流感疫苗的製作方法

2023-05-29 02:00:36

流感疫苗的製作方法
【專利摘要】本發明涉及用於針對流感疾病進行免疫的流感疫苗組合物和疫苗接種方案，具體而言它涉及包含來自第一流感病毒毒株的抗原或抗原製劑和水包油乳狀液佐劑的免疫原性組合物，其用於誘導針對至少一種第二流感病毒毒株的免疫應答，其中所述第二流感病毒毒株來自與所述第一流感病毒毒株不同的類型或不同的亞型。
【專利說明】流感疫苗

【技術領域】
[0001] 本發明涉及流感疫苗組合物和疫苗接種方案，其用於針對流感疾病進行免疫，尤 其是用於誘導針對不包括在疫苗組合物中的流感病毒毒株的交叉保護性免疫應答，並以持 續方式優選至少數月維持那些應答。
[0002] 發明背景 流感病毒是世界上存在的最普遍的病毒之一，同時影響人類和家畜。流感顯著導致經 濟負擔、發病及甚至死亡。存在三種類型的流感：甲型、乙型和丙型。
[0003] 流感病毒是有包膜病毒，主要由內部的核衣殼或與核蛋白結合的核糖核酸（RNA) 的核(其由具有脂質雙層結構的病毒包膜和外部的糖蛋白所包圍)組成。病毒包膜的內層主 要由基質蛋白質構成，並且外層主要為源自宿主的脂質物質。流感病毒含有兩類表面抗原， 糖蛋白神經氨酸酶（NA)及血細胞凝集素（HA)，其作為刺突出現在顆粒表面。正是這些表面 蛋白，特別是HA決定了流感亞型的抗原特異性。
[0004] 病毒毒株根據起源的宿主物種、地理位置和分離年份、序號進行分類，並且對於 甲型流感，通過HA和NA的亞型的血清學特性進行分類。甲型流感病毒的16種HA亞型 (H1-H16)和 9 種NA亞型（N1-N9)已經被鑑定[WebsterRG等人Evolutionandecology ofinfluenzaAviruses.Microbiol.Rev.1992; 56: 152-179;FouchierRA等人· CharacterizationofaNovelInfluenzaAVirusHemagglutininSubtype(H16) ObtainedfromBlack-HeadedGulls. 7；KiroA2005;79:2814-2822)。所有HA和NA亞 型的病毒均已從水禽中獲得，但是只有3種HA亞型（H1、H2和H3)以及2種NA亞型（NI和 N2)自1918年已在人群中建立了穩定系。只有1種HA亞型和1種NA亞型識別為乙型流感 病毒。
[0005] 甲型流感病毒進化並不斷經受抗原變異[WileyD,SkehelJ.Thestructure andthefunctionofthehemagglutininmembraneglycoproteinofinfluenzavirus. Aw.TfeK沿ocAe?. 1987;56:365-394]。缺乏通過病毒RNA聚合酶的有效校對導致高比 例的轉錄錯誤，這可導致表面糖蛋白中的胺基酸取代。這被稱為"抗原漂移"。分段的病毒 基因組允許第二種類型的抗原變異。如果兩種流感病毒同時感染宿主細胞，稱為"抗原轉 變"的基因重排列可能會產生具有新的表面或內部蛋白質的新型病毒。由抗原轉變產生的 流感病毒毒株，特別地，可能導致大流行病。
[0006] 疫苗接種在控制流感大流行病中扮演重要的角色。目前可用的流感疫苗為滅活 或減毒活流感疫苗。滅活流感疫苗由3種可能形式的抗原製劑構成：滅活完整病毒、其中 純化的病毒顆粒用去汙劑或其他試劑溶解脂質包膜進行破壞的亞病毒粒子(稱為"裂解"疫 苗）或純化的HA和NA(亞單位疫苗)。這些滅活疫苗通常肌內（i.m.)、皮下（s.c)或鼻內 (i.η·)給予。
[0007] 所有種類的用於大流行病間使用（interpandemicuse)的流感疫苗(也稱為季節 性的)，通常為三價疫苗。它們通常含有源自兩種甲型流感病毒毒株和一種乙型流感病毒毒 株的抗原。標準的0.5ml可注射劑量在大部分情況下含有各毒株(至少）15μg的HA，如 通過單向福射狀免疫擴散（SRD)所測量的（J.M.Wood等人：Animprovedsingleradial immunodiffusiontechniquefortheassayofinfluenzahaemagglutininantigen: adaptationforpotencydeterminationofinactivatedwholevirusandsubunit vaccines.J.Biol.Stand. 5 (1977) 237-247;J.M.Wood等人，International collaborativestudyofsingleradialdiffusionandImmunoelectrophoresis techniquesfortheassayofhaemagglutininantigenofinfluenzavirus.J.Biol. Stand. 9 (1981) 317-330)。通常，那些疫苗是未佐劑化的。
[0008] 近期已經開發了具有交叉保護效力的新疫苗，其可以被用做大流行前疫苗或儲 存疫苗來在宣告大流行病之前或宣告大流行病時引發免疫上未接種的人群以對抗大流 行毒株。此類疫苗與有效的佐劑一同配製以加強對亞病毒粒子抗原的免疫應答。例如， W02008/009309 或Leroux-Roels等人（PLosONE, 2008. 3(2): 1-5)公開了包含與大流 行病相關的流感抗原與包含水包油乳狀液的佐劑的組合的疫苗。特別地，觀察到接種含有 進化枝1的H5N1流感病毒毒株的含水包油佐劑化的免疫原性組合物產生了針對進化枝2 的H5N1流感病毒毒株的交叉反應性。另一研究已報導施用用水包油乳狀液佐劑化的大流 行疫苗，隨後施用下一季節性的三價疫苗（Gilca等人，Vaccine. 2011，30(1): 35-41)。
[0009] 另一研究已報導兩次劑量的用MF59佐劑化的H5N3流感疫苗在已引發的人群中 加強了對流感H5N1 的免疫（St印henson等人，Vaccine2003，21，1687-1693)。進 一步的研究已報導在三次劑量的特定水包油乳狀液佐劑化的流感H5N3疫苗後獲得了對 H5N1病毒的交叉反應性抗體應答（Stephenson等人，J.Infect.Diseases2005，191， 1210-1215)。
[0010] 然而，仍存在對這樣的疫苗組合物和疫苗接種策略的需求，所述疫苗組合物和疫 苗接種策略能夠提供更廣泛的交叉保護，特別是關於不同亞型的流感病毒的交叉保護，和 關於不同類型的流感病毒、可能多種不同毒株的交叉保護，以及隨時間持續的更廣泛的交 叉保護。
[0011] 發明概沭 在本發明的第一方面中，提供包含來自第一流感病毒毒株的抗原或抗原製劑和水包油 乳狀液佐劑的免疫原性組合物，其用於誘導針對來自與所述第一流感病毒毒株不同的類型 或不同的亞型的至少一種第二流感病毒毒株的免疫應答。
[0012] 在本發明第二方面中，提供包含來自至少一種流感病毒毒株的抗原或抗原製劑的 第二免疫原性組合物，其用於根據一次劑量方案在兒童主體中使用，所述兒童主體之前已 接種有包含來自至少一種流感病毒毒株的抗原或抗原製劑和水包油乳狀液佐劑的第一免 疫原性組合物。
[0013] 在第三方面中，提供包含來自第一流感病毒毒株的抗原或抗原製劑和水包油乳狀 液佐劑的免疫原性組合物，其用於治療或預防由第二流感病毒毒株引起的疾病，其中所述 第二流感病毒毒株來自與所述第一流感病毒毒株不同的亞型或不同的類型。
[0014] 在第四方面中，提供預防和/或治療流感疾病的方法，其中首先施用包含來自至 少一種流感病毒毒株的抗原或抗原製劑連同水包油乳狀液佐劑的第一免疫原性組合物，和 施用包含來自至少一種流感病毒毒株的抗原或抗原製劑的第二免疫原性組合物。
[0015] 附圖簡沭 圖1.在臨床前的引發-加強（prime-boost)疫苗接種的小鼠模型中的HlNl引發。 用Pandemrix?引發隨後為Fluarix?加強相比於一次施用Fluarix?產生了針對A/H3N2/ Victoria和B/Brisbane(和A/HINl/California)更高的HI滴度。參見實施例 3。N= 12隻小鼠/條件。GMT=幾何平均滴度。
[0016] 發明詳沭 本發明發明人已發現，相比於只接種第二免疫原性組合物的主體群體中所獲得的，接 種有含有來自第一流感病毒毒株的流感抗原連同水包油乳狀液佐劑的免疫原性組合物的 主體群體，展示出響應於用含有來自同樣流感病毒毒株的流感抗原的第二免疫原性組合物 接種的改進的免疫應答。此外，發明人發現，相比於只接種第二免疫原性組合物的主體群體 中所獲得的，這樣的在先的疫苗接種允許實現響應於用含有來自不同的亞型或不同的類型 的第二流感病毒毒株的流感抗原的第二次免疫原性組合物接種的改進的免疫應答。這顯示 出用水包油乳狀液佐劑佐劑化的流感製劑可以有利地用於誘導交叉反應性免疫應答，即針 對變體毒株或針對一定範圍的相關毒株的可檢測的免疫(體液的和/或細胞的)。它們也可 以有利地用於誘導交叉引發（cross-priming)策略，即誘導利於用同樣的流感病毒毒株和 /或不同毒株再次疫苗接種(一次劑量）時應答的"引發的（primed) "免疫記憶。
[0017] 特別地，本發明人驚訝地觀察到，在先接種含有甲型流感病毒毒株連同水包油乳 狀液佐劑的免疫原性組合物導致響應於接種含有乙型流感病毒毒株的免疫原性組合物的 改進的免疫應答，表明交叉引發策略不局限於密切相關的流感病毒毒株。
[0018] 因此，本發明的目標是提供預防和/或治療流感疾病的方法，其中合適地根據一 次劑量方案，含有來自至少一種流感病毒毒株的抗原或抗原製劑連同水包油乳狀液佐劑的 第一免疫原性組合物首先施用，並且合適地根據一次劑量方案，含有來自流感病毒毒株的 抗原或抗原製劑的第二免疫原性組合物隨後施用。在一個實施方案中，第一免疫原性組合 物的至少一種流感病毒毒株和第二免疫原性組合物的至少一種流感病毒毒株是不同的類 型或不同的亞型的。合適地第一免疫原性組合物在宣告大流行病時施用，並且第二免疫原 性組合物隨後施用。可選地，施用第一免疫原性組合物是大流行前策略的一部分，並在宣告 大流行病之前進行，作為引發策略，因此允許免疫系統被引發，隨後進行進一步的/加強的 免疫原性組合物的施用。通常，第二免疫原性組合物在第一免疫原性組合物之後至少4個 月，合適地在之後6或8至14個月，合適地在之後約10至12個月，例如12個月，或之後甚 至更長施用。合適地於一年後或甚至多於一年後施用第二免疫原性組合物，能夠加強抗體 和/或細胞免疫應答。這非常重要，因為進一步的感染可能發生於第一次大流行病爆發之 後數月。根據需要，第二免疫原性組合物的施用可能會多於一次，例如兩次。在一個實施方 案中，提供預防和/或治療流感疾病的方法，其中含有來自至少一種流感病毒毒株的抗原 或抗原製劑連同水包油乳狀液佐劑的第一免疫原性組合物首先施用，並且含有來自流感病 毒毒株的抗原或抗原製劑的第二免疫原性組合物在至少6個月後，例如一年之後施用。
[0019] 令人驚訝地，在僅一次劑量的第一免疫原性組合物和僅一次劑量的含有源自第二 流感病毒毒株的流感抗原的第二免疫原性組合物後，觀察到了當用含有來自第一流感病毒 毒株的流感抗原連同水包油乳狀液佐劑的第一免疫原性組合物首先接種主體群體時所達 到的改進的免疫應答。
[0020] 本發明人此外觀察到用於本發明的免疫原性組合物，不但可以誘導，還可以維持 針對不只存在於第一免疫原性組合物中的流感病毒毒株而且還針對不同類型或不同亞型 的流感病毒毒株的隨時間的顯著水平的免疫應答。因此，根據本發明使用的免疫原性組合 物，有能力確保針對由流感病毒毒株引起的流感疾病的持續的免疫應答，所述流感病毒毒 株為與包括在第一免疫原性組合物中的毒株（i)相同、（ii)不同的類型、或（iii)不同的 亞型。特別地，持續性意味著在接種疫苗後至少3個月後，合適地至少6個月後，更合適地 至少12個月後能達到規定標準的抗體應答。特別地，根據本發明使用的要求保護的組合物 能夠誘導在至少3個月後在>50%、合適地>60%的個體>70%的個體、合適地>80%的個體或 合適地>90%的個體中對疫苗中存在的流感病毒毒株的保護性水平的抗體，如同通過保護 率所測量的(見表1 )。在一個具體的方面中，至少接種疫苗6個月後對疫苗組合物的流感病 毒毒株獲得了 >90%的保護性水平的抗體。
[0021] 因此，本發明的另一個目標是提供流感免疫原性組合物，例如疫苗，和用於對流感 疾病進行免疫的疫苗接種方案，特別用於誘導針對不包括在免疫原性組合物中的流感病毒 毒株的交叉保護性免疫應答，並以持續的方式維持這些應答，合適地至少數月。
[0022] 流感病毒毒株和抗原 在一種實施方案中，根據本發明所使用的流感病毒或其抗原製劑可以為裂解的流感病 毒或其裂解的病毒抗原製劑。在可選的實施方案中，流感的製劑可能含有另一類型的滅活 的流感抗原，例如滅活的完整病毒或重組的和/或純化的HA和NA(亞單位疫苗)，或流感病 毒體（virisome)。在仍進一步的實施方案中，流感病毒可能為活減毒流感製劑。
[0023] 根據本發明使用的裂解流感病毒或其裂解病毒抗原製劑合適地為滅活病毒製劑， 其中病毒顆粒用去汙劑或其他試劑破壞以溶解脂質包膜。裂解病毒或其裂解病毒抗原制 劑合適地通過完整流感病毒(有傳染性的或滅活的）的片段化進行製備，其使用溶解濃度的 有機溶劑或去汙劑，並隨後去除所有的或大部分的溶解試劑和一些或大部分的病毒脂質物 質。其裂解病毒抗原製劑意味著這樣的裂解病毒製劑，其相比於裂解病毒可以經歷過一定 程度的純化，同時保留有裂解病毒組分的大部分的抗原特性。例如，當在蛋中產生時，可以 從裂解病毒中去除蛋汙染蛋白，或者當在細胞培養物中產生時，可以從裂解病毒中去除宿 主細胞汙染物。裂解病毒的抗原製劑可能含有多於一種病毒毒株的裂解病毒抗原組分。含 有裂解病毒的(稱為"流感裂解疫苗"）或裂解病毒抗原製劑的疫苗，通常含有殘留的基質蛋 白和核蛋白並有時含有脂質，以及膜包膜蛋白。這樣的裂解病毒疫苗通常將含有大部分或 全部的病毒結構蛋白質，雖然其不需要以如它們存在於完整病毒中的相同比例。
[0024] 可選地，流感病毒可能以完整病毒疫苗的形式。在大流行病情況下這可能會證明 相對於裂解病毒疫苗具有優勢，因為它避免了是否能成功地產生流感病毒的新毒株的裂解 病毒疫苗的不確定性。對於一些毒株，用於產生裂解病毒的常規去汙劑可以破壞病毒並使 其無法使用。除了用完整病毒方法的更高程度的確定性，還存在相比於裂解病毒更大的疫 苗生產能力，這是因為在製備合適的裂解疫苗所需要的額外的純化步驟過程中喪失了相當 數量的抗原。
[0025] 在另一個實施方案中，流感病毒的製備是以純化的亞單位流感疫苗的形式。亞單 位流感疫苗通常含有兩種主要的包膜蛋白，HA和NA，並且可能相對於完整病毒粒（virion) 疫苗具有額外的優勢，因為它們通常為較低反應原性的，特別是在年輕的疫苗接種者中。亞 單位疫苗可以通過重組或從破壞的病毒顆粒中純化進行生產。
[0026] 在另一個實施方案中，流感病毒製劑是以病毒體的形式。病毒體是球形的單層脂 質體（unilamellarvesicle),其保持有以真實的構象的有功能的病毒包膜糖蛋白HA和 NA，所述糖蛋白插入於病毒體的磷脂雙層膜中。
[0027] 所述流感病毒或其抗原製劑可以是源自蛋或源自細胞培養物。它們也可以在其他 系統如昆蟲細胞、植物、酵母或細菌中生產和/或通過重組生產。
[0028] 例如，根據本發明的流感病毒抗原或其抗原製劑可以來源於常規的胚胎蛋方法 (embryonatedeggmethod),通過在蛋中生長流感病毒並純化收集的尿囊液。蛋可以在短 的通知時間內大量積累。可選地，它們可以來源於使用組織培養來生長病毒或表達重組流 感病毒表面抗體的任何新的產生方法。合適的用於病毒生長的細胞基底（cellsubstrate) 包括例如狗腎細胞如MDCK或來自MDCK克隆的細胞、MDCK樣細胞、猴腎細胞如AGMK細胞包 括Vero細胞、合適的豬細胞系，或任何其他適用於生產疫苗目的的流感病毒的哺乳動物細 胞類型。合適的細胞基底也包括人細胞如MRC-5或Per-C6細胞。合適的細胞基底不限於 細胞系；例如原代細胞如雞胚胎成纖維細胞和禽細胞系，例如EB66細胞，同樣包含在內。
[0029] 流感病毒抗原或其抗原製劑可以由大量商業可應用方法的任一種進行生產，例如 專利號DD300 833和DD211 444中所描述的裂解流感方法，其通過引用併入本文。傳 統的裂解流感使用溶劑/去汙劑處理來生產，如三-正丁基磷酸酯，或乙醚與Tween?組合 (稱為"Tween-ether〃裂解)，並且該方法仍在一些生產設備中使用。其他目前使用的裂解 試劑包括去汙劑或蛋白質水解酶或膽汁鹽，例如專利號DD155 875描述的脫氧膽酸鈉，其 通過引用併入本文。可以被用作裂解試劑的去汙劑包括陽離子去汙劑，例如十六烷基三甲 基溴化銨（CTAB)，其他離子去汙劑，例如十二烷基硫酸鹽、牛磺脫氧膽酸鹽，或非離子去汙 劑例如上文描述的那些包括TritonX-100 (例如在Lina等人，2000，Biologicals28， 95-103中描述的方法）和TritonN-101，或任何兩種或更多種去汙劑的組合。
[0030] 裂解疫苗的製備方法可能包括多個不同的過濾和/或其他分離步驟諸如以多種 組合的超速離心、超濾、區帶離心和層析(例如離子交換）步驟，以及任選滅活步驟例如熱、 甲醛或β-丙內酯或U.V.，其可以在裂解之前或之後進行。裂解方法可以以分批、連續或 半連續方法進行。合適的用於裂解免疫原性組合物的裂解和純化方法描述於WO02/097072 中。
[0031] 根據本發明的合適的裂解流感疫苗抗原製劑包含生產方法中留下的殘餘量的 Tween80和/或TritonΧ-100,雖然這些在製備裂解抗原後可能被加入或調節其濃度。這 些非離子表面活性劑在疫苗劑量中的終濃度的合適範圍為： Tween80 :0· 01至1%，合適地約0· 1% (v/v) TritonX-100 :0· 001 至 0·I(%w/v)，合適地 0· 005 至 0· 02% (w/v)。
[0032] 在一個具體的實施方案中，Tween80的終濃度範圍為0· 045%-0· 09%w/v。在 另一具體的實施方案中，提供抗原為兩倍濃縮的混合物，其具有Tween80濃度範圍為 0. 045%-0. 2% (w/v)，並需要根據含佐劑(或對照製劑的緩衝液）的最終製劑稀釋兩次。
[0033] 在另一具體的實施方案中，TritonX-100的終濃度範圍為0· 005%-0· 017%w/v。在 另一具體的實施方案中，提供抗原為兩倍濃縮的混合物，其具有TritonX-100濃度範圍為 0. 005%-0. 034% (w/v)，並需要根據含佐劑(或對照製劑的緩衝液）的最終製劑稀釋兩次。 [0034] 在一個實施方案中，根據本發明的流感製劑是在低水平的防腐劑特別是硫柳汞的 存在下，或者合適地在不存在硫柳汞的情況下製備。
[0035] 如之前所描述的，流感病毒可以分為3個類型：甲型、乙型和丙型。因此，在本發明 的意義中，術語"流感類型"應理解為甲型、乙型或丙型。
[0036] 基於其HA(16種亞型，Hl至H16)和NA蛋白（9種亞型，Nl至N9)，甲型流感病毒 可以進一步分類為不同的亞型，而乙型流感病毒已知僅由一種HA和一種NA亞型構成。因 此，在本發明的意義中，術語"流感亞型"應理解為具有給定H亞型和給定N亞型的甲型流 感病毒毒株，並且術語"不同亞型"指的是不具有相同H亞型和/或相同N亞型的流感病毒 毒株。
[0037] 在一個實施方案中，根據本發明使用的免疫原性組合物含有來自第一流感病毒毒 株的抗原或抗原製劑，並用於誘導針對至少一種具有不同於第一流感病毒毒株的H(HA亞 型）的H(HA)亞型的第二流感病毒毒株的免疫應答。
[0038] 在一個具體的實施方案中，根據本發明使用的免疫原性組合物含有來自第一流感 病毒毒株的抗原或抗原製劑，並用於誘導針對至少一種具有相同N(NA)亞型但具有與第一 流感病毒毒株的H(HA亞型）不同的H(HA)亞型的第二流感病毒毒株的免疫應答。
[0039] 如上文所述，甲型流感病毒不斷地進化並經歷抗原變異。缺乏通過病毒RNA聚合 酶進行的有效的校正，會引起高比例的轉錄錯誤，其可以導致表面糖蛋白例如HA和NA蛋白 中的胺基酸取代。這被稱為"抗原漂移"。分段的病毒基因組允許第二類型的抗原變異。如 果兩種流感病毒同時感染宿主細胞，稱為"抗原轉變"的基因重排列可能產生具有新的表面 或內部蛋白的新型病毒。這些抗原改變"漂移"和"轉變"都是不可預測的，並且從免疫學 觀點的角度上可能具有重大影響，因為它們最終導致新的流感病毒毒株的出現，並且其使 得病毒逃脫免疫系統，導致熟知的、幾乎每年的流行病。這兩種基因改變已產生導致人中的 大流行病的新的病毒變體。
[0040] 因此，在本發明的意義中，術語"變體毒株"應理解為不相同的，但對於參考毒株經 歷抗原漂移或抗原轉變的毒株。
[0041] 本發明中使用的含有水包油乳狀液佐劑的免疫原性組合物可能含有來自任何類 型（甲型、乙型、丙型)和任何亞型（Hl至H16及Nl至N9)的流感病毒的流感抗原。合適地， 待包含於根據本發明使用的免疫原性組合物中的流感病毒來自大流行毒株。大流行毒株意 指是絕大部分人群對其沒有免疫力的新型流感病毒。在遍及本文中，將把大流行毒株指作 與流感疾病的爆發相關或易於與其相關的流感病毒毒株，例如大流行甲型流感病毒毒株。 合適的大流行毒株為但不限於：冊附、!19吧、!17階、!12吧、!17附和！1謂1。人中其他合適的大 流行毒株為H7N3 (兩例報告於加拿大)，H10N7 (兩例報告於埃及）和H5N2 (-例報告於日 本)。或者，待包含於根據本發明使用的含有水包油乳狀液佐劑的免疫原性組合物中的流感 病毒可以來自經典毒株，即非大流行毒株。
[0042] 在一個實施方案中，根據本發明使用的免疫原性組合物含有甲型流感病毒，例如 Hl例如H1N1、H2、H5例如H5N1、H7或H9,並且用於誘導針對至少一種不同亞型的流感病毒 (例如H3)的免疫應答。在可選的實施方案中，根據本發明使用的免疫原性組合物含有甲型 流感病毒，例如Hl例如H1N1、H2、H5例如H5N1、H7或H9,並且用於誘導針對至少一種乙 型流感病毒的免疫應答。
[0043]在一個實施方案中，根據本發明使用的免疫原性水包油乳狀液佐劑化的組合物是 單價的，即只含有一種流感病毒毒株。在一個具體的實施方案中，根據本發明使用的單價免 疫原性水包油乳狀液佐劑化的組合物含有大流行流感病毒毒株或具有與大流行病相關的 潛力的毒株。在可選的實施方案中，根據本發明使用的免疫原性水包油乳狀液佐劑化的組 合物是多價的，即含有多種流感病毒毒株。例如，組合物合適地為二價的、三價的或四價的。 [0044] 在一個實施方案中，根據本發明使用的免疫原性水包油乳狀液佐劑化的組合物用 於誘導針對多種流感病毒毒株的免疫應答，任選地包括來自不同於免疫原性水包油乳狀液 佐劑化的組合物中所包含的流感病毒毒株的亞型或類型的多種毒株。
[0045] 在一個具體的實施方案中，根據本發明使用的免疫原性水包油乳狀液佐劑化的組 合物用於誘導針對以下的一種、兩種、三種或全部的免疫應答：A/H1N1毒株、A/H3N2毒株、Yagamata系的乙型毒株和Victoria系的乙型毒株。
[0046] 在一個實施方案中，根據本發明使用的流感病毒或抗原製劑和水包油乳狀液佐劑 包含於同一容器中。它被稱為"一瓶法（onevialapproach)"。在另一個實施方案中，根 據本發明使用的流感病毒或抗原製劑和水包油乳狀液佐劑是兩組分疫苗，即抗原製劑和佐 劑存在於不同容器中，在向主體施用前進行混合。
[0047] ^<包油乳狀液佐劑 本發明的佐劑組合物含有水包油乳狀液佐劑，合適地所述乳狀液含有以總體積的 0. 5%-20%的量的可代謝油，並且具有其中以強度（intensity)計至少70%為直徑小於1 μm的油微滴。
[0048] 術語可代謝油的含義在本領域內熟知。可代謝可以定義為"能夠通過新陳代謝 來轉化，'（DorlancTsIllustratedMedicalDictionary,ff.B.SandersCompany,第 25版（1974))。油可以是任何植物油、魚油、動物油或合成油，其對受體不具有毒性且 可以通過新陳代謝轉化。堅果、種子和穀物是植物油的常見來源。合成油也是本發明的 一部分，並可以包括可商購油例如ΝΕ0ΒΕΕ?及其他。特別合適的可代謝油是鯊烯。鯊烯 (2, 6, 10, 15, 19, 23-六甲基-2, 6, 10, 14, 18, 22-二十四碳六烯）是大量存在於鯊魚肝油中 且少量存在於橄欖油、麥胚芽油、米糠油和酵母中的不飽和油，並且是用於本發明中的特別 合適的油。鯊烯作為可代謝油是由於其是生物合成膽固醇的中間體（Merckindex，第10 版，登錄號8619)。
[0049] 水包油乳狀液本身在本領域中是熟知的，並且已被暗示可用為佐劑組合物（EP 399843;WO95/17210)〇
[0050] 合適的可代謝油以免疫原性組合物總體積的0. 5%-20% (終濃度）的量存在，合適 地以總體積的1. 〇%-1〇%的量，合適地以總體積的2. 0%-6. 0%的量。
[0051] 在一個具體的實施方案中，可代謝油以免疫原性組合物總體積的約0. 5%、1%、3. 5% 或5%的最終量存在。在另一個具體的實施方案中，可代謝油以免疫原性複合物總體積的 0. 5%、1%、3. 57%或5%的最終量存在。鯊烯合適的量為每疫苗劑量約10. 7mg，合適地為每 疫苗劑量10. 4至11.0mg。
[0052] 合適地，本發明的水包油乳狀液系統具有在亞微米範圍的小的油微滴大小。合適 地，微滴直徑大小範圍將是120至750nm，合適地大小為120至600nm。通常，水包油乳 狀液含有其中以強度計至少70%為直徑小於500nm的油微滴，尤其是以強度計至少80%為 直徑小於300nm，合適地以強度計至少90%的直徑範圍在120至200nm。
[0053] 根據本發明的油微滴的大小，即直徑，以強度給出。存在幾種通過強度來測定油微 滴大小的直徑的方法。強度使用定徑（sizing)儀器，合適地通過動態光散射例如Malvern Zetasizer4000或合適地為MalvernZetasizer3000HS進行測量。詳細的程序在實施例 II. 2中給出。第一種可能性是通過動態光散射（PCS-光子相關光譜法）測定z平均直徑 ZAD;該方法額外給出多分散指數（PDI)，且ZAD和PDI均用累積量算法計算。這些值不需要 知道粒子折射率。第二種方式是通過另一種算法Contin、或NNLS、或自動的"Malvern"算 法(為定徑儀器提供的預設算法)經測定整體粒子大小分布來計算油微滴的直徑。大多數情 況下，由於複雜組合物的粒子折射率是未知的，只有強度分布被考慮在內，並且如需要，為 源自該分布的強度平均值。
[0054] 根據本發明的水包油乳狀液可以含有固醇或生育酚，例如α生育酚。固醇在本領 域內熟知，例如膽固醇是熟知的，並公開於例如MerckIndex,第11版，第341頁中，其作 為發現於動物脂肪中的天然存在的固醇。其他合適的固醇包括β_谷固醇、豆固醇、麥角固 醇和麥角鈣化醇。所述固醇合適地以免疫原性組合物總體積的〇. 01%_20% (w/v)的量存 在，合適地以0.1%至5% (w/v)的量。合適地，當固醇為膽固醇時，它以免疫原性組合物總 體積的0.02%至0.2% (w/v)的量存在，通常以在0.5ml疫苗劑量體積中0.02% (w/v)的 量，或在0. 5ml疫苗劑量體積中0. 07% (w/v)或在0. 7ml疫苗劑量體積中0. 1% (w/v)。
[0055] 合適地，存在α-生育酚或其衍生物例如α-生育酚琥珀酸酯。合適地，α-生育 酚以免疫原性組合物總體積的〇. 2%至5. 0%(ν/ν)的量存在，合適地以在0. 5ml疫苗劑量體 積中2. 5% (v/v)的量，或在0· 5ml疫苗劑量體積中0· 5% (v/v)或在0· 7ml疫苗劑量體 積中1. 7-1. 9% (v/v)，合適地為1. 8%。在此說明，以v/v給出的濃度可以通過應用以下轉 換因子轉換為以w/v計的濃度：5% (v/v)的α-生育酚濃度等於4. 8% (w/v)α-生育酚濃 度。α-生育酚的合適量為每疫苗劑量約11. 9mg，合適地每疫苗劑量11. 6至12. 2mg。
[0056] 水包油乳狀液可以包含乳化劑。乳化劑可以以免疫原性組合物的0. 01重量％至 5. 0重量％ (w/w)的量存在，合適地以0. 1重量％至2. 0重量％ (w/w)的量存在。合適的 濃度為總組合物的〇. 5重量％至1. 5重量％(w/w)。
[0057] 乳化劑可以合適地為聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯（Tween80)。在一個具體的實 施方案中，0.5ml疫苗劑量體積含有1% (w/w)Tween80,並且0.7ml疫苗劑量體積含有 0· 7% (w/w)Tween80。在另一個具體的實施方案中，Tween80濃度為0· 2% (w/w)。聚山 梨醇酯80的合適量為每疫苗劑量約4. 9mg，合適地每疫苗劑量4. 6至5. 2mg。
[0058] 合適地,疫苗劑量包含以每疫苗劑量約11. 9mg的量的α-生育酚、以每疫苗劑量 10. 7mg的量的鯊烯、和以每疫苗劑量約4. 9mg的量的聚山梨醇酯80。
[0059] 水包油乳狀液佐劑可以與其他佐劑或免疫促進劑一同使用，並且因此本發明的一 個重要實施方案是含有鯊烯或另一種可代謝油、生育酚例如α-生育酚、及Tween80的水 包油製劑。水包油乳狀液還可以含有span85和/或Lecithin。通常,水包油會含有免疫 原性組合物總體積2至10%的鯊烯、2至10%的α-生育酚和0.3至3%的Tween80， 並可以根據WO95/17210描述的程序生產。合適地，鯊烯：α-生育酚的比例等於或小於1， 因為這提供更穩定的乳狀液。Span85(聚氧乙烯山梨糖醇酐三油酸酯）也可以存在，例如 以1%的水平。用於本發明的水包油乳狀液佐劑的合適實例在EP0399843B中給出並詳述， 也稱為MF59。
[0060] 麟 待用本發明的免疫原性組合物接種的目標人群是全部人群，例如健康的青年人(例如 18-60歲）、老年人(通常為大於60歲）或嬰兒/兒童。目標人群可以具體是無免疫應答的。 相比於健康的成年人，無免疫應答的人通常較少能充分對抗原，特別是流感抗原應答。
[0061] 在根據本發明的一方面，目標人群是未接種的（na'ive)(例如相對於大流行毒株） 或對先前對流感感染或疫苗接種不能應答的未針對流感引發的人群。合適地，目標人群是 老年人，合適地年齡至少60歲或65歲或以上，更年輕的高危成年人（即年齡18至60歲之 間）例如在醫療機構工作的人，或具有風險因素例如心血管和肺部疾病、或糖尿病的年輕 人。另一目標人群是所有6個月或以上年齡的兒童，所述兒童經歷相對高的流感相關的住 院率。特別地，本發明適合於處於年齡6個月至3歲，或年齡3歲至8歲，例如年齡4歲至 8歲，或年齡9歲至17歲的兒童中的兒童使用。因此，在本發明一個實施方案中，提供包含 來自第一流感病毒毒株的抗原或抗原製劑和水包油乳狀液佐劑的免疫原性組合物，其用於 在年齡6個月至3歲、或年齡4歲至8歲、或年齡9歲至17歲的主體中，誘導針對至少一種 第二流感病毒毒株的免疫應答，所述第二流感病毒毒株為不同於第一流感病毒毒株的類型 或亞型。在一個具體的實施方案中，提供包含來自第一流感病毒毒株的抗原或抗原製劑和 水包油乳狀液佐劑的免疫原性組合物，其用於在年齡> 3歲的的主體中，誘導針對至少一 種第二流感病毒毒株的免疫應答，所述第二流感病毒毒株是不同於第一流感病毒毒株的類 型或亞型。 再接種和用於再接種的組合物 本發明的一方面提供了用於為先前接種過用水包油乳狀液佐劑配製的流感免疫原性 組合物的人再接種的流感免疫原性組合物，以及預防和/或治療流感疾病的方法，其中含 有來自至少一種流感病毒毒株的抗原或抗原製劑連同水包油乳狀液佐劑的第一免疫原性 組合物首先施用，並且隨後施用含有來自至少一種流感病毒毒株的抗原或抗原製劑的第二 免疫原性組合物。在本發明的意義中，術語"施用第二免疫原性組合物"和"再接種"被視 為同義詞，並會以可互換的方式使用。
[0063]通常，再接種在第一次接種後至少6個月進行，合適地在之後8至14個月，合適地 在之後約10至12個月。
[0064]再接種的免疫原性組合物可以含有任何類型的抗原製劑，或者為滅活的、重組的 或活減毒的。它可以含有如用於第一次接種的免疫原性組合物的相同類型的抗原製劑，即 裂解流感病毒或其裂解流感病毒抗原製劑、完整病毒粒（virion)、純化的HA和NA(亞單位） 疫苗或病毒體（virosome)。可選地，第二組合物可以含有不同於第一次接種使用的另一類 型流感抗原，即裂解流感病毒或其裂解流感病毒抗原製劑、完整病毒粒、純化的HA和NA(亞 單位）疫苗或病毒體。合適地，使用裂解病毒或完整病毒粒疫苗。
[0065]第二免疫原性組合物可以是佐劑化的或未佐劑化的。在一個實施方案中，第二免 疫原性組合物是未佐劑化的，並且是含有三種從WHO建議的適當流感季節的毒株製備的滅 活裂解病毒粒抗原的經典流感疫苗，例如肌內給予的Fluarix? /a-Rix?/Influsplit?。 [0066]在另一個實施方案中，第二免疫原性組合物是佐劑化的，例如用任何上文所述佐 劑佐劑化，例如水包油佐劑。合適地，第二免疫原性組合物含有水包油乳狀液佐劑，特別是 含有可代謝油、任選固醇或生育酚例如α-生育酚、以及乳化劑的水包油乳狀液佐劑。特別 地,所述水包油乳狀液佐劑含有以總體積的0. 5%-20%的量的至少一種可代謝油，並且具有 其中以強度計至少70%為直徑小於1μπι的油微滴。可選地，第二免疫原性組合物含有明 礬佐劑，或者為氫氧化鋁或磷酸鋁或兩者混合物。
[0067] 在一個實施方案中，第一次接種由如先前所述的大流行性流感組合物進行，合適 地為裂解流感組合物，並且再接種如下進行。
[0068] 在根據本發明的一個實施方案中，第二免疫原性組合物是含有流感病毒毒株的單 價流感組合物，所述流感病毒毒株與大流行病相關或具有與大流行病相關的潛力。合適的 毒株為但不局限於：冊附、！19吧、！17階、！12吧、！17附和！1謂1。所述毒株可以與用於第一次 接種的組合物中存在的毒株或其中之一相同。在可選的實施方案中，所述毒株可能是變體 毒株，即用於第一次接種的組合物中存在的毒株的漂移毒株（driftedstrain)或轉變毒株 (shiftedstrain)〇
[0069] 在另一個具體的實施方案中，用於再接種的第二免疫原性組合物是多價流感疫 苗。特別地，當加強組合物是多價疫苗例如二價、三價或四價疫苗時，至少一種毒株與大流 行病相關或具有與大流行病相關的潛力。在一個具體的實施方案中，在第二免疫原性組合 物中的兩個或多個毒株均為大流行毒株。在另一個具體的實施方案中，在第二免疫原性組 合物中的至少一種大流行毒株是與用於第一次接種的組合物中存在的毒株或其中之一相 同類型的。在一個可選的實施方案中，至少一種毒株可以是變體毒株，即第一次接種使用的 組合物中存在的至少一種大流行毒株的漂移毒株或轉變毒株。
[0070] 合適地，第二免疫原性組合物當使用時在下一次流感季節給予，例如在第一免疫 原性組合物後約一年。第二免疫原性組合物也可以在隨後的每一年給予(第三、第四、第五 次接種等)。第二免疫原性組合物可以與第一次接種使用的組合物相同。合適地，第二免疫 原性組合物含有這樣的流感病毒或其抗原製劑，其是第一次接種使用的流感病毒的變體毒 株。特別地，流感病毒毒株或抗原製劑根據世界衛生組織發布的參考材料進行選擇，使得它 們適合於在再接種年份流行的流感病毒毒株。合適地，第一次接種在大流行宣告時進行，且 再接種於之後進行。合適地，再接種用含有流感病毒毒株(例如H5N1Vietnam)的疫苗進行， 其是與第一次接種使用的相同的亞型(例如H5N1Vietnam)。在一個具體的實施方案中，再 接種使用相同亞型的漂移毒株，例如H5N1Indonesia進行。在另一個實施方案中，再接種 使用的所述流感病毒毒株是轉變毒株，即不同於第一次接種使用的毒株，例如它具有不同 的HA或NA亞型，例如H5N2 (與H5N1相同的HA亞型，但NA亞型不同）或H7N1 (與H5N1 不同的HA亞型但NA亞型相同）。
[0071] 合適地，相比於用未佐劑化的流感病毒或其抗原製劑第一次接種之後誘導的等 同應答，再接種誘導以下任一種、合適地兩種或全部：（i)對流感病毒或其抗原製劑改進的 CD4應答，或（ii)提升的B細胞記憶應答或（iii)改進的體液應答。合適地，如本文定義的 用佐劑化的流感病毒或其抗原製劑的再接種後所誘導的免疫應答，高於用未佐劑化的組合 物的再接種後誘導的相應的應答。合適地，用未佐劑化的(合適地為裂解的）流感病毒的再 接種後誘導的免疫應答，在用佐劑化的(合適地為裂解的）流感組合物第一次接種的人群中 高於在用未佐劑化的(合適地為裂解的）流感組合物的第一次接種的人群的相應的應答。
[0072] 本發明的佐劑化的組合物相比於由對照疫苗所賦予的保護，將能夠誘導針對漂移 毒株(來自下一個流感季節的流感病毒毒株)更好的交叉應答性。所述交叉應答性相比於用 未佐劑化的製劑獲得的顯示出更高的持續性。佐劑增強針對漂移毒株的交叉應答性的作用 在大流行病情形下是重要的。
[0073] 在進一步的實施方案中，本發明涉及疫苗接種方案，其中第一次疫苗接種用流感 組合物、合適地為裂解流感組合物進行，其含有可能潛在地導致大流行病的流感病毒毒株， 並且再接種用單價或多價的組合物進行，所述組合物含有至少一種正在流行的毒株，或者 為大流行毒株或經典毒株，可能地為不同於第一次疫苗接種使用的毒株的亞型或類型的毒 株。
[0074]疫苗接種方法 本發明的組合物可以通過任何合適的遞送途徑進行施用，例如皮內、黏膜例如鼻內、口 月艮、肌內、或皮下。其他遞送途徑在本領域內熟知。
[0075] 肌內遞送途徑特別合適用於佐劑化的流感組合物。根據本發明組合物可能存在 於單一劑量容器中，或可選地，存在於多劑量容器中，特別適合於大流行性疫苗。在此情 況下，可能存在抗微生物防腐劑例如硫柳汞以在使用過程中預防汙染。硫柳汞合適地以 5μg/0. 5ml劑量（即 10μg/ml)或 10μg/0. 5ml劑量（即 20μg/ml)的濃度存 在。合適的IM遞送設備可能被使用，例如無針液體快速注射設備，例如Biojector2000 (Bioject,Portland, 0R)。可選地，筆式注射器設備，例如用於家用遞送腎上腺素的設備， 可以用於允許疫苗的自助施用。此類遞送設備的使用可能特別適用於例如在大流行病期間 會需要的大規模的免疫活動。
[0076] 皮內遞送是另一種合適的途徑。任何合適的設備可能用於皮內遞送，例如短針設 備。此類設備在本領域內熟知。皮內疫苗也可以通過限制針頭進入皮膚的有效穿透長度的 設備施用，例如在W099/34850和EP1092444中描述的那些，其通過引用併入本文，及其功 能等同方案。同樣合適的是這樣的快速注射設備，其通過液體快速注射器或通過針頭(其刺 穿角質層並產生到達真皮的射流)來遞送液體疫苗到真皮。同樣合適的是彈道粉末/顆粒遞 送設備（ballisticpowder/particledeliverydevice),其使用壓縮氣體加速粉末形式 的疫苗經皮膚外層到達真皮。此外，常規的注射器可以用於皮內施用的經典芒圖（mantoux) 方法。
[0077] 另一種合適的施用途徑是皮下途徑。任何合適設備可以用於皮下遞送，例如經典 的針。合適地，無針快速注射器裝置可以使用。此類設備在本領域中熟知。合適地，所述設 備預填充有液體疫苗製劑。
[0078] 可選地，鼻內施用疫苗。通常，疫苗局部施用於鼻咽區域，合適地不被吸入肺中。期 望使用遞送疫苗製劑至鼻咽區域而不會或基本上不會進入肺中的鼻內遞送設備。
[0079] 根據本發明的疫苗的合適的鼻內施用設備是噴霧設備。合適的可商購的鼻腔噴霧 設備包括Accuspray?(BectonDickinson)。噴霧器產生極細的噴霧，所述噴霧能容易地 吸入肺部並因此不能有效到達鼻黏膜。因此噴霧器不是優選的。
[0080] 合適的用於鼻內使用的噴霧設備是設備性能不取決於由使用者施加的壓力的設 備。這些設備被稱為壓力閥值設備。只有當施加閥值壓力時液體才會從噴嘴釋放。這些設 備能夠更容易實現微滴大小規則的噴霧。本發明合適使用的壓力閥值設備是本領域內已知 的，並在例如WO91/13281和EP311 863B和EP516 636中描述，其通過引用併入本 文。此類設備可從PfeifferGmbH商購，並同樣在Bommer,R.PharmaceuticalTechnology Europe, 1999年9月中被描述。
[0081] 合適的鼻內設備產生範圍在1至200μm，合適地為10至120μm的微滴(使用水作 為液體測量)。低於10μm會有吸入的風險，因此期望具有不多於約5%的微滴低於10μm。 大於120μm的微滴不能像較小的微滴一樣擴散，因此期望具有不多於約5%的微滴超過 120μm〇
[0082] 可選地，表皮或經皮的疫苗接種途徑也考慮在本發明中。
[0083] 在本發明的一個方面中，用於第一次接種的佐劑化的免疫原性組合物可以肌內給 予，且加強組合物，無論是否佐劑化，可以通過不同的途徑施用，例如皮內、皮下或鼻內。在 一個具體的實施方案中，用於第一次施用的組合物含有對於大流行性流感病毒毒株少於 15μg的HA量，並且加強組合物可以含有15μg的標準量，或者，合適地HA的低量即低於 15μg(這取決於施用的途徑）可以以較小的體積給予。
[0084]疫苗接種方案、劑量和療效標準 合適地，根據本發明使用的免疫原性組合物在大多數情況下標準的〇. 5ml可注射劑 量，並含有15μg或更少的來自流感病毒毒株的血細胞凝集素抗原組分，如通過單向輻射 狀免疫擴散（SRD)所測量的（J·MWood等人：J.Biol.Stand5 (1977) 237-247;J. M.Wood等人，J.Biol.Stand. 9 (1981) 317-330)。合適地，疫苗劑量體積會在 0.5ml 至Iml之間，特別是標準的0. 5ml或0. 7ml疫苗劑量體積。對劑量體積的輕微改變將取決 於在原始整裝樣本中的HA濃度並還取決於遞送途徑(其中更小劑量通過鼻內或皮內途徑 給予）來常規進行。
[0085] 合適地，根據本發明使用的所述免疫原性組合物含有低的HA抗原量一例如每流 感病毒毒株1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14yg的HA或每毒株不超過15yg的HA 的任一種。HA量的所述低量可以低至實際可行的量，只要這允許配製效力符合國際例如EU 或FDA標準的疫苗,如下文詳述(參見表1和如所述的具體參數)。合適的HA低量為每流感 病毒毒株1至7. 5μg的HA,合適地為每流感病毒毒株3. 5至5μg諸如3. 75或3. 8μg 的HA，典型地為每流感病毒毒株約5μg的HA。另一合適的HA量為每流感病毒毒株0. 1至 5μg的HA，合適地為每流感病毒毒株1. 0至2μg的HA如每流感病毒毒株1. 9μg的HA。
[0086] 有利地，根據本發明的疫苗劑量，特別是低HA量的疫苗，可以以較常規注射的裂 解流感疫苗更小的體積提供，其通常為每劑量約〇.5、0.7或Iml。根據本發明的低體積劑 量合適地每劑量低於500μ1，通常低於300μ1並且合適地不多於約200μ1或更少。 [0087] 因此，根據本發明的一個方面的合適的低體積疫苗劑量為在低體積中具有低抗原 劑量的劑量，例如在約200μ1的體積中約15μg或約7. 5μgHA或約3. 0μgΗΑ(每毒株)。 [0088] 本發明的流感藥劑合適地符合疫苗的某一國際標準。應用國際標準來測量流感疫 苗的效力。血清學變量根據評價人使用的醫學產品的歐洲機構（EuropeanAgencyforthe EvaluationofMedicinalProductsforhumanuse)(CHMP/BWP/214/96,Committeefor ProprietaryMedicinalProducts(CPMP).Noteforharmonizationofrequirements /br 1997.CHMP/BWP/214/96circularN。96-0666: 1-22)對於 與流感疫苗的年度許可程序相關的臨床試驗的標準(表1)。要求對於成年人群（18-60歲） 和老年人群（>60歲）不同(表1)。對於大流行之間的流感疫苗，對於疫苗中所包含的所有 流感毒株，至少一種評估(血清轉化因子、血清轉化率、血清保護率）應當達到歐洲要求。等 於或大於1:40的滴度比例被視為最相關，因為期望這些滴度與保護最為相關[BeyerW等 人 1998.ClinDrugInvest. ;15: 1-12]。
[0089] 如〃Guidelineondossierstructureandcontentforpandemicinfluenza vaccinemarketingauthorisationapplication. (CHMP/VEG/4717/03, 2004 年 4 月 5 日）中指出的，在缺少對源自非流行毒株的流感疫苗的特定標準的情況下，期望大流行性 候選疫苗應當（至少）在兩次劑量的疫苗後在未引發的成年人或老年人主體中，能夠引起足 夠的免疫應答以合適地達到為現有疫苗設立的所有三種現行標準。
[0090] 根據本發明使用的組合物合適地達到至少一種對於組合物中包含的流感病毒毒 株的此類標準(一種標準足夠獲得批准)，合適地至少兩種，或通常至少在表1中所述的所有 三種保護標準。
[0091] 表I(CHMP標準） !

【權利要求】
1. 免疫原性組合物，其包含來自第一流感病毒毒株的抗原或抗原製劑和水包油乳狀液 佐劑，用於誘導針對至少一種第二流感病毒毒株的免疫應答，其中所述第二流感病毒毒株 來自與所述第一流感病毒毒株不同的類型或不同的亞型。
2. 根據權利要求1的免疫原性組合物，其中所述第一流感病毒毒株是甲型，諸如H1例 如 H1N1、H2、H5 例如 H5N1、H7 或 H9。
3. 根據權利要求1的免疫原性組合物，其中所述第一流感病毒毒株是乙型。
4. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中所述組合物包含來自多種流感 病毒毒株的抗原或抗原製劑。
5. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中所述第二流感病毒毒株是甲型 或乙型。
6. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中所述使用用於誘導針對多種流 感病毒毒株，任選包括來自與所述第一流感病毒毒株不同的亞型或不同的類型的多種流感 病毒毒株的免疫應答。
7. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中所述使用用於誘導針對以下的 一種、兩種、三種或全部的免疫應答：A/H1N1毒株、A/H3N2毒株、Yagamata系的乙型毒株和 Victoria系的乙型毒株。
8. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中誘導的免疫應答持續至少6個 月。
9. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中所述抗原是血細胞凝集素，任 選以每劑量小於15微克諸如3. 75至10微克的量。
10. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中所述抗原或抗原製劑來源於 細胞培養物或產生於胚胎蛋中。
11. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中所述抗原或抗原製劑是純化 的完整流感病毒、非活的流感病毒，諸如裂解流感病毒或亞單位流感病毒。
12. 根據權利要求1-3和5-11中任一項的免疫原性組合物，其中所述組合物是單價的， 任選包含與大流行病相關的或具有與大流行病相關的潛力的毒株。
13. 根據權利要求1至11中任一項的免疫原性組合物，其中所述組合物是多價的，任選 包含與大流行病相關的或具有與大流行病相關的潛力的毒株。
14. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中所述水包油乳狀液包含可代 謝油諸如鯊烯，和乳化劑諸如聚山梨醇酯80。
15. 根據權利要求14的免疫原性組合物，其中所述水包油乳狀液進一步包含α-生育 酚。
16. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中所述使用用於人主體，諸如兒 童或青少年主體，例如年齡為6個月至3歲、或年齡為4歲至8歲、或年齡為9至17歲的主 體。
17. 根據權利要求16的免疫原性組合物，其中所述使用用於年齡> 3歲的主體。
18. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中將所述免疫原性組合物腸道 外施用，例如肌內施用。
19. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中所述免疫原性組合物根據一 次或兩次劑量方案施用，任選具有21至28天的間隔。
20. 根據前述權利要求中任一項的免疫原性組合物，其中所述免疫應答涉及交叉反應 性CD4 T輔助細胞應答和/或交叉反應性體液免疫應答。
21. 第二免疫原性組合物，其包含來自至少一種流感病毒毒株的抗原或抗原製劑，用於 根據一次劑量方案在兒童主體中使用，所述兒童主體之前已經接種有包含來自至少一種流 感病毒毒株的抗原或抗原製劑和水包油乳狀液佐劑的第一免疫原性組合物。
22. 根據權利要求21的第二免疫原性組合物和第一免疫原性組合物，其中所述第二免 疫原性組合物的至少一種流感病毒毒株是不同於所述第一免疫原性組合物的至少一種流 感病毒毒株的類型或亞型。
23. 根據權利要求21或權利要求22的第二免疫原性組合物，其中所述組合物是未佐劑 化的。
24. 根據權利要求21至23中任一項的第二免疫原性組合物，其中所述組合物是包含兩 種不同亞型的甲型流感病毒毒株和一種乙型流感病毒毒株的三價組合物。
25. 根據權利要求21至24中任一項的第二免疫原性組合物，其中所述兒童主體的年齡 為6個月至3歲，或年齡為4歲至8歲。
26. 根據權利要求25的第二免疫原性組合物，其中所述兒童主體的年齡> 3歲。
27. 根據權利要求21至26中任一項的第二免疫原性組合物，其中所述兒童主體在施用 所述第二免疫原性組合物之前一年已經接種有所述第一免疫原性組合物。
28. 免疫原性組合物，其包含來自第一流感病毒毒株的抗原或抗原製劑和水包油乳狀 液佐劑，用於治療或預防由第二流感病毒毒株引起的疾病，其中所述第二流感病毒毒株來 自與所述第一流感病毒毒株不同的亞型或不同的類型。
29. 根據權利要求28的免疫原性組合物，其包含權利要求2至20的一種或多種特徵。
30. 預防和/或治療流感疾病的方法，其包括施用包含來自至少一種流感病毒毒株的 抗原或抗原製劑連同水包油乳狀液佐劑的第一免疫原性組合物，隨後施用包含來自至少一 種流感病毒毒株的抗原或抗原製劑的第二免疫原性組合物，其中施用所述第一免疫原性組 合物誘導針對包含在所述第二免疫原性組合物中但不存在於所述第一免疫原性組合物中 的流感病毒毒株的免疫應答。
31. 根據權利要求30的方法，其中所述第一免疫原性組合物的至少一種流感病毒毒株 和所述第二免疫原性組合物的至少一種流感病毒毒株是不同的類型或亞型。
32. 根據權利要求31的方法，其中所述第一免疫原性組合物的至少一種流感病毒毒株 是甲型，並且所述第二免疫原性組合物的至少一種流感病毒毒株是乙型。
33. 根據權利要求32的方法，其中所述第二免疫原性組合物進一步包含不同於引發組 合物中包含的甲型流感病毒毒株的亞型的甲型流感病毒毒株。
34. 根據權利要求30至33中任一項的方法，其中所述第二免疫原性組合物在引發組合 物之後一年施用。
35. 根據權利要求30至34中任一項的方法，其中所述第一免疫原性組合物根據一次劑 量方案施用。
36. 根據權利要求30至35中任一項的方法，其中所述第二免疫原性組合物根據一次劑 量方案施用。
【文檔編號】A61K39/145GK104302318SQ201380026802
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2013年3月13日 優先權日:2012年3月23日
【發明者】B.L.因尼斯, S.羅伊-格漢塔 申請人:葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司