一種藍莓組培苗液體生根方法及專用培養容器的製造方法
2023-07-26 22:52:46 2
一種藍莓組培苗液體生根方法及專用培養容器的製造方法
【專利摘要】本發明公開了一種藍莓組培苗液體生根方法以及專用培養容器，生根方法包括以下步驟：配製溶液，製備含一定種類和濃度激素的液體培養基，將培養基分裝於吸頭盒中外盒中，放置支架，食用菌袋包裹後高壓蒸汽滅菌，接種，生根培養；專用培養容器由吸頭盒改造而來，包括：吸頭盒和設置於吸頭盒內的支架，支架上形成有若干支架孔，支架的高度、孔數、孔徑與增殖新梢的長度、粗度相適應。本發明的有益之處在於：通過優化培養基配方、在吸頭盒中放置支架，使得藍莓組培苗瓶內生根率大幅度提高，增殖新梢生根數、根長等根系質量指標也得到提升，不僅解決了液體生根技術缺少有效固定支撐物的問題，而且避免了固體培養基瓊脂凝固劑對組培苗的抑制。
【專利說明】一種藍莓組培苗液體生根方法及專用培養容器
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種促進植物生根的方法，具體涉及一種利用液體培養基促進藍莓組 培苗生根的方法，屬於植物栽培【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 藍莓（blueberry)又稱越橘，為杜鵑花科越橘屬多年生灌木，是具有較高經濟價 值和廣闊開發前景的新興樹種。果實藍色，果實大小因品種而異，單果重0.5?2. 5克。果 肉細膩、種子小，甜酸可口，風味獨特，是當今世界發展最快的第三代果樹的代表品種之一。 同時，藍莓果實營養豐富可直接鮮食，並具有極強的藥用價值和營養保健功能，在國內外極 受歡迎，被國際糧農組織列為人類五大健康食品之一。
[0003] 植物組織培養是指在無菌和人工控制的環境條件下，利用人工培養基，對植物的 胚胎、器官、組織或細胞等進行操作和培養，使其按人們的意願增殖、生長或再生的一門學 科。植物組織培養技術是生物技術的主要組成部分，已滲透應用到育種學、植物生理學、細 胞生物學及遺傳學等多個領域，廣泛應用於農業、林業，產生了巨大的經濟和社會效益。
[0004] 植物組織培養應用於無性繁殖，育苗速度快，適宜於優良品種的工廠化大規模繁 殖，還可以實現苗木的脫毒培養。
[0005] 組培苗生根是外植體通過腋芽萌發和不定芽發生再生形成完整植株的關鍵必備 步驟。
[0006] 液體生根技術是利用液體培養基進行生根培養，完成植株再生。液體培養基是固 體培養基的對應詞，培養基未加入凝固劑稱為培養液。培養液中營養成分、激素可自由擴 散，外植體培養過程中一直保持均勻分布，所以有利於組織細胞生長，提高培養效果。
[0007] 液體生根技術應用於藍莓增殖新梢生根缺少有效固定支撐物，故而很少見有這方 面研究報導。2011年關麗霞和韓德偉，研究了藍莓組培的淺層液體生根技術，生根效果良 好，同時，簡化了培養基配製、節約了成本80 %，不用洗根，減少了傷苗傷根。同年，廉家盛將 生物反應器應用於藍莓品種'美登'組培快繁體系建立。在其他研究中，也有採用蛭石、珍 珠巖及濾紙代替瓊脂凝固劑，進行液體培養。然而，這些瓊脂替代物存在外植體易汙染、接 種難操作、易受傷、不能有效固定、不能工廠化應用等問題中的一個或多個。
【發明內容】
[0008] 為解決現有技術的不足，本發明的目的在於提供一種簡便易行、成本低、且能夠使 藍莓組培苗瓶內生根率、根系質量大幅度提高的藍莓組培苗液體生根方法。
[0009] 為了實現上述目標，本發明採用如下的技術方案：
[0010] 一種藍莓組培苗液體生根方法，其特徵在於，包括以下步驟：
[0011] (一）、配製溶液：配製B5培養基的大量元素母液、微量元素母液、有機物母液和鐵 鹽母液4種試驗母液，配製lmg/ml IBA、lmg/ml IAA、lmg/ml NAA3種激素溶液；
[0012] (二）、製備培養基：稱取鹿糖30g，放入1000ml容器中，加冷蒸饋水500ml，加熱 攪拌使鹿糖溶化，依次吸取50ml大量元素母液、5ml微量元素母液、5ml有機物母液和5ml 鐵鹽母液加入到上述容器中，再分別添加〇.5ml IBA、0.3ml IAA、0. lml NAA3種激素溶液， 攪拌均勻，加蒸餾水至l〇〇〇ml，調pH至5. 4,趁熱將培養基分裝於吸頭盒外盒中，每盒裝 100ml，然後在吸頭盒外盒中放置支架，最後用食用菌袋包裹，高壓蒸汽滅菌；
[0013] (三）、接種：選取生長勢強的2-3cm增殖新梢作為外植體，超淨工作檯內無菌操 作，每盒接種10-30個外植體，封口膜封邊；
[0014] (四）、生根培養：將接種有外植體的吸頭盒外盒擺放於組培室培養架上培養，待 根5條以上、平均根長lcm以上時，打開吸頭盒外盒移栽入基質進行馴化。
[0015] 前述的藍莓組培苗液體生根方法，其特徵在於，在步驟（三）中，前述增殖新梢包 括：初代培養腋芽和繼代培養的不定芽、叢生芽。
[0016] 前述的藍莓組培苗液體生根方法，其特徵在於，在步驟（四）中，生根培養的條件 為：
[0017] 培養溫度晝25°C、夜15°C，先暗培養1周，然後光培養，光照強度30001X，光周期 16h光照/8h黑暗。
[0018] 本發明的有益之處在於：
[0019] 1、對培養基的配方進行了優化，使得藍莓組培苗生根率大幅度提高，增殖新梢生 根數、根長等根系質量指標也得到提升。
[0020] 2、在吸頭盒外盒中放置支架，解決了液體生根技術缺少有效固定支撐物的問題， 使得藍莓組培苗瓶內生根率大幅度提高，增殖新梢生根數、根長等根系質量指標也得到提 升；另外，因不使用瓊脂凝固劑，故根系不易受傷、且降低了成本，方法簡便易行。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0021] 圖1是本發明的用於藍莓組培苗液體生根的專用培養容器的一個具體實施例的 結構示意圖。
[0022] 圖中附圖標記的含義：1-吸頭盒外盒，2-支架，21-支架孔。
【具體實施方式】
[0023] 以下結合具體實施例對本發明作具體的介紹。
[0024] 實施本發明的藍莓組培苗液體生根的方法時，需要使用專門的培養容器與其配 套，參照圖1，該專用的培養容器由吸頭盒改造而來，具體包括兩大部分：吸頭盒外盒1和支 架2,支架2上設計有若干支架孔21。使用時，將支架2設置於吸頭盒外盒1內即可，支架 2的高度、孔數、孔徑與增殖新梢的長度、粗度相適應。
[0025] 下面介紹藍莓組培苗液體生根方法，該方法包括以下步驟：
[0026] 一、配製溶液
[0027] 1、配製B5培養基的大量元素母液、微量元素母液、有機物母液和鐵鹽母液4種 試驗母液，配方和配製方法按照《NUTRIENT REQUIREMENTS OF SUSPENSION CULTURES 0F SOYBEAN ROOT CELLS》（Experimental Cell Research50, 151-158(1968))中的記載配製。
[0028] 2、配製 lmg/ml IBA、lmg/ml IAA、lmg/ml NAA3 種激素溶液。
[0029] 二、製備培養基
[0030] 1、稱取蔗糖30g，放入1000ml搪瓷杯中，加冷蒸餾水500ml，加熱攪拌使蔗糖溶化。
[0031] 2、依次吸取50ml大量元素母液、5ml微量元素母液、5ml有機物母液和5ml鐵鹽母 液加入到上述搪瓷杯中。
[0032] 3、分別添加0. 5ml IBA、0. 3ml IAA、0. lml NAA3種激素溶液到上述搪瓷杯中，攪 拌均勻，加蒸餾水至l〇〇〇ml，此時培養基中IBA、ΙΑΑ、NAA3種激素的濃度分別是0. 5mg/L、 0· 3mg/L、0. lmg/L，最後調培養基的pH至5. 4。
[0033] 具體研究中，不同藍莓品種其培養基中IBA、ΙΑΑ、NAA3種激素的濃度可分別在 0· 3-0. 7mg/L、0. 2-0. 4mg/L、0. 06-0. 14mg/L 範圍內適當調整。
[0034] 4、趁熱將培養基分裝於吸頭盒外盒中，每盒裝100ml，然後在吸頭盒外盒中放置支 架，最後用食用菌袋包裹，高壓蒸汽滅菌。
[0035] 吸頭盒外盒：長120mm X寬85mm X高80mm ;
[0036] 支架：長 115mmX 寬 80mmX 高 25mm，28 孔，孔徑 8mm。
[0037] 三、接種
[0038] 選取生長勢強的2-3cm增殖新梢作為外植體，超淨工作檯內無菌操作，每盒接種 10-28個外植體，封口膜封邊。
[0039] 增殖新梢既可以是初代培養腋芽，也可以是繼代培養的不定芽、叢生芽。
[0040] 四、生根培養
[0041] 將接種有外植體的吸頭盒外盒擺放於組培室培養架上培養，培養的條件為：培養 溫度晝25、°C夜15, °C先暗培養1周，然後光培養，光照強度30001x，光周期16h光照/8h 黑暗。
[0042] 待根5條以上、平均根長1cm以上時（大約30天左右），打開吸頭盒外盒移栽入基 質進行馴化。依據季節，馴化選擇在溫室或露地進行。
[0043] 將本發明的方法與使用固體培養基的方法進行比較，實施效果見表1。
[0044] 表1實施效果比較表
[0045]
【權利要求】
1. 藍莓組培苗液體生根方法，其特徵在於，包括以下步驟： (一） 、配製溶液：配製B5培養基的大量元素母液、微量元素母液、有機物母液和鐵鹽母 液4種試驗母液，配製lmg/ml IBA、lmg/ml IAA、lmg/ml NAA3種激素溶液； (二） 、製備培養基：稱取鹿糖30g，放入1000ml容器中，加冷蒸饋水500ml，加熱攪拌使 鹿糖溶化，依次吸取50ml大量元素母液、5ml微量元素母液、5ml有機物母液和5ml鐵鹽母 液加入到上述容器中，再分別添加〇.5ml IBA、0.3ml IAA、0. lml NAA3種激素溶液，攪拌均 勻，加蒸餾水至l〇〇〇ml，調pH至5. 4,趁熱將培養基分裝於吸頭盒外盒中，每盒裝100ml，然 後在吸頭盒外盒中放置支架，最後用食用菌袋包裹，高壓蒸汽滅菌； (三） 、接種：選取生長勢強的2-3cm增殖新梢作為外植體，超淨工作檯內無菌操作，每 盒接種10-30個外植體，封口膜封邊； (四） 、生根培養：將接種有外植體的吸頭盒外盒擺放於組培室培養架上培養，待根5條 以上、平均根長lcm以上時，打開吸頭盒外盒移栽入基質進行馴化。
2. 根據權利要求1所述的藍莓組培苗液體生根方法，其特徵在於，在步驟（三）中，所 述增殖新梢包括：初代培養腋芽和繼代培養的不定芽、叢生芽。
3. 根據權利要求1所述的藍莓組培苗液體生根方法，其特徵在於，在步驟（四）中，生 根培養的條件為： 培養溫度晝25°C、夜15°C，先暗培養1周，然後光培養，光照強度30001x，光周期16h光 照/8h黑暗。
4. 一種用於藍莓組培苗液體生根的培養容器，其特徵在於，由吸頭盒改造而來，包括： 吸頭盒外盒和設置於所述吸頭盒外盒內的支架，所述支架上設計有若干支架孔，支架的高 度、孔數、孔徑與增殖新梢的長度、粗度相適應。
【文檔編號】A01H4/00GK104137776SQ201410356395
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2014年7月24日 優先權日:2014年7月24日
【發明者】秦公偉, 李新生, 曹小勇, 張澤平, 張靜, 蔣景龍 申請人:陝西理工學院, 陝西定軍山藍莓科技有限公司