用於獲得非變應性蜂膠的方法

2023-07-08 09:16:36 2

專利名稱：用於獲得非變應性蜂膠的方法
用於獲得非變應性蜂膠的方法本發明涉及用於獲得蜂膠衍生物的方法，所述蜂膠衍生物中變應原性物質的含量降低，從而使得其大量使用而對人健康沒有禁忌症；處理生蜂膠(raw propolis)或其衍生物的方法；以及有利地用於營養保健(nutraceutic)和美容領域的蜂膠水醇性衍生物。由蜜蜂((Apis mellifera))產生的蜂膠得自植物樹皮和葉芽(例如，楊樹、山毛櫸、樺樹、慄樹、松樹等)的樹脂滲出物，蜜蜂通過其唾液分泌和添加蠟來對所述滲出物進行採集和處理。在室溫下，蜂膠表現為粘性的可塑性物質，具有芳香氣味和取決於植物來源的不同顏色。蜂膠的化學組成取決於樹脂滲出物的植物來源，以及來源地區和採集季節。來自楊屬(Populus genus)植物的蜂膠由樹脂(20% 55% )、錯(30% 40% )、揮髮油(5% 10% )和多種酚類化合物(10% 30% )(尤其是包含類黃酮)組成。酚部分還包含苯烷基酸(例如，肉桂酸、咖啡酸、阿魏酸和對香豆酸)及其一些酯。
由於其中一些組分，蜂膠具有多種生物和藥理特性，包括抗細菌、抗病毒、抗真菌、抗炎、抗氧化、免疫刺激、止頻(cariostatic)、抗腫瘤和抗幽門螺旋菌(Helicobacterpylori)活性(L G. Coelho 等，"Brazilian green propolis on Helicobacter pyloriinfection. A pilot clinical study" , Helicobacter vol. 12 :572-4(2007))。對於這些特性，長久以來，已知在常用藥中使用基於蜂膠的製劑，並且主要應用涉及治療呼吸道感染、流感、痤瘡、創傷、燒傷、皰疹、牙齦炎和口炎以及預防齲齒。蜂膠還用於美容領域用於配製霜劑、軟膏劑、洗髮劑、洗劑、凝膠劑等。但是，除多種有益作用外，使用蜂膠可在特別敏感的人群中引起一些不希望的作用，例如口乾、輕度胃紊亂和變應性皮膚反應(變應性接觸性皮炎)(Contact dermatitis,Vol. 17 :163(1987) ；Pediatr. Dermatol. Vol. 22 :1 (2005) ；Contact dermatitis, Vol.51 255(2004))。近期研究(F.Giusti," Sensitization to propolis in 1255 childrenundergoing patch testing" ；Contact Dermatitis, Vol 51 :255-258 (2004))表明，這些變態反應可歸因於定義明確的蜂膠組分的混合物，稱為LB-1，其由咖啡酸及其通式(I)的一些酯組成。
權利要求
1.一種用於預處理包含至少一種通式(I)的變應原性物質之蜂膠的方法，
2.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於，具有選擇性酯酶活性的所述至少一種酶是細菌來源的。
3.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於，具有選擇性酯酶活性的所述至少一種酶由選自包含以下屬中的至少一種細菌產生乳桿菌屬(Lactobacillus)、肉桿菌屬(Carnobacterium)、腸球菌屬(Enterococcus)、鏈球菌屬(Streptococcus)和雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)。
4.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於具有選擇性酯酶活性的所述至少一種酶由選自包含以下物種中的至少一種細菌菌株產生副乾酪乳桿菌(Lactobacillusparacasei)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、幹釀乳桿菌(Lactobacillus casei)、發酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、麥芽香肉桿菌(Carnobacteriummaltaromaticum)、廣布肉桿菌(Carnobacterium divergens)、幾腸球菌(Enterococcusfaecalis)> 屎腸球菌(Enterococcus faecium)、嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)、兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)、假小鏈雙歧桿菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)、長雙歧桿菌(Bifidobacterium Longum)、動物雙歧桿菌(Bifidobacterium animal is)和青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)。
5.根據權利要求3或4所述的方法，其特徵在於，具有選擇性酯酶活性的至少一種酶由瑞士乳桿菌的至少一種細菌菌株產生。
6.根據權利要求2至5中任一項所述的方法，其特徵在於，所述反應步驟包括 -接種數目為IO4至102°、優選IO16的細菌細胞； -添加乙醇水溶液，其中乙醇含量為按體積計約5%至約20%，優選10% v/v，從而獲得反應混合物，以及 -在20°C至47°C的溫度下將所述反應混合物孵育30分鐘至72小時的時間，從而獲得衍生物，其通常為半固體衍生物。
7.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於，所述乙醇水溶液包含至少一種分散劑。
8.根據權利要求7所述的方法，其特徵在於，至少一種分散劑包含聚乙二醇，優選聚乙二醇 400。
9.根據權利要求6至8中任一項所述的方法，其特徵在於，所述孵育溫度為30°C至42°C，優選 37°C ±2°C。
10.根據權利要求6至9中任一項所述的方法，其特徵在於，所述孵育時間為約24小時。
11.通過根據權利要求I至10中任一項所述方法獲得的蜂膠衍生物，其特徵在於，所述衍生物具有含量降低的所述至少一種變應原性物質，所述降低大於60%。
12.通過根據權利要求I至10中任一項所述方法獲得的蜂膠衍生物，其特徵在於，與生蜂膠相比所述衍生物具有基本未改變的活性成分含量，所述活性成分包括類黃酮。
13.一種純化生蜂膠或半固體蜂膠衍生物的方法，其依次包括以下操作步驟 -將所述蜂膠用極性有機溶劑熱溶解以獲得溶液； -將所述溶液冷卻至室溫，以形成固體顆粒在所述有機溶劑中的懸液； -過濾固體顆粒以使其與所述懸液分離並獲得濾液； 隨後進行包括以下的至少一個循環 -對所述濾液進行化學分析以測定酒精測定體積滴度、幹殘餘物和/或按重量計的類黃酮濃度； -用水稀釋所述濾液以調節所述酒精測定體積滴度； -將所述濾液冷卻至低於0°c的溫度，保持8至30小時的時間，從而獲得分散體； -將任何不溶性物質與所述分散體分離，以分離出流體組分；其後，進行以下步驟 -對所述流體組分進行定量化學分析以測定類黃酮的重量/體積濃度；以及-調節所述流體組分濃度以獲得類黃酮含量為2. 5%至3. 0% w/v、優選2. 6%w/v的水醇性衍生物。
14.如權利要求13所述的方法，其特徵在於，所述至少一個循環包括 -用水稀釋所述濾液以使所述酒精測定體積滴度值在70%至80% v/v的範圍內； -將所述濾液冷卻至低於0°C的溫度，保持8至30小時的時間以獲得分散體； -將任何不溶性物質與所述分散體分離，以分離出流體組分； -對所述流體組分進行定量化學分析以測定類黃酮的重量/體積濃度； -用水稀釋所述濾液以使所述酒精測定體積滴度值在60%至70% v/v的範圍內； -將所述濾液冷卻至低於0°C的溫度，保持8至30小時的時間以獲 得分散體； -將任何不溶性物質與所述分散體分離，以分離出流體組分； -對所述流體組分進行定量化學分析以測定類黃酮的重量/體積濃度； -用水稀釋所述濾液以使所述酒精測定體積滴度值在50%至60% v/v的範圍內； -將所述濾液冷卻至低於0°C的溫度，保持8至30小時的時間以獲得分散體；以及 -將任何不溶性物質與所述分散體分離，以分離出流體組分。
15.根據權利要求13或14所述的方法，其特徵在於，所述極性有機溶劑包括乙醇，優選90%乙醇。
16.根據權利要求13、14或15所述的方法，其特徵在於，在進行所述過濾以獲得所述濾液之後對所述濾液進行化學分析，以測定所述酒精測定體積滴度、幹殘餘物和類黃酮含量。
17.根據權利要求13至16中任一項所述的方法，其特徵在於，在(TC至_20°C的溫度範圍內進行對濾液的所述冷卻。
18.根據權利要求13至17中任一項所述的方法，其特徵在於，在與所述分散體分離之後，對所述流體組分進行定量化學分析以測定其類黃酮含量。
19.根據權利要求13至18中任一項所述的方法，其特徵在於，通過選自過濾、離心和傾析的任何方法進行與不溶性物質的所述分離。
20.根據權利要求13至19中任一項所述的方法，其特徵在於，所述方法包括稀釋所述流體組分以調節其類黃酮含量。
21.根據權利要求13至19中任一項所述的方法，其特徵在於，所述方法包括除去所述流體組分的所述溶劑的一部分以調節所述類黃酮含量。
22.通過根據權利要求13至21中任一項所述方法獲得的水醇性水可分散蜂膠衍生物，用作營養保健劑。
23.通過根據權利要求13至21中任一項所述方法獲得的水醇性水可分散蜂膠衍生物，用於配製美容產品。
24.根據權利要求13至21中任一項所述的方法，其特徵在於，所述生蜂膠或半固體蜂膠衍生物通過如權利要求I至10中任一項所述的方法獲得。
全文摘要
本發明涉及用於預處理包含至少一種變應原活性物質的生蜂膠的方法，其包括使蜂膠與包含一種或更多種具肉桂醯酯酶活性之酶的益生微生物反應，以獲得基本不含或耗盡變應原性物質的半固體蜂膠衍生物。本發明還涉及純化半固體蜂膠衍生物以獲得水醇性水可分散蜂膠衍生物的方法。
文檔編號A61K35/64GK102802646SQ201180014028
公開日2012年11月28日 申請日期2011年3月15日 優先權日2010年3月16日
發明者朱塞佩·馬裡亞·裡基烏託, 克勞迪奧·塞巴斯蒂亞諾·加爾達納, 西蒙娜·多梅尼科·古列爾梅蒂 申請人:朱塞佩·馬裡亞·裡基烏託