一種皮下抗生素藥物組合物的製作方法

2024-04-15 05:00:05

1.本發明屬於醫藥製劑領域，具體地涉及為一種能夠適用於皮內或皮下給藥的β-內醯胺類抗生素藥物組合物，以及所述配製劑的用途及製備方法。


背景技術：

2.抗生素是臨床抗感染最常用的藥物。經過多年發展其種類已達幾千種，在臨床上常用的亦有幾百種，主要分類包括β-內醯胺類、氨基糖苷類、大環內酯類、林可黴素類、多肽類、喹諾酮類、磺胺類、抗結核藥、抗真菌藥及其他抗生素。
3.抗生素有多種給藥方式，以口服、肌肉注射、靜脈給藥較為常見。但抗生素通過這些給藥方式給藥，多有其局限性、缺點和副作用。
4.靜脈給藥是指藥液通過靜脈滴注或推注的方式直接進入體內的一種給藥方法。該方法起效快、生物利用度高，為臨床常用的給藥方法，但也被公認為是一種最危險的給藥方式。除了深度介入性導致的感染風險以外，藥物在生產、運輸、貯藏、以及配藥過程中不可避免的引入不溶性微粒，從而導致血管栓塞、靜脈炎、熱樣反應以及肉芽腫等不良反應。另有一部分抗生素在胃腸道不穩定，易受到胃腸道的破壞，只能採用靜脈注射。而且，靜脈給藥的操作存在較高的技術難度，通常需要專業的醫護人員在醫療機構進行，給患者的治療帶來不便，也極大佔用醫療資源。靜脈給藥必須在進行靜脈穿刺置針，對於某些血管狀態不良者，例如老人、嬰幼兒、重度燒傷患者等，靜脈穿刺會比較困難。
5.口服給藥是藥物療法最常採用的給藥方式，其優點是給藥方便、無痛苦，操作簡單，給藥成本低，且相對靜脈給藥等方式更安全，不易發生注射相關的不良反應。目前有研究顯示，口服抗生素儘管有如上優點，其缺點也日漸凸顯。不僅會對胃腸道刺激或對消化系統產生不利影響，還有研究表明口服抗生素會影響幼兒成長。目前口服抗生素暴露已確證會干擾腸道微生物定植，導致哮喘發病率和1型糖尿病發病率增高等風險。同時更有研究顯示，腫瘤患者，接受免疫治療同時或之前使用口服抗生素會導致腸道菌群紊亂、引起免疫治療療效嚴重下降(routy，b等(2018).science 359(6371)：91-97)。
6.肌肉注射由於給藥體積不能超過5ml、容易造成患者的疼痛和不適、起效慢、注射不當可能會造成神經損傷等缺點，已經很少被作為抗生素的給藥方式。
7.皮內或皮下給藥是指將藥物注射入皮內或皮下組織，使藥物被迅速吸收。皮下給藥方式，相對於靜脈費用低，可選擇部位更多，插針操作簡單，疼痛或不適感比靜脈插針少，且更換位點重新插針也比靜脈插針容易，針管可置於皮膚相對的非敏感部位。同時皮內或皮下給藥幾乎可在任何環境下實施輸液，在護理條件匱乏的情況下，皮內或皮下輸液比靜脈輸液更為合適。然而，當皮內或皮下輸液量超過2ml時就會引起組織變形，增加組織間壓力，引起疼痛與不適，限制皮下輸液單個位點的輸液體積及輸液速度。抗生素由於輸液體積限制，以及高濃度抗生素對皮膚潛在的刺激性，臨床多以靜脈給藥和口服為主。
8.因此急需一種能夠用於皮下給藥的抗生素，既安全、又能快速起效、又不會對患者造成不適感。而皮下給藥抗生素未見相關製劑報導。


技術實現要素：

9.針對現有技術的不足，本發明的目的在於提供一種用於皮內或皮下施用的藥物組合物，其中，所述抗生素藥物組合物包含β-內醯胺類抗生素和透明質酸酶。所述藥物組合物具有較好的保存穩定性及使用穩定性。
10.具體地，本發明涉及如下各項：
11.1.一種藥物組合物，其包含：
12.1)含量為1mg/ml-1g/ml的厄他培南；
13.2)活性為45單位/ml～10000單位/ml的透明質酸酶；和
14.3)藥學上可接受的輔料。
15.2.根據項1所述的藥物組合物，其包含：
16.1)含量為1mg/ml-1g/ml的厄他培南；
17.2)活性為45單位/ml～10000單位/ml的透明質酸酶；
18.3)濃度為1～100mm的緩衝劑；
19.4)濃度為1～500mm的穩定劑；
20.5)濃度為1～500mm的賦形劑；
21.6)濃度為0.01％～0.1％(w/v)的表面活性劑；和
22.7)助溶劑。
23.3.根據項1或2所述的藥物組合物，其ph為5.0～8.0。
24.4.根據項1-3中任一項所述的藥物組合物，其中，所述透明質酸酶在中性條件下具有降解透明質酸的活性；優選的，所述透明質酸酶選自下組：動物睪丸提取透明質酸酶、重組動物透明質酸酶或其突變體、重組和/或提取的菌來源透明質酸酶、重組人透明質酸酶或其突變體；優選的，所述透明質酸酶為重組人透明質酸酶或其突變體；更優選的，所述透明質酸酶為重組人透明質酸酶或其突變體；更優選的，所述的重組人透明質酸酶包含如序列表中seq id no.1所示的胺基酸序列；最優選的，所述的重組人透明質酸酶的胺基酸序列如序列表中seq id no.2所示。
25.5.根據項1-4中任一項所述的藥物組合物，其特徵是，所述厄他培南的濃度為1mg/ml-1g/ml，優選10mg/ml-1g/ml，更優選10mg/ml-0.5g/ml，更優選50mg/ml-0.5g/ml，最優選0.3g/ml。
26.6.根據項1-5中任一項所述的藥物組合物，其特徵是，所述透明質酸酶的酶活性為45單位/ml-10000單位/ml，優選45單位/ml-8000單位/ml，更優選50單位/ml-6000單位/ml，更優選75單位/ml-4000單位/ml，最優選100單位/ml-2000單位/ml。
27.7.根據項1-6中任一項所述的藥物組合物，其含有0.1g-5g的厄他培南，優選為0.2g-2g的厄他培南，最優選為1g的厄他培南。
28.8.根據項2-7中任一項所述的藥物組合物，其中
29.所述的緩衝劑選自下組：組氨酸緩衝劑、醋酸緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑、檸檬酸緩衝劑、tris緩衝劑；優選磷酸鹽緩衝劑；最優選磷酸氫二鈉；
30.所述的穩定劑選自下組：海藻糖、蔗糖、甘露醇、氯化鈉、甲硫氨酸、依地酸二鈉；優選海藻糖、甘露醇、甲硫氨酸、蔗糖；最優選甲硫氨酸、海藻糖組合；
31.所述的賦形劑選自下組：山梨醇、甘露醇、海藻糖、甘油、乳糖、蔗糖、海藻糖、麥芽
糖、葡萄糖；優選甘露醇、海藻糖、蔗糖；最優選海藻糖、甘露醇組合；
32.所述的表面活性劑選自下組：聚山梨酯20、聚山梨酯80、泊洛沙姆188；優選聚山梨酯20、聚山梨酯80；最優選聚山梨酯20；和/或，
33.所述的助溶劑選自下組：碳酸鈉、磷酸、檸檬酸、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、氯化鈉、l-精氨酸；優選為碳酸氫鈉和氫氧化鈉。
34.9.根據項2-8中任一項所述的藥物組合物，其中：
35.所述的緩衝劑濃度為1-100mm，優選為5-50mm；例如5mm、10mm或50mm；
36.所述的穩定劑的濃度為1-500mm，優選為30-150mm；例如5mm甲硫氨酸+25mm海藻糖、5mm甲硫氨酸+53mm海藻糖、5mm甲硫氨酸+100mm海藻糖、10mm甲硫氨酸+25mm海藻糖、10mm甲硫氨酸+53mm海藻糖、10mm甲硫氨酸+100mm海藻糖、50mm甲硫氨酸+25mm海藻糖、50mm甲硫氨酸+53mm海藻糖、50mm甲硫氨酸+100mm海藻糖；
37.所述的賦形劑的濃度為1-500mm，優選為160-280mm；例如160mm、220mm或280mm；
38.所述的表面活性劑的濃度為0.01-0.1％(w/v)，優選0.02-0.04％(w/v)，最優選0.02％(w/v)；和/或
39.所述的助溶劑的濃度為0.01g/l-100g/l。
40.10.根據項1-9中任一項所述的藥物組合物，其通過將乾粉組合物進行復溶或通過將濃縮的液體組合物進行稀釋而獲得。
41.11.一種藥物組合物，其包含：
42.(1)0.1g-5g的厄他培南，優選為0.2g-2g的厄他培南，最優選為1g的厄他培南；和
43.(2)活性為500單位～20000單位的透明質酸酶，優選為500單位、1667單位、3000單位、5000單位、6667單位、8000單位、10000單位、15000單位、20000單位的透明質酸酶。
44.12.根據項1-10中任一項所述的藥物組合物，其通過將項11所述的藥物組合物進行復溶而製得。
45.13.根據項1-12中任一項所述的藥物組合物在製備用於治療疾病的藥物中的用途；所述疾病選自下組：繼發性腹腔感染、複雜性皮膚及附屬器感染、社區獲得性肺炎、複雜性尿道感染，包括腎盂腎炎以及急性盆腔感染，包括產後子宮內膜炎、流產感染和婦產科術後感染、菌血症。
46.發明詳述
47.本發明提供了一種穩定的皮下給藥的抗生素藥物組合物。本發明的皮下給藥抗生素藥物組合物，具有較好的使用穩定性。給藥時，不受體積限制，起效快，血藥濃度高，患者舒適度高。
48.1.定義
49.除非另有定義，否則本文所用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域的技術人員通常所理解的相同含義。
[0050]「與......組合」意指將兩種或更多種治療劑以混合物一起、作為單一藥劑同時或作為單一藥劑以任何順序依次施用給受治療者。
[0051]「藥物組合物」是指抗生素與透明質酸酶混合所得的產物，並且包括固定的和非固定組合兩者。藥物組合物通常包含藥學上可接受的輔料。「固定組合」是指以單一實體或劑量形式同時施用的包含抗生素和透明質酸酶的單一藥物組合物。「非固定組合」是指在非特
定間隔時間限制下同時、並行或順序地作為獨立實體施用的抗生素和透明質酸酶的獨立藥物組合物或單位劑型，其中此類施用在受試者體內提供有效水平的兩種化合物。
[0052]「抗生素」是指一大類抑制和消滅細菌、真菌等病原性微生物的臨床常用抗感染藥物。經過多年發展其種類已達幾千種，在臨床上常用的亦有幾百種，主要分類包括β-內醯胺類、氨基糖苷類、大環內酯類、林可黴素類、多肽類、喹諾酮類、磺胺類、抗結核藥、抗真菌藥及其他抗生素。
[0053]「透明質酸」是指(hyaluronic acid，ha)又稱糖醛酸、玻璃酸或玻尿酸，是由d-葡萄糖醛酸及n-乙醯葡糖胺兩個雙糖單位重複連接組成的直鏈高分子糖胺多聚糖，廣泛地存在於脊椎動物的結締組織、粘液組織、眼球之晶狀體及皮膚中，在胚胎、軟骨、滑液、玻璃體、臍帶、雞冠等組織中尤為豐富。透明質酸是人體組織基質中分布最廣的一種酸性黏多糖，在體內通過形成網狀屏障填充在胞外基質膠原蛋白纖維骨架之間。該透明質酸屏障也是阻礙皮下注射的藥液在皮下快速吸收的最主要因素之一。
[0054]「透明質酸酶」是指能降解透明質酸、產生低分子化作用的內切糖苷酶，通過水解ha鏈中β-1，4糖苷鍵得到小分子ha或者寡糖從而增加組織的通透性，提高組織中液體的滲透能力。透明質酸酶作為一種「藥物擴散劑」已經在醫學領域應用多年，可促使局部積貯的藥液、滲出液或血液擴散，加速藥物吸收，減輕局部組織張力和疼痛，並有利於水腫、炎性滲出物的吸收、消散。臨床上透明質酸酶可以用於藥物滲透劑、麻醉輔助劑、手術後消腫劑等。
[0055]「活性」是指功能活性或與全長(完整)蛋白相關的多肽或其部分的活性。功能活性包括但不限於生物學活性、催化或酶活性、抗原性(與多肽結合或競爭以結合抗多肽抗體的能力)、免疫原性、形成多聚體的能力以及特異性與多肽的受體或配體結合。
[0056]「重組」在本專利中主要是指重組蛋白。重組蛋白的產生是應用了重組dna或重組rna的技術從而獲得的蛋白質。其獲得途徑可以分為體外方法和體內方法。兩種方法的前提都是應用基因重組技術，獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體，之後將其轉入可以表達目的蛋白的宿主細胞從而表達特定的重組蛋白分子。
[0057]「突變體」是指通過人為調整，改變蛋白質的胺基酸序列，使其功能或者性質發生變化。
[0058]「透明質酸酶活性」是指透明質酸酶切割透明質酸的能力。確定透明質酸酶(例如重組人透明質酸酶ph20)的透明質酸酶活性的體外測定法是本領域已知的並且在本文中進行了描述。示例性測定包括以下所述的微濁度測定，其通過檢測未裂解的透明質酸與血清白蛋白結合時形成的不溶性沉澱物來間接測定透明質酸酶對透明質酸的裂解。
[0059]「t
max」是指藥物被單次給藥以後，血藥濃度達到峰值的時間。
[0060]「c
max」是指血藥濃度-時間曲線上的最大血藥濃度值，即用藥後所能達到的最高血漿藥物濃度。藥峰濃度與藥物的臨床應用密切相關。藥峰濃度達到有效濃度才能顯效，而如高出了安全的範圍則可顯示毒性的反應。此外，藥峰濃度還是衡量製劑吸收和安全性的重要指標。
[0061]「腸道微生物」是指在胃腸道內定植的所有微生物的總和，包括細菌、真菌和病毒。已知的29個細菌門中，厚壁菌門、擬桿菌門在健康人的腸道中起著重要作用，其次是變形菌門、放線菌門。腸道微生物之間相互制約、相互依存，與宿主形成一種共生的生態平衡，在維持腸黏膜完整性、新陳代謝、免疫調節及營養等方面發揮重要作用。腸道菌群與人體健康密
切相關，研究發現菌群失調與炎症性腸病、結腸癌、肥胖症和哮喘等疾病的發生、發展有關。
[0062]「腸道微生物菌群的多樣性」是指動物腸道內存在的微生物菌群的種類的豐富程度。「腸道菌群數量」是指樣本腸道內各種類細菌等微生物的存在數量。常用的腸道微生物菌群的多樣性及數量的研究技術，包括宏基因組測序、16s rrna測序、宏轉錄組技術、晶片技術、螢光定量pcr等。宏基因組技術可以檢測出所有的微生物，包括細菌、真菌和病毒的基因組，是一個檢測最全面的方法。16s rrna測序技術可以檢測到細菌屬的級別，可以評估腸道細菌的多樣性，全面地衡量腸道菌的相對含量，用軟體可以預測基因代謝網絡等。宏轉錄組技術可定量檢測所有種類腸道內微生物(細菌、病毒、噬菌體、古生菌、真菌、酵母菌、寄生蟲)，精確到「種(species)」級別，甚至進一步到「株(strains)」級別。晶片技術可定性檢測細菌、真菌和病毒。
[0063]「藥學上可接受的輔料」是指藥物組合物中除活性成分之外的成分，其對受試者無毒。藥學上可接受的輔料包括但不限於緩衝液、賦形劑、穩定劑、表面活性劑和/或助溶劑。
[0064]「口服給藥」是藥物療法最常採用的給藥方式，其優點是給藥方便、無痛苦，操作簡單，給藥成本低，且相對靜脈給藥等方式更安全，不易發生注射相關的不良反應。口服給藥的缺點是但藥物口服後經胃腸道吸收較慢且不規則，藥物利用度一般較低。某些藥物易受到胃腸道的破壞，亦不宜採用口服給藥。此外，口服某些藥物會對胃腸道刺激或對消化系統產生不利影響。
[0065]「皮下給藥」是指將藥物注射入皮下組織，使藥物被吸收。皮下給藥在經濟性和操作性上皮下輸液具有如下眾多優點：1.費用低；2.可選擇部位更多，插針操作簡單，疼痛或不適感比靜脈插針少，且更換位點重新插針也比靜脈插針容易，針管可置於皮膚相對的非敏感部位；3.幾乎可以在任何環境下實施皮下輸液，在護理條件匱乏的情況下，皮下輸液比靜脈輸液更為合適。從安全角度考慮，由於皮下組織中存在結構固定的纖維骨架，限制直徑大於200nm的分子流穿過皮下組織，避免了將大顆粒不溶性微粒引入中央循環的危險。皮下輸液具有如下安全性優勢：1.沒有形成血栓的危險；2.不容易引起肺水腫和輸液量過載；3.不會引起血栓性靜脈炎；4.不會引起敗血症或全身性感染等併發症。
[0066]「約」是指處於如本領域的普通技術人員所確定的特定值的可接受誤差範圍之內，其將部分取決於所述值是如何測量或測定的，即所述測量系統的限制。在特定測定、結果或實施方案的上下文中，除非實施例或說明書其它地方內另有明確說明，否則「約」意指在根據本領域慣例的一個標準偏差之內、或多至5％的範圍(無論哪個更大)。
[0067]
2.本發明的藥物組合物
[0068]
本發明第一方面提供了一種用於皮下給藥的抗生素藥物組合物，其特徵在於，所述抗生素藥物組合物包含抗生素厄他培南、透明質酸酶。在一個實施方案中，所述抗生素的含量為1mg/ml-1g/ml。在一個實施方案中，所述透明質酸酶的濃度為45單位/ml-4500000單位/ml，優選為45單位/ml-3000000單位/ml；更優選為45單位/ml-1500000單位/ml，更優選50單位/ml-30000單位/ml，更優選為100單位/ml-3000單位/ml，最優選為100單位/ml-2000單位/ml。
[0069]
所述的抗生素藥物組合物中包含一種或多種抗生素和/或重組人透明質酸酶，以及藥學上可以接受的輔料成分。
[0070]
所述的抗生素包括：β-內醯胺類、氨基糖苷類、大環內酯類、林可黴素類、多肽類、
四環素類、喹諾酮類、磺胺類、抗結核藥、抗真菌藥；
[0071]
其中，所述的β-內醯胺類抗生素，優選為青黴素g、青黴素v、非奈西林、苯唑西林、甲氧西林、氯唑西林、雙氯西林、氨苄西林、阿莫西林、匹氨西林、羧苄西林、哌拉西林、黃苄西林、替莫西林、美洛西林、甲亞胺青黴素、氮苄脒青黴素雙酯、阿帕西林、阿撲西林、阿度西林、阿洛西林、巴氨西林、苄基青黴素酸、苄基青黴素鈉、卡茚西林、氯甲西林、環己西林、依匹西林、芬貝西林、氟氯西林、海他西林、侖氨西林、美坦西林、甲氧西林鈉、萘夫西林、培那西林、氫碘酸噴沙西林、苯明青黴素g、苄星青黴素g、青黴素g二苯甲胺鹽、青黴素g鈣、哈胺青黴素g、青黴素g鉀、普魯卡因青黴素g、青黴素n、青黴素o、苄星青黴素v、哈胺青黴素v、青哌環素、非奈西林鉀、丙匹西林、喹那西林、磺苄西林、舒他西林、酞氨西林、他唑西林、替卡西林氯碳頭孢、3-氯-1-碳頭孢烯、3-硫代碳頭孢烯、氟氧頭孢、拉氧頭孢、拉氧頭孢、頭孢唑林、頭孢氨苄、頭孢噻吩、頭孢拉定、頭孢替唑、頭孢呋辛、頭孢克洛、頭孢孟多、頭孢替安、頭孢尼西、頭孢雷特、頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢唑肟、頭孢克肟、頭孢地嗪、頭孢匹胺、頭孢匹羅、頭孢吡肟、頭孢克定、頭孢羥氨苄、頭孢曲秦、頭孢西酮、頭孢卡平酯、頭孢利定、頭孢地尼、頭孢託侖、頭孢他美、頭孢甲肟、頭孢替坦、頭孢唑蘭、頭孢咪唑、頭孢泊肟酯、頭孢丙烯、頭孢沙定、頭孢磺啶、頭孢特侖、頭孢布烯、頭孢唑肟、頭孢唑南、頭孢賽曲、頭孢來星、頭孢噻啶、頭孢噻酚、頭孢匹林、頭孢拉宗、頭孢米諾、亞胺培南、美羅培南、帕尼培南、比阿培南、厄他培南、法羅培南、頭孢西丁、頭孢美唑、氨曲南、卡蘆莫南、拉氧頭孢、氟氧頭孢、克拉維酸、克拉維酸酯、棒酸酯、舒巴坦、他唑巴坦；
[0072]
其中，所述的氨基糖苷類抗生素，優選為鏈黴素、卡那黴素、慶大黴素、阿米卡星、妥布黴素、奈替米星、西索米星、阿拉伯黴素、阿貝卡星、班貝黴素、丁胺菌素、地貝卡星、雙氫鏈黴素、福提黴素、異帕米星、小諾米星、新黴素、十一烯酸新黴素、巴龍黴素、核糖黴素、大觀黴素、丙大觀黴素；
[0073]
其中，所述的大環內酯類抗生素，優選為紅黴素、克拉黴素、阿奇黴素、羅紅黴素、卡波黴素、地紅黴素、醋硬脂紅黴素、依託紅黴素、葡庚糖酸紅黴素、乳糖酸紅黴素、司丙紅黴素、硬脂酸紅黴素、交沙黴素、柱晶白黴素、麥迪黴素、美歐卡黴素、竹桃黴素、普利黴素、羅他黴素、羅沙米星、螺旋黴素、醋竹桃黴素；
[0074]
其中，所述的林可黴素類抗生素，優選為林可黴素、克林黴素；
[0075]
其中，所述的多肽類抗生素選自下組：多粘菌素b、多粘菌素e、去甲萬古黴素、壁黴素、萬古黴素、替考拉寧、安福黴素、桿菌肽、捲曲黴素、粘菌素、粘桿菌素、持久殺菌素、恩維黴素、夫沙芬淨、短桿菌肽、米卡黴素、多粘菌素、普那黴素、達福普汀、利託菌素、硫鏈絲菌肽、結核放線菌素、短桿菌酪肽、短桿菌素、紫黴素、維吉黴素、桿菌肽鋅；
[0076]
其中，所述四環素類抗生素，優選為阿哌環素、氯四環素、氯莫環素、地美環素、多西環素、胍甲環素、賴甲環素、甲氯環素、美他環素、米諾環素、氧四環素、青哌環素、匹哌環素、羅利環素、山環素、四環素、環絲氨酸、莫匹羅星、薯球蛋白；
[0077]
其中，所述的喹諾酮類抗生素，優選為萘啶酸、吡哌酸、氟哌酸、氧氟沙星、環丙沙星、依諾沙星、培氟沙星、左氧氟沙星、加替沙星、莫西沙星、諾氟沙星、氟羅沙星、洛美沙星、司帕沙星、格雷沙星、蘆氟沙星、克林沙星、巴羅沙星、曲伐沙星、氟喹諾酮、甲磺酸阿拉曲伐沙星、西諾沙星、二氟沙星、氟甲喹、格帕沙星、米洛沙星、馬波沙星、那氟沙星、喹酸、帕珠沙星、吡咯酸、羅索沙星、替馬沙星、託氟沙星、甲磺酸曲伐沙星；
[0078]
其中，所述的磺胺類抗生素，優選為磺胺甲惡唑、甲氧苄啶、磺胺乙醯甲氧吡嗪、苄磺胺、氯胺b、氯胺t、二氯胺t、甲醯磺胺異二甲嘧啶、β-葡糖基磺胺、磺胺米隆、4
』‑
甲基胺磺醯基-磺苯胺、諾丙磺胺、酞磺醋胺、酞磺胺噻唑、柳氮磺嘧啶、琥珀磺胺噻唑、苯甲醯磺胺、磺胺醋醯、磺胺氯噠嗪、磺胺柯定、磺胺西汀、磺胺嘧啶、磺胺戊烯、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺多辛、磺胺乙二唑、磺胺胍、磺胺胍諾、磺胺林、磺胺洛西酸、磺胺甲嘧啶、甲氧嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺甲二唑、磺胺託嘧啶、磺胺異唑、磺胺甲氧嗪、磺胺美曲、磺胺米柯定、磺胺唑、磺胺、4-磺胺水楊酸、磺胺醯磺胺、磺胺脲、n-磺胺醯-3，4-二甲苯甲醯胺、磺胺硝苯、磺胺培林、磺胺苯吡唑、磺胺普羅林、磺胺吡唑、磺胺吡啶、磺胺異噻唑、磺胺均三嗪、磺胺噻唑、磺胺硫脲、磺胺託拉米、磺胺二甲異嘧啶、磺胺曲沙唑；
[0079]
其中，所述的呋喃類抗生素，優選為呋喃妥因、呋喃唑酮、呋喃他酮、呋唑氯銨、硝呋拉定、硝呋太爾、硝呋復林、硝呋吡醇、硝呋拉嗪、硝呋妥因醇；
[0080]
其中，所述的硝咪唑類抗生素，優選為甲硝唑、替硝唑、奧硝唑；
[0081]
其中，所述的抗結核藥類抗生素，優選為異煙肼、利福平、福米特、吡嗪醯胺、乙胺丁醇；
[0082]
其中，所述的抗真菌藥類抗生素，優選為兩性黴素b、氟康唑、伊曲康唑及5-氟胞嘧啶、克念菌素、制皮菌素、菲律賓菌素、抗真菌色素、抗滴蟲黴素、哈黴素、魯斯黴素、甲三菌素、遊黴素、納他黴素、制黴菌素、變麴黴素、標黴素、重氮絲氨酸、灰黃黴素、寡黴素、十一烯酸新黴素、吡咯菌素、千蠕孢菌素、殺結核菌素、綠毛綠素、烯丙胺、布替萘芬、萘替芬、特比萘芬、咪唑、聯苯苄唑、布康唑、氯登妥因、氯米達唑、氯康唑、克黴唑、益康唑、恩康唑、芬替康唑、氟曲馬唑、異康唑、酮康唑、拉諾康唑、咪康唑、奧莫康唑、硝酸奧昔康唑、舍他康唑、硫康唑、噻康唑、伏立康唑、硫代氨基甲酸酯、託西拉酯、託林達酯、託萘酯、三唑、沙康唑、特康唑、吖啶瑣辛、阿莫羅芬、珍尼柳酯、溴柳氯苯胺、丁氯柳胺、丙酸鈣、氯苯甘醚、艾索帕爾、二鹽酸地馬唑、依沙醯胺、氟胞嘧啶、哈利他唑、海克替啶、脂醯肽例如棘白菌素、氯氟卡班、硝呋太爾、碘化鉀、丙酸、2-巰基吡啶氧化物、水楊苯胺、丙酸鈉、舒苯汀、替諾尼唑、三醋精、苄硫噻二嗪乙酸、十一碳烯酸、丙酸鋅。
[0083]
所述的透明質酸酶，在ph5.0-ph8.0的中性條件下具有降解透明質酸的活性。
[0084]
透明質酸酶是一種降解透明質酸並降低細胞外基質中透明質酸(hyaluronan)的粘度從而增加組織滲透性的酶。透明質酸酶可選自動物睪丸提取透明質酸酶、重組動物透明質酸酶或其突變體、重組和/或提取的菌來源透明質酸酶、重組人透明質酸酶或其突變體；優選的，為重組人透明質酸酶或其突變體；更優選的，為重組人透明質酸酶或其突變體；所述的重組人透明質酸酶包含如序列表中seq id no.1所示的胺基酸序列；最優選的，所述的重組人透明質酸酶的胺基酸序列如序列表中seq id no.2所示。
[0085]
可用於本發明的所述透明質酸酶、重組人透明質酸酶或其突變體，所述突變體分別如cn1942588b、cn102943067b、cn102307993b、cn103205407b、cn104244968b、cn111971387a等所描述。
[0086]
透明質酸酶的酶活性可由單位/ml(u/ml)或由特定製劑中的總酶活性(u)來定義，如下文進一步所解釋。一個單位的酶活性(u)的標準定義是每單位時間催化限定量的底物反應的酶量，例如一摩爾或一納摩爾底物/分鐘。用於測定透明質酸酶製劑活性的技術在本領域中是已知的，並且透明質酸酶製劑的活性通常以u單位或單位(下文為「單位」)表示。
[0087]
透明質酸酶活性是指酶催化透明質酸裂解的能力。《中國藥典》提供透明質酸酶的測定法，其中透明質酸酶活性通過如下方式間接確定：在使得酶與透明質酸在37℃下反應30分鐘後，測量剩餘的較高分子量透明質酸底物的量。可在測定中使用參考標準溶液以確定任何透明質酸酶的相對活性(以單位計)。用於測定透明質酸酶的體外測定在本領域中是已知的。示例性測定法包括下文所述的微濁度測定法，其通過檢測未裂解的透明質酸與血清白蛋白結合時所形成的不溶性沉澱來間接測量透明質酸酶對透明質酸的裂解。參考標準可用於例如生成標準曲線，從而確定以單位計的受測試透明質酸酶的活性。
[0088]
所述的抗生素藥物組合物中包含一種或多種抗生素和重組人透明質酸酶，以及藥學上可以接受的輔料成分。
[0089]
抗生素和重組人透明質酸酶的藥物組合的組合方式可以為複方製劑，或非複方的分別獨立製劑包裝的試劑盒。
[0090]
所述組合物中抗生素的c
max
與單獨施用所述抗生素相比增加至少10％，例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％；和/或，所述組合物中抗生素的t
max
與單獨施用所述抗生素相比縮短至少20％，例如至少30％、至少40％、至少50％。
[0091]
所述組合物皮下施用後，腸道微生物菌群的多樣性相對於給藥前減少量為口服施用抗生素相對於給藥前減少量的90％以下，例如80％以下、70％以下、60％以下、50％以下。
[0092]
所述組合物還包括藥學上可以接受的輔料，所述藥學上可接受的輔料選自下組：緩衝劑、穩定劑、表面活性劑、助溶劑和/或賦形劑。其中所述緩衝劑選自下組：組氨酸緩衝劑、醋酸緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑、檸檬酸緩衝劑、tris緩衝劑；所述的穩定劑選自下組：海藻糖、蔗糖、甘露醇、氯化鈉、甲硫氨酸、依地酸二鈉；所述的表面活性劑選自下組：聚山梨酯20、聚山梨酯80、泊洛沙姆188；所述的助溶劑選自下組：碳酸鈉、磷酸、檸檬酸、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、氯化鈉、l-精氨酸；和/或，所述的賦形劑選自下組：山梨醇、甘露醇、海藻糖、甘油、乳糖、蔗糖、海藻糖、麥芽糖、葡萄糖。
[0093]
其中：所述的緩衝劑濃度為1-100mm，優選為5-50mm；例如5mm、優選10mm或50mm；和/或
[0094]
所述的表面活性劑的濃度為0.01-0.1％(w/v)，優選0.02％(w/v)；和/或
[0095]
所述的助溶劑的濃度為0.01g/l-100g/l；和/或
[0096]
所述的穩定劑的濃度為1-500mm，優選為30-150mm；例如5mm甲硫氨酸+25mm海藻糖、5mm甲硫氨酸+53mm海藻糖、5mm甲硫氨酸+100mm海藻糖、10mm甲硫氨酸+25mm海藻糖、10mm甲硫氨酸+53mm海藻糖、10mm甲硫氨酸+100mm海藻糖、50mm甲硫氨酸+25mm海藻糖、50mm甲硫氨酸+53mm海藻糖、50mm甲硫氨酸+100mm海藻糖；和/或
[0097]
所述的賦形劑的濃度為1-500mm，優選為160-280mm；例如160mm、220mm或280mm。
[0098]
所述藥物組合，其可為凍幹製劑和/或液體製劑；優選的其特徵在於，抗生素和重組人透明質酸酶的藥物組合的組合方式可以為複方製劑，或非複方的獨立製劑。
[0099]
在一些實施方案中，本發明的藥物組合物是通過將乾粉組合物進行復溶或通過將濃縮的液體組合物進行稀釋而獲得的。
[0100]
在一些實施方案中，本發明還提供了一種藥物組合物，其包含：(1)0.1g-5g的厄他培南，優選為0.2g-2g的厄他培南，最優選為1g的厄他培南；和(2)活性為500單位～20000單位的透明質酸酶，優選為500單位、1667單位、3000單位、5000單位、6667單位、8000單位、
10000單位、15000單位、20000單位的透明質酸酶。在一些實施方案中，本發明的藥物組合物是通過將包含上述(1)和(2)中所述組分的藥物組合物進行復溶而製得。
[0101]
3.本發明的藥物組合物的製備方法
[0102]
本發明第二方面提供了一種試劑盒，包含如上所述的藥物組合物，其中所述抗生素和所述透明質酸酶是混合包裝的。
[0103]
所述獨立包裝的抗生素和/或獨立包裝的透明質酸酶是凍幹製劑或液體製劑。所述凍幹製劑在向受試者施用前進行復溶，所述液體製劑直接施用於受試者或向受試者施用前進行稀釋。
[0104]
所述抗生素和所述透明質酸酶是先後施用或同時施用的，優選的，所述獨立包裝的抗生素和/或獨立包裝的透明質酸酶是先後施用或同時施用的。
[0105]
所述抗生素和所述透明質酸酶是分別先後施用是通過三通輸液管進行的，優選通過手動推注、輸液泵或者重力的方式進行給藥速度的控制。
[0106]
在第一個實施方案中，所述試劑盒包含兩個單劑容器，其中第一容器裝有單個特定劑量的包含45單位/ml-4500000單位/ml重組人透明質酸酶的所述液體製劑，且第二容器裝有單個固定劑量的所述的治療劑。
[0107]
所述的包含重組人透明質酸酶液體製劑的容器，選自管形瓶、預充針；優選地為預充針。
[0108]
優選地，所述的重組人透明質酸酶液體製劑中包含45單位/ml-4500000單位/ml重組人透明質酸酶。
[0109]
所述的重組人透明質酸酶液體製劑的體積優選為0.1-50ml，例如0.2ml、0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.50ml、5.00ml、10.00ml、15.00ml、20ml、30ml、40ml或50ml。
[0110]
在一些實施方案中，每1ml所述的重組人透明質酸酶液體製劑包含45單位-75000單位重組人透明質酸酶。
[0111]
其中，所述的第一容器為管形瓶，第二容器為管形瓶，第三容器為管形瓶或預充針。
[0112]
其中，第一容器為管形瓶或預充針，優選地為預充針；第二容器為管形瓶。
[0113]
所述的重組人透明質酸酶液體製劑優選包含45單位/ml-100000單位/ml重組人透明質酸酶；更優選地，包含45單位/ml-50000單位/ml重組人透明質酸酶。
[0114]
本發明的第三方面涉及一種用於製備根據如上所述的試劑盒的方法，其包括：
[0115]
(a)提供抗生素，其為厄他培南；
[0116]
(b)提供透明質酸酶；
[0117]
(c)任選地提供藥學上可接受的輔料；
[0118]
其中將所述抗生素和所述透明質酸酶分別製備成凍幹製劑或液體製劑；或者將所述抗生素和所述透明質酸酶混合後製備成凍幹製劑或液體製劑。
[0119]
本發明的第四方面涉及施用第二方面所述試劑盒治療疾病的方法，通過分別給藥或者混合給藥進行施用。
[0120]
所述的分別給藥包括以下步驟：
[0121]
(a)向施用對象皮內或皮下施用所述的試劑盒中的重組人透明質酸酶液體製劑；
[0122]
(b)向所述對象隨後施用所述的試劑盒中的治療劑。
[0123]
其中，步驟(a)和(b)可單獨、同時或者交替進行；
[0124]
當步驟(a)和(b)單獨進行時，步驟(a)和(b)之間的時間間隔為0-24小時；
[0125]
優選無時間間隔、至多1分鐘、至多2分鐘、至多3分鐘、至多4分鐘、至多5分鐘、至多6分鐘、至多7分鐘、至多8分鐘、至多9分鐘、至多10分鐘、至多15分鐘、至多20分鐘、至多25分鐘、至多30分鐘、至多1h、至多2h、至多3h、至多6h、至多12h或者至多24h。
[0126]
在進行皮下先後給藥時，步驟(a)和(b)之間的時間間隔可為0分鐘、1分鐘、2分鐘、3分鐘、4分鐘、5分鐘、6分鐘、7分鐘、8分鐘、9分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、25分鐘、30分鐘、35分鐘、40分鐘、45分鐘、50分鐘、55分鐘或60分鐘。
[0127]
所述的分別給藥可通過三通的方式實現同時給藥或者先後給藥。
[0128]
所述的分別給藥可通過輸液泵或者重力的方式進行給藥速度的控制；
[0129]
其中，所述重組人透明質酸酶的液體製劑可以0.1-2ml/分鐘的速度進行給藥；
[0130]
所述治療劑可以5ml/小時、10ml/小時、30ml/小時、60ml/小時、120ml/小時、240ml/小時或者300ml/小時的速度輸注。
[0131]
所述的混合給藥包括：將所述的試劑盒中的重組人透明質酸酶液體製劑與治療劑混合後向所述對象皮下施用；每1ml所述液體製劑包含45單位-500000單位重組人透明質酸酶。
[0132]
所述的混合給藥可通過輸液泵或者重力的方式進行給藥速度的控制；
[0133]
其中，所述重組人透明質酸酶的液體製劑和所述治療劑混合後可以5-300ml/小時的速度輸注，例如5ml/小時、10ml/小時、30ml/小時、60ml/小時、120ml/小時、240ml/小時或者300ml/小時。
[0134]
所述的用於混合的治療劑為液體或乾粉形式。
[0135]
所述重組人透明質酸酶液體製劑，可直接施用、和/或稀釋後施用。
[0136]
其中，所述稀釋用製劑可為本領域常規，例如生理鹽水；
[0137]
所述稀釋比例可為本領域常規，例如1：10。
[0138]
4.製藥用途和注射系統
[0139]
本發明還涉及包含抗生素和透明質酸酶的藥物組合物及試劑盒在製備用於治療疾病的藥物中的用途。在一具體實施例中，所述疾病選自下組：細菌、真菌、放線菌、支原體、衣原體、螺旋體、阿米巴原蟲的感染以及所述感染導致的疾病。
[0140]
優選地，所述疾病是細菌或者真菌感染引起的疾病。其中，所述的細菌包括：埃希氏菌屬、假單胞菌屬、克雷伯菌屬、不動桿菌屬、腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌屬、嗜血桿菌屬、變形桿菌屬、沙門氏菌屬、志賀氏菌屬、沙雷氏菌屬、棒狀桿菌屬、葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬、奈瑟菌屬、分支桿菌屬、軍團菌屬。所述的真菌包括：毛癬菌屬、表皮癬菌屬、小孢子癬菌屬、念珠菌屬、隱球菌屬、球孢子菌屬、組織胞漿菌屬、孢子絲菌屬、芽生菌屬、地絲菌屬、麴黴菌屬、毛黴菌屬、青酶菌屬。
[0141]
優選地，所述疾病是細菌或者真菌感染引起的疾病，所述細菌或者真菌可為b型流感嗜血桿菌、a和b型銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、b族鏈球菌、(1、3、4、6、7、8、9、12、14、18、19和23)型肺炎鏈球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、化膿鏈球菌、草綠色鏈球菌、無乳鏈球菌、肺炎雙球菌、炭疽桿菌、白喉桿菌、百日咳桿菌、破傷風桿菌、結核桿菌、芽孢桿菌、產氣莢膜桿菌、麻風桿菌、淋球菌、腦膜炎雙球菌、嗜肺軍團菌、志賀痢疾桿菌、綠膿桿菌、變
形桿菌、霍亂弧菌、副溶血桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、福傷寒桿菌、沙門氏菌、流感嗜血桿菌、不動桿菌、麴黴、念珠菌或、隱球菌、毛黴菌、鐮刀菌。
[0142]
所述病原微生物感染導致的疾病例如：金黃色葡萄球菌所致的慢性骨髓炎、耐藥金黃色葡萄球菌或腸球菌所致心內膜炎、傷寒、副傷寒、細菌性食物中毒、細菌感染性腹瀉、霍亂、細菌性痢疾、布魯菌病、鼠疫、炭疽、白喉、百日咳、猩紅熱、流行性腦脊髓膜炎、結核病、細菌性血流感染、細菌性上呼吸道感染、細菌性下呼吸道感染、細菌性尿路感染、細菌性腹腔感染、皮膚癬菌病、真菌性口腔炎、念珠菌陰道炎、真菌性肺炎、真菌性尿路感染、真菌性菌血症、隱球菌病、念珠菌病、麴黴病、肺孢子菌病。
[0143]
如以上任一項所述的製劑的藥物組合物在製備疾病藥物中的應用。
[0144]
本發明還涉及容器和注射系統，包裝材料包括但不限於管形瓶、注射器或者試管；注射系統包括但不限於：注射器、輸注泵、注射筆、無針裝置或者皮下貼片投遞裝置。
[0145]
所述的注射裝置的組成可為本領域常規，包括：容器、密封件、注射針頭。
[0146]
其中，所述的容器包括但不限於：管形瓶、注射器或試管。
[0147]
所述的容器的材質可為本領域常規，例如玻璃或塑料。
[0148]
其中，所述的密封件包括但不限於：密封塞或密封圈。
[0149]
所述的密封件的材質可為本領域常規，例如橡膠、塑料或高分子材料。
[0150]
其中，所述的注射針頭包括但不限於水針、單針、微針組。
[0151]
所述的注射針頭的材質可為本領域常規，例如金屬、矽、二氧化矽、玻璃、鎳、鈦或可生物降解的聚合物。
[0152]
所述的水針包括但不限於：西林瓶水針、安瓿瓶水針或預充注射系統。
[0153]
所述的安瓿瓶水針可為玻璃安瓿或塑料安瓿。
[0154]
所述的預充注射系統可為本領域常規，例如預充注射器。
[0155]
優選地，所述容器為西林瓶，材質為中性硼矽玻璃，規格為0.1-20ml；
[0156]
所述密封件為密封塞，材質為滷化丁基橡膠；
[0157]
所述注射針頭為單針、微針組。
[0158]
優選地，所述單針的材質可為304或316不鏽鋼，規格(如表1所示)可為30g、24g、27g、29g；所述微針組材質可為304或316不鏽鋼、可生物降解的聚合物，規格為高10-2000μm、寬10-50μm納米級尺寸針。
[0159]
在本發明的一個實施方案中，提供了製品，其含有如本發明第一方面所述的藥物組合物且提供其使用說明。此製品包含所述容器。製品可以進一步包括從商業和用戶觀點看期望的其它材料，包括其它緩衝液、稀釋劑、濾器、針頭、注射器、輸液泵和印有使用說明的包裝插頁。
[0160]
在符合本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。
[0161]
本發明所用試劑和原料均市售可得。
[0162]
本發明的積極進步效果在於：本發明首次提供了一種可穩定使用的透明質酸酶輔助的皮下厄他培南注射製劑。該製劑臨床使用不受體積限制，也更加方便，能夠改善患者治療體驗，降低輸液相關副反應。患者舒適度高，起效快，血藥濃度高，不會造成胃腸道微生物紊亂。
實施例
[0163]
實施例1.重組人透明質酸酶的製備
[0164]
採用穩定表達重組人透明質酸酶蛋白的cho細胞在自主研發的無血清培養基中懸浮培養，以自主研發的無血清補料培養基進行補料流加控制培養，經搖瓶培養逐步擴大到30l反應器規模。
[0165]
培養3-4天時，向生物反應器中每天添加補料培養基的量為生物反應器中實際培養體積的2％-5％。培養溫度控制在35℃-37℃，通過補加10％na2co3及co2控制ph在7.0；反應器通氣量控制在0.015-0.15vvm；轉速控制在80-150rpm；溶氧值控制在20％-40％。在細胞培養過程中，每天取樣，監測溫度、ph、葡萄糖濃度、乳酸濃度、摩爾滲透壓濃度及蛋白表達量；cho細胞活率低於80％或培養周期達14-20天時，結束培養，獲得重組人透明質酸酶培養上清。
[0166]
將獲得的重組人透明質酸酶上清依次進行深層過濾、陰離子層析、親和層析、疏水層析、陽離子層析和超濾換液。按照該工藝進行三批原液的生產，得到sec純度大於95％的重組人透明質酸酶原液，rp純度大於85％的透明質酸酶，酶活性均大於70000單位/mg。
[0167]
實施例2.透明質酸酶、厄他培南溶液相容性研究
[0168]
通過配製包含透明質酸酶及抗生素的溶液研究兩種物質相容性。採用生理鹽水溶解注射用厄他培南乾粉至30mg/ml、300mg/ml，加入透明質酸酶至終濃度分別為150、500、2000、6000單位/ml。配製完成後，室溫放置15分鐘，觀察溶液外觀，並測定透明質酸酶濃度。
[0169]
研究結果顯示，8種溶液配製後，溶液澄清透明，未見沉澱。對溶液進行透明質酸酶活性測定，結果顯示，厄他培南不會干擾透明質酸酶的活性。可進一步進行透明質酸酶、厄他培南混合製劑研究。
[0170]
表1.厄他培南及透明質酸酶相容性研究
[0171][0172]
實施例3.透明質酸酶乾粉製劑研究
[0173]
將實施例1中獲得的重組人透明質酸酶原液換液至不同組成的液體製劑中，並調節重組人透明質酸酶濃度至預期的濃度。將所有製劑通過0.22μm低蛋白質吸附濾器進行除菌過濾，並在無菌條件下填充入無菌5ml玻璃管形瓶中，用氟樹脂層狀丁基橡膠塞子加塞並用鋁/塑料掀開型(flip-off)封條加帽。填充體積為2ml。將這些製劑貯存於不同溫度的環境下，並在指定的時間間隔取樣考察製劑穩定性，對不同製劑穩定性數據進行匯總。25℃進行放樣進行加速實驗，不同時間取樣通過下列分析方法分析蛋白質量。分析方法包括sec純度、rp純度、酶活性，實驗結果如表2-6所示。
[0174]
如表2所示，2mm甲硫氨酸濃度條件下的重組人透明質酸酶在25℃下放置一段時間後rp純度和酶活性下降明顯；含有甲硫氨酸濃度為5、10和50mm範圍內的重組人透明質酸酶製劑穩定性較好。
[0175]
如表3所示，含有250mm海藻糖和250mm蔗糖穩定劑條件下的重組人透明質酸酶在25℃下放置一段時間後sec純度和酶活性下降明顯；含有海藻糖濃度25、53和200mm、蔗糖濃
度25、53和200mm穩定劑條件下的重組人透明質酸酶製劑穩定性較好。
[0176]
如表4所示，含有聚山梨酯20濃度為0.01～0.1％、聚山梨酯80濃度為0.01～0.1％、泊洛沙姆188濃度為0.01～0.1％表面活性劑條件下的重組人透明質酸酶製劑穩定性較好。
[0177]
如表5所示，含有甘露醇160mm～280mm作為賦形劑的條件下的重組人透明質酸酶製劑穩定性較好
[0178]
如表6所示，本實施例的重組人透明質酸酶液體製劑中重組人透明質酸酶活性在150、500、1000、5000、50000、300000、1500000、3000000和4500000單位/ml內穩定性較好，2～8℃放置12個月後酶活性保持在95％以上。
[0179]
[0180]
[0181]
[0182]
[0183][0184]
實施例4.透明質酸酶乾粉製劑
[0185]
根據實施例3的製劑處方篩選，選擇其中7個具有代表性的透明質酸酶製劑，如表
7。其中每組製劑配方，透明質酸酶設計4種濃度，分別為150、500、2000、6000單位/ml。按照表8所示冷凍乾燥程序進行凍幹後，用於與厄他培南混合配製。
[0186]
表7.透明質酸酶凍乾粉製劑配方
[0187] abcdefg磷酸氫二鈉10mm10mm10mm10mm10mm10mm10mm甲硫氨酸10mm10mm10mm10mm10mm10mm10mm吐溫200.02％0.02％0.02％0.02％0.02％0.02％0.02％氯化鈉30mm130mm
‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑
海藻糖
‑‑‑‑‑‑‑‑
80mm25mm25mm甘露醇
‑‑‑‑
220mm220mm220mm220mm220mm蔗糖
‑‑‑‑
25mm53mm
‑‑‑‑‑‑
[0188]
表8.透明質酸酶凍幹程序
[0189][0190]
實施例5.皮下厄他培南乾粉製劑
[0191]
將凍幹後的透明質酸酶乾粉(表7中的配方a-g)與厄他培南乾粉進行混合，製備皮下厄他培南乾粉製劑。混合規格為，每份含有厄他培南有效成分1g，透明質酸酶根據組別，分別為500單位、1667單位、6667單位、20000單位。
[0192]
取混合後乾粉，按照含1g厄他培南有效成分的乾粉用3.2ml注射用水的方式進行溶解。溶解後，透明質酸酶濃度分別為分別對應150單位/ml，500單位/ml，2000單位/ml，6000單位/ml。將溶液放置於25℃，時間設定為15min、1hr。測定每個取樣點樣品的透明質酸酶活性、厄他培南含量、外觀。其中透明質酸酶活性、厄他培南含量均採用《hplc測定注射用厄他培南的含量及有關物質》方法進行檢測。
[0193]
表9、表10分別顯示了各組在不同條件下厄他培南含量(標示成分的90～110％即為合格)、透明質酸酶活性的變化。
[0194]
結果顯示，復溶後，不同製劑配方溶液均澄清透明。15min時，不同製劑配方下，厄他培南含量穩定、透明質酸酶活性穩定。1hr時，不同製劑配方下，厄他培南含量在90～110％範圍內。組a、組b中的透明質酸酶活性略有下降，組c、組d、組e、組f、組g中的透明質酸酶活性保存的較好。
[0195]
表9.厄他培南含量
[0196][0197]
表10.透明質酸酶活性
[0198][0199]
申請人聲明，本發明通過上述實施例來說明本發明的詳細方法，但本發明並不局限於上述詳細方法，即不意味著本發明必須依賴上述詳細方法才能實施。所屬技術領域的技術人員應該明了，對本發明的任何改進，對本發明產品各原料的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發明的保護範圍和公開範圍之內。