一種能夠促進番茄生長並拮抗三種病害的內生細菌及其分離方法
2023-05-26 21:45:21
專利名稱：一種能夠促進番茄生長並拮抗三種病害的內生細菌及其分離方法
技術領域：
本發明涉及一種內生細菌，尤其涉及一種能夠促進番茄生長並拮抗三種病害的內生細菌，同時還涉及一種該內生細菌的分離方法。
背景技術：
番爺早疫病是由半知菌亞門爺鏈格孢菌(Alternaria solani)引起,在全國各地都有發生，是番茄的主要病害之一。目前對於該病的防治主要依靠化學藥劑，然而隨著對環境保護意識的增強，人們越來越重視化學農藥所造成殘留和環境汙染問題。生物防治已經成為控制病害的重要手段，而植物內生細菌作為植物病害生物防治的潛在資源菌具有獨特的優勢，並且已經顯示出很好的利用前景。發明內容
本發明的目的在於提供一種能夠促進番茄生長並拮抗三種病害的內生細菌。
同時，本發明的目的還在於提供一種該內生細菌的分離方法。
為了實現上述目的，本發明的技術方案採用了一種能夠促進番茄生長並拮抗三種病害的內生細菌，命名為Fb9(Bacillum sp.)，保藏於位於中國，武漢，武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2011年12月8日，保藏編號為CCTCC NO M 2011448。
本發明的技術方案採用了一種內生細菌的分離方法，包括以下步驟採集健康番茄植株的根、莖、葉各3g，在75%的酒精中浸泡30s，然後用O. I %的升汞消毒3min，用無菌水衝洗5次後,於滅菌的研缽中研磨,加入5ml無菌水混勻，分別取最後一次的衝洗液和研磨液200ul，塗布於NB培養基平板上，在28°C下培養，逐日觀察，如最後一次衝洗液塗布的培養基中無菌落，在研磨液塗布的培養基中長出的菌落為內生細菌，進行純化培養後，4°C 冰箱中保存備用。
所述的衝洗液組成為75%的酒精中浸泡30s，l%的升汞消毒3min，無菌水衝洗5 次，無菌水是經過高壓蒸 汽滅菌鍋滅菌的蒸餾水。
所述的研磨液為無菌水，無菌水是經過高壓蒸汽滅菌鍋滅菌的蒸餾水。
所述的NB培養基組成為牛肉浸膏5g，蛋白腖10g，氯化鈉5g，瓊脂條18g，加蒸餾水至 1000mL。
本發明利用稀釋分離法，從健康的番茄植株中分離得到11個細菌菌株。通過平板對峙試驗篩選出對三種病菌抑菌效果最好的Fb9菌株，對番茄早疫病菌、番茄菌核病菌、黃瓜枯萎病菌抑菌率分別為70. 81%,74. 35%,65. 17%。Fb9菌株對番茄的生長具有促進作用，對番茄早疫病的室內盆栽防治效果為63. 7%。經試驗通過分離篩選獲得對番茄早疫病具有防治效果的番茄內生細菌菌株，並鑑定出該菌株對番茄的生長具有促進作用。
本發明的內生細菌，命名為Fb9 (Bacillum sp.)，保藏於位於中國，武漢，武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2011年12月8日，保藏編號為CCTCC NO M2011448。
具體實施方式
本發明的內生細菌的具體分離過程如下
I.材料與方法
I. I供試菌株與番茄品種
番爺早疫病菌Alternaria solani和黃瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum從田間發病植株上分離得到，番爺菌核病菌Sclerotinia scIerotiorum由河南科技大學林學院植保系實驗室保存；供試番爺品種為『中蔬四號』。
I. 2培養基
細菌培養用NB培養基，真菌培養及平板對峙試驗用PDA培養基。
L 3番茄內生細菌的分離
米集健康番爺植株的根、聖、葉各3g,在75%的酒精中浸泡30s,然後用1%的升萊消毒3min,用無菌水衝洗5次後,於滅菌的研缽中研磨，加入5ml無菌水混勻,分別取最後一次的衝洗液和研磨液200ul，塗布於NB培養基平板上，在28°C下培養，逐日觀察，如最後一次衝洗液塗布的培養基中無菌落，在研磨液塗布的培養基中長出的菌落是內生菌，進行純化培養後，4 C冰箱中保存備用。
I. 4拮抗活性測定
番茄早疫病菌、番茄菌核病菌、黃瓜枯萎病菌活化培養，製成8mm的菌餅放置於 PDA培養基中心，四周40mm處分別放置三片8mm大小含有內生細菌的濾紙片，置於28°C培養箱內培養4 5天，測量抑菌圈半徑並計算抑菌率。
權利要求
1.一種能夠促進番爺生長並拈抗三種病害的內生細菌Fb9(Baci I Ium sp.),保藏日期為2011年12月8日，保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO M 2011448。
2.一種能夠促進番茄生長並拈抗三種病害的內生細菌的分離方法，其特徵在於包括以下步驟採集健康番茄植株的根、莖、葉各3g，在75%的酒精中浸泡30s，然後用O. 1%的升汞消毒3min，用無菌水衝洗5次後，於滅菌的研缽中研磨，加入5ml無菌水混勻，分別取最後一次的衝洗液和研磨液200ul，塗布於NB培養基平板上，在28°C下培養，逐日觀察，如最後一次衝洗液塗布的培養基中無菌落，在研磨液塗布的培養基中長出的菌落為內生細菌， 進行純化培養後，4°C冰箱中保存備用。
3.根據權利要求2所述的能夠促進番茄生長並拈抗三種病害的內生細菌的分離方法， 其特徵在於所述的衝洗液為75%的酒精中浸泡30s，0. 1%的升汞消毒3min，無菌水衝洗 5次，無菌水是經過高壓蒸汽滅菌鍋滅菌的蒸餾水。
4.根據權利要求2所述的能夠促進番茄生長並拈抗三種病害的內生細菌的分離方法， 其特徵在於所述的研磨液是無菌水，無菌水是經過高壓蒸汽滅菌鍋滅菌的蒸餾水。
5.根據權利要求2所述的能夠促進番茄生長並拈抗三種病害的內生細菌的分離方法，其特徵在於所述的NB培養基組成為牛肉浸膏5g，蛋白腖10g，氯化鈉5g，加蒸餾水至 IOOOmL0
6.根據權利要求5所述的能夠促進番茄生長並拈抗三種病害的內生細菌的分離方法， 其特徵在於向NB培養基中加入瓊脂條18g，為固體培養基。
全文摘要
本發明涉及一種能夠促進番茄生長並拈抗三種病害的內生細菌及其分離方法，內生細菌Fb9(Bacillum sp.)，保藏日期為2011年12月8日，保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NOM 2011448。本發明通過平板對峙試驗篩選出對三種病菌抑菌效果最好的Fb9菌株，對番茄早疫病菌、番茄菌核病菌、黃瓜枯萎病菌抑菌率分別為70.81％、74.35％、65.17％。Fb9菌株對番茄的生長具有促進作用，對番茄早疫病的室內盆栽防治效果為63.7％。經試驗通過分離篩選獲得對番茄早疫病具有防治效果的番茄內生細菌菌株，並鑑定出該菌株對番茄的生長具有促進作用。
文檔編號C12R1/07GK102864092SQ20121001152
公開日2013年1月9日 申請日期2012年1月15日 優先權日2012年1月15日
發明者李永麗, 周洲, 崔林開, 胡豔紅, 李凡, 於雪 申請人:河南科技大學