稀釋緩衝劑。在優選的方面，容器360包括設置成攪拌容器360的內容物以促進稀釋的一個或多個元件。在一個方面中，在容器360中存在的稀釋緩衝劑的量基本上等於向其中引入的脂質體溶液的體積。例如，當45%乙醇中的脂質體溶液引入到含有相等體積的乙醇的容器360中時，將有利地在22.5%的乙醇中產生更小的顆粒。在圖3b中所示的實施方案中，將含有稀釋緩衝劑的第三儲蓄器345流動性地偶聯到第二混合區域340。在該實施方案中，將在混合區域320中形成的脂質體溶液立即並且直接與在第二混合區域340的稀釋緩衝劑混合。在某些方面，混合區域340包括排列的T-連接器，以致脂質體溶液和稀釋緩衝劑流動作為反向180°的流動而匯合，然而，可以使用提供更狹窄角度例如，27°-約180°的連接器。泵機構330將緩衝劑的可控流動遞送至混合區域340。在一個方面中，控制提供到混合區域340的稀釋緩衝劑的流速，使之基本上等於從混合區域320引入到其中的脂質體溶液的流速。本實施方案有利地允許更多地控制與所述脂質體溶液在第二混合區域340混合的稀釋緩衝劑流動，並且因此還更多地控制在整個第二混合過程的緩衝劑中脂質體溶液的濃度。這種稀釋緩衝劑流速的控制有利地允許在減小的濃度形成小的粒度。參見，例如，下面的實施例部分。在某些方面中，本發明的脂質體生成裝置300和302進一步包括用於控制儲蓄器305和310的溫度的溫度控制機構(未顯示)。典型地，來自第一儲蓄器305和第二儲蓄器310的流體在分開的孔同時流入混合室320。裝置302進一步包括用於脂質體收集的第二混合室340下遊的收集儲蓄器350。此外，在某些方面，裝置300和302進一步包括儲蓄器305和310之一或兩者上遊的存儲容器。此外，儲蓄器305和310之一或兩者可以包括裝有高架混合器的套層不鏽鋼容器。在另一個實施方案中，本發明提供具有超濾系統的裝置，用於實施本發明的方法。圖4是按照本發明的一個實施方案的裝置400的代表性示意圖的實例。這一示意圖只是舉例說明，並不應該限制本文權利要求的範圍。本領域的普通技術人員應該認識到其它的變化、改進和備選方案。在某些方面，裝置400包括多個儲蓄器，並且裝有超濾系統。水溶液儲蓄器440和有機溶液儲蓄器430每一個分別具有上遊製劑囊(未顯示)。如在圖4中所示，收集容器450與流動超濾系統流體連通。在某些方面，超濾用來濃縮SNALP樣品，然後通過緩衝劑置換而將乙醇從製劑中去除。應該理解，當進行按照圖3a的方法時，收集容器450可與包含需要量的稀釋緩衝劑。類似地，當進行按照'圖3b的過程時，容器450可以作用為圖3b的收集容器350(在圖4中未顯示的第二泵)。在一個操作實施方案中，將稀釋的SNALP轉移到超濾系統的給料儲蓄器中。通過去除緩衝劑和乙醇，例如，通過使用用擁有約0.5mm-約1.0mm內徑和約l,000-約750,000截留分子量(MWCO)的聚碸中空纖維填充的錯流柱體，而進行濃縮。SNALP保持在所述中空纖維內並且再循環，而乙醇和緩衝劑成分通過流經這些中空纖維的孔而從所述製劑去除。這種濾液稱為穿透溶液，並且被丟棄。當SNALP濃縮到需要的質粒濃度時，SNALP懸浮在其中的緩衝劑可以通過超濾去除，並且被等體積的最終緩衝劑置換。超濾可以用其它方法諸如常規透析代替。VI.實施例實施例l-現有方法與直接稀釋方法的比較SNALP由2摩爾。/。PEG-C-DMA，30%DlinDMA，20摩爾。/。DSPC和48摩爾。/。Chol"組成。WATSONMARLOW泵一505Di/L型—核酸未修飾的siRNA(在0.9。/。NaCl中復原)(0.225mg/mlsiRNA)—混合體積10mL核酸+100^脂質-乙醇溶液(5mL脂質)—1.6mmT形連接器，3.2mm管道，每個通道40cm管長^流速200mL/分鐘條件1.將核酸與脂質混合，然後在溫育延遲後使用泵稀釋SNALP(現有方法)。2.將核酸與脂質混合，然後使用移液器添加緩衝劑而稀釋SNALP。3.將核酸和脂質直接混合到含有稀釋緩衝劑的瓶中(圖3a，不攪動)。4.將核酸和脂質直接混合在攪動的稀釋緩衝劑中(圖3a)。結果:tableseeoriginaldocumentpage24與用現有方法諸如在公布的美國申請2004/0142025中公開的方法製備的SNALP相比較，直接稀釋方法(圖3a)以類似的包封效率產生顯著更小的SNALP顆粒。實施例2-使用變化的方法參數比較本發明的方法。形成4x濃縮的SNALPSNALP2顯示在圖3a中的方法SNALP3顯示在圖3b中的方法tableseeoriginaldocumentpage25形成4x濃縮的SNALP直接稀釋(圖3a)相對管道中的稀釋(圖3b)tableseeoriginaldocumentpage26*在稀釋之前關於初始囊形成的速率的流速值，對於管道中的稀釋方法以600mL/min遞送的稀釋緩衝劑，以在得到的SNALP樣品中獲得20%的EtOH。總結1.當泵流速增加時，可以在更高的初始脂質和siRNA濃度(4x)製備SNALP，並且對所述siRNA溶液、脂質溶液和稀釋緩衝劑進行修飾。這些SNALP具有良好的包封效率和粒度。2.使用管道中的稀釋方法(SNALP3-圖3b)，可以進一步控制這些SNALP的粒度，給出在尺寸上類似於以四分之一的初始脂質和siRNA濃度製備的SNALP2(圖3a)的顆粒。VII.結論使用本發明的系統和方法可以生產的脂質顆粒的其它特點、優點和實例可以在美國臨時專利申請系列號[60/](代理人記錄號020801-002810US)中找到，所述美國臨時專利申請系列號[60/](代理人記錄號020801-002810US)題目為"ApoliproteinB的siRNA沉默(siRNASilencingofApoliproteinB)"，與本申請同時於2005年7月27日提交，其內容通過引用結合於此。本文討論的所有專利、專利申請和其它參考文獻都通過引用結合於此。儘管本發明已經通過實施例並且關於具體的實施方案進行了描述，但是應該理解，本發明不限於所公開的實施方案。相反，意欲涵蓋對於本領域的技術人員顯而易見的各種改進和類似的安排。因此'後附的權利要求的範圍應該符合最廣泛的解釋，從而包括所有這樣的改進和類似的安排。權利要求1.生產包封治療產品的脂質體的方法，所述方法包括在第一儲蓄器中提供水溶液；在第二儲蓄器中提供有機脂質溶液，其中所述水溶液和所述有機脂質溶液的一種包含治療產品；將所述水溶液和所述有機脂質溶液在第一混合區域混合，以產生脂質體溶液，其中所述有機脂質溶液與所述水溶液混合，以便基本上瞬時產生包封所述治療產品的脂質體；並且然後立即將所述脂質體溶液與緩衝溶液混合，以產生稀釋的脂質體溶液。2.權利要求1的方法，其中將所述脂質體溶液與所述緩衝溶液混合包括將所述脂質體溶液引入到含有所述緩衝溶液的第三儲蓄器中。3.權利要求2的方法，其中所述第三儲蓄器包含基本上等於或大於向其中引入的脂質體溶液的量的一定量的緩衝溶液。4.權利要求2的方法，其中攪拌所述第三儲蓄器。5.權利要求1的方法，其中將所述脂質體溶液與所述緩衝溶液混合包括在第二混合區域中混合。6.權利要求5的方法，其中所述第一混合區域包括第一T-連接器，其中將所述水溶液和所述有機脂質溶液作為相對彼此基本上1S0。的相對流動引入到第一T-連接器中，其中第二混合區域包括第二T-連接器，並且其中將所述脂質體溶液和所述緩衝溶液作為相對彼此基本上180°的相對流動引入到所述第二T-連接器中。7.權利要求1的方法，其中所述第一混合區域包括第一T-連接器，並且其中將所述水溶液和所述有機脂質溶液作為相對彼此基本上180°的相對流動引入到所述T-連接器中。8.權利要求1的方法，其中所述脂質體溶液具有約20y。v/v至約55%v/v的有機溶劑濃度。9.權利要求8的方法，其中所述稀釋的脂質體溶液具有小於約25%v/v的有機溶劑濃度。10.權利要求1的方法，其中所述脂質體直徑小於約100nm。11.權利要求1的方法，其中所述治療產品選自由下列各項組成的組:蛋白質、質粒、適體、核酸、反義核酸、核酶、tRNA、snRNA、siRNA、shRNA、ncRNA、預先濃縮的DNA和抗原。12.權利要求l的方法，其中所述治療產品是核酸。13.權利要求12的方法，其中所述核酸編碼選自由下列各項組成的組的蛋白質單純皰疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)、胞嘧啶脫氨酶、黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶、p53、嘌呤核苷磷酸化酶、羧酸酯酶、脫氧胞苷激酶、硝基還原酶、胸苷磷酸化酶、或細胞色素P4502B1。14.權利要求l的方法，其中所述治療產品是親脂性的。15.權利要求14的方法，其中所述親脂性產品選自由protaxIII、紫杉醇(Paclitaxol)、紫杉醇(taxol)、紫杉醇衍生物和脂質衍生的前藥組成的組。16.用於生產包封治療產品的脂質體的系統，所述系統包括容納水溶液的第一儲蓄器；容納有機脂質溶液的第二儲蓄器，其中所述水溶液和所述有機脂質溶液中的一種包含治療產品；和泵機構，將所述泵機構設置成將所述水溶液和所述有機脂質溶液以基本上相等的流速泵抽到混合區域中，其中所述有機脂質溶液與所述水溶液在混合區域中混合，以基本上瞬時形成包封治療產品的脂質體溶液；和收集儲蓄器，所述收集儲蓄器包括緩衝溶液，與所述混合區域流體連通，其中將所述脂質體溶液在形成後基本上立即引入到收集儲蓄器中，由此形成稀釋的脂質體溶液。17.權利要求16的系統，其中所述混合區域包括T-連接器，並且其中將所述水溶液和所述有機脂質溶液作為相對彼此基本上180。的相對流動引入到所述T-連接器中。18.權利要求16的系統，其中所述收集儲蓄器含有基本上等於或大於向其中引入的脂質體溶液的量的一定量的緩衝溶液。19.權利要求16的系統，其中攪拌所述第三儲蓄器。20.用於生產包封治療產品的脂質體的系統，所述系統包括容納水溶液的第一儲蓄器；容納有機脂質溶液溶液的第二儲蓄器，其中所述水溶液和所述有機脂質溶液中的一種包含治療產品；和第一泵機構，將其設置成將所述水溶液和所述有機脂質溶液以基本上相等的流速泵抽到第一混合區域中，其中所述有機脂質溶液與所述水溶液在第一混合區域混合，以基本上瞬時形成包封治療產品的脂質體溶液；容納緩衝溶液的緩衝儲蓄器；禾口第二泵機構，將其設置成將所述緩衝溶液以控制的流速泵抽到第二混合區域中，其中在第一混合區域中形成以後，所述脂質體溶液基本上立即引入到第二混合區域，由此在所述第二混合區域形成稀釋的脂質體溶液。21.權利要求20的裝置，其中所述第一混合區域包括第一T-連接器，其中將所述水溶液和所述有機脂質溶液作為相對彼此基本上180°的相對流動引入到第一T-連接器中，其中所述第二混合區域包括第二T-連接器，並且其中將所述脂質體溶液和所述緩衝溶液作為相對彼此基本上180°的相對流動引入到所述第二T-連接器中。22.權利要求20的系統，其中控制所述緩衝溶液的流速基本上等同於或大於進入所述第二T-連接器的脂質體溶液的流速。23.權利要求16或20的系統，其中所述脂質體溶液具有約20%^^約55%v/v的有機溶劑濃度。24.權利要求23的系統，其中所述稀釋的脂質體溶液具有小於約25%v/v的有機溶劑濃度。25.權利要求16或20的系統，其中所述脂質體直徑小於約100nm。26.權利要求16或20的系統，其中所述治療產品選自由下列各項組成的組蛋白質、質粒、適體、核酸、反義核酸、核酶、tRNA、snRNA、siRNA、shRNA、ncRNA、預先濃縮的DNA和抗原。27.權利要求16或20的系統，其中所述治療產品是核酸。28.權利要求27的系統，其中所述核酸編碼選自由下列各項組成的組的蛋白質單純皰疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)、胞嘧啶脫氨酶、黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶、p53、嘌呤核苷磷酸化酶、羧酸酯酶、脫氧胞苷激酶、硝基還原酶、胸苷磷酸化酶、或細胞色素P4502B1。29.權利要求16或20的系統，其中所述治療產品是親脂性的。30.權利要求29的系統，其中所述親脂性產品選自由protaxIII、紫杉醇(Paclitaxo)、紫杉醇(taxol)、紫杉醇衍生物和脂質衍生的前藥組成的組。全文摘要本發明提供用於生產脂質體的裝置和方法。通過在第一儲蓄器中提供緩衝溶液，和在第二儲蓄器中提供脂質溶液，在混合室中用緩衝溶液連續稀釋所述脂質溶液而產生脂質體。將治療劑，諸如核酸，包含在所述緩衝溶液或所述脂質溶液的一種中。當混合脂質體時，基本上瞬時形成包封治療產品。然後，將形成的脂質體溶液立即用緩衝溶液稀釋，以提高均勻性並且保持小的粒度。文檔編號A61K38/43GK101267805SQ200680034313公開日2008年9月17日申請日期2006年7月27日優先權日2005年7月27日發明者伊恩·麥克拉克倫,勞埃德·B·傑夫斯,基尤·拉姆,愛德華·亞沃爾斯基申請人:普洛體維生物治療公司