脂肪酸合成酶抑制劑及其製造方法與應用的製作方法

2023-05-27 14:53:11

專利名稱：脂肪酸合成酶抑制劑及其製造方法與應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及酶的抑制劑及其製造方法與應用，特別是涉及一種脂肪酸合成酶抑制劑及其製造方法與應用。
研究表明，高等動物的體脂一方面靠直接攝入，更多的由體內自身合成(Lenninger，A.L.，1982.Principles of Biochemistry，Chapter 13，p333-360 andChapter 21，p593-614；Wakil，S.J.et al.，1983.Ann.Rev.Biochem.52，p537-579)。脂肪酸合成酶是生物細胞內合成脂肪過程中最重要的酶。田維熙等對家禽脂肪酸合成酶的研究發現，家禽腹腔的脂肪水平和脂肪酸合成酶活性有很高的正相關，並提出控制脂肪酸合成酶活性是控制動物體脂水平的有效方法的理論(田維熙，1994.動物的體脂水平和脂肪酸合成酶活性的調控.生命的化學，14，(1)184；田維熙等，1996.不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關係.生物化學雜誌，12(2)234-236；Mei Li et al.，1999.Factors influencing the levels of fattyacid synthase complex activity in fowl.Biochemistry and Molecular BiologyInternational，47(1)63-69)。最近，霍普金斯大學Loftus等對小鼠脂肪酸合成酶的研究結果證明，抑制脂肪酸合成酶可造成丙二醯輔酶A的積累，而後者抑制與進食相關的下丘腦神經肽Y的表達，在不影響小鼠活動能力的情況下使食慾下降，體重降低。Loftus等指出，脂肪酸合成酶可以作為控制體重潛在的治療靶位(Loftus.T.M.et al.，2000.Science，288(5475)2379-2381)。以上結果表明，抑制脂肪酸合成酶的活性，不僅可抑制細胞內脂肪的合成，而且還能抑制動物的食慾，進而限制直接攝入的熱量。因此，研製和開發脂肪酸合成酶的抑制劑將具有重大的現實意義及開發潛力。
本發明的目的是提供一種能有效抑制脂肪酸合成酶活性的脂肪酸合成酶抑制劑。
本發明的另一目的是提供一種製造上述脂肪酸合成酶抑制劑的方法。
本發明的又一目的是提供上述脂肪酸合成酶抑制劑的用途。
本發明的脂肪酸合成酶抑制劑是用有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物，從中藥甘草中萃取出的物質。
實驗證明，有機溶劑以極性有機溶劑為佳，其中，優選的是乙醇、丁醇或者丙酮。所述乙醇的濃度在15％-100％的範圍內時效果較好，其中，優選的是45％-95％的乙醇，最優選的是70％的乙醇。
生產上述脂肪酸合成酶抑制劑的方法，包括以下步驟
(1)、將粉碎後的甘草置於容器中，加入有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物；(2)、在20℃-40℃條件下萃取22-26小時；(3)、離心或過濾，收集上清液。
在上述生產方法中，所述加入的有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物的重量可以為所述甘草重量的4-15倍，其中優選的為5-8倍。
如果萃取在攪拌、30℃條件下進行，則萃取12小時即可；如果離心是在8000轉/分鐘的條件下進行，則進行15分鐘。
以本發明的脂肪酸合成酶抑制劑為活性成分生產的藥物，是本發明脂肪酸合成酶抑制劑的主要應用領域。
本發明的脂肪酸合成酶抑制劑還可以作為食品添加劑、日用化學品(特別是化妝品)添加劑及保健品添加劑。
中藥甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的根及根狀莖。甘草分布於我國東北、華北、西北等地，產量較大。其「入手太陰肺經，足太陰脾經」(《本草經解》)。中醫認為，甘草的功用主要為「和中緩急，潤肺，解毒，調和諸藥」。常被用於治療咳嗽，消化系統疾病和消炎解毒等。
本發明巧妙地將傳統的中藥甘草用有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物，特別是極性有機溶劑進行萃取，創造性地揭示出，所萃取出的物質是有效的脂肪酸合成酶抑制劑。由於中藥甘草本身無毒，因而為該脂肪酸合成酶抑制劑的進一步開發利用提供了廣闊的前景。實驗表明脂肪酸合成酶抑制劑可以有效抑制脂肪酸合成酶的活性，而脂肪酸合成酶活性的強弱直接影響到生物細胞內合成脂肪的多少。也就是說，抑制了脂肪酸合成酶的活性，生物細胞內合成脂肪的過程會弱化，脂肪含量即會得到控制，甚至減少，而且，脂肪酸合成酶抑制劑還可以控制動物的食慾，所以本發明的脂肪酸合成酶抑制劑可以作為減肥藥物的活性成分，生產口服液、衝劑、膠囊、片劑、針劑等各種劑型的減肥藥物。本發明的脂肪酸合成酶抑制劑還可以作為保健品、食品的添加劑，特別是可作為高熱食品的添加劑，使喜食高熱食品的人既滿足了口福，又不用擔心會增胖。本發明的脂肪酸合成酶抑制劑還可以作為美容日用化學品的添加劑，如可以製成減肥霜，對需要減肥的部位進行定點塗抹。同時，由於中藥甘草的源植物分布廣泛，價格低廉，為脂肪酸合成酶抑制劑的工業化生產提供了保證。
下面結合具體實施例對本發明作進一步說明。
在下述的實施例中，所用的脂肪酸合成酶均為用常規方法(W.X.Tian et al.，1985.J.Biol.Chem.，260(20)11375-11387；田維熙等，1996.不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關係.生物化學雜誌，12(2)234-236)自新鮮雞肝中分離提純的，並經聚丙烯醯胺凝膠電泳檢測為單一帶。
脂肪酸合成酶活性採用乙醯輔酶A、丙二醯輔酶A、NADPH為底物的標準測活方法測定(W.X.Tian et al.，1985.J.Biol.Chem.，260(20)11375-11387；田維熙等，1996.不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關係.生物化學雜誌，12(2)234-236)。
脂肪酸合成酶(FAS)活性被抑制的程度用I％(抑制程度)來表示，其計算方法為以底物中只加入相應提取溶劑的為對照，測定其脂肪酸合成酶活性值，該值用A0表示，並設定其為100％。底物中加入脂肪酸合成酶抑制劑提取液的為實驗組，測得其脂肪酸合成酶活性的數值為A；RA％(剩餘活性)＝A/A0×100％I％(抑制程度)＝100％-RA％實施例1用乙醇從中藥甘草中萃取脂肪酸合成酶抑制劑(1)取中藥甘草，粉碎後置於容器中，加入5倍重量95％的乙醇，充分攪拌後密封；(2)在30℃、攪拌的條件下萃取12小時；(3)將上述溶液在8000轉/分鐘的條件下離心15分鐘，取上清液，即為含脂肪酸合成酶抑制劑的提取液，以備下面的實驗使用。
可以用與該實施例相同的方法，用不同梯度的乙醇(如17％，40％，50％，70％，80％)、水、與乙醇極性相近或較弱的有機溶劑(如丁醇、丙酮)來萃取脂肪酸合成酶抑制劑。如果是在非攪拌條件下進行萃取，則至少應每隔4小時攪拌一次，萃取24小時。用該實施例的方法自中藥甘草中萃取脂肪酸合成酶抑制劑，攪拌條件下，萃取時間只要不低於12小時，溫度在20-100℃之間均能萃取出有效成分。在實際生產中，萃取後一般採用壓濾機來收取上清液。
實施例2相同的實驗底物中加入不同數量的脂肪酸合成酶抑制劑對FAS活性的影響(測活的酶加入量為每毫升實驗底物10微克)。每毫升底物中加實施例1提取液的微升數 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 4.0 5.0折算成加入中藥甘草的毫克數 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0折算成每毫克酶加入中藥甘草的毫克數 10 20 30 40 60 80 100FAS酶活性被抑制的程度I％ 417 27 43 66 78 97由以上實驗結果可以看出，隨著加入提取液量的增加，FAS酶活性被抑制程度I％升高，當每毫升底物中加入5.0微升的提取液時，I％達到97％，表明脂肪酸合成酶的活性基本被抑制。
實施例3萃取溶劑對脂肪酸合成酶活性的影響取與實施例2相同的底物，分別向每毫升底物中加0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0微升95％的乙醇，檢測計算FAS酶活性被抑制的程度I％，結果是I％均為0，表明所加量的萃取溶劑乙醇不會抑制脂肪酸合成酶的活性，抑制脂肪酸合成酶活性的是從中藥甘草中萃取出的物質。
實施例4脂肪酸合成酶抑制劑的半抑制濃度用實施例1所得的提取液進行實驗，結果表明，要達到I％＝50％，每毫升溶液中需加入2.2微升的提取液，折算成加入中藥甘草的毫克數為0.44，折算成每毫克酶加入中藥甘草的毫克數為44，半抑制濃度較低，說明本發明的脂肪酸合成酶抑制劑對脂肪酸合成酶的活性有強烈的抑制作用，並且所需有效劑量較低。
實施例5不同萃取劑對萃取出的脂肪酸合成酶抑制劑數量的影響萃取劑水17％ 50％ 95％ 丁醇 丙酮 乙醚 石油醚乙醇 乙醇 乙醇每毫升底物中加入 2.5 2.5 2.52.5 4.0 4.0 4.0 4.0提取液的微升數折算成加入中藥0.5 0.5 0.50.5 0.8 0.8 0.8 0.8甘草的毫克數折算成每毫克酶加入505050 50 80808080中藥甘草的毫克數FAS酶活性被抑 5 1472 64 62667 0制的程度I％從以上實驗結果可以看出，本發明的脂肪酸合成酶抑制劑可以溶於水，但溶解性較弱，在70％的乙醇中溶解性較好，在弱極性的丁醇、丙酮中溶解性一般，在非極性溶劑中不溶。
權利要求
1.脂肪酸合成酶抑制劑，它是用有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物，從中藥甘草中萃取出的物質。
2.根據權利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑，其特徵在於所述有機溶劑為極性有機溶劑。
3.根據權利要求2所述的脂肪酸合成酶抑制劑，其特徵在於所述極性有機溶劑為乙醇、丁醇或丙酮。
4.根據權利要求3所述的脂肪酸合成酶抑制劑，其特徵在於所述乙醇的濃度為15％-100％，其中，優選的是45％-95％，最優選的是70％。
5.一種生產權利要求1所述脂肪酸合成酶抑制劑的方法，包括以下步驟(1)將粉碎後的甘草置於容器中，加入有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物；(2)在20℃-40℃條件下萃取22-26小時；(3)離心或過濾，收集上清液。
6.根據權利要求4所述的生產脂肪酸合成酶抑制劑的方法，其特徵在於所述加入的有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物的重量為所述甘草重量的4-15倍；其中優選的為5-8倍。
7.以權利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑為活性成分的藥。
8.權利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑作為食品添加劑的應用。
9.權利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑作為日用化學品添加劑的應用。
10.權利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑作為保健品添加劑的應用。
全文摘要
本發明公開了一種脂肪酸合成酶抑制劑,它是用有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物,從中藥甘草中萃取出的物質;所述有機溶劑優選乙醇、丁醇或丙酮;所述乙醇的濃度優選的是45%－95%,最優選的是70%。一種生產上述脂肪酸合成酶抑制劑的方法,包括以下步驟:(1)將粉碎後的甘草置於容器中,加入有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物;(2)在20℃－40℃條件下萃取22－26小時;(3)離心或過濾,收集上清液。本發明的脂肪酸合成酶抑制劑可以在製藥、食品添加劑及日用化學品添加劑等領域得到廣泛應用。
文檔編號A23L1/30GK1370550SQ0110430
公開日2002年9月25日 申請日期2001年2月23日 優先權日2001年2月23日
發明者田維熙, 王玄, 吳曉東, 陳傳楚, 李麗春, 黃莉莉 申請人:田維熙