西黃緩釋片活性組分及其緩釋片和製備方法
2023-05-27 06:01:46
西黃緩釋片活性組分及其緩釋片和製備方法
【專利摘要】本發明涉及藥物製劑領域，特別是涉及一種西黃緩釋片活性組分，它由下述重量份數的原料經過下述步驟製得：牛黃15份、麝香15份、乳香（醋制）550份、沒藥（醋制）550份；步驟一，將乳香和沒藥分別低溫粉碎，過24目篩混合，將所得混合物裝入超臨界萃取罐中，在壓力35MPa，溫度45℃的條件下，萃取3h，得乳香沒藥超臨界萃取物55～88份，備用；步驟二，將牛黃粉碎成細粉，過60目篩，得牛黃粉末15份，備用；步驟三，將麝香粉碎成細粉，過60目篩，得麝香粉末15份，備用。本發明還涉及包含上述活性組分的西黃緩釋片劑及其製備方法。本發明的西黃緩釋片能有效控制處方中活性成分的釋放速率，改善活性成分釋放的規律性，穩定血藥濃度，延長和提高療效。
【專利說明】西黃緩釋片活性組分及其緩釋片和製備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及藥物製劑領域，特別是涉及一種中藥緩釋製劑及其製備方法。
【背景技術】
[0002]西黃丸，出自清代著名醫家王洪緒所著《外科證治全生集.卷四》。作為一種純中藥製劑，西黃丸經大量的臨床驗證，療效確切，尤其在乳腺癌、肝癌、白血病、胰腺癌等多種癌症的治療中效果顯著，被公認為抗腫瘤的經典名方。
[0003]西黃丸方現已被收載於《中華人民共和國衛生部藥品標準》中藥成方製劑第九冊第71頁，其有效成分原料藥的重量配比為:牛黃15份、磨香15份、乳香(醋制)550份和沒藥(醋制)550份，上市劑型主要為丸劑。西黃丸的生產工藝是將全部藥材制粉加入黃米等輔料用水泛丸製成。成品為褐色水丸。但在實際應用過程中人們發現:上述製備方法存在著處方服用量過大、無法保證處方中有效成分釋放的規律性和揮發性成分的穩定性等缺點。
【發明內容】
[0004]本發明的目的旨在提供一種的西黃緩釋片活性組分、西黃緩釋片劑及其製備工藝。
[0005]具體地說，本發明的第一方面是提供了一種西黃緩釋片活性組分，它由下述重量份數的原料經過下 述步驟製得:
[0006]牛黃15份、麝香15份、乳香(醋制)550份、沒藥(醋制)550份；
[0007]步驟一，將乳香和沒藥分別低溫粉碎，過24目篩混合，將所得混合物裝入超臨界萃取罐中，在壓力35MPa，溫度45°C的條件下，萃取3h，，得乳香沒藥超臨界萃取物55~88份，備用；
[0008]步驟二，將牛黃粉碎成細粉，過60目篩，得牛黃粉末15份，備用；
[0009]步驟三，將麝香粉碎成細粉，過60目篩，得麝香粉末15份，備用。
[0010]本發明的第二方面是提供了一種西黃單層緩釋片，它由下述重量比的成分製成:
[0011]上述西黃緩釋片活性組分中的乳香沒藥超臨界萃取物55~88份；
[0012]上述西黃緩釋片活性組分中的牛黃粉末15份；
[0013]上述西黃緩釋片活性組分中的麝香粉末15份；
[0014]表面活性劑30~80份，所述表面活性劑選自Kolliphor HS、Kolliphor EL、Kolliphor TPGS、吐溫-80或二甲亞碸中的一種和多種；
[0015]吸附固化劑30~100份，所述吸附固化劑選自AEROPERLil 300pharm、Aerosil?200pharma、二氧化娃或Kollidon CL-SF中的一種和多種；
[0016]骨架材料35~80份，所述骨架材料選自羥丙甲基纖維素、羥丙甲基纖維素與乙基纖維素1:1或2:1混合物或羥丙甲基纖維素與Kollidon SR3:1混合物中的一種和多種；
[0017]填充劑150~300份，所述填充劑選自微晶纖維素、乳糖、可壓性澱粉或速流甘露醇中的一種和多種。[0018]在一優選例中,所述表面活性劑的用量為50~60份。
[0019]在另一優選例中，所述吸附固化劑的用量為50~80份。
[0020]在另一優選例中，所述骨架材料的用量為50~70份。
[0021]在另一優選例中，所述填充劑的用量為200~250份。
[0022]本發明的第三方面是提供了一種西黃單層緩釋片的製備方法，包括按配方量將表面活性劑與乳香沒藥超臨界萃取物混合均勻，加入到攪拌狀態中的吸附固化劑中，攪拌至乳香沒藥超臨界萃取物全部被吸收，再依次加入骨架材料、填充劑、麝香粉末、牛黃粉末，等量遞增混勻，壓片即得。
[0023]本發明的第四方面是提供了一種西黃雙層緩釋片，它包括緩釋層A和緩釋層B，所述緩釋層A由下述重量比的成分製成:
[0024]上述西黃緩釋片活性組分中的乳香沒藥超臨界萃取物55~88份；
[0025]上述西黃緩釋片活性組分中的麝香粉末15份；
[0026]表面活性劑30~60份，所述表面活性劑選自Kolliphor HS、Kolliphor EL、Kolliphor TPGS、吐溫-80或二甲亞碸中的一種和多種；
[0027]吸附固化劑30~100份，所述吸附固化劑選自AEROPERLfc 300pharm、Aerosil?200pharma、二氧化娃或Kollidon CL-SF中的一種和多種；
[0028]骨架材料10~30份，所述骨架材料選自羥丙甲基纖維素、羥丙甲基纖維素與乙基纖維素1:1或2:1混合物或羥丙甲基纖維素與Kollidon SR3:1混合物中的一種和多種；
[0029]填充劑120~250份，所述填充劑選自微晶纖維素、乳糖、可壓性澱粉或速流甘露醇中的一種和多種；
[0030]所述緩釋層B由下述重量比的成分製成:
[0031]上述西黃緩釋片活性組分中的牛黃粉末15份；
[0032]骨架材料10~27份，所述骨架材料選自羥丙甲基纖維素、羥丙甲基纖維素與乙基纖維素1:1或2:1混合物或羥丙甲基纖維素與Kollidon SR3:1混合物中的一種和多種；
[0033]填充劑100~200份，所述填充劑選自微晶纖維素、乳糖、可壓性澱粉或速流甘露醇中的一種和多種。
[0034]在一優選例中，所述緩釋層A中的表面活性劑的用量為40~50份。
[0035]在另一優選例中，所述緩釋層A中的吸附固化劑的用量為58~80份。
[0036]在另一優選例中，所述緩釋層A中的骨架材料的用量為14~22份。
[0037]在另一優選例中，所述緩釋層A中的填充劑的用量為160~200份。
[0038]在另一優選例中，所述緩釋層B中的骨架材料的用量為15~23份。
[0039]在另一優選例中，所述緩釋層B中的填充劑的用量為140~160份。
[0040]本發明的第五方面是提供了一種西黃雙層緩釋片的製備方法，包括如下步驟:
[0041]步驟一，按配方量將表面活性劑與乳香沒藥的超臨界提取物混合均勻，加入到攪拌狀態中的吸附固化劑中，攪拌至乳香沒藥超臨界提取物全部被吸收，再依次加入骨架材料、填充劑、麝香粉末，等量遞增混勻；
[0042]步驟二，按配方量將牛黃粉末與骨架材料、填充劑等量遞增混勻；
[0043]步驟三，分別取兩層粉末，壓片，即得。
[0044] 本發明各個方面的細節將在隨後的章節中得以詳盡描述。通過下文以及權利要求的描述，本發明的特點、目的和優勢將更為明顯。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0045]圖1體現了本發明的西黃緩釋片活性組分對人肝癌細胞株SMMC-7721細胞生長抑制作用。
[0046]圖2體現了各實驗組外周血細胞數(Srfcs，n = 10),與CTX組相比*Ρ〈0.05，**Ρ〈0.01 ;與西黃丸組相比--〈.05 ；。
[0047]圖3為西黃單層緩釋片各活性成分體外累積釋放度曲線；體現了本發明的西黃單層緩釋片中的麝香酮、醋酸辛酯及膽酸的體外釋放情況；
[0048]圖4為西黃雙層緩釋片各活性成分體外累積釋放度曲線；體現了本發明的西黃雙層緩釋片中的麝香酮、醋酸辛酯及膽酸的體外釋放情況。
圖5為液固壓縮技術路線示意圖；體現了本發明中液態活性成分粉末化的技術方案。
【具體實施方式】
[0049]本發明人經過多年研究，開發出了一種中藥複方製劑西黃丸活性組分的提取工藝，在經該工藝提取獲得西黃緩釋片活性組分中加入特定比例的藥用輔料即可製得本發明的西黃單層或雙層緩釋片劑。
[0050]如本發明所 用，西黃丸是一種治療癰疽疔毒、瘰癧、流注、癌腫的中藥複方製劑，由下述重量配比的原料製成:
[0051]牛黃15份磨香15份
[0052]乳香(醋制)550份沒藥(醋制)550份
[0053]以上組成中，藥物的重量是以生藥計算的，每一份可以是Ig或1kg，如本領域的技術人員所知，以上組成是按重量作為配比的，在實際生產時可按照相應比例增大或減少，但各組成間的生藥材重量配比的比例不變。
[0054]具體而言，本發明的新工藝包括以下步驟:
[0055]步驟一，將上述配方量的乳香和沒藥分別低溫粉碎，過24目篩混合，將混合物裝入超臨界萃取罐中，在壓力35MPa，溫度45°C，萃取3h，提取收率在5%~8%之間，可製得乳香沒藥超臨界萃取物55~88份，備用；
[0056]步驟二，將牛黃粉碎成細粉，過60目篩，得牛黃粉末15份，備用；
[0057]步驟三，將麝香粉碎成細粉，過60目篩，得麝香粉末15份，備用。
[0058]上述活性組分進而可用於製備本發明的西黃單層和雙層緩釋片。
[0059]在用本發明新工藝提取的西黃活性組分中，乳香沒藥超臨界萃取物為油狀液體，且用量大，若要製備成片劑，就必須先將其固態化，方能保證西黃活性成分的完全釋放。故而本發明人採用了液固壓縮技術，將乳香沒藥超臨界萃取物溶解在表面活性劑中，通過藥物與表面活性劑的接觸，改善其潤溼性，增加藥物溶出的有效表面，提高藥物的溶出速率。同時選用吸附性極強的載體材料將其吸附固化，使液態的活性成分轉變成易於處理的粉末(見圖5)。
[0060]
[0061]進而，本發明提供了一種西黃單層緩釋片，它由下述重量比的成分製成:[0062]上述西黃緩釋片活性組分中的乳香沒藥超臨界萃取物55~88份；
[0063]上述西黃緩釋片活性組分中的牛黃粉末15份；
[0064]上述西黃緩釋片活性組分中的麝香粉末15份；
[0065]表面活性劑30~80份，所述表面活性劑選自Kolliphor HS、Kolliphor EL、Kolliphor TPGS、吐溫-80或二甲亞碸中的一種和多種；所述表面活性劑的優選用量為50~60份，優選使用Kolliphor HS ；
[0066]吸附固化劑30~100份，所述吸附固化劑選自AEROPERL* 300pharm、Aerosil妒200pharma、二氧化矽或Kollidon CL-SF中的一種和多種；所述吸附固化劑的優選用量為50 ~80 份，優選使用 AEROPERL+# 300pharm ；
[0067]骨架材料35~80份，所述骨架材料選自羥丙甲基纖維素、羥丙甲基纖維素與乙基纖維素1:1或2:1混合物或羥丙甲基纖維素與Kollidon SR3:1混合物中的一種和多種；所述骨架材料的優選用量為50~70份，優選使用羥丙甲基纖維素K4M ；
[0068]填充劑150~300份，所述填充劑選自微晶纖維素、乳糖、可壓性澱粉或速流甘露醇中的一種和多種，所述填充劑的優選用量為200~250份，優選使用微晶纖維素和乳糖。
[0069]本發明的 西黃單層緩釋片可用本領域的常規方法製得，即按上述配方量將表面活性劑與乳香沒藥超臨界萃取物混合均勻，加入到攪拌狀態中的吸附固化劑中，攪拌至乳香沒藥超臨界萃取物全部被吸收，再依次加入骨架材料、填充劑、麝香粉末、牛黃粉末，等量遞增混勻，壓片即得。
[0070]本發明還提供了一種西黃雙層緩釋片，它包括緩釋層A和緩釋層B，所述緩釋層A由下述重量比的成分製成:
[0071]上述西黃緩釋片活性組分中的乳香沒藥超臨界萃取物55~88份；
[0072]上述西黃緩釋片活性組分中的麝香粉末15份；
[0073]表面活性劑30~60份，所述表面活性劑選自Kolliphor HS、Kolliphor EL、Kolliphor TPGS、吐溫-80或二甲亞碸中的一種和多種；所述表面活性劑的優選用量為40~50份，優選使用Kolliphor HS ；
[0074]吸附固化劑30~100份，所述吸附固化劑選自AEROPERL? 300pharm、Aerosil?200pharma、二氧化矽或Kollidon CL-SF中的一種和多種；所述吸附固化劑的優選用量為58 ~80 份，優選使用 AEROPERL" 300pharm ；
[0075]骨架材料10~30份，所述骨架材料選自羥丙甲基纖維素、羥丙甲基纖維素與乙基纖維素1:1或2:1混合物或羥丙甲基纖維素與Kollidon SR3:1混合物中的一種和多種；所述骨架材料的優選用量為14~22份，優選使用羥丙甲基纖維素K4M ；
[0076]填充劑120~250份，所述填充劑選自微晶纖維素、乳糖、可壓性澱粉或速流甘露醇中的一種和多種；所述填充劑的優選用量為160~200份，優選使用微晶纖維素和乳糖；
[0077]所述緩釋層B由下述重量比的成分製成:
[0078]上述西黃緩釋片活性組分中的牛黃粉末15份；
[0079]骨架材料10~27份，所述骨架材料選自羥丙甲基纖維素、羥丙甲基纖維素與乙基纖維素1:1或2:1混合物或羥丙甲基纖維素與Kollidon SR3:1混合物中的一種和多種；所述骨架材料的優選用量為15~23份，優選使用羥丙甲基纖維素K4M與K15M4:1混合物；[0080]填充劑100~200份，所述填充劑選自微晶纖維素、乳糖、可壓性澱粉或速流甘露醇中的一種和多種；所述填充劑的優選用量為140~160份，優選使用微晶纖維素和乳糖。
[0081]本發明的西黃雙層緩釋片亦可用本領域的常規方法製備，其包括如下步驟:
[0082]步驟一，按配方量將表面活性劑與乳香沒藥的超臨界提取物混合均勻，加入到攪拌狀態中的吸附固化劑中，攪拌至乳香沒藥超臨界提取物全部被吸收，再依次加入骨架材料、填充劑、麝香粉末，等量遞增混勻；
[0083]步驟二，按配方量將牛黃粉末與骨架材料、填充劑等量遞增混勻；
[0084]步驟三，分別取兩層粉末，壓片，即得。
[0085]經本發明人研究證實:在本發明的單層緩釋片中，西黃丸處方中三種活性成分，即麝香中的麝香酮、牛黃中的膽酸以及乳香沒藥超臨界提取物中的醋酸辛酯等均得以緩慢釋放；而在本發明的雙層緩釋片的原料藥中，上述三種活性成分中的麝香酮、醋酸辛酯幾乎不溶，相對而言，牛黃中的膽酸溶解度稍大，根據活性成分溶解度的差異，選擇本發明的雙層緩釋片，亦可產生令上述三種活性成分在體外同步緩釋的效果。
[0086]由此可見，本發明的西黃緩釋片劑較之普通西黃丸劑，能有效控制處方中有效成分的釋放速率，提高了藥物釋放的規律性，從而達到穩定的血藥濃度，有利於藥物療效的充分發揮，從而延長和提高了療效。
[0087]下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件或按照製造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分數、比率、比例、或份數按重量計。
[0088]除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用於本發明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示範之用。
[0089]本發明提到的上述特徵，或實施例提到的特徵可以任意組合。本專利說明書所揭示的所有特徵可與任何組合物形式並用，說明書中所揭示的各個特徵，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特徵取代。因此除有特別說明，所揭示的特徵僅為均等或相似特徵的一般性例子。
[0090]實施例1西黃緩釋片活性組分A的製備
[0091]處方:牛黃15g麝香15g乳香(醋制)550g沒藥(醋制)550g
[0092]製備方法:將乳香和沒藥分別-20°C條件下低溫粉碎，過24目篩，按1:1混合均勻，放入超臨界萃取罐內，以壓力為35MPa，溫度為45 °C的條件下，萃取3h，提取物收率為5%，得乳香沒藥超臨界萃取物55份，備用；
[0093]將牛黃粉碎成細粉，過60目篩，得牛黃粉末15份，備用；
[0094]將麝香粉碎成細粉，過60目篩，得麝香粉末15份，備用。
[0095]實施例2西黃緩釋片活性組分B的製備
[0096]處方:牛黃15g麝香15g乳香(醋制)550g沒藥(醋制)550g [0097]製備方法:將乳香和沒藥分別-20°C條件下低溫粉碎，過24目篩，按1:1混合均勻，放入超臨界萃取罐內，以壓力為35MPa，溫度為45 °C的條件下，萃取3h，提取物收率為
5.8%，得乳香沒藥超臨界萃取物64份，備用；
[0098]將牛黃粉碎成細粉，過60目篩，得牛黃粉末15份，備用；[0099]將麝香粉碎成細粉，過60目篩，得麝香粉末15份，備用。
[0100]實施例3西黃緩釋片活性組分C的製備
[0101]處方:牛黃15g麝香15g乳香(醋制)550g沒藥(醋制)550g
[0102]製備方法:將乳香和沒藥分別-20°C條件下低溫粉碎，按1:1混合均勻，放入超臨界萃取罐內，以壓力為35MPa，溫度為45°C的條件下，萃取3h，提取物收率為6.4%，得乳香沒藥超臨界萃取物70份，備用；
[0103]將牛黃粉碎成細粉，過60目 篩，得牛黃粉末15份，備用；
[0104]將麝香粉碎成細粉，過60目篩，得麝香粉末15份，備用。
[0105]實施例4西黃緩釋片活性組分D的製備
[0106]處方:牛黃15g麝香15g乳香(醋制)550g沒藥(醋制)550g
[0107]製備方法:將乳香和沒藥分別-20°C條件下低溫粉碎，按1:1混合均勻，放入超臨界萃取罐內，以壓力為35MPa，溫度為45°C的條件下，萃取3h，提取物收率為7.3%，得乳香沒藥超臨界萃取物80份，備用；
[0108]將牛黃粉碎成細粉，過60目篩，得牛黃粉末15份，備用；
[0109]將麝香粉碎成細粉，過60目篩，得麝香粉末15份，備用。
[0110]實施例5西黃緩釋片活性組分E的製備
[0111]處方:牛黃15g麝香15g乳香(醋制)550g沒藥(醋制)550g
[0112]製備方法:將乳香和沒藥分別-20°C條件下低溫粉碎，過24目篩，按1:1混合均勻，放入超臨界萃取罐內，以壓力為35MPa，溫度為45 °C的條件下，萃取3h，提取物收率為8%，得乳香沒藥超臨界萃取物88份，備用；
[0113]將牛黃粉碎成細粉，過60目篩，得牛黃粉末15份，備用；
[0114]將麝香粉碎成細粉，過60目篩，得麝香粉末15份，備用。
[0115]實施例6在細胞水平上檢測本發明的西黃緩釋片活性組分A~E (按實施例1~5製備)對人原發性肝癌細胞株SMMC-7721和H22荷瘤小鼠腫瘤的生長抑制作用。
[0116]6.1在細胞水平上檢測西黃緩釋片活性組分對人原發性肝癌細胞株SMMC-7721的生長抑制作用
[0117]實驗材料:
[0118]人原發性肝癌細胞株SMMC-7721由上海中醫藥大學基礎醫學院提供。細胞於含10%胎牛血清(Gibco)的RPM1-1640 (Gibco)培養基中，在37°C、5%C02條件下培養。
[0119]Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒由碧雲天生物技術研究所提供；其他試劑:MTT及DMSO等均為Sigma公司產品。
[0120]實驗方法:
[0121]西黃緩釋片活性組分對人原發性肝癌細胞株SMMC-7721的細胞毒性通過MTT法測得。具體步驟如下:
[0122]1.樣品製備:取西黃緩釋片活性組分(按提取得率計算，相當於76mg生藥材)加200 μ L DMSO超聲20min，加預冷4°C的RPM1-1640培養液至4mL，浸泡24h後超聲20min，得到西黃緩釋片活性組分浸提液。實驗時用RPM1-1640培養液稀釋至所需濃度使用。同法設置西黃丸對照組。
[0123]2.取對數生長期的人原發性肝癌細胞株SMMC_7721，0.25%胰蛋白酶消化，用1640培養基稀釋成9 X 104/mL濃度的單細胞懸液，每孔100 μ L，接種到96孔板上，置37°C、5%C02飽和溼度的細胞培養箱中，培養12h。
[0124]3.待細胞貼壁後，空白對照組用等體積1640培養液代替受試藥物，藥物處理組分別加入不同濃度的西黃緩釋片活性組分浸提液、西黃丸浸提液，每個濃度設5復孔，每孔100 μ L。
[0125]4.將加藥細胞在37°C，5%C02細胞培養箱中保溫48h。
[0126]5.每孔中加入10 μ L5mg/ml MTT溶液，繼續在培養箱中保溫3~4h。
[0127]6.將細胞板於1000rpm離心15min，真空吸去培養液，加入150 μ L PBS洗滌後離心並小心地吸去溶液。
[0128]7.每孔加入150 μ I DMS0，置於搖床上以150rpm搖動15分鐘，使生成的甲簪晶體充分溶解。以570nm為測定波長，630nm為參比波長，測定吸光度值。
[0129]8.根據吸光度值計算西黃方活性組分浸提液、西黃丸對肝癌細胞株SMMC7721的生長抑制率。
[0130]腫瘤細胞生長抑制率(％)=[(對照組平均OD值-給藥組測定的平均OD值)/對照組平均OD值]X 100%。
[0131]9.以藥物濃度的對數值為橫坐標，細胞生長抑制率為縱坐標，繪製西黃方活性組分、西黃丸對細胞 增殖的抑制作用圖，用Graphpad prism5.0軟體計算IC5tl值。
[0132]實驗結果
[0133]西黃緩釋片活性組分對人肝癌細胞株SMMC-7721細胞生長抑制作用，見圖1。
[0134]由圖1可見，西黃丸、西黃緩釋片活性組分對人惡性腫瘤細胞株(SMMC-7721)增殖均有抑制作用，隨著藥物濃度的增加抑制率呈遞增趨勢。相對於西黃丸組來說，經提取精製後的西黃緩釋片活性組分對SMMC7721細胞的增殖表現出更強的抑制作用，在濃度為1.90mg.ml-1時抑制率有顯著差異(P < 0.05)，西黃緩釋片活性組分的IC5tl值為
1.890mg.ml-1,西黃丸的 IC50 值為 2.450mg.ml-1,小於西黃丸組(P < 0.05)。
[0135]6.2西黃緩釋片活性組分對Η22荷瘤小鼠腫瘤抑制作用
[0136]實驗材料:
[0137]腫瘤株:肝癌Η22細胞株由上海中醫藥大學基礎醫學院提供。
[0138]動物:昆明種小鼠，清潔級，體重18~22g，雌雄兼用，由中國科學院上海實驗動物中心提供，動物使用許可證(SYXK [滬]2003-0029)。
[0139]實驗方法:
[0140]1.取生長良好的腹水，臺盼蘭染色後計活細胞數，加入滅菌生理鹽水(約1:7稀釋)製備腫瘤細胞懸液(瘤細胞濃度約I X IO7個/ml)，0.15ml/只皮下注射接種於小鼠左前肢腋下製備實體瘤模型，0.2ml/只無菌條件下腹腔注射，製備腹水型模型。
[0141]2.接種24h後按體重後隨機分組，灌胃給藥，每天一次，觀察並記錄各組小鼠的體重變化情況和生存狀況。實體瘤模型小鼠連續用藥17d，第18d小鼠摘眼球取血放入肝素抗凝的試管中，血球分析儀測定血常規,計算血液中白細胞總數、紅細胞總數、淋巴細胞數和中性粒細胞數。脫頸椎處死小鼠，取瘤塊、脾臟及胸腺，稱重，按下式分別計算腫瘤抑制率、臟器指數。
[0142]抑瘤率(％)=(模型對照組瘤重-給藥組瘤重)/模型對照組瘤重X 100%[0143]胸腺(脾)指數(mg/10g) =胸腺(脾)重量/小鼠重量XlO
[0144]3.腹水瘤模型測定生存時間:觀察各組小鼠的生存時間，以60d為限，生存時間超過60d按60d計，計算小鼠生命延長率。
[0145]生命延長率生存期=(給藥組生存時間一荷瘤對照組生存時間)/荷瘤對照組生存時間X 100%O
[0146]實驗結果:
[0147]1.各組荷瘤小鼠體重及抑瘤率(結果見表1)
[0148]表1.各組荷瘤小鼠體重及抑瘤率的比較(i±s,n=W)
[0149]
【權利要求】
1.一種西黃緩釋片活性組分，其特徵在於，它由下述重量份數的原料經過下述步驟製得: 牛黃15份、磨香15份、乳香(醋制)550份、沒藥(醋制)550份； 步驟一，將乳香和沒藥分別低溫粉碎，過24目篩混合，將所得混合物裝入超臨界萃取罐中，在壓力35MPa，溫度45°C的條件下，萃取3h，，得乳香沒藥超臨界萃取物55~88份，備用； 步驟二，將牛黃粉碎成細粉，過60目篩，得牛黃粉末15份，備用； 步驟三，將麝香粉碎成細粉，過60目篩，得麝香粉末15份，備用。
2.一種西黃單層緩釋片，其特徵在於，它由下述重量比的成分製成: 如權利要求1所述的西黃緩釋片活性組分中的乳香沒藥超臨界萃取物55~88份； 如權利要求1所述的西黃緩釋片活性組分中的牛黃粉末15份； 如權利要求1所述的西黃緩釋片活性組分中的麝香粉末15份； 表面活性劑30~80份,所述表面活性劑選自Kolliphor HS>KoIliphor EL、KolIiphorTPGS、吐溫-80或二甲亞碸中的一種和多種； 吸附固化劑30~100份，所述吸附固化劑選自AEROPERL? 300pharm、Aerosil?200pharma、二氧化娃或 Kollidon CL-SF中的一種和多種； 骨架材料35~80份，所述骨架材料選自羥丙甲基纖維素、羥丙甲基纖維素與乙基纖維素1:1或2:1混合物或羥丙甲基纖維素與Kollidon SR3:1混合物中的一種和多種； 填充劑150~300份，所述填充劑選自微晶纖維素、乳糖、可壓性澱粉或速流甘露醇中的一種和多種。
3.如權利要求2所述的西黃單層緩釋片，其特徵在於，所述表面活性劑的用量為50~60份。
4.如權利要求2所述的西黃單層緩釋片，其特徵在於，所述吸附固化劑的用量為50~80份。
5.如權利要求2所述的西黃單層緩釋片，其特徵在於，所述骨架材料的用量為50~70份。
6.如權利要求2所述的西黃單層緩釋片，其特徵在於，所述填充劑的用量為200~250份。
7.如權利要求2所述的西黃單層緩釋片的製備方法，包括按配方量將表面活性劑與乳香沒藥超臨界萃取物混合均勻，加入到攪拌狀態中的吸附固化劑中，攪拌至乳香沒藥超臨界萃取物全部被吸收，再依次加入骨架材料、填充劑、麝香粉末、牛黃粉末，等量遞增混勻，壓片即得。
8.一種西黃雙層緩釋片，其特徵在於，它包括緩釋層A和緩釋層B，所述緩釋層A由下述重量比的成分製成: 如權利要求1所述的西黃緩釋片活性組分中的乳香沒藥超臨界萃取物55~88份； 如權利要求1所述的西黃緩釋片活性組分中的麝香粉末15份； 表面活性劑30~60份,所述表面活性劑選自Kolliphor HS>KoIliphor EL、KolIiphorTPGS、吐溫-80或二甲亞碸中的一種和多種；吸附固化劑30~100份，所述吸附固化劑選自AEROPERL* 300pharm、Aerosil?200pharma、二氧化娃或Kollidon CL-SF中的一種和多種； 骨架材料10~30份，所述骨架材料選自羥丙甲基纖維素、羥丙甲基纖維素與乙基纖維素1:1或2:1混合物或羥丙甲基纖維素與Kollidon SR3:1混合物中的一種和多種； 填充劑120~250份，所述填充劑選自微晶纖維素、乳糖、可壓性澱粉或速流甘露醇中的一種和多種； 所述緩釋層B由下述重量比的成分製成: 如權利要求1所述的西黃緩釋片活性組分中的牛黃粉末15份； 骨架材料10~27份，所述骨架材料選自羥丙甲基纖維素、羥丙甲基纖維素與乙基纖維素1:1或2:1混合物或羥丙甲基纖維素與Kollidon SR3:1混合物中的一種和多種； 填充劑100~200份，所述填充劑選自微晶纖維素、乳糖、可壓性澱粉或速流甘露醇中的一種和多種。
9.如權利要 求8所述的西黃雙層緩釋片，其特徵在於，所述緩釋層A中的表面活性劑的用量為40~50份。
10.如權利要求8所述的西黃雙層緩釋片，其特徵在於，所述緩釋層A中的吸附固化劑的用量為58~80份。
11.如權利要求8所述的西黃雙層緩釋片，其特徵在於，所述緩釋層A中的骨架材料的用量為14~22份。
12.如權利要求8所述的西黃雙層緩釋片，其特徵在於，所述緩釋層A中的填充劑的用量為160~200份。
13.如權利要求8所述的西黃雙層緩釋片，其特徵在於，所述緩釋層B中的骨架材料的用量為15~23份。
14.如權利要求8所述的西黃雙層緩釋片，其特徵在於，所述緩釋層B中的填充劑的用量為140~160份。
15.如權利要求8所述的西黃雙層緩釋片的製備方法，包括如下步驟: 步驟一，按配方量將表面活性劑與乳香沒藥的超臨界提取物混合均勻，加入到攪拌狀態中的吸附固化劑中，攪拌至乳香沒藥超臨界提取物全部被吸收，再依次加入骨架材料、填充劑、麝香粉末，等量遞增混勻； 步驟二，按配方量將牛黃粉末與骨架材料、填充劑等量遞增混勻； 步驟三，分別取兩層粉末，壓片，即得。
【文檔編號】A61P35/00GK103977054SQ201410121163
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年3月28日 優先權日:2014年3月28日
【發明者】馮年平, 王志, 葉貝妮, 趙繼會, 張永太, 劉穎, 朱春贇 申請人:上海中醫藥大學