一種粉葛總苷元非口服製劑及其製備方法和用途的製作方法

2023-07-25 22:21:31 1

專利名稱：：一種粉葛總苷元非口服製劑及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種中藥粉葛提取物，尤其是一種粉葛總苷元的提取物，以及該提取物的藥物用途。屬中藥領域。
背景技術：
：粉葛為豆科植物千葛藤PuerariathomsoniiBenth.的乾燥根，粉葛中含有多鍾黃酮類成分，如葛根素、大豆苷、4，7-二葡萄糖大豆苷、3'甲氧基葛根素、7-木糖一葛根素、大豆苷元等，其大部分以苷類形式存在。粉葛中的總黃酮苷類成分在治療心血管疾病、高血壓、腦血栓、頭痛、糖尿病、更年期症候群及腫瘤等疾病中具有較好的療效。文獻報導中，李豈凡等在"從葛根中提取和純化藥用成分一總黃酮"(《安徽農業科學》，2007年，第35巻第27期)、杜德及"葛根的抗腫瘤作用研究"(《中藥藥理與臨床》，1994年2月)、曾明在"葛根提取物對糖尿病大鼠腎臟功能的影響"(《中國實驗方劑學雜誌》，2007年8月，第13巻第8期)研究中表明，粉葛中的總黃酮苷類成分具有較強的生理作用；而在CN200410006579.9、CN200610042076.3、CN200510135612.2、CN91110602.2、CN200510013666.1、CN01106845.0等專利公開文獻及其他普通文獻中也提供了多種製備粉葛總苷的方法。可見在中藥
技術領域：
中，粉葛中總苷類成分一直是被研究的熱點。但是，現有的技術都忽視了對粉葛總苷元的研究，雖然翁紅博等在"葛根黃豆苷元對腦缺血的保護作用及機制探討"(《中國藥理學通報》，1999年，第15巻第6期)、韓文全在"黃豆苷元的研究與開發"(《食品與藥品》，2006年，第8巻第5期)等文獻中對黃豆苷元進行了初步研究，但只是針對了單一成分黃豆苷元，並沒有對粉葛中含有的總苷元進行系統研究，故總苷元的效果與應用情況也一直處於空白狀態。
發明內容本發明的第一目的在於提供一種以粉葛總苷元為活性成分的非口服藥物。第二目的是提供該藥物的製劑形式，特別是一種高效製劑；第三目的是提供該藥物高效製劑的製備方法；最後是提供該藥物在用於治療心血管疾病、高血壓、腦血栓、頭痛、糖尿病、更年期症候群及腫瘤疾病中的應用。本發明目的第一目的是這樣實現的3發明人提供一種非口服的藥物，該藥物以粉葛總苷元為活性成分。發明人發現，苷類物質其實是在植物體內產生的生物活性較低的化合物，如在化合物上添加極性基團，把具有生物活性的苷元和糖結合起來形成生理活性較低的苷類而加以儲存，使之更易排出體外。同樣，這些苷類化合物在人體內的生物利用度也較低，口服的苷類化合物在腸道內難以吸收、生物利用度低，多數在體內代謝並不完全，有的甚至完全以原型(苷類形式)排除體外，只有少量的苷類化合物經腸道細菌、酶分解為苷元後才發揮出療效；非口服的苷類化合物，被人體吸收的苷還需經血液轉運到肝臟，再通過肝腸循環，將苷水解為苷元再吸收入血而發揮療效，但因為步驟較多，故也不能迅速發揮療效。因而，針對粉葛的藥用價值，發明人提出一種新的藥用物質，即粉葛總苷元。它是按現有技術從粉葛藥材中提取得到粉葛總苷，對該有效部位進行水解，使其中的苷類物質脫去糖基，生成更具生物活性的苷元，即成為本發明所提供的粉葛總苷元。人體皮膚細胞膜及各種腔道黏膜具有類脂質特性，非極性強，般脂溶性藥物比水溶性藥物易穿透皮膚，而且組織液是極性的，因此既有一定脂溶性又有一定水溶性的藥物(分子具有極性基團和非極性基團)更易穿透。藥物分子的大小對藥物經皮吸收也有影響，小分子藥物更易擴散，分子量大於600的藥物較難透過角質層。可見，外用製劑宜選用分子量小，中等極性的藥物，否則吸收和利用差，療效極不理想。即使苷類透過黏膜和皮膚屏障進入血液，還需經過肝腸循環，將苷水解為苷元再吸收入血而發揮療效，吸收少，療效慢。發明人經研究證實，苷類水解成苷元後，所得苷元分子量變小，一般均在600以下，其極性減小，脂溶性增強；因此苷元易於透膜吸收，而且吸收迅速，療效成倍增強，大大提高了藥物的生物利用率，節約了藥物資源。在本發明提供的藥物中，粉葛總苷元可以單獨使用，也可以與其他藥物成分聯合使用，即在藥物活性成分中，可以只有粉葛總苷元純品，也可以是粉葛總苷元粗品，還可以是粉葛總苷元與其他藥物的混合物。本發明優選使用粉葛總苷元粗品，即從藥材中提取粉葛總苷，再以適當方式水解，並根據需要進行精製，得到所需純度。上述的水解方法包括了酸水解、酶水解或微生物水解，發明人經過篩選，分別提供如下幾種具體的水解方法酸水解可以用11Omol/L的鹽酸、硫酸、醋酸及甲酸等進行水解；酶水解可以用苦杏仁酶、麥芽糖酶、轉化糖酶、橙皮苷酶等進行水解；微生物可以用大腸桿菌、腸球菌、乳酸桿菌、梭狀芽孢桿菌、畸形菌體、雙岐桿菌及人體腸道正常菌群等進行水解。本發明的第二目的是提供上述粉葛總苷元的藥物製劑，尤其是一種高效製劑。由於本發明的第一目的中己解決了藥物的吸收問題，所以本領域技術人員可以方便地將本發明的粉葛總苷元配合適當的輔料，製備成各種常規製劑。但是發明人還注意到另一個問題，即由於苷元的脂溶性相對較強，因而其製劑應用於人體後，其中的苷元成分不易被潤溼和溶出，如果不能解決這一問題，也會影響苷元的吸收。所以，針對這一問題，發明人提供了一種新技術方案，可以保證將粉葛總苷元製成高效製劑，該技術方案是-一種以本發明所述粉葛總苷元為活性成分的高效藥物製劑，其輔料中含有吸收促進劑和/或潤溼劑，並被製成的非口服製劑。該技術方案的核心在於將粉葛總昔元用於藥物製劑，並通過特殊輔料保證粉葛總苷元的高效利用。因而，體現到具體的藥物製劑中，其藥物活性成分中可以只有本發明的粉葛總苷元，也可以與其他藥用或非藥用物質配合使用，只要其目的是將所含的粉葛總苷元利用吸收促進劑和潤溼劑進行潤溼、分散，以製成非口服高效製劑，均應在本發明申請保護的範圍內。同理，本發明技術方案選用吸收促進劑和潤溼劑作為主要輔料，目的在於使粉葛總苷元得以充分、均勻的分散，利於吸收；在實際應用中，還可以根據需要加入其他常規輔料及成型輔料，如甘油明膠、聚乙二醇、西黃芪膠、甲基纖維素、乙基纖維素、結冷膠、壓敏膠、三乙醇胺、甘油等，這些均應視為在本發明技術的基礎上完成的工作，也應受本發明申請的保護。在該技術方案中，吸收促進劑優選為氮酮、桉油或其混合物，潤溼劑優選為卵磷脂、泊洛沙姆、丙二醇或它們之間的混合物。其中，氮酮、桉油等作為藥物吸收促進劑，能打開上皮細胞的緊密連接，促進藥物有效成分快速、充分的吸收利用，增強藥效。卵磷脂、泊洛沙姆、丙二醇等表面活性劑對粉葛總苷元有表面潤溼的作用，降低表面張力，增加脂溶性的粉葛總苷元的溶解度，促進其迅速吸收利用，利於迅速發揮療效。將本發明的粉葛提取物與上述輔料配合使用，充分混合均勻，可以增強其中粉葛總苷元的分散性、潤溼性，提高其生物利用度。在優選的情況下，本發明藥物中各成分所佔比例優選為本發明藥物中各成分所佔比例優選為活性成分1050%，吸收促進劑05%，潤溼劑110%，其他輔料4089%;其中的其他輔料是指製劑在成型過程中的一些其他輔料，如甘油明膠、聚乙二醇、西黃芪膠、甲基纖維素、乙基纖維素、結冷膠、壓敏膠、明膠、三乙醇胺、甘油、凡士林、羊毛脂、聚氯乙烯、乙醇、水等。上述技術方案主要應用於非口服製劑，包括經皮給藥製劑或黏膜及腔道給藥製劑等，最適宜的劑型為凝膠劑、栓劑、軟膏劑和貼劑。本發明的第三目的是提供上述高效製劑的製備方法，其中的核心技術是將粉葛總苷元與所需輔料通過熔融、溶解、攪拌、研磨或超微粉碎混合中的任一種方法混合均勻後，再加入所需常規製劑輔料，按常規工藝製成製劑。而這裡的混合方法優選振動磨超微粉碎混合的方法。只有通過有效的混合方式，才能保證提取物中所含粉葛總苷元與特殊輔料充分分散均勻，應用於人體時才能夠迅速潤溼、溶出、吸收，發揮高效的作用。經發明人驗證，熔融、溶解、攪拌、研磨或超微粉碎混合等方式，都能夠實現本發明目的，而其中的超微粉碎方式效果最為突出。雖然超微粉碎技術早己出現，但在中藥
技術領域：
的應用，一直停留於"粉碎"的概念上，始終沒有突破，因而其範圍很局限。發明人在實踐中發現，超微粉碎技術已不僅僅是粉碎技術，更是一種高效混合技術，它可使苷元與輔料一起受到強烈的正向擠壓力和切向剪切力的作用，運用高速、高能量進行粉碎、混合，所得到的粉末中心粒徑由原來的75um減小到10um以下，粒度細膩、均勻，表面積增加，孔隙率增大，使藥物粒子與輔料粒子充分接觸、混合，既提高了藥物粒子的分散度，又保證了其迅速潤溼並溶出，大大提高了藥物的吸收率和生物利用度，其優勢是目前常規混合方法不可比擬的。在這其中，振動磨超微粉碎方式是實現本發明目的的最佳方法。有益效果本發明的粉葛總苷元，可用於治療心血管疾病、高血壓、腦血栓、頭痛、糖尿病、更年期症候群及腫瘤疾病的藥物中的應用。配合本發明的高效製劑手段，更可以充分發揮其功效。發明人通過以下動物實驗，來說明本發明的突出效果。一、粉葛總苷元對大鼠糖尿病症的影響1.試驗動物與藥物Wistar大鼠，雄性，體重220250g，34月齡，由山東大學實驗動物中心提供。供試樣品的製備取粉葛5kg，粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1.5小時，濾過，濾液回收乙醇，水液加乙酸乙酯提取五次，合併乙酸乙酯液，蒸乾，取l/2乾燥物製備粉葛總苷製劑；其餘l/2乾燥物加10%鹽酸，加熱水解4小時，水解液加氫氧化鈉調節至近中性，濾過，濾液備用；沉澱以70%乙醇提取一次，濾過，回收乙醇，與前述水液合併，繼續濃縮，減壓乾燥，乾燥物製備苷元的製劑。粉葛總苷製劑為取粉葛總苷乾燥物，加卵磷脂5g，並加S-40至100g，加熱熔融，混勻，製成栓(0.5g/枚)。粉葛總苷元製劑為取苷元的乾燥物，加卵磷脂5g，並加S—40至100g，加熱熔融，混勻，製成栓(0.5g/枚和0.25g/枚，供做高劑量組和低劑量組)。2.主要試劑與儀器鏈脲佐菌素(STZ)，美國Sigma公司產品Unicheck血糖測i式條，美國DiagnlsticSolutionsInc公司產品OneTouch血糖儀，美國Scanlife公司產品AL204型萬分之一電子天平。3.試驗方法3.1糖尿病大鼠病理模型製備選取大鼠55隻，造模前於自然光線、自由飲水、自由攝食條件下訓練l周。隨機抽取9隻為正常對照組(正常組)，9隻為預防給藥組(預防組)，造模前4d給予本發明藥物，l次/d共5周。4d後與剩餘30隻一起製備糖尿病病理模型。造模前先更換籠具，禁食(不禁水)12h，然後將STZ溶於配製好的檸檬酸一擰檬酸鈉緩衝液中，配成濃度為2%的溶液，按STZ50mg/kg的劑量行腹腔注射，72h後取尾血，用Onetouch血糖儀測定其空腹血糖(FBG)，FBG》11.11mmol/L者確定為造模成功。正常對照組從腹腔注射相同條件下等體積的擰檬酸-檸檬酸鈉緩衝液。3.2試驗方法隨機抽取10隻大鼠為正常對照組(正常組)。剩餘45隻，造模成功40隻，再依血糖水平隨機分為模型組、粉葛總苷元低劑量組、粉葛總苷元高劑量組、粉葛苷組4組，每組各10隻。再按以下方法處理正常組:直腸給藥基質栓，l次/d，共4周。模型組直腸給藥基質栓，造模成功後給予，1次/d，共4周。粉葛總苷元低劑量組直腸給藥粉葛總苷元低劑量栓，造模前4d開始給藥，l次/d，共5周。粉葛總苷元高劑量組直腸給藥粉葛總苷元高劑量栓，造模成功後給藥，l次/d，共4周。粉葛苷組直腸給藥粉葛苷栓，造模成功後給藥，l次/d，共4周。3.3觀察指標與方法大鼠每周測體重l次，並加以記錄。分別於造模後第0周、第4周末取血，禁食不禁水12h，採血測空腹血糖。方法測血糖前5min把大鼠置於設置溫度為4(TC的電熱恆穩鼓風乾燥箱中，然後取出，置於大鼠臺上，用銳利刀片切斷大鼠尾尖，棄去第1滴血，取第2滴血，用血糖儀測定血糖。4.結果4.1各組大鼠體重比較表l粉葛總苷元對大鼠體重的影響(g,^土s)組別n第o周n第4周末變化率正常組10235.4252±6.44567355.8534±13,57640.5211±0.0365模型組10236.7235±4.12427346.6735±11.55540,4452±0.0353**7總苷元高劑量10242.3341±8.35757357.4543±13.52360.4745±0.0225*總苷元低劑量10233.2654±10.09648329.8565±21.55320.4907±0.0245*粉葛總苷組10238.5223±15.168338351.4572±26.46830.4852±0.0355*注與正常組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型組比較，*P<0.05上表結果表明，第0周，各實驗組大鼠的體重無明顯差異(PX).05)，說明隨機分組均衡合理。第4周末體重變化率，各造模組與正常組比較均有顯著差異(PO.05或PO.01)，給藥各組和模型組比較有顯著差異(P<0.05)。給藥各組之間比較無差異。4.2各組大鼠血糖水平比較表2粉葛總苷元對大鼠試驗性血糖的影響(；±s)組別n第0周(mmol/L)n第4周末(mmol/L)變化率(％)正常組104.1124±0.35544.3316±0.24320.0532±0.1235模型組1014.3434±1.4765720.6218±3.15390.4508±0.2321總苷元高劑lt組1014.1126±1.257374.0543±1.3169**0.7335±0.0875**總苷元低劑it組1014.0550±0.554386.2464±0.8875k0.5653±0.0421**▲▲粉葛總苷組1013.3126±0.5684:88.9522±0.7176**"'0.3248±0.0662**▲▲注與正常組比較，P<0.05，P〈0.01;與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01;與苷元高劑量比較，▲P<0.05，"PO,01。上表結果表明，第0周、第4周末的給藥組的FBG水平均顯著高於同期正常組(PO.Ol或P0.05)，說明本實驗造模模型穩定可靠。第4周末FBG及其變化率，粉葛總苷元高、低劑量組、粉葛苷組與模型組差異顯著(PO.Ol)，說明治療有效。且粉葛總苷元高、低劑量的高效製劑組的效果尤為顯著。結果表明，本發明中的粉葛總苷元藥物可以提高大鼠的營養水平，遏制病鼠因肌肉組織的新陳代謝紊亂而導致的逐漸消痩的進程，阻止病鼠脾胃功能的下降趨勢、促進其脾胃的運化功能、改善病鼠的糖代謝，並能明顯降低大鼠造模成功後的血糖。二、抗大鼠靜脈血栓形成的作用1、材料1.1動物Wister大鼠40隻，雌雄各半，體重200士20g。由山東大學實驗動物中心提供。1.2藥品與試劑供試樣品的製備取粉葛5kg，粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1.5小時，濾過，濾液回收乙醇，水液加乙酸乙酯提取五次，合併乙酸乙酯液，蒸乾，取l/2乾燥物製備粉葛總苷製劑；其餘1/2乾燥物加10%鹽酸，加熱水解4小時，水解液加氫氧化鈉調節至近中性，濾過，濾液備用；沉澱以70%乙醇提取一次，濾過，回收乙醇，與前述水液合併，繼續濃縮，減壓乾燥，乾燥物製備苷元的製劑。粉葛總苷製劑為取粉葛苷乾燥物，加卵磷脂5g，並加S-40至100g，加熱熔融，混勻，製成栓(0.5g/枚)。粉葛總苷元製劑為取粉葛總苷元的乾燥物，加卵磷脂5g，並加S—40至100g，加熱熔融，混勻，製成栓(0.5g/枚和0.25g/枚，供做高劑量組和低劑量組)。2、方法與結果2.1試驗方法取Wistar大鼠40隻，雌雄各半，體重200士20g，隨機分為4組，每組10隻粉葛總苷元低劑量組、粉葛總苷元高劑量組、粉葛苷組、空白對照組，每天直腸給藥相應栓劑1枚，空白對照組和模型組給予空白基質栓，連續7天。末次給藥6h後，用內徑為lmm的玻璃毛細管插入鼠內眥靜脈叢取血，至毛細管血柱達5cm，每隔30s折斷毛細管一段，檢查有無出現凝血絲，計算毛細管採血到出現血凝絲時間，即為凝血時間。2.2試驗結果結果見下表。表3粉葛總苷元對大鼠靜脈血栓形成的影響(f±S)組別動物數(只)凝血時間(s)粉葛總苷元低劑量組10104.00±18.65**粉葛總苷元高劑量組10138.00±54.29***粉葛總苷組1082.00±31.44*空白對照組1063.00±59.53注與空白對照組比較(t檢驗)，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。以上試驗結果表明，粉葛總苷元的高、低劑量組均可明顯延長凝血時間，與空白對照組比較具有顯著性差異，均較粉葛苷組效果好。且粉葛總苷元大、小劑量的高效製劑組效果尤為顯著。三、粉葛總苷元對小鼠移植性腫瘤S，的抑制作用研究1、材料動物昆明種小鼠，體重1822g，雌性兼有，由山東大學實驗動物中心提供。腹水型肉瘤SI8。由山東大學實驗動物中心提供。供試樣品的製備取粉葛5kg，粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1.5小時，濾過，9濾液回收乙醇，水液過D101大孔樹脂柱，用70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，餘水液取1/2製備粉葛總苷製劑，其餘1/2用{3-糖苷酶水解24小時，水解液過D101大孔樹脂柱，用70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓乾燥，乾燥物製備苷元製劑。粉葛總苷製劑取乙基纖維素2g加水潤脹24小時，加三乙醇胺5g，攪勻，加入苷元乾燥物、氮酮2g、卵磷脂5g，並加水至100g，混合均勻，即得；粉葛總苷元製劑取乙基纖維素2g加水潤脹24小時，加三乙醇胺5g，攪勻，加入苷元乾燥物、氮酮2g、卵磷脂5g，並加水至100g，混合均勻，即得，作為苷元高劑量組；另取50g，加水至100g，作為苷元低劑量組。2、方法小鼠40隻，在無菌條件下取生長79d的小鼠腹水型移植性腫瘤S1S。，以1:3生理鹽水稀釋，接種於小鼠腋窩皮下0.2ml每隻，接種次日按體重隨機分成4組，分別為基質組、粉葛總苷元小劑量組、粉葛總苷元大劑量組、粉葛苷組。各組小鼠用脫毛劑脫去背部毛，清水洗淨皮膚表面，分別塗抹相應量的藥物；接種後第ll天，脫椎，處死小鼠，稱重，剝離其瘤塊並稱瘤重，計算抑瘤率(IR)。IR=(對照組平均瘤重一給藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重X100。/。(當11030%和P<0.05時，評定藥物有一定療效。)試驗結果見表4。表4粉葛總苷元對小鼠S18。的抑制作用分組N(只)給藥量(g/kg)體重變化(g)平均瘤重(g)抑瘤率(％)基質組10_8.73.38±0.53---粉葛總苷組10107.02.42±0.6528.4總苷元小劑量1056.51.75±0.1848.2總苷元大劑量10106.41.34±0.3860.3以上試驗結果表明，粉葛總苷元的各組均可明顯抑制腫瘤的增長，與空白對照組、總苷組比較具有顯著性差異，且粉葛總苷元大、小劑量的高效製劑組效果尤為顯著。四、粉葛總苷元對酒石酸銻鉀致小鼠扭體反應的影響1、材料1.1動物昆明種小鼠，由山東大學實驗動物中心提供。1.2藥品與試劑供試樣品的製備取粉葛5kg，粗粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1.5小時，濾過，合併濾液，減壓回收乙醇，水液以乙酸乙酯提取四次，乙酸乙酯液蒸乾，取1/2的乾燥物製備粉葛總苷製劑；其餘1/2的加水溶解，115'C滅菌20min，以乳酸菌菌種發酵水解72小時，水解液加於AB-8大孔吸附樹脂柱上，以70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，減壓乾燥，乾燥物製備苷元製劑。粉葛總苷製劑取卡波姆加水潤脹24小時，以三乙醇胺調pH為7，放置12小時，再以三乙醇胺調pH為7，作為基質；再加入粉葛苷乾燥物、氮酮5g、卵磷脂10g，並加水至100g，混合均勻，即得；粉葛總苷元製劑取卡波姆加水潤脹24小時，以三乙醇胺調pH為7，放置12小時，再以三乙醇胺調pH為7，作為基質；加入苷元乾燥物、氮酮5g、卵磷脂10g，並加水至100g，混合均勻，即得，作為苷元高劑量組；另取50g，加水至100g，混勻，作為苷元低劑量組。2方法與結果2.1試驗方法將體重25g土2g的小白鼠用脫毛劑脫去背部毛，清水洗淨皮膚表面，靜養24h，取40隻，雌雄各半，隨機均勻分為4組，即空白組、粉葛總苷元高劑量組、粉葛總苷元低劑量組、粉葛苷組，分別於脫毛處塗抹生理鹽水、粉葛總苷元高劑量組、粉葛總苷元低劑量組、粉葛苷組，每鼠腹腔注射新配製的酒石酸銻鉀液，立即觀察小鼠首次出現扭體反應的潛伏期及10min內小鼠扭體發生數。2.2試驗結果結果見下表。表5粉葛總苷元對酒石酸銻鉀所致小鼠扭體反應的影響(又士S)組另lj動物數(只)劑量(g/kg)首次發生扭體反應的潛伏期(min)10min內扭體發生次數(次)粉葛總苷元高劑量組10103.73±0.23**10.1±4.8*粉葛總苷元低劑量組1053.41±0.87林12.5±7.9*粉葛總苷組10103.22±0.79林15,1±5.1空白對照組10—2.25±0.5418.5±9.0注與空白對照組比，*P<0.05，林P〈0.01。以上試驗結果表明，粉葛總苷元的高、中劑量組均可明顯延長小鼠首次發生扭體的潛伏期，減少小鼠扭體次數，與空白對照組比較具有顯著性差異；且粉葛總苷元高效製劑的高、低製劑組效果尤為顯著。五、粉葛總苷元對高血壓大鼠的降壓作用1、材料1.1動物SD大鼠，由山東大學實驗動物中心提供。1.2藥品與試劑供試樣品的製備(同實驗2)。陽性藥(卡託普利)取卡託普利10g，加泊洛沙姆5g，並加S40至100g，加熱熔融，混合均勻，製成栓劑，即得。2、方法與結果2.l造模方法取健康雄性大鼠60隻，體重180220g，隨機分為6組，每組10隻總苷元高劑量組、總苷元低劑量組、總苷製劑組、陽性藥組、正常對照組、模型組，採用電擊足底作為單一應激源對大鼠進行應激刺激，刺激強度為3048.5V，頻率0.5Hz，將大鼠放於自製分格式電擊鼠箱，並連接應激源，除正常對照組外，其餘實驗組大鼠每天上午8:0010:00、下午2:004:OO各接受l次應激刺激，共4周，最後一次施以應激刺激後25h內用尾套法測量尾動脈收縮壓(即將大鼠置於軟棉墊上後，尾部加熱，將壓脈套套至大鼠尾部近心端，換能器置於鼠尾中上部1/3處，打開記錄系統，等有規律脈搏出現以後，利用充氣球使套內壓力升高到搏動完全消失，然後緩慢放氣，仔細觀察並讀取脈搏波從無到開始出現時所對應的壓力值，此即大鼠收縮壓(mmHg)，重複3次，取平均值)。2.2實驗方法將造模成後的各組高血壓大鼠及正常對照組的10隻健康雄性大鼠直腸給予相應供試品l枚，正常對照組和模型組給予相應的空白基質栓劑，每天1次，連續給藥3天後，以P/。戊巴比妥腹腔麻醉(5mg/kg)，頸動脈插管取血，測定收縮壓。2.3實驗結果實驗結果見表6。表6對高血壓大鼠收縮壓的影響(X士S)tableseeoriginaldocumentpage12以上試驗結果表明，模型組與正常對照組比較，收縮壓增高有顯著性差異，顯示造模成功。粉葛總苷元的高劑量、陽性藥組可明顯降低高血壓大鼠的收縮壓，與空白對照組比較具有極顯著性差異，較總苷元低劑量組、總苷製劑組效果好；總苷元低劑量組與空白對照組比較具有顯著性差異，較總苷製劑組效果好。且粉葛總苷元的高、低劑量的高效製劑的效果尤為顯著。六、對MCAT大鼠腦梗塞範圍的影響1實驗材料1.1動物Wistar大鼠，體重260-300g。由北京大學實驗動物中心提供。1.2供試樣品(同實驗2)1.3試劑與儀器FeCI3(A.R.)，批號20020128，廣東山頭市西隴化工廠紅四氮唑(TTC)，A.R.，北京化學試劑公司AO光學顯微鏡，美國產品；慍溫水浴，HH.W21.Cu600，上海躍進醫療器械廠；電子天平，JUPITERS2160A型，日本生產。2實驗方法2.1分組及給藥取Wistar大鼠60隻，分為5組(即假手術組、MCAT模型組、粉葛總苷元高劑量組、粉葛總苷元低劑量組、粉葛總苷組)，每組10隻，雌雄各半。各組大鼠直腸給予相應栓劑l枚，正常對照組和模型組給予相應的空白基質栓劑，每天1次，連續給藥5天。2.2實驗方法大鼠腹腔注射3%異戊巴比妥0.lml/100g麻醉。按Tamura方法，稍加改進。大鼠右側臥位固定，在眼外眥和耳道連線中點作一弧形切口，長約1.5cm，夾斷顳肌並切除，暴露顳骨，用牙科鑽在顴骨和顳骨接合處靠近口側lmm處作一直徑2.5mm骨窗，清理殘渣，暴露大腦中動脈(位於嗅束及大腦下靜脈之間)。置一小片塑料薄膜保護血管周圍組織。將吸有50%三氯化鐵溶液10W的小片定量濾紙敷在此段大腦中動脈上，30min後取下濾紙，用生理鹽水衝洗局部組織，逐層縫合，回籠飼養。假手術組大鼠除不滴加三氯化鐵溶液外，其餘手術步驟同模型組。2.3腦梗塞範圍測定最後一次給藥12小時後，斷頭取腦。去掉嗅球、小腦和低位腦幹，剩餘部分在4'C以下冠狀切成5片。迅速將腦片置於TTC染液中(每5ral染料中含4。/。TTC1.5ml，1MK2HP040.lml)，37。C避光溫孵30min，再取出，置於甲醛中避光保存。經染色後非缺血區為玟瑰紅色，梗塞區為白色。將白色組織仔細挖下稱重，以梗塞組織重量佔總腦重量的百分比作為腦梗塞範圍。模型組腦梗塞範圍一給藥組腦梗塞範圍腦組織梗塞範圍抑制率(％)=-X100%模型組腦梗塞範圍3實驗結果試驗結果進行組間比較，t檢驗，結果見表7。表7對MCAT大鼠腦組織梗塞範圍的影響(X士SD)組別給藥量(g/kg)動物數(只)梗塞範圍(％)抑制率(％)假手術組生理鹽水100.00±0.00—模型組生理鹽水107.82±1.46—粉葛總苷元高劑量組5.0103.37±1.70**56.9粉葛總苷元低劑量組2.5105.05±1.17**35.4粉葛總苷組5.0105.57±1.85*28.8注與模型組相比，*P<0.05,林P<0.01。結果顯示，除假手術組未見異常改變外，血栓模型組大鼠及各給藥組大鼠均有不同程度梗塞。粉葛總苷元的各劑量組均可明顯減少梗塞程度，與模型組比較有顯著差異。且粉葛總苷元高、低劑量的高效製劑組效果尤為顯著。具體實施例方式下面列舉實施例，進一步說明本發明，各實施例僅用於說明本發明，並不限制本發明實施例1取粉葛總苷元50g，加入泊洛沙姆5g、聚乙二醇60020g，並加聚乙二醇4000至500g，加熱熔融，研磨混勻，製成1000枚栓劑，即得。實施例2取卡波姆5g，加水潤脹24小時，加三乙醇胺調pH到8，攪勻，加入粉葛總苷元120g、斷血流總苷元30g、氮酮12.5g、丙二醇5g，並加水至500g，振動磨超微粉碎50分鐘，製成凝膠劑。實施例3取粉葛總苷元100g，加入卵磷脂5g、'丙二醇5g、桉油5g、氮酮5g，並加羊毛脂至200g，振動磨超微粉碎60分鐘，分裝，製成軟膏劑。實施例4取粉葛總苷元50g，用乙酸乙酯一乙醇一丙酮混合溶液溶解，加入壓敏膠100g，混合均14勻；另取壓敏膠75g，加卵磷脂10g、丙二醇10g、泊洛沙姆5g，加乙酸乙酯一乙醇一丙酮混合溶液溶解，與前述的藥物壓敏膠溶液一起用振動磨超微粉碎20分鐘，混合均勻，靜置，在塗布機上塗膜，乾燥，製成貼劑。實施例5取粉葛5kg，粉碎，力n70%乙醇回流提取三次，每次1.5小時，濾過，濾液回收乙醇，水液過D101大孔樹脂柱，用70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，餘水液用e-糖苷酶水解24小時，水解液過D101大孔樹脂柱，用70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓乾燥，得到粉葛總苷元提取物(含粉葛總苷元65%以上，其餘為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產物)，加入卵磷脂10g、泊洛沙姆15g、丙二醇5g，並加S-40至500g，加熱熔融，保溫下振動磨超微粉碎30分鐘混勻，製成1000枚栓劑，即得。實施例6取粉葛5kg，粉碎，力n80%乙醇回流提取三次，每次1.5小時，濾過，濾液回收乙醇，水液加乙酸乙酯提取五次，合併乙酸乙酯液，蒸乾，加10%鹽酸，加熱水解4小時，水解液加氫氧化鈉調節至近中性，濾過，濾液備用；沉澱以70%乙醇提取一次，濾過，回收乙醇，與前述水液合併，繼續濃縮，減壓乾燥，得到粉葛總苷元提取物(含粉葛總苷元55%以上，其餘為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產物)，加乙酸乙酯一乙醇一丙酮混合溶液溶解，加入壓敏膠250g，混合均勻；另取壓敏膠110g，加泊洛沙姆10g、桉油10g、氮酮10g，加乙酸乙酯—乙醇一丙酮混合溶液溶解，與前述的藥物壓敏膠溶液一起用振動磨超微粉碎70分鐘，混合均勻，靜置，在塗布機上塗膜，乾燥，製成貼片。實施例7取粉葛5kg，粗粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1.5小時，濾過，合併濾液，減壓回收乙醇，水液以乙酸乙酯提取四次，乙酸乙酯液蒸乾，取乾燥物加水溶解，115'C滅菌20min，以乳酸菌菌種發酵水解72小時，水解液加於AB-8大孔吸附樹脂柱上，以70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，減壓乾燥，得到粉葛總苷元提取物(含粉葛總苷元70%以上，其餘為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產物)，加入黃芪總苷元20g，丙二醇5g、卵磷脂5g、氮酮7g，並加羊毛脂至500g，攪拌均勻，分裝，製成軟膏劑。實施例8取粉葛5kg，粗粉碎，加8倍量水煎煮三次，每次2小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為1.101.15(60°C)的清膏，加乙醇至含醇量達60%，靜置過夜，取上清液減壓回收乙醇，餘水液以水飽和正丁醇提取三次，正丁醇液蒸乾，乾燥物加水溶解，以乳酸菌菌種水解24小時，水解液加於D101大孔吸附樹脂柱上，分別以水、30%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80°/。乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，減壓乾燥，得到粉葛總苷元提取物(含粉葛總苷元65%以上，其餘為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產物)。取甲基纖維素8g，加水潤脹24小時，攪勻，加入上述粉葛總苷元提取物，加卵磷脂10g、泊洛沙姆20g，並加水至500g，振動磨超微40分鐘，混合均勻，製成凝膠劑。實施例9取實施例5所制栓劑治療65例頭痛患者。治療方案每日一次，每次一枚，使用7天後，治癒率為41.3%，顯效率為50.4%，總有效率為91.7%。實施例10取實施例6所制貼片治療82例高血壓患者。治療方案每日一貼。15天為一個療程，3個療程後統計結果，治癒72例，好轉7例，總有效率為96.3%。實施例〗1取實施例1所制栓劑治腦血栓患者125例。治療方案每天1次，每次一枚，2周為一個療程，2個療程後統計治療結果，總有效率為88.1%。權利要求1、一種以粉葛總苷元為活性成分的非口服藥物。2、根據權利要求1所述的藥物，其特徵在於所述活性成分中可以只有粉葛總苷元，也可以是粉葛總苷元與其他藥物成分聯合使用。3、根據權利要求2所述的藥物，其特徵在於所述粉葛總苷元是通過水解粉葛總苷而得到的。4、根據權利要求3所述的藥物，其特徵在於水解方法為酸水解、酶水解或微生物水解。5、根據權利要求1至4中任一項所述的藥物，其特徵在於藥物活性成分與藥劑學上可接受的輔料配合使用。6、根據權利要求5所述的藥物，其特徵在於輔料中含有吸收促進劑和/或潤溼劑。7、根據權利要求6所述的藥物，其特徵在於輔料中的吸收促進劑是指氮酮和/或桉油，潤溼劑是指卵磷脂、泊洛沙姆、丙二醇中的一種或二種以上的混合物。8、根據權利要求7所述的藥物，其特徵在於藥物活性成分與輔料的組成比例為-活性成分1050%，吸收促進劑05%,潤溼劑110%，其他輔料4089%。9、根據權利要求8所述的藥物，其特徵在於被製成經皮給藥製劑或黏膜及腔道給藥製劑。10、根據權利要求9所述的藥物，其特徵在於被製成凝膠劑、栓劑、軟膏劑或貼劑。11、製備權利要求6至10中任一項所述藥物的方法，其特徵在於將藥物活性成分與所需輔料通過熔融、溶解、攪拌、研磨或超微粉碎混合中的任一種方法混合均勻後，再加入所需常規製劑輔料，按常規工藝製成製劑。12、根據權利要求ll所述的製備方法，其特徵在於藥物活性成分與所需輔料通過振動磨超微粉碎方法混合。13、權利要求1至4中任一項所述藥物在製備用於治療心血管疾病、高血壓、腦血栓、頭痛、糖尿病、更年期症候群或腫瘤疾病的藥物中的應用。全文摘要本發明公開了一種粉葛總苷元非口服製劑及其製備方法和用途，屬中藥領域。該發明是將從粉葛中提取的總苷進行水解，得到總苷元，並將總苷元配合特殊的輔料製成高效製劑，可以大大提高粉葛總苷元的生物利用度。該製劑在治療心血管疾病、高血壓、腦血栓、頭痛、糖尿病、更年期症候群及腫瘤疾病中有明顯的療效。文檔編號A61K9/70GK101518563SQ200810101020公開日2009年9月2日申請日期2008年2月27日優先權日2008年2月27日發明者孫志強,賈世偉申請人:北京凱瑞創新醫藥科技有限公司