從遠志中分離製備細葉遠志皂苷的方法
2023-07-25 10:49:01 2
專利名稱：從遠志中分離製備細葉遠志皂苷的方法
技術領域：
本發明涉及中藥有效成分的分離製備，具體是從遠志中分離製備細葉遠志皂苷化學對照品的方法。
背景技術：
細葉遠志皂苷，全稱遠志皂苷元一3--0--i3--D--吡喃葡萄糖苷，英文名為tenuifolin，其結構式如下，是一類五環三萜類化合物，為遠志總皂苷的鹼水解物，從2010版《中國藥典》開始作為中藥化學對照品用於遠志藥材的質量評價。 目前文獻報導已有學者對細葉遠志皂苷提取分離。董曉兵等(遠志皂苷對照品細葉遠志皂苷的製備.董曉兵等.中藥新藥與臨床藥理，第18卷第1期.2007)主要採用以下步驟藥材提取一大孔柱層析一鹼水解一乙酸乙酯萃取一水飽和正丁醇萃取一矽膠柱層析一重結晶。此方法較為繁瑣，成本較大，且在製備過程中需要多種有機材料及化學試劑，對環境汙染較大。本發明的目的在於提供一種從遠志中分離製備細葉遠志皂苷的方法，該方法操作步驟簡單，對環境汙染較小，細葉遠志皂苷純度在98%以上，可以作為化學對照品。本發明提供的一種從遠志中分離製備細葉遠志皂苷的方法，包括如下步驟步驟1、將乾燥的遠志藥材粉碎，加入5 10倍量的5(Γ90%的乙醇溶液回流提取，提取液
經過濾，濃縮，得浸膏；
步驟2、將步驟1所得浸膏加入廣5倍量石油醚超聲或攪拌提取2 3次，每次1. 5、小時，靜置分層，取下層揮幹試劑，得乾粉；
步驟3、將步驟2所得的乾粉中加入2(Γ300倍量質量百分濃度為10%的氫氧化鈉溶液，加熱回流1. 5、小時，冷卻後加入濃鹽酸調節ρΗ至廣5，靜置至析出沉澱，過濾，濾渣乾燥，得乾粉；
步驟4、對步驟3所得乾粉過矽膠柱，以乙酸乙酯甲醇水=15 20:2:1體積比的混合
發明內容液洗脫，薄層層析檢測，合併含細葉遠志皂苷的部分，濃縮，得細葉遠志皂苷粗品；
步驟5、對步驟4所得粗品進行重結晶，所得白色晶體即為高純度的細葉遠志皂苷。其可以作為化學對照品。所述步驟2中廣5倍量石油醚優選2倍量。所述步驟4中乙酸乙酯甲醇水的體積比優選為15:2:1。所述步驟4中所述薄層層析的條件為乙酸乙酯甲醇水=11:2:1或氯仿甲醇水=75:25:2，顯色劑為硫酸香草醛溶液，105°C加熱至出現藍紫色斑點，出現藍紫色斑點表明含細葉遠志皂苷。本發明的優點是操作步驟簡單，所用有機材料及化學試劑較少，對環境汙染較小，所獲得的細葉遠志皂苷成本較低，純度高，經高效液相色譜法檢測純度可達98%以上，可作為化學對照品用來控制有關遠志藥材及製劑的質量。
圖1為本發明實施例1製備的細葉遠志皂苷的純度分析色譜圖。圖2為本發明實施例1製備的細葉遠志皂苷的1H NMR圖。
具體實施例方式通過以下實施例進一步詳細說明本發明，但本發明的範圍並不受這些實施例的任何限制。實施例1
將乾燥的遠志藥材粉碎，取150g加入1200ml 75%的乙醇溶液浸泡半小時後，加熱回流提取3小時，3小時後過濾得濾液，重複3次，合併3次提取液，減壓濃縮得浸膏。向浸膏中加入300ml石油醚，超聲提取3小時，3小時後過濾得濾渣，濾渣揮幹試劑得乾粉。向乾粉中加入4500ml為10%的氫氧化鈉溶液，加熱回流2小時，冷卻後加入濃鹽酸調節pH，使pH值為3. 5，充分攪拌，靜置至析出沉澱，過濾得濾渣，濾渣乾燥，得乾粉。對所得乾粉進行矽膠柱層析(1:40，g/g)，以乙酸乙酯甲醇水=15:2:1進行洗脫，並進行薄層層析檢測，薄層層析條件為乙酸乙酯甲醇水=11:2:1，顯色劑為硫酸香草醛溶液，合併105°C下加熱後出現藍紫色斑點的部分，減壓濃縮，即得細葉遠志皂苷粗品(乾重2. 5g，細葉遠志皂苷含量為 90%)。對其進行重結晶，得白色晶體 2. 25g。IH-NMR (600MHz,C5D5N) δ :5.89 (1 H，m，Η-12)，5· 10 (1 H, d, J=7. 5Hz, H-I of Glc), 1. 99，1. 54，1. 05，1. 00,0. 85 (each 3 H, s)。經高效液相色譜法檢測其純度99. 9%。高效液相色譜(HPLC)定量方法為面積歸一法檢測波長為203nm
HPLC條件
柱子條件 Diamonsil C18(2) 5u (200X4. 6mm)流速:1. Oml/min進樣量20μ
流動相為甲醇0. 2%磷酸溶液=60 40
4實施例2
將乾燥的遠志藥材粉碎取150g，加入IOOOml的50%的乙醇溶液浸泡半小時後，加熱回流提取3小時，3小時後過濾得濾液，重複3次，合併3次提取液，減壓濃縮，得浸膏。向浸膏中加入200ml石油醚，超聲提取4小時後，過濾得濾渣，濾渣揮幹試劑得乾粉。向乾粉中加入4000mll0%的氫氧化鈉溶液，加熱回流3小時，冷卻後加入濃鹽酸調節pH，使pH值為2. 0，充分攪拌，靜置至析出沉澱，過濾得濾渣，濾渣乾燥，得乾粉。對所得乾粉進行矽膠柱層析(1 30，g/g)，得細葉遠志皂苷粗品(乾重2. 3g，細葉遠志皂苷含量為87%)。對其進行重結晶，得白色晶體2. 0g，即為細葉遠志皂苷。經高效液相色譜法檢測其純度99. 7%。實施例3
將乾燥的遠志藥材粉碎取150g，加入900ml 70%的乙醇溶液浸泡半小時後，加熱回流提取4小時，4小時後過濾得濾液，重複3次，合併3次提取液，減壓濃縮，得浸膏。向浸膏中加入^Ktoil石油醚，超聲提取4小時後，過濾得濾渣，濾渣揮幹試劑得乾粉。向乾粉中加入3500ml 10%氫氧化鈉溶液，加熱回流3小時，冷卻後並加入濃鹽酸調節pH，使pH值為1，充分攪拌，靜置至析出沉澱，過濾得濾渣，濾渣乾燥，得乾粉。對所得乾粉進行矽膠柱層析(1 35，g/g),即得細葉遠志皂苷粗品(乾重2. 65g，細葉遠志皂苷含量為79. 2%)0對其進行重結晶，得白色晶體2. lg，即細葉遠志皂苷。經高效液相色譜法檢測其純度99. 5%。實施例4
將乾燥的遠志藥材粉碎取150g，加入1400ml 60%的乙醇溶液浸泡半小時後，加熱回流提取2. 5小時，2. 5小時後過濾得濾液，重複4次，合併4次提取液，減壓濃縮，得浸膏。向浸膏中加入450ml石油醚，攪拌1. 8小時，1. 8小時後過濾得濾渣，濾渣揮幹試劑得乾粉。向乾粉中加入3000ml 10%的氫氧化鈉溶液，加熱回流2小時，冷卻後加入濃鹽酸調節pH，使pH值為4. 0，充分攪拌，靜置至析出沉澱，過濾得濾渣，濾渣乾燥，得乾粉。對所得乾粉進行矽膠柱層析(1:50，g/g),即得細葉遠志皂苷粗品(乾重2. 80g，細葉遠志皂苷含量為79. 3%)。對其進行重結晶，得白色晶體2. 22g,即得細葉遠志皂苷。經高效液相色譜法檢測其純度99. 0%。實施例5
將乾燥的遠志藥材粉碎取150g，加入750ml 85%的乙醇溶液浸泡半小時後，加熱回流提取3小時，3小時後過濾得濾液，重複3次，合併3次提取液，減壓濃縮，得浸膏。向浸膏中加入500ml石油醚，攪拌3小時，3小時後過濾得濾渣，濾渣揮幹試劑得乾粉。向乾粉中加入4000mll0%的氫氧化鈉溶液，加熱回流3小時，冷卻後加入濃鹽酸調節pH，使pH值為2. 0，充分攪拌，靜置至析出沉澱，過濾得濾渣，濾渣乾燥，得乾粉。對所得乾粉進行矽膠柱層析(1 50，g/g),即得細葉遠志皂苷粗品(乾重2. 3g，細葉遠志皂苷含量為86%)。對其進行重結晶，得白色晶體1.98g，即為細葉遠志皂苷。經高效液相色譜法檢測其純度98. 7%。上述實施例從遠志中分離製備的細葉遠志皂苷，經高效液相色譜法檢測其純度均在98%以上，可以作為化學對照品。
權利要求
1.一種從遠志中分離製備細葉遠志皂苷的方法，其特徵在於，包括如下步驟步驟1、將乾燥的遠志藥材粉碎，加入5 10倍量的5(Γ90%的乙醇溶液回流提取，提取液經過濾，濃縮，得浸膏；步驟2、將步驟1所得浸膏加入廣5倍量石油醚超聲或攪拌提取2 3次，每次1. 5、小時，靜置分層，取下層揮幹試劑，得乾粉；步驟3、將步驟2所得的乾粉中加入2(Γ300倍量質量百分濃度為10%的氫氧化鈉溶液，加熱回流1. 5、小時，冷卻後加入濃鹽酸調節ρΗ至廣5，靜置至析出沉澱，過濾，濾渣乾燥，得乾粉；步驟4、對步驟3所得乾粉過矽膠柱，以乙酸乙酯甲醇水=15 20:2:1體積比的混合液洗脫，薄層層析檢測，合併含細葉遠志皂苷的部分，濃縮，得細葉遠志皂苷粗品；步驟5、對步驟4所得粗品進行重結晶，所得白色晶體即為高純度的細葉遠志皂苷。
2.如權利要求1所述的從遠志中分離製備細葉遠志皂苷的方法，其特徵在於，所述步驟2中石油醚加入量為步驟1所得浸膏的2倍。
3.如權利要求1所述的從遠志中分離製備細葉遠志皂苷的方法，其特徵在於，所述步驟4中乙酸乙酯甲醇水的體積比為15:2:1。
4.如權利要求1所述的從遠志中分離製備細葉遠志皂苷的方法，其特徵在於，所述步驟4中薄層層析的條件為乙酸乙酯甲醇水=11:2:1。
5.如權利要求1所述的從遠志中分離製備細葉遠志皂苷的方法，其特徵在於，所述步驟4中薄層層析的條件為氯仿甲醇水=75:25:2。
全文摘要
本發明涉及一種細葉遠志皂苷化學對照品的分離製備方法。是以乾燥的遠志藥材為原料，獲得純度大於98%的細葉遠志皂苷化學對照品。工藝步驟如下將乾燥的遠志藥材粉碎，加入乙醇水溶液回流提取，減壓濃縮提取液得膏狀物，加入溶劑超聲提取，棄去提取液，將殘渣揮幹試劑，加入10%的氫氧化鈉溶液加熱回流，冷卻後加入濃鹽酸調pH至1~5，靜置至析出沉澱，對沉澱物進行柱層析，即得高純度細葉遠志皂苷。本發明所用原料廉價易得，對環境汙染小，工藝簡單易行，所獲得的細葉遠志皂苷成本較低、純度高。
文檔編號C07H1/08GK102558256SQ20121001062
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月15日 優先權日2012年1月15日
發明者張麗增, 李震宇, 王雪潔, 秦雪梅 申請人:山西大學